Name: Optik Koherens tomografi: Fare retina Ganglion hücreleri Vivo içinde görüntüleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 17 s
Description: Öğrenin, fare retina ganglion hücrelerini görüntülemek için spektral domain optik koherens tomografi (SD-OCT) kullanmayı. Bu invaziv olmayan yöntem, optik nöropati araştırmalarında retinal kalınlığı hızlı ve doğru şekilde değerlendirmeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser desteklenen INSERM, Université Montpellier, Retina Fransa, sendika National des Aveugles et Déficients Visuels (UNADEV), dernek Sendromu de Wolfram, Fondation pour la Recherche Médicale, Fondation de France ve mükemmellik laboratuvar EpiGenMed programı.

deneysel protokol Institut national de la santé tarafından kabul edildi et de la recherche médicale (INSERM; Montpellier, Fransa), Avrupa direktifleri ile tutarlıdır ve ARVO deyimiyle oftalmik araştırma hayvanlarda kullanım için uygundur. Etik Languedoc Roussillon nezaket içinde hayvan deneme (CEEALR; nuCEEA-LR-12123) sözleşme uyarınca gerçekleştirilmiştir.
 1. ekipman kurulumu ve öncesi görüntüleme hazırlık Not: Burada, OCT spektral etki alanı (SD) oftalmik görüntüleme sistemi ( şekil 1A) kullanarak fare retina üzerinde gerçekleştirildi. SD-Ekim aparatı bir üs ve bir hayvan görüntüleme Dağı (AIM) olan bir kemirgen hizalama sahne (RAS) ( şekil 1B) oluşur. Bankası bilgisayar OCT motoru, SD-Ekim sonda ve fare özgü lens içerir. Sonda Z-çevirmen içerir amacı monte edilir. RAS fare ile X - ve Y-çevirmen, tablo sayesinde döndürülmüş ve swiveled, kaset konumlandırma ve burun bandı olan çıkarılabilir ısırık çubuk için kullanılır. İkincisi de bir açık kaynak görüntü işleme programı ile yapılabilir, ancak üreticisi tarafından sağlanan yazılımı toplama ve analizi OCT dosyaların için sağlar.
<ol><li>Sıkıca sonda AIM yerleştirin.</li>
	<li>Fare özgü lens için sonda bağlayın.</li>
	<li>Belirli objektifi (burada, 086 güç ve 964 konumunda) başvuru kol ayarlarını.</li>
	<li>Yapma fare özel lens emin yeterince uzak kaset, burun bandı kaset üzerine olan ısırık çubuk eklemek. 
	Not: Objektif ve kaset arasındaki mesafe amaç arka tarafında bulunan Z-çevirmen vida ile ayarlanabilir. Piyasada bulunan bir elastik bant burun grubudur ve onun gerginlik fare boyutuna bağlı olarak ayarlanması gereken.</li>
	<li>Güç kaynağı (sağ alt köşesinde sepeti) ve sonra bilgisayarı açın.</li>
	Görüntüleme programını başlatmak için <li>çift tıklatın üstünde üstünde belgili tanımlık perde uygun kısa. 
	Not: Bu objektif türüne bağlıdır; Burada, fare Retina.</li>
	<li>Yeni bir klinik çalışma oluşturun ve istenen iletişim kuralları ekleyin. Aksi takdirde, mevcut klinik çalışma ve/veya iletişim kuralları kullanın.
	<ol><li>Seçerek yeni bir çalışma eklemek &#34; eğitim NameŔ &#34; IDŔ &#34; tedavi kol özellikleri &#34; (burada, &#34; Uncategorized &#34;); ve önceden tanımlanmış &#34; protokolleri tarama &#34;, varsa.</li>
	</ol></li> <li>Seç bir &#34; adli &#34; içinde &#34; klinik çalışmada &#34; bölüm. 
	Not: için yeni bir &#34; sınav &#34; gidin, &#34; Kur sınav &#38; doktorlar &#34; onu tanımlamak için</li>
	<li>Ekle yeni bir hasta hasta/sınav içinde bölüm yanında tıkırtı üstünde eklemek hasta; girme &#34; numarası &#34;, &#34; adı &#34;, &#34; soyadı &#34;, &#34; seks &#34;, ve &#34; Doğum tarihi &#34; (isteğe bağlı). 
	Not: sadece her fare test etmeden önce daha uygun, bunu. Kimliği 10 karakter uzunluğunda olduğundan emin olun. Fare için her iki gözde için refraktif hata 0, Aksiyel uzunluğu 23.0.</li>
	<li>Tıklayın &#34; eklemek sınavı &#34; ve istenen seçin &#34; protokol &#34; ekleyerek &#34; önceden inceden inceye gözden geçirmek &#34; listesi (burada, sağ gözü) ilk ölçülecektir göz ile başlayan veya taramalar özelleştirerek.</li>
	<li>Bir tarama özelleştirmek için bir şablon olarak varolan bir tarama kullanmak ve düzenlemek veya sıfırdan oluşturmak &#34; özel tarama Ekle &#34; seçeneği. Tüm taramalar listesine ekledikten sonra yeni bir iletişim kuralını kullanarak tanımlamak &#34; Enter &#34; yeni iletişim kuralı adı &#34; seçeneği (OS: yuvarlak pencere uğursuz, sol göz; OD: yuvarlak pencere dexter, değil göz). 
	Not: Burada, protokol üç tarar içerir.: (i) bir Radyal inceden inceye gözden geçirmek, 1.4 mm çapında, 0 mm yatay ve düşey uzaklıklar, 1.000 satırlık A-taramalar/B-Tara, B-taramalar/hacim 100, 1 kare/B-Tara, etkin olmayan A-taramalar/B-tarama 80 satır ve 1 birim; (ii) bir dikdörtgen tarama, 1.4 mm Uzunluk ve genişlik, 0° açı, 0 mm yatay ve düşey uzaklıklar, A-taramalar/B-Tara, 100 B-inceden inceye gözden geçirmek, 1 kare/B-Tara, etkin olmayan A-taramalar/B-tarama 80 satır ve 1 birim 1.000 satırlık; ve (iii) bir annüler inceden inceye gözden geçirmek, 0,4 mm minimum ve 0,6 mm maksimum çapı, 0 mm yatay ve düşey uzaklıklar, A-taramalar/B-Tara, B-taramalar/Cilt 3, 48 çerçeveler/B-Tara, etkin olmayan A-taramalar/B-tarama 80 satır ve 1 birim 1.000 satırlık.</li>
</ol> 2. Fare hazırlık <ol><li>göz dilatasyon ve immobilizasyon <ol><li>en az 15 dk önce veri toplama, fare gözlerinin içine % 10 phenylephrine göz damlası aşılamak, aşırı kaldırmak ve % 0.5 tropicamide göz damlası aşılamak. 
		Not: İlk dilatasyon aynı anda oturum sırasında test tüm fareler için yapılabilir. Sıvı oda sıcaklığında olduğundan emin olun.</li>
		<li>Hemen sonra ikna genel anestezi (Adım 2.2), %0,4 oxybuprocaine hidroklorid göz damlası, 3 için yerinde tutarak yönetmek anestezi ve gözleri hareketsiz için s. Daha sonra damla silin ve gözleri de genişlemiş tespit etmek için %10 phenylephrine ve % 0.5 tropicamide korumak yineleyin. 
