Name: Sinaptik plastisite akut Hipokampal dilimleri bir küçük hacimli geri dönüşüm-, perfüzyon- ve batma-tipi oda sistemi içinde tutulan kayıt (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 51 s
Description: Öğrenin akut hipokampal dilimlerde sinaptik plastisite kaydı için küçük hacimli geri dönüşüm sisteminde oksijen seviyesi stabilizasyonu. Bu yöntem uzun süreli elektrofizyolojik kayıtlarda maliyet verimliliğini artırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

WW yürütülen, analiz ve deneyler tasarlanmış ve el yazması yazdı. D.X. ve C.P. şekil hazırlanmasında destekli ve deneyler yaptı. Bu eser NSFC (31320103906) tarafından desteklenen ve tüberküloz için 111 Projesi (B16013)

Hayvanlar hayvan bakım kurulan standartları ve prosedürleri beyin bilim kurumları ve devlet anahtar laboratuvar, tıbbi Nörobiyoloji Bund'a Üniversitesi, Shanghai, Çin uygun olarak muhafaza.
1. çözüm hazırlık
Not: tablo malzemelerinbakın.
<ol>
	<li>Dilimleme arabellek (değiştirilmiş Gey'nın çözüm) hazırlamak: 92 mM NaCl, 2.5 mM KCl, 1,25 mM NaH2PO4, 30 mM NaHCO3, 25 mM glikoz, 20 mM HEPES, 3 mM Na+-pyruvate, 10 mM MgSO4ve 0,5 mM CaCl2.</li>
	<li>PH 7,6 1 M NaOH carbogenation olmadan kullanarak için ayarlayın.</li>
	<li>Arabellek 4 ° C'de depolayın Not: Titrasyon bulutlu sıvı açıklar. Osmolalite 305-310 mOsm var. Carbogen%21 5 karbon dioksit ve % 95 oksijen içerir.</li>
	<li>ACSF son bir bileşimi vererek 10 x does değil içermek bikarbonat ve glukoz, aCSF hisse senedi çözüm sulandrarak hazırlamak: 124 mM NaCl, 2.5 mM KCl, 2.5 mM CaCl2, 2 mM MgCl2ve 1,25 mM KH2PO4.</li>
	<li>Bikarbonat ve 10 mM glikoz ve 26 mM NaHCO3ulaşmak için şekeri ekleyin.</li>
	<li>Carbogenate hemen NaHCO3ekledikten sonra Engellenen bir son ile delikli silikon tüp yoluyla aCSF.</li>
	<li>Carbogenating (pH 7.3 7.4) iken pH ölçmek. Not: Arabelleği kapasitesi biraz NaHCO3miktarını değiştirerek ayarlanabilir. Elde edilen pH sıcaklık bağımlı olduğundan, carbogenating, çalışma sıcaklığında (Örneğin, 30 ° C) sırasında elde edilen pH kontrol etmek gereklidir.</li>
</ol>
2. akut Hipokampal dilimleri hazırlanması
Not: tablo malzemelerinbakın.
<ol>
	<li>Akut beyin dilimleri için bir kuluçka odası içine bir dilim tutma kafes koyun, aCSF ve carbogenate (4-6 L/h) en az 30 dk22 28-30 ° C'de odası dolgu</li>
	<li>2-4 ° c aşağı cerrahi aletler serin</li>
	<li>Soğuk ve vibratome yakınındaki bir buz/su karışımı saklanır arabellek (2-4 ° C), Dilimleme carbogenated dolu bir cam kabı yerleştirin.</li>
	<li>Fareler ya da fareler kadar kornea refleksleri (30-50 ler) ortadan anestezi 2 L cam sürahi veya 50 mL tüp içine 12.5 µL 500 µL alarak isoflurane kullanarak.</li>
	<li>Bir yöntemle açıklanan ve ayrıntılı Mathis vd. yayınları olarak görüntülenmiştir beyin izole (2011) 23 ve Yuanxiang vd. (2014) 24.</li>
	<li>2-4 ° C aşağı beyin ve beyincik anatomi ve hemisferlerin ayıran önce buz gibi bir Dilimleme arabellek (için en az 2 dk) ne yapıyorsun?</li>
