Name: İnsan vücudunun fizyolojisini bütünleştiren 4 damarlı Örnekleme Yaklaşımı emIn vivo /em (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-08-02T12:30:00.000+00:00
Duration: 12 min 17 s
Description: Öğrenin, dört damarlı örnekleme yöntemiyle canlıda insan plasenta fizyolojisini incelemeyi. Bu teknik, anne-fetal etkileşim ve besin transferi çalışmalarında kapsamlı veri sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Her şeyden önce, bu projeye katılan annelere içtenlikle teşekkür ederiz. Sonra, örnekleme prosedürüne yardımcı olan ve kolaylaştıran tüm personeli, Anestezi uzmanı, hemşire anestezisti ve cerrahi hemşirelerini kabul ediyoruz. Proje, Güneydoğu Norveç Bölgesel Sağlık Otoritesi ve Norveç Kadın Sağlığı Danışma Birimi, Oslo Üniversitesi ve Oslo Üniversitesi Hastanesi tarafından sağlanan yerel fonlardan sağlanan finansman olmaksızın mümkün olmazdı.

Çalışma, Oslo Üniversitesi Hastanesi&#39;ndeki veri koruma görevlileri ve Güney Norveç 2419/2011 Tıbbi ve Sağlık Araştırma Etikleri Bölgesel Komitesi tarafından onaylandı. Tüm katılımcılar, dahil edilme konusunda yazılı bir bilgilendirilmiş onam imzaladılar. 1. Preparatlar NOT: İşlemler için bir zaman çizelgesi Şekil 1&#39;de özetlenmiştir. <img alt="Şekil 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55847/55847fig1.jpg" /> Şekil 1 : 4 damarlı Numune Alma İşleminde Zamanlamayı ve Personel İfadesini Tanımlayan Akış Şeması. Tek renk bir kişiyi temsil eder. Yöntemin ayrıntılı açıklaması protokolde verilmiştir. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55847/55847fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen tıklayınız.</a> <ol><li> Personel <ol><lI&gt; Gerekli tüm personelin mevcut olduğundan emin olun: Ultrason ölçümlerini yapan oldukça yetenekli bir Fetal Tıp uzmanı, cerrahiyi yürüten iki doğum uzmanı, doğum uzmanlarından ve numuneleri toplayan iki hemşireden biri, kan gazı analizlerini yapan bir asistanı ve Diğer numuneler toplama işlemini ard arda ve derhal gerçekleştirdikten sonra. NOT: Plasental dokunun daha gelişmiş toplanması durumunda ilave bir kişiye ihtiyaç vardır. </li></ol></li><li> ekipman <ol><li> Ekipman, buz soğukluğunda 1 M fosfat tamponlu salin (PBS), 25 mL soğuk RNA stabilize edici çözelti ve 5 x 0.5 mL optimal kesme sıcaklığı bileşiği (OCT) hazırlayın. Vacutainers ve tüpleri etiketleyin. Deneysel ekipman listesini görün. </li></ol></li></ol> 2. Anaokulleri <ol><li> Annelik klinik ve klinik dışı özelliklerini dahil ederek kaydedin ve ilgili soruları tekrarlayın veDoğumlar, doğum sırasında ağırlık dahil olmak üzere. Sezaryen öncesi oruç tutma süresini ve cerrahi sırasında meydana gelen herhangi bir hipotansif bölüme dikkat edin. Not: Global pregnancy coLaboratory (COLAB) &#39;dan yeni yayınlanan en az maternal klinik veri kümesini ekleyin. Bu makale aynı zamanda çalışma popülasyonlarının seçiminde çok önemli bazı yönleri içermektedir ve çalışmayı planlarken ele alınmalıdır 18 . </li><li> Etnik köken, yaş ve beden kitle indeksi (BKİ) de dahil olmak üzere baba özelliklerini kaydetmeyi düşünün. </li></ol> 3. Ultrason <ol><li> Doppler ultrason muayenesini doğum gününde, kadınlar açlıkta gerçekleştirin. Muayene, aort ve vena kava basısından kaçınmak için, yarı-sırtüstü konumdaki kadının fetal durgunluk döneminde, ilgi bölgesinin biraz lateralinde eğildiğinde gerçekleştirilir. Içindeki çıktıyı izleyinYoğunluğu ekrandaki mekanik ve termik indekslerle belirtir. </li><li> Umbilikal ven <ol><li> Göbek karını sagital veya oblik bir transeksiyonda göbekten damarı görselleştirin. Karın içi umbilikal venin düz bölümündeki iç büzgeci çapını, görülebilen dallardan önce ölçün. Normal B-modunu kullanın ve çap ölçümleri için tekneyi dik açılım açısı ile görselleştirin ve pulsatil çap değişikliklerinin etkisini en aza indirgemek için sonraki ölçümler için birkaç optimum kareyi tutun. <ol><li> Ölçümleri 5-10 kez tekrarlayın 19 . </li></ol></li><li> Aynı yerde, Doppler ultrasonu kullanın ve zaman ortalamalı maksimum hızı (TAMX) ölçmek için mümkün olduğunca düşük (30 ° &#39;lik) bir insonasyon açısı elde etmek için probu ayarlayın. Hızı 3 - 5 s&#39;lik bir periyot boyunca elde edin (titreşimsiz akış). </li></ol></li><li> Uterus arteri <ol><li> Doppler kullanUltrason, internal iliyak arterden dallandıktan hemen sonra, harici iliak arteri geçtiği için uterin arteri görselleştirir. Düşük insonasyon açısı (her zaman &lt;30 °) elde etmek için probu bu bölgede ayarlayın ve TAMX&#39;i ölçün. Hızı üç kalp çevriminin ortalama hızı olarak alın. </li><li> TAMX ölçülene kadar aynı yerde dikey bir açı elde etmesi pek mümkün olmadığından, çap ölçümleri alanlarına yakın ulaşılabilen çap ölçümleri için doğru bir açı elde etmek için, distal olarak damarı takip edin. Renkli Doppler ultrasonografi ile değerlendirildiğinde görünür damarlar bu bölgeden önce kesilirse çap ölçümlerini hariç tutun. <ol><li> Normal B-modunu kullanın ve çap ölçümleri için tekneyi dik açılım açısı ile görselleştirin ve pulsatil çap değişikliklerinin etkisini en aza indirgemek için sonraki ölçümler için birkaç optimum kareyi tutun. </li><li> Ölçümleri 5-10 kez tekrarlayın 19 . </li></ol></<html> li&gt; </ol></li><li> Plasentanın konumunu not edin. </li></ol> 4. 4 damarlı Kan Örneklemesi NOT: İşlemler için zaman çizelgesi Şekil 1&#39;de özetlenmiştir ve örneklerin genel görünümü Şekil 2&#39;de gösterilmiştir. <img alt="şekil 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/55847/55847fig2.jpg" /> Şekil 2 : Plasental Vasküler Yapının Şematik Gösterimi ve Numune Alma Siteleri. 4 damarlı örnekleme yönteminde, uterin ven, radial arter (uterin arter için bir vekil olarak) ve göbek arterleri ve damardan kan örnekleri alınır. Uterin arter ve göbek bağı kan akımı ultrason ile ölçülür. Plasentanın doku örnekleri toplanır. Resim: Øystein H. Horgmo, Oslo Üniversitesi.5847fig2large.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; Bu figürde daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen tıklayınız. <ol><li> Güvenlik prosedürleri <ol><li> Operasyon tiyatrosundaki tüm personele eldiven, cerrahi eldiven takımı, maskeler ve şapkalar takın. </li><li> Operasyon alanıyla temas halindeki cerrahları ve araştırma personelini cerrahi kese elbiseleri, maskeler, şapkalar, önlüklar ve çift eldiven ile sağlayın. Gözlük isteğe bağlıdır. </li><li> Kan numunelerini eldivenlerle tutan personel sağlayın. </li><li> Plasenta numunelerine eldiven ve cerrahi maskeyle müdahale eden personel sağlayın. Homojenizasyon kaputların kullanılmasını gerektirir. </li></ol></li><li> Operasyon tiyatrosunda hazırlık <ol><li> Bir brifing verin ve ekipmanı ameliyat başlamadan önce numuneye yardımcı olacak tüm personele verin. </li><li> Gerekli periferik arteryel ve venöz girişe yardımcı olacak anestezi uzmanı ve anestezi hemşiresinin adresini öğrenin veNumune almadan önce intravenöz olarak hiçbir sıvı verilmez. </li><li> Antakübital ven örneğini ve iki şırıngayı (biri 20 mL ve bir tane de 10 mL) ve radial arteri destekleyen kişiye bir kan gazı şırıngasını (heparin ile) destekleyen kişiye iğneler olmadan