		Not: sıvıların oda sıcaklığında ve fare oxybuprocaine yutmak değil emin olun.</li>
	</ol></li> <li>Genel anestezi <ol><li>ketamin (20 mg/mL) ve xylazine (1.17 mg/mL) anestezik bir çözüm salin hazır olun. En fazla 2 hafta 4 ° C'de mağaza.</li>
		<li>Test önce yaklaşık 5 dk intraperitoneally enjekte anestezik çözüm vücut kitle, yaş ve fare boyutunu bağlı olarak 1 gram başına 5-10 µL. 
		Not: Genç ve/veya ince fareler ihtiyacı daha az anestezik, çekim daha az zaman anestezi, ama aynı zamanda daha hızlı uyandırmak için. Burada, 8 µL/g (160 mg/kg ketamin bas, xylazine 9.33 mg/kg).</li>
		<li>İsteğe bağlı olarak, yapışkan göz damlası veya kornea kuruluğu önlemek için oftalmik bir jel gözlerle yağlamak.</li>
	</ol></li></ol> 3. Fare konumlandırmasını <ol><li>viskoz glikol tabanlı göz gözlerle damla kornea hidrasyon sağlamak için Lubricate. 
	Not: gözleri sınav sırasında kuru görünüyorsa, göz damlası yeniden uygulamak.</li>
	<li>Fare sabıkası sıcak tutmak için cerrahi gazlı bez sarın.</li>
	<li>Bir sünger veya pamuk fitil kullanmak oftalmik bir jel ile % 0.3 mellose her gözün üzerine ince bir tabaka uygulanır, ışık kırılma en aza indirmek için kaçının opaklıklar ve güvenli kornea hidrasyon. Bunu yaparken de, kirpik ve bıyık çekil.</li>
	<li>Fareyi kasete, kafa düz ve işaretleme ileri ile konumlandırma.</li>
	<li>Yavaşça ısırık bar kelepçe açın ve bar ağzına yerleştirin; sabitleyin için burun bandı kullanın. 
	Not: ısırık bar kaset ortasında olduğundan emin olun.</li>
	<li>Bir pamuk rulo doğru () sol altında sağ (sol) gözü test yer.</li>
	<li>Klip hedefleyen ucunu fare özgü lens üzerinde tutarak, bu doğru göz Z-çevirmen vida saat yönünün tersine çevirerek getir.</li>
	<li>Döndürme ve kaset yedirdikten ve çevirerek ısırık bar ve X-çevirmen vidalar, önceden belirlenen farenin konumunu; sağ gözü göz doğrudan objektif ve böylece için için hedeftir gözleri ve objektifin optik eksenleri Hizala. 
	Not: fare çok yüksek veya çok düşük ise, Y-çevirmen vida ilk kullanılmalıdır.</li>
	<li>İlk taramada seçin &#34; sınav &#34;, tıklayın &#34; başlatmak amaçlayan &#34; ve retina görüntüleme için daha fazla el ile ayarlamaları yapın.
	<ol><li>Z-çevirmen vidayı kullanarak hareket retina dikey olarak sol panelindeki ( 2 rakam, yatay B-tarama hizalama) ve yatay olarak rsağ panel ( 2 rakam, dikey B-tarama hizalama).</li>
		<li>ONH yukarı veya aşağı hareket ettirerek doğru kapı aynası ortasında ONH getirmek için kaset döndürün. Isırık bar vidalı sağ panosunda retina düzeltmek için kullanın. ONH sol panelin ortasında konumlandırmak için kaset dönebilen.</li>
		<li>X-çevirmen vida sol panelde retina düzeyi için kullanın. Her modülatör büyük fonksiyonu göz önünde bulundurarak daha da retina ONH merkezileştirmek için konumunu ayarlamak. 
		Not: gerekirse, ONH yukarı ve aşağı sağ panelde taşımak için Y-çevirmen vida kullanın. Pozisyon taramalar arasında herhangi bir zamanda rafine olabilir.</li>
	</ol></li></ol> 4. SD-Ekim Imaging Retina ve ONH <ol><li>ayarlamaları ile içerik sonra tıklayın &#34; başlatmak anlık görüntü &#34; SD-Ekim Taramaya başlamak için.
	<ol><li>Bir 3D görüntüleme gerekli değilse, Öcü seçeneğinin işaretini kaldırın.</li>
	</ol></li> <li>Tarama ve raporu kaydetmek.</li>
	<li>Sonraki taramaları ile ilerle.</li>
	<li>İkinci göz görüntü için objektif geri çeker sonra kaset buna göre ve adımları 3.6-4.3 tekrarlayın.</li>
</ol> 5. Satın alma tamamlama <ol><li>ne zaman satın alma tamamlandıktan, kaset fareden kaldırmak, oftalmik jel ile % 0.3 mellose her göz için geçerlidir ve yukarı uyandırmak ısıtma yüzeyi üzerinde fareyi getirin</li>
	<li>Son satın alma sonra yazılımı kapatın ve bilgisayarı veya OCT Makinası (güç kaynağı button) kapatma.</li>
	<li>Dezenfektan ile kaset temiz.</li>
</ol> 6. Analiz <ol><li>retina tabakası kalınlığı ölçümü için üretici tarafından sağlanan otomatik bölümleme yazılımı kullanın.
	<ol><li>Tıklayın &#34; hasta &#34;, istenen seçin &#34; sınav &#34; dan sonra liste ve tıkırtı üstünde &#34; bir daha gözden geçirme sınav &#34; seçenek.</li>
		<li>İstenen tarama klasör simgesini sağ tıklatarak istediğiniz OCT verileri OCT yazılım üzerine yüklemek.</li>
		<li>Hemen üzerinde B-Tara'yı tıklatın; Kumpasları Çap pergeli; ölçme 10 etkinleştirerek yapılandırmak ve onların adları, açılar ve renkleri girin.</li>
		<li>İstenen gövde üzerinde B tarama; sağ tıklatarak seçtiğiniz yer o buna göre ölçüm için retina üzerine. 
		Not: Bu, birbirlerinden eşit uzaklıkta her tarafında 5 Çap pergeli ONH üzerinde ortalanmış taramalar için ayarlayın. Peripapillary analiz için kumpas çok ileri ONH yerleştirilmedi emin olun. Radyal taramak için OCT yazılım tarafından seçilen 10 fotoğraf oranı analiz. Sayıları bulunabilir &#34; raporları &#34; klasörü.</li>
		<li>Kaydetmek sonuçları analiz için bir elektronik tablo yazılım programında B Ultrasonda sağ tıklatıp'i tıklatarak &#34; sağlamaları &#34;. 
		Not: Sonuçları tarama veri ile aynı klasörde bulunabilir.</li>
	</ol></li> <li>Alternatif olarak, ev yapımı Kaliper makroyu kullanmak &#34; Mr Retina aracı &#34;, bir açık kaynak görüntü işleme programı için Gelişmiş (malzemeleri tablo görmek).
	<ol><li>Emin olun &#34; Mr Retina aracı &#34; ve &#34; çokgen bölüm aracı değiştirmek &#34; makroları etkin. Resim yükleyin. Ölçüm başlatmak için m düğmesini tıklayın. 
		Not: Makroyu otomatik olarak bir 0.2 mm uzunluğundaki oluşturur kaset ONH her iki tarafında ölçme. Her kaset 5 ölçüm noktaları Kumpasları bu işlevi içerir. Yanal konumlarını değiştirilemez ve peripapilla Radyal taramaları için özelleştirilmiş. Kasetleri yatay konumunu RNFL/un kalınlığını ölçmek için önceden, ancak bunun yerine GC karmaşık katman ölçmek için kolayca değiştirilebilir. Tarama kalitesi kötüdür, yatay konumu ayarlanması gerekiyor veya resmi analizinden dışlanmaları gerekir.</li>