	<li>Şekil 1' deC gösterildiği gibi bir parça enine dilimleri ventral ve Hipokampus, ara parçası almak için her yarım küre25 dorsal kenarı boyunca 70 ° açıyla dorsal korteksin incelemek için soğuk bir cerrahi bıçak kullanın ve E.</li>
	<li>Bir soğuk diş çimento spatula ile bir filtre kısa bir süre (1-2 s) oluşturulan yüzey kuru kağıt parçası bir Yarımküre aktarın.</li>
	<li>Taze kesilmiş yüzeyler ile iki hemisferlerin hızlı yapıştırıcı tutkal kullanarak buz gibi Dilimleme platformda mount; hemisferlerin yüz tıraş bıçağı (şekil 1D) Kaudal sonu var.</li>
	<li>Dilimleme platformu bir vibratome soğutma odasına koyun ve o odası ile dilimleme tampon (2-4 ° C) doldurun. Delikli silikon tüp kullanarak Carbogenate.</li>
	<li>Yeterli vibratome ayarları kullanarak 350 µm dilimler kesip (Örneğin, bıçak ileri hız: 1.2 mm/s, bıçak genlik: 1 mm).</li>
	<li>Hipokampal oluşumu subiculum ve iki enjeksiyonu Kanüller kullanılarak entorhinal cortices izole (&#62; 28 G) olarak makas.</li>
	<li>Baloncuklar Pasteur pipet kullanarak önceden hazırlanmış kuluçka odası dilim tutma kafes kaldırın.</li>
	<li>Kuluçka odası mesh katman pyramidale Dilimleme platformdan bazı şeffaflık sahip dilimleri aktarın. Herhangi bir katlama, germe, örtüşen ve aCSF ve dilim büyük ağız Pasteur pipet alıyorum tarafından yüzen kaçının. Not: Tüm prosedürü (Adım 2.5-2.14) 5-10dk sürebilir; Bu nedenle, arabellek çözüm sıcaklığı 4 ° C'de korumak için zaman içinde kontrol etmek önemlidir</li>
	<li>Dilimleri en az 1.5-2 h kuluçka odasında için 30 ° C'de kuluçkaya ve 4-6 L/s carbogen sağlar. Not: kuluçka makinesi arabellekte dolaşımda ancak yüzen üzerinden dilimleri engellemek için carbogen akış hızı ayarlayın.</li>
</ol>
3. değişiklikler aCSF için Carbogenation geri dönüşüm, küçük rezervuarlar
<ol>
	<li>Bir 3-yönlü tüp bağlayıcı geri dönüşüm sistemi (Şekil 2B) çıkış için ekleyin.</li>
	<li>3'lü boru bağlantılarının orta kol carbogen tedarik tüp ile bağlayın ve akış hızı ile bir hava akımı metre (3-4 L/h, Şekil 2D ve şekil 4C) düzenleyen.</li>
	<li>İkinci bir 3-yönlü tüp bağlayıcı geri dönüşüm sistemi girişi ekleyin. Satır içi Kalorifer, ince silikon tüp (10 cm uzunluk) için üst kol ve alt kol giriş akımı tüp rezervuar (alçak geçiren Filtre; karşı karşıya tüp orta kol bağlanmak Şekil 4 C).</li>
	<li>Bir tüp sıkacağı bir ince silikon tüp yerleştirin (OD: 2 mm) tüp boyunca bir pozisyonda Peristaltik pompa tarafından oluşturulan dilim odasında aCSF nabız, en azından nerede. Not: Çıkış-carbogenation (çıkış-carb.) değiştirme oranı, geri dönüşüm aCSF aCSF göl hacmi carbogenation seviyeye duyarlılığını azaltır ve göreli tüp konumlandırır küçük aCSF rezervuarlar içinde (&#60; 50 mL; Şekil 3). Alçak geçiren filtre ile ilgili nabız aCSF akımı ince silikon tüp havada belli bir miktar azaltır; Böylece, tüp çoğunlukla hava ile dolu olması gerekir.</li>
</ol>
4.Sinaptik yanıt bir batma dilim odasında kayıt
Not: tablo malzemelerinbakın.