üç şırınga (10 mL) verin. </li><li> Ameliyat sahası için iki steril şırınga (20 mL), beş steril şırınga (10 mL), üç &quot;kelebek iğne&quot; ve iki kan gazı şırıngası hazırlayın. </li></ol></li><li> Kan damarlarına erişim. <ol><li> Periferik intravenöz (iv) erişimi sağlamak için sezaryen öncesi standart prosedür izleyin. NOT: Antecubital ven tercih edilir, çünkü bu siteden örnek almak daha kolaydır. </li><li> Radial arteri ultrasonla veya palpasyonla bilekte lokalize edin. 0.5 mL subkutanöz lidokain analjeziyi takiben, radial artere bir arteriyel hat yerleştirin. Üç başarısız ekleme olması durumunda örneklemeyi bu siteden terk edin veyaEğer kadın yerleştirme sırasında acı çekerse. NOT: Standart prosedüre göre sezaryonun cerrahi prosedürünü uygulayın. Yalnızca örnekleme prosedürü için gereken ayarlamalar aşağıda belirtilmiştir. </li></ol></li><li> Anne kan örnekleri NOT: Uterus insizyonundan önce aynı anda üç anne kan örneğini (uterin ven, radial arter ve antekübital ven) elde edin. <ol><li> Uterin damar için, karın boşluğunu açtıktan sonra, karın duvarını kaldırmak ve uterusun anterolateral kenarlarındaki uterin venlerin ana dallarını ortaya çıkarmak için bir geri çekici kullanın. Mümkün olduğunca plasenta ile aynı yönde uterin damar dallarından kan alın veya plasenta rahim orta çizgisinde bulunduğu takdirde en belirgin damarı pleksus kullanın. <ol><li> Uterin damardaki bir kan gazı şırıngasına yaklaşık 30 derecelik bir açıda bir kelebek iğne takın ve önlemek için nazik bir aspirasyon ile kan toplamayınhemoliz. Kelebek iğnenin iv konumunu özenle sabitlerken dolu kan gazı şırıngasını 20 mL&#39;lik ve 10 mL&#39;lik şırıngayla ardışık olarak değiştirin. NOT: Seçilen rahim damarının kontralateral tarafında durduğunuzda en iyi verimi sağlamak en iyisidir. </li></ol></li><li> Radial arter için, intra-arteriyel hattan aspire edin. İlk 5 mL&#39;yi atın ve daha sonra kan gazı analizleri için heparin enjektöründe 3 mL aspirat ve bunu takiben iki şırınga (20 + 10 mL) içinde 3 mL aspire edin. </li><li> Antekübital ven için, intravenöz kateterden hafifçe aspire edin. İlk 5 mL&#39;yi atın ve üç şırıngada (10 mL) 30 mL aspire edin. </li><li> Karnı kapatmaya başlamadan önce uterin ven üzerindeki örnekleme alanının son muayenesini yapın. </li></ol></li><li> Fetal kan örnekleri <ol><li> Çocuğunuz doğduğunda, umbilikal kordonu kelepçelemeden veya plasentayı göndermeden umblikal arterden hemen kan alın. Zekayı başlatH kan gazı analizi şırınga ve mümkünse üç 10 ml şırınga ile izleyin. </li><li> Arteryel numuneler güvenceye alındığında, umblikal ven (kan gazı ve 20 + 10 mL şırınga) örneklemeden önce kordonu sıkıştırın ve çocuğu ebeye verin. NOT: Teslimat saniye içinde ve kendiliğinden müstakil sürece yerinde plasenta ile tüm göbek örnekleri alın. </li><li> Geç kordon kelepçesi ile ilgili Norveç önerilerini izleyin. Bozulmuş bir çocuğun olması durumunda, kelepçeyi kelepçeleyin ve kesin derhal ve elini çocuğu ebe ve neonatologla görüşün. </li></ol></li><li> Kan örneklerinin taşınması <ol><li> Geri kalan kan numunelerini hazırlarken kan gaz şırıngalarını buz üzerine koyun ve 5 dakika içinde bir kan gazı analizöründe analiz edin. </li><li> Kan numunelerini derhal vacutainers&#39;a aktarın ve buz üzerine koymadan önce plazma tüplerini 1 - 2 dakika boyunca bir rocker üzerine koyun. Serum tüplerini emek üzerine bırakın.Atory tezgah 30 dakika yerleşmek için. NOT: Prosedürdeki ekstra dikkat gerektiren kritik bir adımdır, çünkü beş bölgeden alınan numunelerin aynı kalitede olması için aynı anda hazırlanması gerekir. </li><li> Plazma örneklerini mümkün olan en kısa sürede santrifüj edin ve 30 dakika içinde, 6 ° C&#39;de, 20 dakika süreyle 2,500 xg santrifüjleyin. </li><li> 30 dakika sonra, serum örneklerini 10 dakika 2.500 x g&#39;de oda sıcaklığında santrifüjleyin. </li><li> Trombosit içermeyen plazma sağlamak için süpernatantları peletin üstünde 0,5 mL bırakarak, 2 mL cryo tüplerine dikkatle ayırın. </li><li> Örnekleri -80 ° C&#39;de saklayın. </li></ol></li></ol> 5. Plasental Dokunun Toplanması <ol><li> Plasenta, buzağı soğutulmuş diseksiyon tepsisine mümkün olduğunca kısa sürede düz bir şekilde koyun. En uzun çapı ve çapı 90 derece fotoğraflayın ve ölçün. </li><li> Plasentayı tartın. </li><li> Ağırlığı, iki çapını, herhangi bir gRoss patolojisi, kordtaki damar sayısı ve doğumdan plasenta buza yerleştirilme zaman aralığı. NOT: Plasenta, klinik olarak belirtilmişse, patolojik muayene için gönderilir. </li><li> Plasenta, maternal yüzeyi yukarı bakacak şekilde yerleştirin ve açık pozitif patolojilerin bulunduğu bölgeden kaçınarak, plasentanın her bir çeyreğinde tesadüfen bulunan 4-5 örnekleme bölgesini belirleyin. Anne yüzeyinden 3-5 mm kesmek için desiduyu makas kullanarak çıkartın. Her bir alandan 1 - 2 cm&#39;lik 3 adet villous doku toplayın. </li><li> Toplanan dokuyu yavaşça 50 mL soğuk 1M PBS içerisinde yıkayın. Her numune alanından birkaç parça halinde bölün. Not: Plasenta parçalarının boyutu, planlanan analizlere bağlı olacaktır. </li><li> 5 kriyo boruları 0,5 cm3 doku örnekleri ve sıvı azot içinde dondurulması ek - 0.1 alikotları ekleyin. </li><li> RNA, sabitleme çözeltisi 25 mL tüpe 0.2 cm 3-0,1 küçük parçalar ekleyin. 4&#39;te saklama6 ° C&#39;de 24 saat bekletin, RNA stabilizasyon solüsyonunu atın ve değiştirin. Donmak. </li><li> Karıştırmak ve dondurularak, OKT ile OCT, yukarı 0.5 mL, 5 kriyo boruları 0,5 cm3 parçaları ekleyin. </li><li> Analiz edilene kadar numuneleri -80 ° C&#39;de saklayın. NOT: Burton ve ark. Planlanan analizlere bağlı olarak plasental numunenin pratik yönlerine mükemmel bir genel bakış sağlar. 20 Kalan dokuyu, mikrovillus ve bazal zarları izole etmek için hazırlamayı ve vakum emme tekniği ile desidual dokuyu toplamayı düşünün. 21 , 22 </li></ol> 6. Yenidoğan Özellikleri <ol><li> Apgar skoru (1, 5 ve 10 dakika), cinsiyet, kilo, uzunluk, gebelik haftası ve Yenidoğan Yoğun Bakım Ünitesine kabulün (kalışın uzunluğu ve sonucuna) dahil yenidoğanın özelliklerini kaydedin. </li><li> Yenidoğan vücut kompozisyonunu antropometrik ölçümlerle, havayı yerinden değiştirerek ölçmeyi düşünün.Ment pletismograf veya çift X-ışını absorptiometrisi. 23 , 24 </li></ol> 7. Hesaplamalar <ol><li> Radial ve uterin arterde benzer kan kompozisyonu varsayın ve uteroplasental arteriovenöz konsantrasyon farkını hesaplayın. Uteroplasental arteriovenöz konsantrasyon farkı = C A - C V Umbilikal venöz arteriyel konsantrasyon farkı = C v - C a C, alt simgelerle konsantrasyon: A, radyal arter; V, rahim damarı; V göbek bağı ve a, göbek bağı. </li><li> Hacimdeki kan akışını, mL / dak (Q) hesaplayın: <img alt="Denklem 1" src="/files/ftp_upload/55847/55847eq1.jpg" /> D, damar çapı (cm) olduğunda, TAMX, zaman ortalamalı maksimum hız ve h, uzaysal kan hızı profili için katsayıdır. Umblikal ven katsayısı olarak 0.5 kullanın veUterin arter 25, 26 için 0.6. </li><li> Plasental alımını hesaplayın ve Fick&#39;in prensibine göre serbest bırakın: Uteroplasental alım = ( C A - C V ) x Qm Fetal alımı = (Cı-V - C) X Q f Alt simgeler: m, maternal ve f, fetus. </li></ol>