		<li>Yatay ayarlama için e butonuna tıklayın. Yeni açılan &#34; ROI Yöneticisi &#34; pencere, ilk kaset seçin.</li>
		<li>'I tıklatın mavi çokgen düğmesini tıklatın ve resim ölçülen katman sınırları tıklayarak ilk kaset konumunu ayarlamak.</li>
		İlk içinde seçerek <li>tekrar için ikinci kaset &#34; ROI Yöneticisi &#34; pencere ve o zaman tıkırtı üstünde uygun imge. R çubuğunda yeniden ölçmek için. Sonuçlarda görüntülemek &#34; ölçümleri &#34; penceresi. 
		Not: Sonuçları herhangi bir zamanda bir elektronik yazılım programı kopyalanabilir. Onlar doğru kaset (r), sol kaset (l) ve toplam için aşağıdaki değerleri içerir: Intden - entegre yoğunluk içinde kaset; : Alanı mm 2 ölçü; Len: kasete mm içinde gövde uzunluğu; Anlamına: demek kaset içinde sinyal yoğunluğu; ve Std: sinyalin ortalama yoğunluğunun standart hata.</li>
		<li>Sonraki görüntü ile ilerle.</li>
		<li>Daha fazla analiz verileri bir elektronik yazılım programı. 
		Not: katman ortalama kalınlığı bulmak için on Len değerler alır.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>Drexler, W., Fujimoto, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((State-of-the-art+retinal+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">State-of-the-art retinal optical coherence tomography.</a> Prog Retin Eye Res. 27 (1), 45-88 (2008).</li>
<li>Grenier, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((WFS1+in+Optic+Neuropathies%3A+Mutation+Findings+in+Nonsyndromic+Optic+Atrophy+and+Assessment+of+Clinical+Severity%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">WFS1 in Optic Neuropathies: Mutation Findings in Nonsyndromic Optic Atrophy and Assessment of Clinical Severity.</a> Ophthalmology. 123 (9), 1989-1998 (2016).</li>
<li>Zmyslowska, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+thinning+as+a+marker+of+disease+progression+in+patients+with+Wolfram+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">Retinal thinning as a marker of disease progression in patients with Wolfram syndrome.</a> Diabetes Care. 38 (3), e36-e37 (2015).</li>
<li>Fischer, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive%2C+in+vivo+assessment+of+mouse+retinal+structure+using+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Noninvasive, in vivo assessment of mouse retinal structure using optical coherence tomography.</a> PLoS One. 4 (10), e7507(2009).</li>
<li>Grieve, K., Thouvenin, O., Sengupta, A., Borderie, V. M., Paques, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Appearance+of+the+Retina+With+Full-Field+Optical+Coherence+Tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Appearance of the Retina With Full-Field Optical Coherence Tomography.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 57 (9), OCT96-OCT104 (2016).</li>
<li>Chang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+degeneration+mutants+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Vision+Res%22%5BJournal%5D)">Retinal degeneration mutants in the mouse.</a> Vision Res. 42 (4), 517-525 (2002).</li>
<li>Mustafa, S., Pandit, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Approach+to+diagnosis+and+management+of+optic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Neurol+India%22%5BJournal%5D)">Approach to diagnosis and management of optic neuropathy.</a> Neurol India. 62 (6), 599-605 (2014).</li>
<li>Sarzi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+human+OPA1delTTAG+mutation+induces+premature+age-related+systemic+neurodegeneration+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">The human OPA1delTTAG mutation induces premature age-related systemic neurodegeneration in mouse.</a> Brain. 135 (Pt 12), 3599-3613 (2012).</li>
<li>Sarzi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+steroidogenesis+promotes+early-onset+and+severe+vision+loss+in+females+with+OPA1+dominant+optic+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Increased steroidogenesis promotes early-onset and severe vision loss in females with OPA1 dominant optic atrophy.</a> Hum Mol Genet. 25 (12), 2539-2551 (2016).</li>
<li>Delettre-Cribaillet, C., Hamel, C. P., Lenaers, G., et al. Optic Atrophy Type 1. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK1248/">Gene Reviews</a>. Pagon, R. A. 7 (2007), University of Washington. Seattle. (2007).</li>
<li>Lenaers, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dominant+optic+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Orphanet+J+Rare+Dis%22%5BJournal%5D)">Dominant optic atrophy.</a> Orphanet J Rare Dis. 7 (46), (2012).</li>
<li>Delettre, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nuclear+gene+OPA1%2C+encoding+a+mitochondrial+dynamin-related+protein%2C+is+mutated+in+dominant+optic+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Nuclear gene OPA1, encoding a mitochondrial dynamin-related protein, is mutated in dominant optic atrophy.</a> Nat Genet. 26 (2), 207-210 (2000).</li>
<li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+retinal+morphologic+and+functional+changes+in+mice+following+optic+nerve+crush%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Monitoring retinal morphologic and functional changes in mice following optic nerve crush.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 55 (6), 3766-3774 (2014).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

