Semiautomated boyuna Microcomputed tomografi tabanlı nicel yapısal analizi bir çıplak sıçan vertebra kırığı Osteoporoz ile ilgili Model

Bu cerrahi modelin ve görüntü analiz yönteminin genel amacı, tedavinizin klinik öncesi osteoporozla ilişkili vertebral kompresyon kırığı modeli üzerindeki etkisini gözlemlemektir. Bu yöntem, osteoporoza bağlı vertebral kompresyon kırıkları için etkili bir tedavi ne olabilir ve böyle bir tedavi kemik rejenerasyonuna nasıl yardımcı olabilir? Bu tekniğin ana avantajı, çıplak fareleri içermesidir, bu nedenle yeni tedaviler, bağışıklık reddi endişeleri olmadan in vivo olarak test edilebilir.

Ayrıca, burada sunulan bu yöntemin altında yatan kemik rejenerasyonu yarı otomatiktir, bu nedenle daha önce yayınlanandan daha doğru ve daha az kullanıcıya bağımlıdır. Prosedürü gösteren, laboratuvarımızdan bir araştırma bilimcisi olan Doktor Wafa Tawackoli olacak. İlk olarak% 100 oksijende% 5 izofluran kullanarak osteoporotik bir sıçanda anesteziyi indükleyin, daha sonra bakım için% iki ila% 3 izofluran bir burun konisine aktarın.

Elektrikli tıraş makinesi kullanarak karın bölgesini tıraş edin. % 0.5 klorheksidin glukonat ve ardından% 70 etanol içinde iyot bazlı antiseptik ile swablayın. Anestezi altındayken kuruluğu önlemek için gözlere veteriner merhemi kullanın.

Yeterli bir anestezi düzlemi sağlamak için bir ayak parmağı çimdikleme uyarısı uygulayın. Herhangi bir yanıt not edilmezse, prosedürü başlatın. Anestezi uygulanmış fareyi 37 santigrat dereceye ayarlanmış bir ısıtma yastığına sırt yaslanmış olarak yerleştirin ve manyetik bir fiksatör retraksiyon sistemi kullanarak uzuvları gerin.

Cerrahi işleme başlamadan önce fareyi deri altına carprofen ile enjekte edin. Deride, ksifoid sürecin bir santimetre altından başlayarak ve orta hat boyunca beş ila sekiz santimetrelik bir kesi yaptıktan sonra, karın boşluğuna erişmek için linea alba boyunca aponevroz kesisi yapmak için cerrahi makas kullanın. Ekartörler kullanarak karın boşluğunu ortaya çıkarın.

Abdominal aortu ve sol böbreği ortaya çıkarmak için bağırsakları farenin sağına doğru yönlendirin. Dehidrasyonu önlemek için, iç organları sarmak için steril ıslatılmış gazlı bezler kullanın. Aortu açığa çıkarmak için gerektiği kadar ek ekartörler kullanın.

Lomber omurgayı palpe edin ve ardından ortaya çıkarmaya devam edin. Lomber vertebral cisimlerin L dört ila beş ön yüzünü ortaya çıkarmak için termokoter kullanın ve bunları çevredeki bağ dokusu ve kaslardan izole edin. L dört omurdan kan ve kalan dokuyu çıkarmak için pamuklu çubuk kullanın.

Daha sonra, omur gövdesinin açıkta kalan ön yüzünün merkezinde beş milimetre derinliğinde bir kemik defekti delmek için steril, iki santimetre çapında bir matkap ucu kullanın. Sadece ventral korteksi ve alttaki trabeküler kemiği delmek için minimum basınç uygulayın. Dorsal korteksi delmekten kaçının.

Ardından, sıçan başına iki kusur oluşturmak için L beş omuru aynı şekilde delin. Delme işlemi tamamlandığında, bağırsakları karın boşluğuna geri koyun ve ekartörleri çıkarın. Daha sonra, aponevrozu sütürlemek için sürekli bir düzende vicryl sentetik emilebilir cerrahi sütür kullanın.

Cildi 4-0 monofilament naylon emilmeyen sütür kullanarak basit bir kesikli desende kapatın. Daha sonra cildin tamamen kapanmasını sağlamak için cilt dikişlerinin üzerine ve arasına 100 mikrolitre topikal cilt yapıştırıcısı uygulayın. Hipotermi ve dehidrasyonu önlemek için sıçana 37 santigrat derece laktasyonlu zil çözeltisi ve ameliyat sonrası ağrının giderilmesi için buprenorfin enjekte ettikten sonra, hayvanın ısıtma yastığı üzerindeki anesteziden kurtulmasına izin verin.

Cerrahi işlemi takip eden gün, daha önce olduğu gibi izofluran ile anestezi indükleyin. Bir in vivo mikro-CT tarayıcı kullanarak fareyi tarayın. Anestezi taraması ve iyileşmesinden sonra, fareyi ev kafesine geri koyun.

Omur verilerini analiz için ayırmak için mikro-BT değerlendirme programına tıklayın ve menüden örneği seçin. Ardından, bir dilim üzerinde tek tek omurları şekillendirmek için fareyi kullanın. Bir sonraki dilime geçmek için Z çubuğunu kullanın ve tek tek omurları aynı şekilde şekillendirin.

Konturlu omurları dosyaya tıklayarak ayrı bir dosya olarak kaydedin, GOBJ'yi her iki dilimde bir kaydedin. Daha sonra referans omuru ayarladıktan sonra, bir mikro-CT ortamına aktarın. Referans vertebra için tanımlanan VOI'yi mikro-CT değerlendirme programına tıklayarak kayıtlı hedef vertebra'ya uygulayın, dosyalayın, GOBJ'yi yükleyin ve daha önce oluşturulan GOBJ'yi seçin.

Son olarak, bir mikro-CT değerlendirme programı kullanarak VOI'yi değerlendirme için gönderin. Bu önden 3D görüntü, defekt oluşumundan bir gün sonra temsili bir vertebral defekt görüntüsünü göstermektedir. Boşlukta kemik oluşumu kırmızı ile gösterilir.

Bu, aynı alanın sagital bir 2D görüntüsü ve son olarak eksenel bir 2D görüntüdür. Burada görüldüğü gibi kemik oluşumu zamanla gerçekleşir ve boylamasına görüntüleme ile tespit edilir. Kemik hacim yoğunluğu ve görünür yoğunluk hesaplandı ve çoklu karşılaştırmalar için Bonferroni düzeltmesi ile tekrarlanan ölçümler iki yönlü ANOVA kullanılarak karşılaştırıldı.

Burada görüldüğü gibi, kemik hacmi yoğunluğu ve görünür yoğunluk, vertebral defektin oluşturulmasından iki hafta sonra önemli ölçüde artar. Bu prosedürü takiben, hangi hücrelerin mevcut olduğu ve defektte hangi proteinlerin eksprese edildiği gibi ek soruları yanıtlamak için histoloji ve immünohistokimya gibi diğer yöntemler uygulanabilir. Bu videoyu izledikten sonra, çıplak sıçanlarda birden fazla vertebral kusurun nasıl oluşturulacağını iyi anlamalı ve bu kusurlarda zaman içinde kemik rejenerasyonunu analiz etmelisiniz.