<ol><li>Jansson, T., Powell, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+placenta+in+fetal+programming%3A+underlying+mechanisms+and+potential+interventional+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Sci+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Role of the placenta in fetal programming: underlying mechanisms and potential interventional approaches.</a> Clin Sci (Lond). 113 (1), 1-13 (2007).</li>
<li>Hanson, M. A., Gluckman, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+developmental+conditioning+of+later+health+and+disease%3A+physiology+or+pathophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Early developmental conditioning of later health and disease: physiology or pathophysiology.</a> Physiol Rev. 94 (4), 1027-1076 (2014).</li>
<li>Guttmacher, A. E., Spong, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+human+placenta+project%3A+it%27s+time+for+real+time%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Obstet+Gynecol%22%5BJournal%5D)">The human placenta project: it's time for real time.</a> Am J Obstet Gynecol. 213, 4 Suppl 3-5 (2015).</li>
<li>Battaglia, F. C., Regnault, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Placental+transport+and+metabolism+of+amino+acids%5BTitle%5D)+AND+%22Placenta%22%5BJournal%5D)">Placental transport and metabolism of amino acids.</a> Placenta. 22 (2-3), 145-161 (2001).</li>
<li>Hay, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Placental-fetal+glucose+exchange+and+fetal+glucose+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Trans+Am+Clin+Climatol+Assoc%22%5BJournal%5D)">Placental-fetal glucose exchange and fetal glucose metabolism.</a> Trans Am Clin Climatol Assoc. 117, 321-339 (2006).</li>
<li>Woollett, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review%3A+Transport+of+maternal+cholesterol+to+the+fetal+circulation%5BTitle%5D)+AND+%22Placenta%22%5BJournal%5D)">Review: Transport of maternal cholesterol to the fetal circulation.</a> Placenta. 32, Suppl 2 218-221 (2011).</li>
<li>Prenton, M. A., Young, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Umbilical+vein-artery+and+uterine+arterio-venous+plasma+amino+acid+differences+%28in+the+human+subject%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Obstet+Gynaecol+Br+Commonw%22%5BJournal%5D)">Umbilical vein-artery and uterine arterio-venous plasma amino acid differences (in the human subject).</a> J Obstet Gynaecol Br Commonw. 76 (5), 404-411 (1969).</li>
<li>Cetin, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma+and+erythrocyte+amino+acids+in+mother+and+fetus%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Neonate%22%5BJournal%5D)">Plasma and erythrocyte amino acids in mother and fetus.</a> Biol Neonate. 60 (2), 83-91 (1991).</li>
<li>Filshie, G. M., Anstey, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+distribution+of+arachidonic+acid+in+plasma+and+tissues+of+patients+near+term+undergoing+elective+or+emergency+Caesarean+section%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Obstet+Gynaecol%22%5BJournal%5D)">The distribution of arachidonic acid in plasma and tissues of patients near term undergoing elective or emergency Caesarean section.</a> Br J Obstet Gynaecol. 85 (2), 119-123 (1978).</li>
<li>Haberey, P. P., Schaefer, A., Nisand, I., Dellenbach, P. The fate and importance of fetal lactate in the human placenta -a new hypothesis. J Perinat Med. 10 (2), 127-129 (1982).</li>
<li>Prendergast, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucose+production+by+the+human+placenta+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Placenta%22%5BJournal%5D)">Glucose production by the human placenta in vivo.</a> Placenta. 20 (7), 591-598 (1999).</li>
<li>Metzger, B. E., Rodeck, C., Freinkel, N., Price, J., Young, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplacental+arteriovenous+gradients+for+glucose%2C+insulin%2C+glucagon+and+placental+lactogen+during+normoglycaemia+in+human+pregnancy+at+term%5BTitle%5D)+AND+%22Placenta%22%5BJournal%5D)">Transplacental arteriovenous gradients for glucose, insulin, glucagon and placental lactogen during normoglycaemia in human pregnancy at term.</a> Placenta. 6 (4), 347-354 (1985).</li>
<li>Zamudio, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoglycemia+and+the+origin+of+hypoxia-induced+reduction+in+human+fetal+growth%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Hypoglycemia and the origin of hypoxia-induced reduction in human fetal growth.</a> PLoS One. 5 (1), 8551(2010).</li>
<li>Holme, A. M., Roland, M. C., Lorentzen, B., Michelsen, T. M., Henriksen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Placental+glucose+transfer%3A+a+human+in+vivo+study%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Placental glucose transfer: a human in vivo study.</a> PLoS One. 10 (2), 0117084(2015).</li>
<li>Holme, A. M., Roland, M. C., Henriksen, T., Michelsen, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+uteroplacental+release+of+placental+growth+factor+and+soluble+Fms-like+tyrosine+kinase-1+in+normal+and+preeclamptic+pregnancies%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Obstet+Gynecol%22%5BJournal%5D)">In vivo uteroplacental release of placental growth factor and soluble Fms-like tyrosine kinase-1 in normal and preeclamptic pregnancies.</a> Am J Obstet Gynecol. 215 (6), 781-782 (2016).</li>
<li>Paasche Roland, M. C., Lorentzen, B., Godang, K., Henriksen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uteroplacental+arterio-venous+difference+in+soluble+VEGFR-1+%28sFlt-1%29%2C+but+not+in+soluble+endoglin+concentrations+in+preeclampsia%5BTitle%5D)+AND+%22Placenta%22%5BJournal%5D)">Uteroplacental arterio-venous difference in soluble VEGFR-1 (sFlt-1), but not in soluble endoglin concentrations in preeclampsia.</a> Placenta. 33 (3), 224-226 (2012).</li>
<li>Brar, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uteroplacental+unit+as+a+source+of+elevated+circulating+prorenin+levels+in+normal+pregnancy%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Obstet+Gynecol%22%5BJournal%5D)">Uteroplacental unit as a source of elevated circulating prorenin levels in normal pregnancy.</a> Am J Obstet Gynecol. 155 (6), 1223-1226 (1986).</li>
<li>Myatt, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategy+for+standardization+of+preeclampsia+research+study+design%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Strategy for standardization of preeclampsia research study design.</a> Hypertension. 63 (6), 1293-1301 (2014).</li>
<li>Kiserud, T., Rasmussen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+repeat+measurements+affect+the+mean+diameter+of+the+umbilical+vein+and+the+ductus+venosus%5BTitle%5D)+AND+%22Ultrasound+Obstet+Gynecol%22%5BJournal%5D)">How repeat measurements affect the mean diameter of the umbilical vein and the ductus venosus.</a> Ultrasound Obstet Gynecol. 11 (6), 419-425 (1998).</li>
<li>Burton, G. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimising+sample+collection+for+placental+research%5BTitle%5D)+AND+%22Placenta%22%5BJournal%5D)">Optimising sample collection for placental research.</a> Placenta. 35 (1), 9-22 (2014).</li>
<li>Illsley, N. P., Wang, Z. Q., Gray, A., Sellers, M. C., Jacobs, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+preparation+of+paired%2C+syncytial%2C+microvillous+and+basal+membranes+from+human+placenta%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Simultaneous preparation of paired, syncytial, microvillous and basal membranes from human placenta.</a> Biochim Biophys Acta. 1029 (2), 218-226 (1990).</li>
<li>Staff, A. C., Ranheim, T., Khoury, J., Henriksen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+contents+of+phospholipids%2C+cholesterol%2C+and+lipid+peroxides+in+decidua+basalis+in+women+with+preeclampsia%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Obstet+Gynecol%22%5BJournal%5D)">Increased contents of phospholipids, cholesterol, and lipid peroxides in decidua basalis in women with preeclampsia.</a> Am J Obstet Gynecol. 180 (3), Pt 1 587-592 (1999).</li>
<li>Catalano, P. M., Thomas, A. J., Avallone, D. A., Amini, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anthropometric+estimation+of+neonatal+body+composition%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Obstet+Gynecol%22%5BJournal%5D)">Anthropometric estimation of neonatal body composition.</a> Am J Obstet Gynecol. 173 (4), 1176-1181 (1995).</li>
<li>Ellis, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Body-composition+assessment+in+infancy%3A+air-displacement+plethysmography+compared+with+a+reference+4-compartment+model%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Clin+Nutr%22%5BJournal%5D)">Body-composition assessment in infancy: air-displacement plethysmography compared with a reference 4-compartment model.</a> Am J Clin Nutr. 85 (1), 90-95 (2007).</li>
<li>Haugen, G., Kiserud, T., Godfrey, K., Crozier, S., Hanson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Portal+and+umbilical+venous+blood+supply+to+the+liver+in+the+human+fetus+near+term%5BTitle%5D)+AND+%22Ultrasound+Obstet+Gynecol%22%5BJournal%5D)">Portal and umbilical venous blood supply to the liver in the human fetus near term.</a> Ultrasound Obstet Gynecol. 24 (6), 599-605 (2004).</li>
<li>Acharya, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+validation+of+uterine+artery+volume+blood+flow+measurement+by+Doppler+ultrasonography+in+pregnant+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22Ultrasound+Obstet+Gynecol%22%5BJournal%5D)">Experimental validation of uterine artery volume blood flow measurement by Doppler ultrasonography in pregnant sheep.</a> Ultrasound Obstet Gynecol. 29 (4), 401-406 (2007).</li>
<li>Wu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamate-glutamine+cycle+and+exchange+in+the+placenta-fetus+unit+during+late+pregnancy%5BTitle%5D)+AND+%22Amino+Acids%22%5BJournal%5D)">Glutamate-glutamine cycle and exchange in the placenta-fetus unit during late pregnancy.</a> Amino Acids. 47 (1), 45-53 (2015).</li>
<li>Tuckey, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progesterone+synthesis+by+the+human+placenta%5BTitle%5D)+AND+%22Placenta%22%5BJournal%5D)">Progesterone synthesis by the human placenta.</a> Placenta. 26 (4), 273-281 (2005).</li>
<li>Simmons, M. A., Meschia, G., Makowski, E. L., Battaglia, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fetal+metabolic+response+to+maternal+starvation%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Res%22%5BJournal%5D)">Fetal metabolic response to maternal starvation.</a> Pediatr Res. 8 (10), 830-836 (1974).</li>
<li>Simmons, M. A., Jones, M. D., Battaglia, F. C., Meschia, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+effect+on+fetal+glucose+utilization%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Res%22%5BJournal%5D)">Insulin effect on fetal glucose utilization.</a> Pediatr Res. 12 (2), 90-92 (1978).</li>
<li>Bujold, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+supporting+that+the+excess+of+the+sVEGFR-1+concentration+in+maternal+plasma+in+preeclampsia+has+a+uterine+origin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Matern+Fetal+Neonatal+Med%22%5BJournal%5D)">Evidence supporting that the excess of the sVEGFR-1 concentration in maternal plasma in preeclampsia has a uterine origin.</a> J Matern Fetal Neonatal Med. 18 (1), 9-16 (2005).</li>
<li>Jansson, T., Aye, I. L., Goberdhan, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+emerging+role+of+mTORC1+signaling+in+placental+nutrient-sensing%5BTitle%5D)+AND+%22Placenta%22%5BJournal%5D)">The emerging role of mTORC1 signaling in placental nutrient-sensing.</a> Placenta. 33, Suppl 2 23-29 (2012).</li>
<li>Cetin, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Placental+transport+of+amino+acids+in+normal+and+growth-restricted+pregnancies%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Obstet+Gynecol+Reprod+Biol%22%5BJournal%5D)">Placental transport of amino acids in normal and growth-restricted pregnancies.</a> Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 110, Suppl 1 50-54 (2003).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

