Optik Koherens tomografi: Fare retina Ganglion hücreleri Vivo içinde görüntüleme

Bu deneyin genel amacı, retinal kalınlığın doğru bir değerlendirmesini hızla elde etmek için optik koherens tomografi veya OCT kullanmaktır. OCT, oftalmoloji alanındaki optik nöropati gibi temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, fare retinal ganglion hücrelerindeki yapısal değişiklikleri tespit etmek için non-invaziv bir yöntem olmasıdır.

Bu teknik, optik nöropatide tedavinin etkisini test etmek için non-invaziv, güvenli ve saygın bir yöntem olduğu için gerçekten ilgi çekicidir. Başlamak için, önce referans kol ayarlarını lens için uygun şekilde düzenleyin. Ardından, güç kaynağını ve bilgisayarı açın.

Bilgisayar hazır olduğunda, görüntüleme programını başlatın. Yeni bir klinik çalışma oluşturun ve istenen protokolleri ekleyin. Hasta muayene bölümüne gidin ve muayene varsayılanlarını ayarlayın.

Yeni bir hasta eklemek için hasta muayenesi bölümündeki hasta ekle seçeneğine tıklayın ve ilgili hasta bilgilerini girin. Ardından, önce ölçülecek gözle başlayarak istenen protokolü seçmek için muayene ekle, muayeneyi başlat seçeneklerine tıklayın ve listeden ön tanımlı taramaları ekleyin. Veri toplama işleminden en az 15 dakika önce, test edilecek tüm farelerin her iki gözüne oda sıcaklığında %10 phenylephrine damla damlatın.

Ardından fazla reaktifi uzaklaştırın ve oda sıcaklığındaki %0,5 tropicamide damlatın. Görüntüleme işleminden yaklaşık beş dakika önce genel anestezi uygulayın. Hemen ardından, gözleri anesteze etmek ve immobilize etmek için her göze %0,4 oxybuprocaine hydrochloride uygulayın ve solüsyonu üç saniye boyunca bekletin.

Ardından, damlaları temizleyin ve %10 fenilefrin ile %0,5 tropikamid uygulamalarını tekrarlayın. Gözler görüntüleme için yeterince dilate olduğunda, kornea hidrasyonunu sağlamak için gözleri viskoz glikol bazlı göz damlalarıyla yağlayın ve fareyi sıcak tutmak için bir cerrahi gazlı bezle sarın. Bir sünger veya pamuklu fitil kullanarak, her bir göze %0,3 hipromelloz ile desteklenmiş ince bir oftalmik jel tabakası uygulayın.

Bu işlemi yaparken kirpikleri ve bıyıkları kenara ayırın. Fareyi, başı düz ve ileriye bakacak şekilde kasede konumlandırın ve ısırma çubuğunu dikkatlice ağzına yerleştirin. İncelenen gözün olduğu tarafta, hayvanın altına bir pamuk rulo yerleştirin.

Ardından, klipsli hedefleme ucunu fareye özel lensin üzerinde tutarak, lensi göze yaklaştırmak için z translatör vidasını saat yönünün tersine döndürün. Kasetle döndürme ve pivot hareketleri yaparak, ısırık çubuğunu ve x-translatör vidalarını deneysel göz doğrudan lense bakacak şekilde konumlandırana kadar çevirerek farenin pozisyonunu önceden ayarlayın. Gözlerin optik ekseni ile lens hizalandığında, muayenedeki ilk taramayı seçin.

Başlangıç hedeflemesine tıklayın ve retinayı sol panelde dikey, sağ panelde ise yatay olarak hareket ettirmek için z-çevirici vidayı kullanın. Kaseti döndürerek, optik sinir başını sağ panelin ortasına getirmek için yukarı veya aşağı hareket ettirin. Retinayı sağ panel içerisinde düzeltmek için ısırma çubuğu vidasını kullanın ve optik sinir başını sol panelin ortasına yerleştirmek için kaseti döndürün.

Ardından, retinayı sol panel içinde düzlemek için x-translatör vidasını kullanın ve her bir modülatörün temel işlevini göz önünde bulundurarak, optik sinir başında mükemmel bir merkezleme sağlamak için retinanın konumunu daha fazla ayarlayın. Retina uygun konuma geldiğinde, spektral alan optik koherens tomografi taramasını başlatmak için anlık görüntü başlat (start snapshot) düğmesine tıklayın. Taramayı ve raporu kaydetmeyi unutmayın.

Gerekirse merkezlemeyi ayarlayın. Tarama tamamlandığında, lensi geri çekin ve ikinci gözü az önce gösterildiği gibi konumlandırın. İkinci göz tarandıktan sonra fareyi kaseden çıkarın, her iki göze %0,3 hipromelloz içeren oftalmik jel uygulayın ve fareyi tam iyileşme gerçekleşene kadar izleme eşliğinde bir ısıtıcı plaka üzerine yerleştirin.

Retinal ganglion hücrelerine odaklanmak için Image J için oluşturulmuş MRI retina tool makrosunu kullanın. MRI retina tool'u açın, polygon selection tool'u düzenleyin ve ilgili görüntüyü yükleyin. Ölçüme başlamak için M'ye tıklayın, ardından yatay konumu ayarlamak için E'ye tıklayın. Yeni açılan region of interest manager penceresindeki ilk kaseti seçin.

İlk kasetin konumunu ayarlamak için mavi poligona ve resimdeki ölçülen katmanın kenarlarına tıklayın. İlgi alanı yöneticisi penceresinden ikinci kaseti seçin ve ikinci kaseti ayarlayın. Ardından, retinayı yeniden ölçmek ve sonuçları ölçümler penceresinde görüntülemek için R'ye tıklayın.

Spektral domain OCT taramasının kalitesi, retinal kesit görüntüsünün kalitesi kadar yüksek olmasa da, OCT daha fazla katmanın görselleştirilmesine olanak tanır. Retina katmanları bir OCT taramasında kolayca ölçülebilir; ganglion hücre katmanlarındaki retinal sinir liflerini, iç nükleer tabakayı, dış pleksiform tabakayı, dış nükleer tabakayı, retina pigment epitelyumunun iç ve dış segment tabakalarını ve koroidi kapsayarak tüm retinanın karmaşık bir şekilde incelenmesini sağlar. Retinal kalınlığın OCT ile ölçümü burada gösterilmiş olup, görme engelli genetik mutant OPA1 dişi farelerin, ganglion hücre kompleksinde ve papilla çevresi retina sinir lifi katmanlarında progresif bir kalınlaşma sergilediğini göstermektedir.

Standart ve el yapımı kumpaslar kullanılarak yapılan gangliyon hücre tabakası retina sinir lifi kalınlığı karşılaştırması, standart kumpasların çok daha kalın olması ve ince bir tabaka sınırına yerleştirilmesinin daha zor olması nedeniyle, standart kumpasların el yapımı kumpaslara göre önemli ölçüde daha düşük bir kalınlık ölçtüğünü göstermektedir. Uzmanlaşıldığında, bu teknik doğru şekilde uygulandığı takdirde 15 dakikada tamamlanabilir. Geliştirilmesinin ardından OCT, oftalmoloji alanındaki araştırmacıların fare retinasındaki yapısal değişiklikleri analiz etmesinin önünü açmıştır.

Bu videoyu izledikten sonra, farelerde retina ganglion hücreleri için OCT görüntülemesinin nasıl gerçekleştirileceği ve analiz edileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.