OCT sistemi, görüntüleme yöntemi, bir non-invaziv vivo içinde yüksek çözünürlüklü retina çapraz section gibi tarama sağlar. Böylece, başlıca avantajı insanlar fare modelleri için rutin olarak uygulanan protokoller aktarılması için harika bir fırsat ile detaylı analiz için potansiyel var.
Örneğin Opa1delTTAG mutasyona uğramış fareler, SD-Ekim DOA patofizyolojisi9yeni keşifler için izin RNFL ve GC karmaşık tabakası kalınlığı bir artış gösterdi...

OCT retina yapıları1optik sinir başı (ONH) de dahil olmak üzere, incelenmesi kolaylaştıran bir tanı aracıdır. Yıllar boyunca bu hastalık progresyon insanlar2,3, hem de kemirgen4,5güvenilir bir göstergesi haline gelmiştir. 2-µm Aksiyel çözünürlükte retina katmanları kesitsel görüntüler oluşturmak için Interferometry kullanır. Çoğunlukla RGC organları içeren ganglion hücre katmanı tarafından (un), takip RGC akson, içeren retina Sinir lifi Katmanı (RNFL), en içteki katmanıdır. Sonraki iç Pleksiform tabaka (IPL), RGC dendrites İki kutuplu, yatay ve amacrine hücre aksonlar buluştuğu olduğunu. Bunlar, yatay hücresi ile birlikte iç nükleer tabaka (INL) formu, ve onların çıkıntılar photoreceptor akson dış Pleksiform tabaka (OPL) içinde bağlantı. Bu photoreceptor hücre organları ile dış nükleer tabaka (yalnız), arkasından ve photoreceptor katmandan iç segment/dış kesimi olarak da adlandırılan dış sınırlayıcı membran tarafından (OLM), ayrılmış (IS / OS) katmanı. Son olarak, son gözlemlenebilir katmanlar halinde fare retina retina pigment epiteli (RPE) ve (C) koroid vardır. Yalnız RNFL normal farelerde ölçülecek çok ince; Böylece, RNFL/un analiz yerine tercih4,5' tir. Başka bir olasılık ikinci IPL ek olarak içeren GC karmaşık katmanı, kalın ve böylece daha kolay hale OCT üzerinde ölçmek için4tarar. Sonuç olarak, OCT içinde OPNs gibi retina, patolojik durumunu içgörü sağlayabilir.
Alternatif olarak, fare retina kalınlığı genellikle post mortem Histoloji ile analiz edilir. Ancak, bu tekniği yüzler sınırlamalar doku koleksiyonu, fiksasyon, kesme, Boyama, montaj, vb dolayısıyla, ince kalınlık değişiklikler gibi bazı kusurları ile ilgili tespit edilemez. Son olarak, çünkü aynı fare, birkaç zaman sınanamıyor puan, hayvan sayısı büyük ölçüde artar, aksine OCT için çalışma. Sonuçta, yineleme için invasiveness olmayan, yüksek çözünürlüklü, olasılık, zaman zaman ve rahatlık-in kullanma OCT teknoloji izleme yapmak yönteminin seçimi retina hastalığı çalışmalarda.
Fare modelleri gen hataları tanımlamak ve moleküler mekanizmaları retinopathies6temel aydınlatmak için kullanılır. OPN bir Optik siniri önemli hasar ile retinopati (açık), yaklaşık 1.2 milyon RGC akson yapıldığı şeklidir. OPN ON odaklı veya görme alanı kaybı ve daha sonra körlük önde gelen diğer bozuklukları, doğuştan veya değil7, ikincil olabilir. RGC kaybı OPN karakteristik özellikleri vardır ve hasar, hangi insan Ekim RNFL ve2,3inceltme un görülebilir. Bu arada, OPN Patofizyoloji hala kötü anlaşılmaktadır ve dolayısıyla fare retina test gerek kalır.
Bu el yazması görüntüleme ve retina tabakası kalınlığı, Opa1delTTAG fare çizgi8,9, baskın optik Atrofi (DOA)10modeli örneği kullanarak miktar açıklanmaktadır. RGC patofizyolojisi değerlendirmek için Radyal, dikdörtgen ve Anüler taramalar sayısal. Bu standart kaliperler OCT yazılım tarafından sağlanan veya bir açık kaynak görüntü işleme programı için geliştirilmiş bir ev yapımı makro ile yapıldı. Standart Çap pergeli işlemek zor ve kez daha kalın RNFL/un, daha kolay, tekrarlanabilir ve daha kesin ev yapımı Kumpasları iken. Makroyu otomatik olarak algılanan bir katman, 5 puan ve peripapillary bölgesinde ONH her iki tarafında sabit pozisyonlarda için bir ölçüm yapar. OCT tarama edinme retina konumlandırma RGCs odaklanarak belirtmek için açıklamak için sunulan Protokolü hedefidir.