<ol>
	<li>Yaklaşık 28-30 ° c (bu-ecek önlemek kayıt odası kabarcık oluşumu) bir su banyosunda aCSF çözüm önceden ısıtmak.</li>
	<li>Geri dönüşüm sistemi (4-5 mL/dk) başlatmak ve sistem en az 1 h için equilibrate için satır içi Kalorifer etkinleştirin.</li>
	<li>Lens kağıt ve bir U şeklinde Platin tel batma dilim odasında bir kaç dakikalığına (şekil 4) sabit bir naylon mesh Temizleme küçük bir parça presoak.</li>
	<li>U şekilli Platin tel kaldırın.</li>
	<li>Geri dönüşüm kapalı geçiş ve bir dilim kağıt temizlik objektif yerleştirin.</li>
	<li>Hemen üstünde tepe-in dilim dilim-holding kafes yerleştirin, pompa geçiş ve amacı aCSF daldırma olmadan için 30 dk equilibrate dilim izin.</li>
	<li>Borosilikat micropipette (Yani, kayıt elektrot) aCSF ile doldurmak (İpucu direnç: 1-2 MΩ, 1/3 ile aCSF dolu) ve pipet yuvasına bağlayın.</li>
	<li>NaHCO3 çözüm yerleştirerek metal stimülasyon elektrot yalıtım kontrol (&#62; 40 mM). Elektrot bir DC gerilim jeneratör eksi kutbuna bağlayın (1-2 V, pozitif Kutbu: gümüş veya Platin tel) ve kabarcıklar diseksiyon mikroskop altında ucundaki oluşumu gözlemlemek (&#62; 60 x büyütme).</li>
	<li>Test epoksi izolasyonlu tungsten stimülasyon elektrot yer manipülatör tutucu ve başvuru dilim odasında teller.</li>
	<li>İkinci bir referans elektrot odasına eklemek ve kayıt elektrodu (şekil 4A) headstage başvuru prizine takýn.</li>
	<li>Amplifikatör kontrol yazılımı "sıfır kelepçe modu" kutusunu tıklatıp "çıkış elde listesi" kutusunu çift tıklatarak devam edin. Bir kazanç seçin "100", "yüksek geçiş filtresi liste kutusunu (Bessel)," çift tıklatın "0.1 Hz" seçin ve "düşük geçiş filtresi liste kutusunu (AC)" "3 kHz." seçmek için çift tıklatın</li>
	<li>Kayıt yazılımı tıklatın üzerinde "edinme | İletişim kuralı açın." Epizodik elektrodlar ve 50-100 ms için 10-20 kHz güçlendirilmiş potansiyelleri dijitalleştirme ve bunun için otomatik olarak izin ayarlarına sahip bir protokol bir uyarıcı izolatör 10 ms epizodik bir kayıt başladıktan sonra Tetikleyicileri seç.</li>
	<li>Çizgi ve stratum pyramidale (şekil 4B ve şekil 5) örneğin paralel stimülasyon ve kayıt elektrotları yeri.</li>
	<li>Tıklatın "elde etmek | İletişim Kuralı Düzenle"ve"tetik"sekmesinde (açılır pencere) seçin. Seçti "space bar" ve "tetikleyici kaynağı" kutusu üzerinde tetikleyici kaynağı olarak'ı tıklatın. "Tamam" düğmesini tıklatın. Satın başlatmak ve açılır pencerenin bir tetikleyici düğme ile not için "kayıt" düğmesini tıklatın.</li>
	<li>Uyarıcı izolatör yazılım "gerilim kontrolü" kutusuna tıklayın ve "0" girin "Yükle" düğmesini tıklatın. Tıkırtı üstünde "kayıt yazılımı" pencere ve boşluk çubuğuna basın. Sırayla değerleri 1'den 8'e, örneğin, 1 mV adımlar "gerilim kontrolü" kutusuna girerek bu döngüsünü tekrarlayın.</li>
	<li>Stimülasyon gücü fEPSP-eğim değerleri ile ilişkilendirmek ve fEPSP-eğim % 40'ını en fazla almak için gerekli stimülasyon gücü belirlemek. "Voltaj kontrol kutusu" tıklatın ve kararlı değeri girin. "Yükle" düğmesini tıklatın. Not: Bir uyarıcı izolatör kısa gerilim veya geçerli bakliyat beyin dokusu ile uygulamak için kullanılır. Bifazik bakliyat faz başına 100 µs olabilir.</li>
	<li>Kayıt yazılımı Durdur düğmesini ve ardından "Ele geçirme" menüsünü tıklayın. "Düzenleme protokol" tıklayın ve açılan pencerede "tetik" sekmesini seçin. Tetikleyici kaynak kutusu ve seçilmek "iç süreölçer" tetikleyici kaynağı olarak'ı tıklatın. "Tamam" düğmesini tıklatın. Her 30 alan potansiyelleri otomatik kayıt başlar kayıt düğmesini tıklatın s, örneğin. 30-60 dakika sonra "dur" düğmesini tıklatın.</li>
	<li>"Elde" menüsünde tıklatın, "Açık protokol üzerinde" sinaptik plastisite istenen indüksiyon protokolü seçin ve "Tamam" düğmesini tıklatın. Yüksek frekanslı stimülasyon ve kayıt otomatik olarak etkinleştirmek için "kayıt" düğmesini tıklatın. "Kes" düğmesini tıklatın. Not: sinaptik plastisite ile ilgili çalışmaları durumunda, uzun vadeli kullanılmasının muhtemelen veya uzun süreli temel kaydettikten sonra uzun süreli depresyon için standart indüksiyon paradigmalar birini uygulayın. Sinaptik iletimi elde edilen modülasyon temsilcisi örnekleri Şekil 7 ve şekil 8tasvir edilmektedir.</li>
	<li>Kayıt yazılımı tıklatın "edinme | İletişim kuralı açın"ve adım 4.12 olduğu gibi aynı iletişim kuralını seçin. "Tamam" düğmesini tıklatıp ardından "kaydı." Otomatik olarak alan potansiyel kayıtları için 2-4 h, örneğin koşmaya devam et. Kaydı sonlandırmak için "stop" düğmesine tıklayın.</li>
	<li>İlaç çalışmaları durumunda, bileşik uygulamak doğrudan aCSF için kalıcı bileşik yönetim ise rezervuar istenen (şekil 6).</li>
</ol>
5. Kurulum ve İpuçları Temizleme
Not: aşağıda genel ipuçları için bkz:.