<html> Plasenta 4-gemi örnekleme yöntemi, üç ana amaç için uygundur. İlk olarak, spesifik maddelerin maternal tarafta plasenta tarafından nasıl alındığını ve glikoz ve amino asit çalışmalarımızla gösterildiği gibi muhtemelen umblikal dolaşıma ve fetusa transfer edildiğini incelemek için kullanılabilir. İkincisi, yöntem progesteron sonuçlarına göre plasenta tarafından üretilen ve maternal veya fetal dolaşıma bırakılan maddelerin incelenmesi ile oldukça yakından ilgilidir. Üçüncü olarak, hızlı büyüme ve doku yeniden biçiml...

Ulusal Sağlık Enstitüsüne (ABD) göre, plasenta insan vücudunda en az anlaşılmış organ 1 , 2 , 3&#39;tür . Devam eden gebelikte etik olmayan riskler getirmeksizin insan plasentasını in vivo erişmek ve incelemek zordur. İnsandaki plasental fonksiyon çalışmaları büyük oranda in vitro ve ex vivo modellere dayanır. Plasental nakil ve metabolizma ile ilgili önceki in vivo çalışmaların çoğunluğu hayvanlar 4 , 5 , 6&#39;da gerçekleştirilmiştir . Bununla birlikte, plasental yapı ve fonksiyonlar türler arasında önemli farklılık gösterdiğinden, hayvanlardan insanlara yapılan sonuçların dikkatle kullanılması gerekir. İn vivo çalışmaların sadece birkaç küçük insan plasental ve fetal alımını ve normal fizyolojikVe hiçbiri 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 numaralı bileşiklerin bir bütün olarak transferini araştırmamıştır. Bu temel çalışmalar insan plasentasının in vivo çalışmalarının uygulanabilir olduğunu ve çeşitli amaçlara hizmet edebileceğini göstermektedir. Birincisi, plasental fonksiyonların temelde in vitro , ex vivo ve hayvan çalışmalarından türetilen güncel kavramları insan ortamında test edilerek insan plasentasına yeni ve daha spesifik bir bakış açısı getirilebilir. İkincisi, anormal fetal büyüme, preeklampsi, maternal diyabet, metabolik sendrom ve diğer maternal metabolik bozukluklarla ilişkili disfonksiyonel plasentanın özellikleri daha iyi karakterize edilebilir. Üçüncü olarak, insan in vivo çalışmalar teşhis geliştirme fırsatı sağlarPlasental fonksiyonun tik ve prediktif araçları. Bu arka planda insan plasental fonksiyonunu in vivo araştırmak için kapsamlı bir fizyolojik veri topluluğu oluşturmayı amaçladık . Planlı bir sezaryen sırasında, plasentanın maternal ve fetal taraflarındaki (4 damarlı örnekleme yöntemi) gelen ve giden damarlardan kan örnekleri toplamak için intraabdominal uterin ven girişini kullanırız. Bu numuneler besin maddeleri ve diğer maddelerin eşleştirilmiş arteriovenöz konsantrasyon farklılıklarını hesaplamak için kullanılır 14 . Buna ek olarak, ultrason ile plasentanın her iki tarafındaki hacimsel kan akışını ölçüyoruz. Sonuç olarak, herhangi bir bileşiğin plasental ve fetal alım miktarı belirlenebilir. Ayrıca plasenta tarafından maternal ve fetal dolaşımlara 15 , 16 , 17 serbest bırakılan maddelerin belirlenmesi mümkündür. BirleştirildiğindeD anne ve çocuğun klinik parametreleri ile birlikte, ve plasental ve diğer ilgili dokuların analizleri ile, bu yöntem, plasenta fonksiyonlarının birçok yönünü in vivo aynı anne-fetus çiftlerine entegre etmek için heyecan verici bir potansiyele sahiptir.

<table><tbody><tr><td><güçlü>Anne vücut kompozisyonu</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Empedans ölçeği</td><td>Tanita</td><td></td><td>veya benzeri</td></tr><tr><td><güçlü>Ultrason ölçümleri&nbsp; < / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Sequoia 512 ultrason makinesi</td><td>Acuson</td><td></td>, <td>renkli ve nabız dalgası Doppler (frekans bant genişliği 2 - 6 MHz) ile kavisli bir dönüştürücü ile donatılmıştır (frekans bant genişliği 2 - 6 MHz)</td></tr> <tr><td>< güçlü > Kan örnekleri< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Arerial kanül</td><td>BD Medical</td><td>682245</td><td>veya benzeri</td></tr><tr><td>20 cc İğnesiz Eksantrik Luer Uçlu Şırınga</td><td>Termo</td><td>SS-20ES</td><td>veya benzeri. 3 gerekli.</td></tr><tr><td>10 cc Eksantrik Luer Uçlu Şırınga İğnesiz</td><td>Termo</td><td>SS-10ES</td><td>veya benzeri. 9 gerekli.</td></tr><tr><td>İğnesiz 5 cc% 6 Luer Şırınga</td><td>Termo</td><td>SS-05S1</td><td>veya benzeri. 2 gerekli.</td></tr><tr><td>Arteriyel kan gazı şırıngası&nbsp;</td><td>Radiometer Medical</td><td></td><td>veya benzeri. 4 gerekli.</td></tr><tr><td>Esnek boruya bağlı steril kanatlı iğne, 21 gauge</td><td>Greiner Bio-One</td><td>450081</td> <td>(tek kullanımlık olarak tasarlanmıştır).3 gerekli.</td></tr><tr><td>Vacutainer tüpü 6 mL EDTA&nbsp;</td><td>Greiner Bio-One</td><td>456043</td><td>veya benzeri. Örnek site ile etiketleyin. 10 gerekli.</td></tr><tr><td>Vacutainer tüpü 5 mL LH Lityum Heparin Ayırıcı</td><td>Greiner Bio-One</td><td>456305</td><td>veya benzeri. Örnek site ile etiketleyin. 5 gerekli.</td></tr><tr><td>Vacutainer tüp 6 mL Serum Pıhtı Aktivatatörü&nbsp;</td><td>Greiner Bio-One</td><td>456089</td><td>veya benzeri. Örnek site ile etiketleyin. 5 gerekli.</td></tr><tr><td>Vacutainer tüpü 3 mL ve nbsp; 9NC Pıhtılaşma sodyum sitrat %3.2</td> <td>Greiner Bio-One</td><td>454334</td><td>veya benzeri. Örnek site ile etiketleyin. 5 gerekli.</td></tr><tr><td>Kriyojenik şişeler, 2.0 mL</td><td>Corning</td><td>430488</td><td>veya benzeri. Örnek bölge, serum/plazma türü ve ID 90 gerekli.</td></tr><tr><td>Ameliyathanede kan örneklerini taşımak için</td>şırıngaları <td></td><td></td><td>taşımak için işaretli tepsiler</td></tr><tr><td>Örneklerin nazikçe karıştırılması için</td><td>külbütör</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Strafor kutuda</td><td>buz</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Uygun kapta</td> <td>sıvı nitrojen</td><td></td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Plasenta örnekleri</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Metal tepsi</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Strafor kutuda</td><td>buz</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kalibre edilmiş ölçek</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Metal cetvel</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 M Fosfat tamponlu tuzlu su</td><td>Sigma</td><td>D1408</td><td>veya benzeri. 10 M ila %nbsp seyreltin. </td></tr><tr><td>RNA stabilizasyon solüsyonu</td> kullanmadan 1 M önce <td>Sigma</td><td>R0901-500ML&nbsp;</td><td>veya benzeri</td></tr><tr><td>Optimum Kesme Sıcaklığı (OCT) bileşiği</td><td>vwr</td><td>361603E</td><td>veya benzeri</td></tr><tr><td>Kriyojenik şişeler, 2.0 mL</td><td>Corning</td><td>430488</td><td>veya benzeri. Örnek site ile etiketleyin. içerik ve kimlik. 10 gerekli.</td></tr><tr><td>Santrifüj tüpleri, konik tabanlı 50 mL</td><td>Greiner Bio-One</td><td>227,285</td><td>veya benzeri. "RNA later" ile etiketleyin, numune yeri ve ID. 2 gerekli.</td></tr><tr><td>Uygun kapta</td> <td>sıvı nitrojen</td><td></td><td></td></tr><tr><td><güçlü>fetal vücut kompozisyonu</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kalibre edilmiş ölçek</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ölçüm bandı</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