<table><tbody><tr><td>Fareler</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Opa1delTTAG</td><td>Montpellier'deki fare Nörobilimler Enstitüsü, INSERM UMR 1051,</td><td></td> <td>Fransa-Opa1 knock-in fare taşıma&nbsp; C57Bl6/J arka planında OPA1 c.2708_2711delTTAG mutasyonu</td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>Katalog Numarası</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>EnVisu R2200 SD-OCT Görüntüleme Sistemi</td><td>Bioptigen, Leica Microsystems, Almanya</td><td>-</td><td>Spektral Alan Optik Koherens Tomografi sistemi</td></tr><tr><td>EnVisu R2200 SD-OCT Görüntüleme Sistemi Yazılımı</td><td>Bioptigen, Leica Microsystems,</td><td></td> <td>Almanya-OCT edinimi ve analizi için yazılım</td></tr><tr><td>ImageJ 1.48v</td><td>Wayne Rasband, National Institutes of Health,</td> <td>ABD-Analiz</td> <td>için yazılım, iki özel yapım makronun indirilmesini ve kurulmasını gerektirir: http://dev.mri.cnrs.fr/projects/imagej-macros/wiki/Retina_Tool</td></tr><tr><td>Kendinden regüleli ısıtma plakası</td><td>Bioseb, Fransa</td><td>BIO-062</td><td>Hipotermiye karşı koruma</td></tr> <tr><td>< güçlü > İsim< / güçlü ></td> <td>< güçlü > Şirket < / güçlü ></td> <td>< güçlü > Katalog Numarası < / güçlü ></td> <td>< güçlü > Yorumlar< / güçlü</td></tr> <tr><td>> < güçlü > Malzemeler< güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Burun Bandı</td> <td>-</td><td></td> <td>Elastik bant</td></tr><tr><td>Gazlı bez pedleri 3 "x 3"</td> <td>Curad, ABD</td><td></td><td>CUR20434ERB Hipotermiye karşı koruma</td></tr><tr><td>Çift Uçlu Pamuk uç aplikatörü</td><td>Güzelliğin Özü, CVS Health Corporation, ABD-Jel</td><td></td> <td>uygulaması</td></tr><tr><td>Pamuk Bükümleri</td><td>CentraVet, Fransa</td><td>T.7979C.CS</td><td>Fare konumlandırma</td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>Katalog Numarası</td><td>Comments</strong</td></tr><tr><td>>Reaktifler ve İlaçlar</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>N&eacute; osyn&eacute; phrine Faure 10</td><td>%Laboratoires Europhtha, Monako-Göz</td><td></td> <td>dilatasyonu</td></tr><tr><td>Mydriaticum %0.5</td> <td>Laboratoires Th&eacute; a, Fransa</td><td>3397908</td><td>Göz dilatasyonu</td></tr><tr><td>Cebesine %0.4Chauvin</td><td>, Bausch & Lomb, Fransa</td><td>3192342</td><td>Lokal anestezi</td></tr><tr><td>Imalgene 1000</td><td>Merial, Fransa/CentraVet, Fransa</td><td>IMA004</td><td>Genel anestezi</td></tr><tr><td>Rompun</td><td>Bayer Healthcare, Almanya/CentraVet, Fransa</td><td>ROM001</td><td>Genel anestezi, analjezi, kas gevşetme</td></tr><tr><td>NaCl %0.9</td> <td>Laboratoire Osalia, Fransa&nbsp;</td><td>103697114</td><td>Fizyolojik serum</td></tr><tr><td>Systene Ultra</td><td>Alcon, Novartis,</td> <td>ABD-Gözlerin</td> <td>nemlendirilmesi</td></tr><tr><td>GenTeal'Alcon</td><td>, Novartis, ABD-Işık</td><td></td> <td>kırılmasını ve opaklıkları en aza indirmek için oftalmik jel</td></tr><tr><td>Aniospray Surf 29</td><td>Laboratoires Anios, Fransa</td><td>59844</td><td>Dezenfekte edici</td></tr></tbody></table>