<ol>
	<li>Temiz belgili tanımlık sistem haftalık % 10 H2O2 için en fazla 20 dk deiyonize H2ile O. yıkama tarafından takip, geri dönüştürerek Not: Etanol temizlik için önerilmez. Bu aynı şekilde başvuru teller ve objektif H2O2sokmak için tavsiye edilmez.</li>
	<li>Objektif lens veya odası çevresi ile 0.1 N HCl ve sonra su yüzeyinde zarlarını tuz kaldırın.</li>
	<li>Distile su veya 0,1 N HCl carbogen bubbler yıkayın.</li>
	<li>Haftada bir kez 5 min için % 10 H2O2 dilim kuluçka odasında bırakın ve sonra iyice durulayın kuluçka odası deiyonize H2O.</li>
	<li>Metal stimülasyon elektrotlar, durumunda her deneyden sonra uyarıcı elektrot uç deiyonize suyla durulayın ve hafifçe kalan dokuyu etanol ile ıslatılmış bir pamuk ile uyarıcı elektrot uç silin.</li>
	<li>Direnç ticari metal stimülasyon elektrot uç zımpara ile dikkatli bir kuvvetli darbe ile yalıtım kaldırarak azaltın.</li>
	<li>Carbogen kaybı aCSF borular politetrafloroetilen tüpleri ile silikon tüpler değiştirerek geri dönüşüm sırasında azaltın.</li>
	<li>Kayıt elektrot ve referans elektrot gümüş tel tel yüzey üzerine form AgCl birkaç gün için çamaşır suyu içinde tutun.</li>
</ol>

<ol><li>McIlwain, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+response+in+vitro+to+electrical+stimulation+of+sections+of+mammalian+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+J%22%5BJournal%5D)">Metabolic response in vitro to electrical stimulation of sections of mammalian brain.</a> Biochem J. 48 (4), (1951).</li>
<li>McIlwain, H., Richards, C. D., Somerville, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Responses+in+vitro+from+the+piriform+cortex+of+the+rat%2C+and+their+susceptibility+to+centrally-acting+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Responses in vitro from the piriform cortex of the rat, and their susceptibility to centrally-acting drugs.</a> J Neurochem. 14 (9), 937-938 (1967).</li>
<li>Yamamoto, C., McIlwain, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+activities+in+thin+sections+from+the+mammalian+brain+maintained+in+chemically-defined+media+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Electrical activities in thin sections from the mammalian brain maintained in chemically-defined media in vitro.</a> J Neurochem. 13 (12), 1333-1343 (1966).</li>
<li>Andersen, P., Bliss, T. V., Lomo, T., Olsen, L. I., Skrede, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lamellar+organization+of+hippocampal+excitatory+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiol+Scand%22%5BJournal%5D)">Lamellar organization of hippocampal excitatory pathways.</a> Acta Physiol Scand. 76 (1), 4-5 (1969).</li>
<li>Skrede, K. K., Westgaard, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+transverse+hippocampal+slice%3A+a+well-defined+cortical+structure+maintained+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">The transverse hippocampal slice: a well-defined cortical structure maintained in vitro.</a> Brain Res. 35 (2), 589-593 (1971).</li>
<li>Kirov, S. A., Sorra, K. E., Harris, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Slices+have+more+synapses+than+perfusion-fixed+hippocampus+from+both+young+and+mature+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Slices have more synapses than perfusion-fixed hippocampus from both young and mature rats.</a> J Neurosci. 19 (8), 2876-2886 (1999).</li>
<li>Schwartzkroin, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristics+of+CA1+neurons+recorded+intracellularly+in+the+hippocampal+in+vitro+slice+preparation%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Characteristics of CA1 neurons recorded intracellularly in the hippocampal in vitro slice preparation.</a> Brain Res. 85 (3), 423-436 (1975).</li>
<li>Schwartzkroin, P. A., Wester, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-lasting+facilitation+of+a+synaptic+potential+following+tetanization+in+the+in+vitro+hippocampal+slice%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Long-lasting facilitation of a synaptic potential following tetanization in the in vitro hippocampal slice.</a> Brain Res. 89 (1), 107-119 (1975).</li>
<li>Reymann, K. G., Frey, J. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+late+maintenance+of+hippocampal+LTP%3A+requirements%2C+phases%2C+%27synaptic+tagging%27%2C+%27late-associativity%27+and+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharm%22%5BJournal%5D)">The late maintenance of hippocampal LTP: requirements, phases, 'synaptic tagging', 'late-associativity' and implications.</a> Neuropharm. 52 (1), 24-40 (2007).</li>
<li>Bliss, T. V., Collingridge, G. L., Morris, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+plasticity+in+health+and+disease%3A+introduction+and+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Philos+Trans+R+Soc+Lond+B+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">Synaptic plasticity in health and disease: introduction and overview.</a> Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 369 (1633), 20130129(2014).</li>