İnsan vücudunun fizyolojisini bütünleştiren 4 damarlı Örnekleme yaklaşımı<emin vivo</em

The 4-vessel Sampling Approach to Integrative Studies of Human Placental Physiology In Vivo

Insan plasenta rahimde iken hala araştırma için son derece erişilemez. Bu nedenle, plasental anatomi, hemodinamik ve gebeliğin süresindeki türler arasında yüksek çeşitliliğe rağmen, insan plasental fizyolojisinin in vivo olarak mevcut anlayışı büyük oranda hayvan çalışmalarına dayanmaktadır. İnsan plasenta çalışmalarının büyük çoğunluğu ex vivo perfüzyon çalışmaları veya in vitro trofoblast çalışmalardır. In vitro çalışmalar ve hayvan modelleri çok önemlidir, ancak bu tür çalışmaların sonuçlarının insan plasentasına in vivo ekstrapolasyonu kesin değildir. İnsana plasenta fizyolojisini venöz dönemde çalışmayı ve yöntemin ayrıntılı bir protokolünü sunmayı amaçladık. Planlanan sezaryen sırasında uterin vene uterin vene girişin uterus kesi öncesi istismar edilmesi, gelen ve giden damarlardan plasentanın maternal ve fetal taraflarındaki kan örneklerini toplarız. Konuyu birleştirirkenHacimsel kan akımı ölçümleri ile kan numunelerinden elde edilen santrasyon ölçümleri sayesinde, herhangi bir bileşiğin plasental ve fetal alımını ve salımını nicel olarak değerlendirebiliriz. Dahası, aynı anne-fetus çiftlerinden elde edilen plasental doku örnekleri, taşıyıcı yoğunluğunu, aktivitesini ve plasental fonksiyonların diğer yönlerini in vivo olarak ölçebilir . 4 damarlı örnekleme yönteminin bu entegre kullanımı sayesinde hem normal hem de patolojik gebeliklerde plasental besin transferinin ve metabolizmasının bazılarını in vivo olarak test edebiliyoruz. Ayrıca, bu yöntem, plasenta tarafından salgılanan maddelerin maternal dolaşımda tanımlanmasını sağlar ve bu da plasenta disfonksiyonunun biyolojik belirteçlerinin araştırılmasına önemli katkı sağlayabilir.

4 damarlı örnekleme yöntemi klinik uygulamada uygulanabilir ve 209 ana / bebek çifti kan numunesini başarıyla elde ettik. Bunların 128&#39;inde hacimsel kan akışını ölçmekteyiz. Hem ana hem de fetal damarların tam 4 damar örneklemesi ve kaliteli akış ölçümleri, 70 ana-fetus çiftinde elde edildi ( Şekil 3 ). Buna ek olarak, şimdiye kadar 30 preeklamptik hastadan alınan kan ve plasenta örneklerini aldık. Yöntemin 14 , <sup cl...

Bu dönemde in vivo insan plasental fizyoloji çalışmak için ayrıntılı bir yöntem sunulmaktadır. Yöntem, plasentanın maternal ve fetal taraflarındaki gelen ve giden damarlardan alınan kan örneklerini, hacimsel kan akışı ve plasental doku örneklemesi ile ilgili ultrason ölçümleri ile birleştirir.

İnsan vücudunun fizyolojisini bütünleştiren 4 damarlı Örnekleme Yaklaşımı<emIn vivo</em

The human placenta is highly inaccessible for research while still in utero. The current understanding of human placental physiology in vivo is therefore ...