optik koherens tomografi: fare retina ganglion hücreleri vivo içinde görüntüleme

Optical Coherence Tomography: Imaging Mouse Retinal Ganglion Cells In Vivo

Yapısal değişiklikler retina göz hastalıkları ortak belirtileri vardır. Optik Koherens tomografi (OCT) sağlar onların kimlik vivo içinde— hızlı, sürekli ve yüksek çözünürlükte. Bu iletişim kuralı fare retina OCT görüntülemede optik neuropathies (OPN) eğitim için güçlü bir araç olarak açıklar. OCT sistem ortak post mortem histolojik deneyleri Interferometry tabanlı, non-invaziv bir alternatiftir. Retina kalınlığı, retina incelme veya kalınlaşma gibi değişiklikleri, izleme imkanı sağlayan hızlı ve doğru bir değerlendirmesini sağlar. Biz Opa1delTTAG fare çizgi örnekle görüntüleme işlemi ve analiz mevcut. İnceden inceye gözden geçirmek üç tür önerilen, iki miktar yöntemi ile: Standart ve ev yapımı Çap pergeli. İkinci Radyal taramalar sırasında peripapillary retina üzerinde kullanım için en iyisidir; daha kesin olarak, ince yapıları analiz etmek için tercih edilir. Burada açıklanan tüm yaklaşımlar retina ganglion hücrelerinin (RGC) için tasarlanmış ama diğer hücre popülasyonlarının kolayca uyarlanabilir. Sonuç olarak, OCT fare modeli fenotipleme etkilidir ve tedavi müdahaleler güvenilir değerlendirme için kullanılacak potansiyeline sahiptir.

SD-Ekim teknoloji retina hayal ve histoloji için benzer, ancak daha hızlı kalınlığı analizi ve daha ayrıntılı (şekil 3) sağlar. Wildtype C57Bl/6 fare ile düz-se bile bir SD-Ekim tarama kalitesini sunulan (şekil 3A, sağ) iyi olarak retina enine kesit (şekil 3A, sol) bir görüntü değil, daha fazla katman (Örneğin, OLM) görüntüler. Ayrıca, bu sadece yaklaşık 40 gün veya hafta histolojik analizle...

Bu el yazması ile yüksek çözünürlüklü spektral etki alanı optik Koherens tomografi (SD-Ekim) fare retinanın vivo içinde görüntüleme için bir protokol açıklar. Retina ganglion hücrelerinin (RGC) peripapillary bölgede çeşitli tarama ve açıklanan yaklaşımlar miktarının üzerinde duruluyor.

Optik Koherens tomografi: Fare retina Ganglion hücreleri Vivo içinde görüntüleme

Structural changes in the retina are common manifestations of ophthalmic diseases. Optical coherence tomography (OCT) enables their identification in ...