<li>Bliss, T. V., Gardner-Medwin, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-lasting+potentiation+of+synaptic+transmission+in+the+dentate+area+of+the+unanaestetized+rabbit+following+stimulation+of+the+perforant+path%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Long-lasting potentiation of synaptic transmission in the dentate area of the unanaestetized rabbit following stimulation of the perforant path.</a> J Physiol. 232 (2), 357-374 (1973).</li>
<li>Reid, K. H., Edmonds, H. L., Schurr, A., Tseng, M. T., West, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pitfalls+in+the+Use+of+Brain-Slices%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Pitfalls in the Use of Brain-Slices.</a> Prog Neurobiol. 31 (1), 1-18 (1988).</li>
<li>Rambani, K., Vukasinovic, J., Glezer, A., Potter, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culturing+thick+brain+slices%3A+an+interstitial+3D+microperfusion+system+for+enhanced+viability%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Culturing thick brain slices: an interstitial 3D microperfusion system for enhanced viability.</a> J Neurosci Methods. 180 (2), 243-254 (2009).</li>
<li>Hajos, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maintaining+network+activity+in+submerged+hippocampal+slices%3A+importance+of+oxygen+supply%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Maintaining network activity in submerged hippocampal slices: importance of oxygen supply.</a> Eur J Neurosci. 29 (2), 319-327 (2009).</li>
<li>Redondo, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+tagging+and+capture%3A+differential+role+of+distinct+calcium%2Fcalmodulin+kinases+in+protein+synthesis-dependent+long-term+potentiation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Synaptic tagging and capture: differential role of distinct calcium/calmodulin kinases in protein synthesis-dependent long-term potentiation.</a> J Neurosci. 30 (14), 4981-4989 (2010).</li>
<li>Stopps, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Design+and+application+of+a+novel+brain+slice+system+that+permits+independent+electrophysiological+recordings+from+multiple+slices%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Design and application of a novel brain slice system that permits independent electrophysiological recordings from multiple slices.</a> J Neurosci Methods. 132 (2), 137-148 (2004).</li>
<li>Behnisch, T., Matsushita, S., Knopfel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+gene+expression+during+long-term+potentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Imaging of gene expression during long-term potentiation.</a> Neuroreport. 15 (13), 2039-2043 (2004).</li>
<li>Karpova, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Encoding+and+transducing+the+synaptic+or+extrasynaptic+origin+of+NMDA+receptor+signals+to+the+nucleus%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Encoding and transducing the synaptic or extrasynaptic origin of NMDA receptor signals to the nucleus.</a> Cell. 152 (5), 1119-1133 (2013).</li>
<li>Karpova, A., Mikhaylova, M., Thomas, U., Knopfel, T., Behnisch, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+protein+synthesis+and+degradation+in+long-term+potentiation+of+Schaffer+collateral+CA1+synapses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Involvement of protein synthesis and degradation in long-term potentiation of Schaffer collateral CA1 synapses.</a> J Neurosci. 26 (18), 4949-4955 (2006).</li>
<li>Weng, W., Chen, Y., Wang, M., Zhuang, Y., Behnisch, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potentiation+of+Schaffer-Collateral+CA1+Synaptic+Transmission+by+eEF2K+and+p38+MAPK+Mediated+Mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Potentiation of Schaffer-Collateral CA1 Synaptic Transmission by eEF2K and p38 MAPK Mediated Mechanisms.</a> Front Cell Neurosci. 10 (247), (2016).</li>
<li>Meduna, L. J., Jackman, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbon+dioxide+inhalation+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Res+Publ+Assoc+Res+Nerv+Ment+Dis%22%5BJournal%5D)">Carbon dioxide inhalation therapy.</a> Res Publ Assoc Res Nerv Ment Dis. 31, 280-286 (1953).</li>
<li>Edwards, F. A., Konnerth, A., Sakmann, B., Takahashi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+thin+slice+preparation+for+patch+clamp+recordings+from+neurones+of+the+mammalian+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Arch%22%5BJournal%5D)">A thin slice preparation for patch clamp recordings from neurones of the mammalian central nervous system.</a> Pflugers Arch. 414 (5), 600-612 (1989).</li>
<li>Mathis, D. M., Furman, J. L., Norris, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+acute+hippocampal+slices+from+rats+and+transgenic+mice+for+the+study+of+synaptic+alterations+during+aging+and+amyloid+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Preparation of acute hippocampal slices from rats and transgenic mice for the study of synaptic alterations during aging and amyloid pathology.</a> J Vis Exp. (49), (2011).</li>