Bu prosedürün genel amacı, insan fetal plasenta fizyolojisine dair kapsamlı ve bütünleşik verilerin toplanmasını birlikte sağlayan çeşitli yöntemler kullanarak, insan plasenta fonksiyonunu in vivo olarak incelemektir. Bu yöntem, plasentanın maternal-fetal etkileşimdeki rolü gibi insan plasenta fizyolojisine ilişkin temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, plasental transfer, alım ve sekresyona dair mevcut kavramların insanlarda in vivo olarak test edilmesini mümkün kılmasıdır.Deneysel çalışmaların insanlara ekstrapolasyonu; plasental anatomi, gebelik süresi ve gebelik komplikasyonları açısından hayvanlar ve insanlar arasındaki büyük farklılıklar nedeniyle kısıtlanmaktadır. Bu yöntem, plasental metabolizma ve besin transferine dair içgörü sağlayabilmenin yanı sıra, hem sağlıklı gebeliklerde hem de preeklampsi gibi komplikasyonlu gebeliklerde bileşiklerin plasental salınımının incelenmesi için de uygulanabilir. Bu yöntem, birçok tıp uzmanı, hemşire ve araştırmacının yüksek düzeyde koordineli bir iş birliğini gerektirmektedir.Başarının anahtarı, her an anneyi ve bebeğini odak noktasında tutarak yapılan titiz bir planlamadır. Bu tablo, örneklerin elde edilmesi için gereken zaman çizelgesini ve personeli göstermektedir. Örnekleme işlemine yardımcı olan her bir birey farklı bir renkle temsil edilmiştir.Bu protokol, insan plasenta fizyolojisini incelemek için üç yöntemin birleşik kullanımından oluşmaktadır. İlk olarak, uterin arter ve göbek venindeki kan akımı hacmi ultrason ile ölçülür. İkinci olarak, sezaryen sırasında insan plasentasının maternal ve fetal taraflarındaki giriş ve çıkış damarlarından kan örnekleri toplanır.Analiz için üçüncü plasenta doku örnekleri toplanır. Başlamak için, aort ve vena cava basısını önlemek amacıyla kadını, ilgi bölgesinin aksi yönüne hafifçe yan yatırılmış yarı sırtüstü pozisyona getirin. Fetal sessizlik döneminde, fetal abdomenin sagital veya oblik kesitinde göbek venini görüntüleyin ve intra-abdominal göbek veninin herhangi bir görünür dal öncesindeki düz bir bölümünde damar iç çapını ölçün.Çap ölçümleri için standart B-modu kullanın ve damarı dik bir sonasyon açısında görüntüleyin; pulsatif çap değişimlerinin etkisini en aza indirmek için daha sonraki ölçümlerde kullanmak üzere birkaç optimal kareyi saklayın. Ölçümleri beş ila 10 kez tekrarlayın. Aynı bölgede, probu ayarlayın ve zaman ortalamalı maksimum hızı veya TAMX'i ölçmek için Doppler ultrason kullanarak sonasyon açısını mümkün olduğunca düşük tutun.Üç ila beş saniyelik bir süre boyunca hızı belirleyin. Ardından, uterus arterinin internal iliak arterden ayrıldıktan hemen sonra eksternal iliak arteri kestiği bölgeyi görüntülemek için Doppler ultrason kullanın. Düşük bir sonikasyon açısı elde etmek için probu bu bölgede ayarlayın ve TAMX değerini ölçün.Hızı, üç kalp döngüsünün ortalama hızı olarak elde edin. Çap ölçümleri için, TAMX ölçüm bölgelerine mümkün olduğunca yakın bir noktada doğru bir açı yakalamak amacıyla damarı distal yönde takip edin. Uterin arterde kan hacim akışını ölçmek zordur, çünkü TAMX'in ölçüldüğü aynı noktada dik bir açı yakalamak pek olası değildir.İki ölçüm noktası arasında dallanan damarlar, çap ölçümlerinin hariç tutulmasına neden olabilir. Cerrahi işlem başlamadan önce dört damardan kan örneği almak için solüsyonları, tüpleri ve ekipmanları hazırlayın. Ardından, örnekleme işlemine yardımcı olacak tüm personele bilgi verin ve ekipmanları teslim edin.Standart periferik intravenöz erişime ek olarak, radial artere arteriyel hat yerleştirin. Örnek almanın daha kolay olması nedeniyle antekubital ven tercih edilir. Ardından, abdominal boşluğu açtıktan sonra, abdominal duvarı kaldırmak ve uterusun anterolateral taraflarındaki uterus venlerinin ana dallarını açığa çıkarmak için birle rertraktör kullanın.Mümkün olduğunca plasenta ile aynı tarafta bulunan bir uterus veni dalını veya plasentanın en belirgin venöz pleksusunun yer aldığı uterus orta hattını belirleyin. Uygun bir uterus veni belirlendiğinde, yardımcı personele radial arter ve antekubital venden kan örnekleri alması talimatını verin. Eş zamanlı olarak, 30 derecelik bir açıyla, uterus venine kan gazı enjektörüne bağlı bir kelebek iğne yerleştirin ve hafif aspirasyon yoluyla kan toplayın.Kelebek iğnenin IV pozisyonunu dikkatlice sabit tutarken, bir asistana kan gazı şırıngasını 20 mililitrelik bir şırıngayla değiştirmesini söyleyin. Bunu hemen ardından 10 mililitrelik bir şırınga ile tekrarlayın. Radial arterden veya antekubital venden ilk beş mililitreyi atın ve ardından kan gazı analizleri için heparinli bir şırıngaya üç mililitre aspire edin.Ardından her bölgeden 30 mililitre aspire edin. Çocuk doğduğunda, kan gazı analizi için bir şırınga ile başlayın ve göbek kordonunu klemplemeden veya plasentayı doğurtmadan hemen önce göbek arterinden kan aspire edin. Mümkünse bunu üç adet 10 