Cue reaktivite kokain kullanımı bozukluğu bir sıçan modelinde ölçmek için bir protokol

Bu protokolde, işaret tepkiselliği, bir hayvanın kokainin kendi kendine uygulanmasının yokluğunun ardından kokain arama motivasyonunu ölçer. İşaret reaktivitesi, sıçan daha önce intravenöz kokain dağıtımıyla ilişkilendirilen bağlama ve ipuçlarına yeniden maruz kaldığında ortaya çıkar. İşaret reaktivitesi, nüks riski için bir ölçüdür.

Burada tarif edilen işaret reaktivite protokolü, nüksü modifiye edici farmakoterapileri test etmenin yanı sıra nüks riskine katkıda bulunan genetik ve çevresel faktörleri araştırmak için klinik öncesi bir araçtır. Bu, insan ilacı alma ve nüksetme özelliklerinin çoğuyla uyumlu olan uyuşturucu arama davranışı için edimsel bir görevdir. Kokain dozu, dağıtım hacmi ve infüzyon süresi gibi temel parametrelerin optimizasyonu, faz geçerliliği ve translasyonel üretim gücü oluşturmak için yapılmıştır.

Bu protokol için, en az yedi gün boyunca koloni odasına alıştırılmış, kabaca sekiz ila dokuz haftalık olan erkek Sprague Dawley sıçanlarını kullanın. Alışma döneminde, fareleri çiftler halinde barındırın ve çalışma boyunca günlük olarak ele alın. Çalışmanın tüm aşamaları boyunca ev kafeslerinde yiyeceklere sınırsız erişim sağlayın.

Kmiotek ve işbirlikçileri tarafından JoVE videolarında belirtilen yöntemi kullanarak juguler ven kateterleri implante edin, ardından fareleri rastgele salin veya kokain tedavi gruplarına atayın. Eğitim için, metin protokolünde açıklandığı gibi kokainin kendi kendine uygulanmasına ilişkin program programları. Eğitim odalarını iki geri çekilebilir tepki kolu, her yanıt kolunun üzerinde bir uyarı ışığı ve kolların karşısında bir ev ışığı ile donatın.

Şırınga infüzyon pompalarından kabinin dışına kokain veya salin verin. Şırıngalara bağlı 23 gauge iğne ve farenin kateterlerine bağlı metal bir yaylı tasma içine yerleştirilmiş polietilen boru kullanın. Kokain veya salin, aktif bir kol presinden sonra verilir, ancak aktif olmayan kol basmasından sonra verilmez.

Çözümleri günlük olarak değiştirin. Her sıçanın ağırlığına göre uyarlanmış steril %0,9 sodyum klorürde yeni yapılmış kokain seyreltmelerini kullanın. Her sıçanın şırıngasına en az sekiz mililitre çözelti yükleyin.

Sıçanları bir FR1 takviye programı üzerinde eğitmekle başlayın ve seans başına toplam infüzyon sayısında% 5'dan daha az değişkenlik ile saatte yedi infüzyondan üç gün sonra bir FR10 programına ilerleyin. Bir hayvanın ne zaman FR5'e ilerletileceğini belirlemek ve kateter açıklığı kaybını kontrol etmek için kendi kendine uygulama davranış verilerini günlük olarak analiz etmek zorunludur. Protokolün en kritik adımlarından biri, hayvanın normal şekilde kendi kendini yönetmesini sağlamak için eğitimin ilk 14 günü boyunca kendi kendine uygulamayı izlemektir.

Kendi kendine uygulama önemli ölçüde azalırsa, sıçanın kateteri muhtemelen açıklığını kaybetmiştir. Bir seansın başında, şırıngada kabarcık olmadığını kontrol edin. Şırıngayı polietilen boruya takın ve infüzyon pompasına yerleştirin.

Şırıngayı, çözelti polietilen boruya eşit ve tamamen dağılacak şekilde dikkatlice ayarlayın. Daha sonra, fareleri dağıtım sistemine bağlayın ve onları fanlı havalandırmalı ses azaltıcı kabinlere yerleştirilmiş ilgili standart edimsel koşullandırma odalarına yerleştirin. Deney boyunca tutarlılık hayati önem taşır.