<li>Yuanxiang, P., Bera, S., Karpova, A., Kreutz, M. R., Mikhaylova, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+CA1+nuclear+enriched+fractions+from+hippocampal+slices+to+study+activity-dependent+nuclear+import+of+synapto-nuclear+messenger+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of CA1 nuclear enriched fractions from hippocampal slices to study activity-dependent nuclear import of synapto-nuclear messenger proteins.</a> J Vis Exp. (90), e51310(2014).</li>
<li>Leutgeb, J. K., Frey, J. U., Behnisch, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LTP+in+cultured+hippocampal-entorhinal+cortex+slices+from+young+adult+%28P25-30%29+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Meth%22%5BJournal%5D)">LTP in cultured hippocampal-entorhinal cortex slices from young adult (P25-30) rats.</a> J Neurosci Meth. 130 (1), 19-32 (2003).</li>
<li>Kloosterman, F., Peloquin, P., Leung, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apical+and+basal+orthodromic+population+spikes+in+hippocampal+CA1+in+vivo+show+different+origins+and+patterns+of+propagation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Apical and basal orthodromic population spikes in hippocampal CA1 in vivo show different origins and patterns of propagation.</a> J Neurophysiol. 86 (5), 2435-2444 (2001).</li>
<li>Thiemann, W., Malisch, R., Reymann, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+microcirculation+chamber+for+inexpensive+long-term+investigations+of+nervous+tissue+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Bull%22%5BJournal%5D)">A new microcirculation chamber for inexpensive long-term investigations of nervous tissue in vitro.</a> Brain Res Bull. 17 (1), 1-4 (1986).</li>
<li>Shetty, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigation+of+Synaptic+Tagging%2FCapture+and+Cross-capture+using+Acute+Hippocampal+Slices+from+Rodents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Investigation of Synaptic Tagging/Capture and Cross-capture using Acute Hippocampal Slices from Rodents.</a> J Vis Exp. (103), (2015).</li>
<li>Du, H., Lin, J., Zuercher, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Higher+efficiency+of+CO2+injection+into+seawater+by+a+venturi+than+a+conventional+diffuser+system%5BTitle%5D)+AND+%22Bioresour+Technol%22%5BJournal%5D)">Higher efficiency of CO2 injection into seawater by a venturi than a conventional diffuser system.</a> Bioresour Technol. 107, 131-134 (2012).</li>
<li>Weinman, J., Mahler, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Analysis+of+Electrical+Properties+of+Metal+Electrodes%5BTitle%5D)+AND+%22Med+Electron+Biol+Eng%22%5BJournal%5D)">An Analysis of Electrical Properties of Metal Electrodes.</a> Med Electron Biol Eng. 2, 299-310 (1964).</li>
<li>Fanselow, M. S., Dong, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Are+the+dorsal+and+ventral+hippocampus+functionally+distinct+structures%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Are the dorsal and ventral hippocampus functionally distinct structures.</a> Neuron. 65 (1), 7-19 (2010).</li>
<li>Wang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translation+of+BDNF-gene+transcripts+with+short+3%27+UTR+in+hippocampal+CA1+neurons+improves+memory+formation+and+enhances+synaptic+plasticity-relevant+signaling+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Learn+Mem%22%5BJournal%5D)">Translation of BDNF-gene transcripts with short 3' UTR in hippocampal CA1 neurons improves memory formation and enhances synaptic plasticity-relevant signaling pathways.</a> Neurobiol Learn Mem. , (2016).</li>
</ol>

Yazarlar araştırma potansiyel bir çatışması olarak yorumlanamaz herhangi bir ticari veya mali ilişkileri yokluğunda yapılmıştır bildirin.

Her ne kadar daha sağlam sinaptik yanıt-e doğru25,26,27,28arabirimi dilim chambers sergi, batma chambers yama-kelepçe kayıt ve floresan için ek kolaylık sağlar görüntüleme. Bu nedenle, alan potansiyel kayıtları kolayca floresan problar nöronlar17,18içinde görüntüleme için genişletilebilir bir ticari batma dilim odası kullanarak aku...

1951 yılında, akut beyin ilk rapor dilim deneyler yapılan1vardı. 1971 yılında, sonra başarılı vitro kayıtları piriform korteks2,3 ve Hipokampal nöronlar kemiği Hipokampus4, birini septotemporal ekseni boyunca birbirine bağlanır bulma Hipokampal nöronal aktivite ilk vitro kayıtları elde5oldu. Nöronlar içinde vivo ve in vitro koşullarda nörofizyolojik veya neurostructural parametreleri benzerlik hala biraz tartışma6konusu, ama Schwartzkroin7 1975'te belirtilen Bazal vitro nöron özellikleri korunur ve bu yüksek frekanslı uyarılması (Örneğin, tetanization) afferents Hipokampal oluşumunda bir uzun süreli kolaylaştırma sinaptik potansiyelleri8indükler. Elektrofizyolojik nöronal aktivite kayıt vitro büyük ölçüde Bliss tarafından 1973 yılında keşfetmişti etkinlik bağımlı sinaptik plastisite9,10, hücresel mekanizmaları çalışmanın genişletilmiş vd. 11 ' in vivo tavşanlarla deneyleri.