mililitrelik şırınga ile takip edin.Arteriyel örnekler alındığında, göbek veninden örnekleme yapmadan önce kordonu klempleyin ve kesin; tüm göbek örneklerini plasenta in situ durumundayken toplayın. Dört damar yöntemi, beş farklı bölgeden aynı anda hızlı örnek alımının yanı sıra koordineli kan örneklemesi gerektirir. Kontraksiyona, hemolize ve koagülasyona yatkın olan göbek arterine dikkat edin.Karın bölgesini kapatmaya başlamadan önce uterin ven üzerindeki örnekleme bölgesinin son kontrolünü yapın. Tüm kan gazı şırıngalarını buz üzerine yerleştirin ve örnekleri beş dakika içinde analiz etmek için bir kan gazı analizörü kullanın. Kan örneklerini derhal vacutainer'lara aktarın ve plazma tüplerini buz üzerine koymadan önce bir ila iki dakika boyunca sallayın.Plazma örneklerini mümkün olan en kısa sürede ve 30 dakika içerisinde 2.500 ×g'de ve altı °C'de 20 dakika boyunca santrifüjleyin. Ardından süpernatantları dikkatlice iki mililitrelik kriyotüplere paylaştırın. Kan örneklerini istenen maddeler açısından analiz edin ve plasental transfer hesaplamalarını metin protokolüne göre gerçekleştirin.Plasentayı, doğumdan hemen sonra buzla soğutulmuş bir diseksiyon tepsisine düz bir şekilde yerleştirin. Dokunun ağırlığının yanı sıra en uzun çapını ve ilk ölçüme 90 derece dik olan çapını kaydedin. Ardından, herhangi bir makroskobik patolojiyi ve kordaki damar sayısını kaydedin.Plasentayı maternal yüzeyi yukarı bakacak şekilde yerleştirin ve plasentanın her kadranında rastgele seçilmiş dört ila beş örnekleme alanı belirleyin. Desiduanın uzaklaştırılması için makas kullanarak maternal yüzeyden üç ila beş milimetre derinliğinde kesin. Ardından, her bir alandan bir ila iki santimetreküp boyutunda villöz doku parçası toplayın.Toplanan dokuyu 50 mililitre soğuk, bir molar PBS ile nazikçe yıkayın. Ardından dokuyu, her bir örnekleme bölgesinden birkaç parçaya ayırın ve alikotlayın. 0,1 ila 0,5 santimetreküp boyutundaki doku örneği alikotlarını beş kriyotüpe ekleyin ve örnekleri sıvı azot içinde şok dondurun.Boyutları 0,1 ila 0,2 santimetreküp olan küçük parçaları, önceden hazırlanmış ve 25 mililitre RNA stabilizasyon çözeltisi içeren tüplere ekleyin. Histolojik çalışmalar için, 0,5 santimetreküp boyutundaki parçaları 0,5 mililitre OCT içeren beş kriyotüpe ekleyin, üzerini OCT ile tamamlayın ve ardından tüplerin içeriğini karıştırın. Numuneleri ileri analizlere kadar -80 °C'de dondurun.Dört damarlı örnekleme yöntemi kullanılarak 209 anne-bebek çiftinden başarıyla kan örnekleri alınmıştır. Örneklerin 128'inde volümetrik kan akımı ölçülmüştür. 70 anne-fetüs çiftinde tam dört damarlı örnekleme yapılmış ve hem maternal hem de fetal damarların kaliteli akım ölçümleri elde edilmiştir.Burada glikoz örneğiyle gösterildiği üzere, plasental transferi incelemek için dört kaplı yaklaşım kullanılmıştır. Plasentanın her iki tarafında anlamlı arteriyovenöz glikoz farkları saptanmış; bu durum 0.29 millimoles per liter tutarında bir in vivo uteroplasental alım ve 0.54 millimoles per liter tutarında bir fetal alım olduğunu göstermiştir. Medyan göbek veni akımı 196.2 milliliters per minute olarak ölçülmüştür.Fick Prensibi kullanılarak, göbek kordonu dolaşımından medyan fetal glukoz alımı dakikada 0.10 milimol olarak hesaplanmıştır. Dört damar yöntemi kullanılarak, metabolik yolaklarda bir yakıt olarak ve amino asitlerin fetal-plasental etkileşimli dönüşümü için önemli olan glutamik asidin plasental alımı incelenmiştir. Glutamik asidin hem göbek kordonu hem de maternal dolaşımdan plasental alımı gözlemlenmiştir.Plasentanın term dönemindeki in vivo progesteron salınımı da ölçülmüş ve maternal dolaşıma anlamlı bir progesteron salınımı olduğu saptanmıştır; bu durum, plasental dört damar örnekleme yönteminin plasenta tarafından salınan maddelerin tespitinde nasıl kullanılabileceğini göstermektedir. Bu prosedür uygulanırken, doğru ölçümler elde edebilmek için volumetrik kan akımı ölçümlerinin, bu tür sonografide deneyimli bir fetal tıp uzmanı tarafından yapılması gerektiğini vurgulamak önemlidir. Bu prosedürün ardından, kan örnekleri; besinler, metabolitler, sinyal molekülleri, eksozomlar, atık bileşikler, ilaçlar veya toksinler olsun, ilgili maddenin plasental transferini ve alımını veya salınımını incelemek amacıyla analiz edilebilir.Ayrıca, plasenta örneklerinin analizi, transfer regülasyonu ve plasental metabolizma ile ilgili ek sorulara cevap verebilir. Toplu olarak bu protokol, insan plasental fizyolojisini incelemek için bütünsel bir in vivo model elde etmek amacıyla kan akım hacmi ölçümlerinin, kan ve doku örneklerinin koordineli bir şekilde nasıl toplanabileceğini göstermektedir. Bu videoyu izledikten sonra bir kadın doğum uzmanı, sezaryen sırasında insan plasentasının her iki tarafından arteriovenöz kan örneklerinin nasıl güvenle toplanacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalıdır.