Her zaman aynı hazneye bir fare yerleştirin ve aktif kolu o haznenin içinde aynı tarafta tutun. Günde 14 kez 180 dakikalık seanslar boyunca, fareler kollara serbestçe erişebilir ve sistemin çalışması koşuluyla hangi kolun stimülasyon sağladığını kolayca öğrenirler. Aktif kolun bir sabit oranlı programdaki her tetiği, altı saniye boyunca 0,1 mililitre çözelti salgılar ve aynı anda kafes ışığını ve aktif kolun üzerindeki uyarı ışığını yakar.

Çözüm serbest bırakılmadan önce bir saniyelik bir gecikme olur. Her kokain veya tuzlu su dağıtımından sonra, uyarı ışığı ve infüzyon pompası 20 saniye boyunca devre dışı bırakılır, bu sırada ev ışığı açık kalır ve kola basmak hiçbir şey yapmaz, ancak kaydedilir. Işık söndüğünde, kol yeniden etkinleştirilir.

Etkin olmayan kolun herhangi bir şekilde tetiklenmesi, planlanmış bir sonuç oluşturmaz. Bu 180 dakikalık seansın sonunda, potansiyel olarak agresif fareyi odadan çıkarmak için yavaş ve dikkatli hareketler kullanın. Sonra kateterini yıkayın.

Seanslar arasında, odaları dikkatlice temizleyin. Her yüzeyi %70 etanol solüsyonu ile silin. Eğitim seanslarının sonunda, fareleri 30 gün boyunca ameliyat odasına erişimi olmadan zorla yoksunluğa koyun.

Fareleri günlük olarak kullanmaya devam edin ve genel sağlığı izleyin. Uzun perhiz döneminden sonra, farelerin ameliyat odasında 60 dakika kalmasına izin verin ve hemen ardından beyin hasadı yapın. Bu oturum için, işaret tepkiselliği zamanlanmış programını çalıştırın.

Oturumlar arasında beyin toplamak için zaman tanımak için oturum başlangıç saatlerini kademelendirin. Daha da önemlisi, pompayı şırınga takılı olmadan çalıştırın, böylece pompanın işitsel ipucu, madde iletimi olmadan hala uyaranın bir parçası olur. Bu oturuma her zamanki gibi, eğitildiği kendi kendine yönetim odasındaki sıçanla başlayın.

Bu testte, daha önce kokain veya salin veren aktif kola basıldığında, yalnızca ipuçları bir FR1 programına göre iletilir. Etkin olmayan kol hala hiçbir şey yapmıyor. Tüm işaret sunumlarını, daha önce aktif olan kol preslerini ve etkin olmayan kol preslerini ve ilk kol basışına kadar olan gecikmeyi kaydedin.

Açıklanan protokol kullanılarak bir çalışma yapıldı ve sıçanlar, kriterleri karşıladıkları için ayrı ayrı FR1'den FR5'e geçirildi. Kokain uygulayan grupta, sıçanlar kritere ulaşana kadar infüzyon sayısını kademeli olarak artırdılar, daha sonra FR1'den FR5'e geçirildiler. Kokain işaret reaktivite testinden çoklu çıktı ölçümleri toplanmıştır.

Örneğin, daha önce kendi kendine kokain uygulayan sıçanlar, daha önce aktif olan kolu, kendi kendine salin uygulayan sıçanlardan çok daha fazla bastırdı. Bir diğer önemli çıktı ölçüsü, birinci seviye baskıya kadar olan gecikmedir. Bunda bir değişiklik gözlendiğinde, hayvan fiziksel olarak stresli olabilir veya kokainin kendi kendine uygulanması için motivasyonu azalmış olabilir.

Lokomotor davranış görevleri, fiziksel sağlıktaki değişiklikleri değerlendirmek ve motor bozukluğu motivasyonel değişikliklerden ayırt etmek için kullanılabilir. Bu videoyu izledikten sonra, fareleri bir ilacı kendi kendine uygulamak, kendi kendine uygulama sırasında kateter açıklığını korumak ve nüks riskinin bir ölçüsü olarak yoksunluğu takiben ilaçla ilişkili ipuçlarına işaret tepkisini değerlendirmek için nasıl eğitileceğini iyi anlamalısınız. Bu prosedürü denerken, yazılımı dikkatli bir şekilde programlamayı, hayvanları uygun şekilde tutmayı ve intravenöz kateterleri düzenli olarak yıkamayı unutmamak önemlidir.

Bu prosedürü takiben, kokain işaret reaktivitesini yönlendiren hücresel ve moleküler mekanizmalar değerlendirilebilir ve ayrıca kokain işaret reaktivitesini değiştiren potansiyel farmakoterapötikler test edilebilir.