Bu deneyin genel amacı, retinal kalınlığın doğru bir değerlendirmesini hızla elde etmek için optik koherens tomografi veya OCT kullanmaktır. OCT, oftalmoloji alanındaki optik nöropati gibi temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, fare retinal ganglion hücrelerindeki yapısal değişiklikleri tespit etmek için non-invaziv bir yöntem olmasıdır.Bu teknik, optik nöropatide tedavinin etkisini test etmek için non-invaziv, güvenli ve saygın bir yöntem olduğu için gerçekten ilgi çekicidir. Başlamak için, önce referans kol ayarlarını lens için uygun şekilde düzenleyin. Ardından, güç kaynağını ve bilgisayarı açın.Bilgisayar hazır olduğunda, görüntüleme programını başlatın. Yeni bir klinik çalışma oluşturun ve istenen protokolleri ekleyin. Hasta muayene bölümüne gidin ve muayene varsayılanlarını ayarlayın.Yeni bir hasta eklemek için hasta muayenesi bölümündeki hasta ekle seçeneğine tıklayın ve ilgili hasta bilgilerini girin. Ardından, önce ölçülecek gözle başlayarak istenen protokolü seçmek için muayene ekle, muayeneyi başlat seçeneklerine tıklayın ve listeden ön tanımlı taramaları ekleyin. Veri toplama işleminden en az 15 dakika önce, test edilecek tüm farelerin her iki gözüne oda sıcaklığında %10 phenylephrine damla damlatın.Ardından fazla reaktifi uzaklaştırın ve oda sıcaklığındaki %0,5 tropicamide damlatın. Görüntüleme işleminden yaklaşık beş dakika önce genel anestezi uygulayın. Hemen ardından, gözleri anesteze etmek ve immobilize etmek için her göze %0,4 oxybuprocaine hydrochloride uygulayın ve solüsyonu üç saniye boyunca bekletin.Ardından, damlaları temizleyin ve %10 fenilefrin ile %0,5 tropikamid uygulamalarını tekrarlayın. Gözler görüntüleme için yeterince dilate olduğunda, kornea hidrasyonunu sağlamak için gözleri viskoz glikol bazlı göz damlalarıyla yağlayın ve fareyi sıcak tutmak için bir cerrahi gazlı bezle sarın. Bir sünger veya pamuklu fitil kullanarak, her bir göze %0,3 hipromelloz ile desteklenmiş ince bir oftalmik jel tabakası uygulayın.Bu işlemi yaparken kirpikleri ve bıyıkları kenara ayırın. Fareyi, başı düz ve ileriye bakacak şekilde kasede konumlandırın ve ısırma çubuğunu dikkatlice ağzına yerleştirin. İncelenen gözün olduğu tarafta, hayvanın altına bir pamuk rulo yerleştirin.Ardından, klipsli hedefleme ucunu fareye özel lensin üzerinde tutarak, lensi göze yaklaştırmak için z translatör vidasını saat yönünün tersine döndürün. Kasetle döndürme ve pivot hareketleri yaparak, ısırık çubuğunu ve x-translatör vidalarını deneysel göz doğrudan lense bakacak şekilde konumlandırana kadar çevirerek farenin pozisyonunu önceden ayarlayın. Gözlerin optik ekseni ile lens hizalandığında, muayenedeki ilk taramayı seçin.Başlangıç hedeflemesine tıklayın ve retinayı sol panelde dikey, sağ panelde ise yatay olarak hareket ettirmek için z-çevirici vidayı kullanın. Kaseti döndürerek, optik sinir başını sağ panelin ortasına getirmek için yukarı veya aşağı hareket ettirin. Retinayı sağ panel içerisinde düzeltmek için ısırma çubuğu vidasını kullanın ve optik sinir başını sol panelin ortasına yerleştirmek için kaseti döndürün.Ardından, retinayı sol panel içinde düzlemek için x-translatör vidasını kullanın ve her bir modülatörün temel işlevini göz önünde bulundurarak, optik sinir başında mükemmel bir merkezleme sağlamak için retinanın konumunu daha fazla ayarlayın. Retina uygun konuma geldiğinde, spektral alan optik koherens tomografi taramasını başlatmak için anlık görüntü başlat (start snapshot) düğmesine tıklayın. Taramayı ve raporu kaydetmeyi unutmayın.Gerekirse merkezlemeyi ayarlayın. Tarama tamamlandığında, lensi geri çekin ve ikinci gözü az önce gösterildiği gibi konumlandırın. İkinci göz tarandıktan sonra fareyi kaseden çıkarın, her iki göze %0,3 hipromelloz içeren oftalmik jel uygulayın ve fareyi tam iyileşme gerçekleşene kadar izleme eşliğinde bir ısıtıcı plaka üzerine yerleştirin.Retinal ganglion hücrelerine odaklanmak için Image J için oluşturulmuş MRI retina tool makrosunu kullanın. MRI retina tool'u açın, polygon selection tool'u düzenleyin ve ilgili görüntüyü yükleyin. Ölçüme başlamak için M'ye tıklayın, ardından yatay konumu ayarlamak için E'ye tıklayın. Yeni açılan region of interest manager penceresindeki ilk kaseti seçin.İlk kasetin konumunu ayarlamak için mavi poligona ve resimdeki ölçülen katmanın kenarlarına tıklayın. İlgi alanı yöneticisi penceresinden ikinci kaseti seçin ve ikinci kaseti ayarlayın. Ardından, retinayı yeniden ölçmek ve sonuçları ölçümler penceresinde görüntülemek için R'ye tıklayın.Spektral domain OCT taramasının kalitesi, retinal kesit görüntüsünün kalitesi kadar yüksek olmasa da, OCT daha fazla katmanın görselleştirilmesine olanak tanır. Retina katmanları bir OCT taramasında kolayca ölçülebilir; ganglion hücre katmanlarındaki retinal sinir liflerini, iç nükleer tabakayı, dış pleksiform tabakayı, dış nükleer tabakayı, retina pigment epitelyumunun iç ve dış segment tabakalarını ve koroidi kapsayarak tüm retinanın karmaşık bir şekilde incelenmesini sağlar. Retinal kalınlığın OCT ile ölçümü burada gösterilmiş olup, görme engelli genetik mutant OPA1 dişi farelerin, ganglion hücre kompleksinde ve papilla çevresi retina sinir lifi katmanlarında progresif bir kalınlaşma sergilediğini göstermektedir.Standart ve el yapımı kumpaslar kullanılarak yapılan gangliyon hücre tabakası retina sinir lifi kalınlığı karşılaştırması, standart kumpasların çok daha kalın olması ve ince bir tabaka sınırına yerleştirilmesinin daha zor olması nedeniyle, standart kumpasların el yapımı kumpaslara göre önemli ölçüde daha düşük bir kalınlık ölçtüğünü göstermektedir. Uzmanlaşıldığında, bu teknik doğru şekilde uygulandığı takdirde 15 dakikada tamamlanabilir. Geliştirilmesinin ardından OCT, oftalmoloji alanındaki araştırmacıların fare retinasındaki yapısal değişiklikleri analiz etmesinin önünü açmıştır.Bu videoyu izledikten sonra, farelerde retina ganglion hücreleri için OCT görüntülemesinin nasıl gerçekleştirileceği ve analiz edileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

optical-coherence-tomography-imaging-mouse-retinal-ganglion-cells

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu video, bir fare enfeksiyöz üveit fare modelinde göz iltihabını tespit etmek ve ölçmek için in vivo bir görüntüleme tekniğini göstermektedir. Optik koherens tomografi (OCT) olarak bilinen teknik, hastalığın ilerlemesini değerlendirmek için gözün yüksek çözünürlüklü kesitsel görüntülerini üretir.