the-4-vessel-sampling-approach-to-integrative-studies-human-placental

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Biz, gelişimi sırasında büyük bir hematopoetik organ olarak plasenta tespit ettik. Biz, hematopoietik kök hücreler (HKH'lerin) üretilen ve benzersiz microenvironmental nişler içinde plasenta genişletilmiş iki bulundu. Burada, fare plasenta HKH'lerin izolasyonu ve görselleştirme için gerekli deneysel teknikler açıklanmaktadır.

Plasenta Hematopoetik Kök Hücre İzolasyonu ve Analizi

Plasenta karşısında Ksenobiyotik ve Nanomalzemelerin Ulaştırma Hızı belirlenmesi kullanarak<em&gt; Ex vivo</em&gt; İnsan Plasental Perfüzyon Modeli

Birincil insan plasental (villöz) ve plasental organ kültürleri oluşturmak için basit bir yöntem tarif edilmektedir. Villus ve desidual organ kültürleri, insan maternal-fetal arayüzünde patogenezinde eğitim için çok değerli araçlardır. Fakültatif hücre içi bakteri Listeria monocytogenes ile enfeksiyon gösterilmiştir.

İnsan Plasental ve Desidual Organ Kültürleri Maternal-Fetal Arayüz de Enfeksiyonlar Eğitim için

Bu çalışmada tersinir doku takas, immunostaining, 3D işleme ve analiz insan plasenta villus örneklerinde sırasına 1-2 mm3damar ağları için bir protokol sunar.

Üç boyutlu görüntü oluşturma ve çözümleme-in Immunolabeled, açıklık insan plasental Villous damar ağları

Biz emanet ve plasenta hedefli ilaç dağıtım etkinliğini değerlendirmek için üç yöntem kullanır bir sistem tarif: nanopartikül birikimi, plasenta ve fetal gelişim izlemek için yüksek frekanslı ultrason izlemek için Imaging vivo içinde  ve HPLC doku için ilaç dağıtım ölçmek için.

Kapsamlı değerlendirme etkinliği ve güvenliği üç tamamlayıcı yöntemlerle plasenta hedefli ilaç dağıtım

Burada, bir test makalesinin maternal damar içine uygulanmasını sağlamak ve ksenobiyotik partiküllerin veya farmakolojik ajanların plasental aktarımını değerlendirmek için ex vivo maternal-fetal vasküler perfüzyon Protokolü sunulmuştur. Plasental Fizyoloji.

Rodent placenta 'nın ex vivo perfüzyon

İşte sabit akış koşulları altında plasental eksplantların kültürlenmesi için bir protokol. Bu yaklaşım, dinamik fizyolojik ortamların replikasyonunu sağlayarak geleneksel statik villöz kültür sistemlerini geliştirir.

Ex Vivo (Canlı Canlı) Plasental Eksplant Akış Kültürü - Utero'daki Dinamik Koşulları Taklit Etmek

Bu protokol, viral enfeksiyonların incelenmesi için hava-sıvı arayüzünde kültürlenen insan plasenta dokusu eksplantlarının hazırlanmasını açıklar.

Ex vivo Anne-Fetal Arayüzü üzerinden viral iletimin incelenmesi için insan plasenta eksplantlarının kültürü

Gastrik bypass sıçan modellerini kullanarak çok sayıda çalışma son zamanlarda Roux-en-Y gastrik bypass işlemleri altta yatan fizyolojik mekanizmaları ortaya çıkarmak için yapılmıştır. Bu makale, göstermek ve bu deneysel aracın avantajları ve sınırlamaları anlamak için bizim yayınlanan gastrik bypass sıçan modelinin teknik ve deneysel ayrıntıları tartışmayı amaçlamaktadır.

Sıçanlarda Roux-en-Y Gastrik Bypass Operasyonu

Insan tümör ksenograftlarının vaskülarize ve in vivo olarak büyüme aşamasında, fare kökenli hücreleri tarafından filtre edilemeyen bulunmaktadır. aşağı analizi sırasında bu kirletici hücrelerinin neden olduğu önyargı aşmak için, biz manyetik hücre sıralama tarafından tüm fare hücrelerinin kapsamlı tükenmesi için izin veren bir yöntem geliştirdi.

İnsan Tümör ksenogratflarının gelen Fare Hücrelerinin tükenmesi Anlamlı Hedef Hücre Alt Analizi geliştirir

Öğrenin, dört damarlı örnekleme yöntemiyle canlıda insan plasenta fizyolojisini incelemeyi. Bu teknik, anne-fetal etkileşim ve besin transferi çalışmalarında kapsamlı veri sağlar.

İnsan vücudunun fizyolojisini bütünleştiren 4 damarlı Örnekleme Yaklaşımı

Daha fazla video keşfet