Nöronal aktivite veya yollar beyin dilimleri ve özellikle akut Hipokampal dilimleri, sinyal çalışma şimdi standart bir araçtır. Ancak, şaşırtıcı, vitro deneyler standart olacak, hala hazırlık ve akut Hipokampal dilimleri bakımı için mevcut birden çok yaklaşımlarla kanıtladığı gibi henüz. Reid vd. (1988) 12 bakım akut beyin dilim dilim odaları farklı türleri ve orta, pH, sıcaklık ve oksijen düzeyi banyo seçimler için yöntembilimsel sorunlar gözden geçirdim. Bu parametreler hala vitro dilim-kayıt kurulumları özel yapım unsurları nedeniyle kayıt odası kontrol etmek zordur. Üstesinden gelmek için yardımcı bazı yöntembilimsel sorunlar ve bu yeni tip batma dilim chambers, interstisyel 3D microperfusion sistem13, Gelişmiş laminar akışı ve oksijen ile bir oda gibi açıklayabilir yayınları bulunabilir 14, bilgisayarlı sıcaklık kontrol15ile bir sistem ve bir çok odası kayıt sistemi16sağlayın. Bu odaları inşa etmek kolay olmadığı için çoğu bilim adamı piyasada bulunan dilim chambers güveniyor. Bu odaları böylece Elektrofizyoloji ve17,18,19görüntüleme Floresans birleşimi için izin bir mikroskop sistemi monte edilebilir. Bu odaları yapay beyin omurilik sıvısı (aCSF) sular altında beyin dilimleri tutmak beri tampon çözeltinin yüksek akış hızı muhafaza edilmesi, ilaç uygulama masrafına artan gerekmektedir. Bu amaçla, biz çıkış-carbogenation alan potansiyelleri batma dilim odasında bir nispeten küçük aCSF birim için uzun süreli kayıt için yeterli istikrar sağlayan bir geri dönüşüm perfüzyon sistemiyle dahil. Buna ek olarak, biz bu deneysel carbogenation/perfüzyon sistemi etkinlik bağımlı sinaptik plastisite10 sonucunu etkilemesi ve nasıl ökaryotik uzama faktör-2 kinaz (eEF2K) inhibisyonu sinaptik modüle özetlenebilir iletim20.

<table><tbody><tr><td><güçlü > Gerekli reaktifler< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sinopharm Kimyasal Reaktif, Çin</td><td>10019318</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sinopharm Kimyasal Reaktif, Çin</td><td>10016318</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO 4</td><td>Sinopharm Kimyasal Reaktif, Çin</td><td>10017618</td> MgCl <<td></td></tr><tr><td>sub>2 &orta nokta; 6H2O</td><td>Sinopharm Kimyasal Reaktif, Çin</td><td>10012818</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sinopharm Kimyasal Reaktif, Çin</td><td>10005861</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Sinopharm Kimyasal Reaktif, Çin</td><td>10018960</td><td></td></tr><tr><td>Glikoz</td><td>Sinopharm Kimyasal Reaktif, Çin</td><td>10010518</td><td></td></tr><tr><td>NaH2 PO < > < / alt ></td> <td>Sinopharm Kimyasal Reaktif, Çin</td><td>20040718</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum piruvat</td><td>Sigma</td><td>A4043</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>Sinopharm Kimyasal Reaktif, Çin</td><td>20025118</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Sinopharm Kimyasal Reaktif, Çin</td><td>10019718</td><td></td></tr><tr><td>< güçlü > Diseksiyon için alet ve malzemeler< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dekapitatörler</td><td>Harvard aparatı</td><td>55-0012</td><td>sıçan dekapitasyonu için</td></tr><tr><td>Bandaj Makası</td><td>SCHREIBER</td><td>12-4227</td> fare <td>kafa kesme için</td></tr><tr><td>çift kenarlı bıçak</td><td>Uçan Kartal, Çin</td><td>74-C</td><td></td></tr><tr><td>IRIS Makas</td><td>RWD, Çin</td><td>S12003-09</td><td></td></tr><tr><td>Bone Rongeurs</td><td>RWD, Çin</td><td>S22002-14</td><td></td></tr><tr><td>Kaşık</td><td>Hammacher&nbsp;</td><td>HSN 152-13</td><td></td></tr><tr><td>diş çimentosu spatula</td><td>Hammacher&nbsp;</td><td>HSN 