Bir Fare Modelinde Üveiti Değerlendirmek için Optik Koherens Tomografi Görüntüleme

Kaynak: Wang, Z.,  et al. Transpupiller İki Fotonlu Fare Retinasının İn Vivo Görüntülemesi.  J. Vis. Uzm. (2021). Bu video, iki foton mikroskobu kullanılarak in vivo retinal görüntüleme için bir tekniği göstermektedir. Anestezi uygulanmış fareler, başlarını sabitleyerek, göz kayganlaştırıcı uygulayarak ve gözün üzerine bir lamel yerleştirerek görüntülemeye hazırlanır. Floresan proteinleri eksprese eden retinal ganglion hücreleri (RGC'ler) ilk olarak hizalama için epifloresan kullanılarak...

Fare Retinasının İki Fotonlu İn Vivo Görüntülemesi

Source: Jagodzinska, J., et. al., Optik Koherens Tomografi: Fare Retinal Ganglion Hücrelerini Görüntüleme In Vivo. J. Vis. Exp. (2017)  Bu videoda, optik nöropatili genetik olarak değiştirilmiş bir fare modelinde retina katmanlarını görüntülemek ve yapısal değişiklikleri değerlendirmek için spektral alan optik koherens tomografinin (SD-OCT) kullanımını gösteriyoruz.

Optik Koherens Tomografi Kullanılarak Fare Retinasının İn Vivo Görüntülenmesi

Bu protokolü nasıl yüksek çözünürlüklü spektral etki alanı optik Koherens tomografi gibi görüntüleme teknikleri açıklar ve lazer ophthalmoscopy tarama bir oftalmik görüntüleme platformu üzerinde bilgi edinme sistemiyle küçük Rodents yararlı olabilir dağıtım, hücre sırasıyla retina kalınlığı ve mikroglial.

Vivo Tayf alanlı optik Koherens tomografi ve lazer Ophthalmoscopy tarama Cx3cr1gfp/gfp muhabir farelerin görüntüleme

Yapısal ve görsel dökümanları Rodents optik koherens tomografi ve optokinetic yanıt tarafından değerlendirilmesi için detaylı bir protokol sunulmuştur. Sonuçları Oftalmolojik gibi nörolojik araştırma için değerli bilgiler sağlar.

Optik koherens tomografi ve Optokinetic yanıt yapısal ve işlevsel görsel sistemin çıktıları fareler ve sıçanlar olarak kullanma

Burada, retinal dejenerasyon, glokom, diyabetik retinopati ve miyopi modellerinde retinal ve oküler yapıları in vivo olarak görselleştirmek için spektral-alan optik koherens tomografinin (SD-OCT) kullanımını açıklamaktayız.

Optik Koherens Tomografi Kullanılarak Kemirgen Modellerinde Oküler Hastalığın İn vivo Yapısal Değerlendirmeleri

İn vivo görüntüleme, sağlık ve hastalıkta biyoloji çalışmaları için güçlü bir araçtır. Bu protokol, standart iki foton mikroskobu ile fare retinasının transpupiller görüntülemesini tanımlar. Ayrıca, retinanın birden fazla hücresel kohortunu floresan olarak etiketlemek için farklı in vivoimaging yöntemleri göstermektedir.

Transpupiller İki Foton Fare Retinasının In vivo Görüntülenmesi

Burada, farelerde retinopatinin tanısını ve kantitatif ölçümünü kolaylaştırmak için optik koherens tomografi kullanan bir in vivo görüntüleme tekniğini tanımladık.

Optik Koherens Tomografinin Retinopatinin Bir Fare Modeline Uygulanması

Mevcut protokol, in vivo görüntülerde gözlenen retinal ganglion hücre akson demeti morfolojisini doğrulamak amacıyla in vivo görünür ışık optik koherens tomografi fibergrafi (vis-OCTF) görüntülerini aynı fare retinasının ex vivo konfokal görüntüleriyle hizalama adımlarını özetlemektedir.

Görünür Işık Optik Koherens Tomografi Fibergramlarının Aynı Fare Retinasının Konfokal Görüntüleri ile Hizalanması

Bu makale, fare izole retinal hazırlanması incelemek ve kaydetmek için nasıl bir açıklama sağlar. Özellikle, floresan etiketli ganglion hücre popülasyonu ışık yanıtlarını kaydetmek ve daha sonra belirlemek ve morfolojisi analiz nasıl açıklar.

Genetik Etiketli Retina Ganglion Hücreleri Işık Tepkisi Record İzole Retina Hazırlık

Öğrenin, fare retina ganglion hücrelerini görüntülemek için spektral domain optik koherens tomografi (SD-OCT) kullanmayı. Bu invaziv olmayan yöntem, optik nöropati araştırmalarında retinal kalınlığı hızlı ve doğru şekilde değerlendirmeyi sağlar.

Optik Koherens tomografi: Fare retina Ganglion hücreleri Vivo içinde görüntüleme

Daha fazla video keşfet