016-15</td><td></td></tr><tr><td>dental çift uçlu ekskavatör</td><td>Demirci Cerrahi, ABD</td><td>BS-415-017</td><td></td></tr><tr><td>Titreşimli Mikrotom</td><td>Leica, Almanya</td><td>VT1200S</td><td></td></tr><tr><td>cerrahi bıçak&nbsp;</td><td>RWD, Çin</td><td>S31023-02</td><td></td></tr><tr><td>cerrahi tutucu</td><td>RWD, Çin</td><td>S32007-14</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Elektrofizyoloji ekipman ve malzemeleri</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dikey Pipet Çektirme</td><td>Narishige, Japonya</td><td>PC-10</td><td></td></tr><tr><td>Titreşim izolasyon masası</td><td>Meirits, Japonya</td><td>ADZ-A0806</td><td></td></tr><tr><td>batık tip kayıt oda</td><td>Warner Instruments</td><td>RC-26GLP</td><td></td></tr><tr><td>4 Eksenli Mikromanipülatör</td><td>Sutter, ABD</td><td>MP-285, MP-225</td><td></td></tr><tr><td>Platin Tel</td><td>Dünyası Hassas Aletler</td><td>PTP406</td><td></td></tr><tr><td>Amplifikatör</td><td>Moleküler Cihazlar, ABD</td><td>Multiclamp 700B</td><td></td></tr><tr><td>Veri Toplama</td><td>Sistemi Moleküler Cihazlar, ABD</td><td>Digidata 1440A</td><td></td></tr><tr><td>Analizi yazılım</td><td>Moleküler Cihazlar, ABD</td><td>Clampex 10.2</td><td></td></tr><tr><td>Floresan Mikroskobu</td><td>Nikon, Japonya</td><td>FN1</td><td></td></tr><tr><td>LED ışık kaynağı</td><td>Lümen Dinamiği Grubu, Kanada</td><td>X-cite 120LED</td><td></td></tr><tr><td>mikropipetler</td><td>Harvard cihazı</td><td>GC150TF</td><td>hücre dışı kayıt</td></tr><tr><td>borosilikat mikropipetler</td><td>Sutter, ABD</td><td>BF150-86</td><td>yama kelepçesi</td></tr><tr><td>tungsten elektrot</td><td>A-M Sistemleri, ABD</td><td>575500</td><td></td></tr><tr><td>peristaltik pompa</td><td>Daha uzun, Çin</td><td>BT00-300T</td><td></td></tr><tr><td>peristaltik pompa için tüpler</td><td>ISMATEC, Wertheim, Almanya</td><td>SC0309</td><td>1x giriş, ID: Peristaltik pompa için 1,02 mm</td></tr><tr><td>tüpler</td><td>ISMATEC, Wertheim, Almanya</td><td>SC0319</td><td>Çıkış için 2x tüp, ID: 2,79 mm</td></tr><tr><td>CCD kamera</td><td>PCO, Almanya</td><td>pco.edge sCMOS</td><td></td></tr><tr><td>lens temizleme kağıdı</td><td>Kodak</td><td></td><td></td></tr><tr><td>50 mL konik santrifüj tüpü</td><td>Termo bilimsel</td><td>339652</td><td></td></tr><tr><td>Ön Bölme</td><td>Warner Instruments</td><td>BSC-PC</td><td></td></tr><tr><td>Sıralı ısıtıcı</td><td>Warner Instruments</td><td>SF-28</td><td></td></tr><tr><td>Sıcaklık Kontrol Cihazı</td><td>Warner Instruments</td><td>TC-324B</td><td></td></tr></tbody></table>

sinaptik plastisite akut hipokampal dilimleri bir küçük hacimli geri dönüşüm-, perfüzyon- ve batma-tipi oda sistemi içinde tutulan kayıt

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

Beyin dilimleri üzerinde deneyler 1951 beri kullanımda olmuştur rağmen sorunlar alan potansiyel ya da hücre içi kayıtları yapılırken sinaptik iletimi modülasyon istikrarlı ve başarılı bir analizini ulaşma olasılığını azaltan devam etmektedir. Bu el yazması deneysel koşullar akut beyin dilimleri bakımı için ve alan eksitatör postsinaptik potansiyeller bir piyasada bulunan batma odaya kayıt için geliştirmeye yardımcı olabilir metodolojik açıları anlatır bir çıkış-carbogenation birimi ile. Çıkış-carbogenation ilaç deneyleri maliyet verimliliğini artırmak için küçük arabellek rezervuarı geri dönüşüm itimat deneylerde oksijen seviyesini dengelemek için yardımcı olur. Ayrıca, el yazması sinaptik iletimi etkinlik bağımlı sinaptik plastisite farklı carbogenation modları ve stimülasyon paradigmalar etkilerini incelemek temsilcisi deneyler sunar.

Protokol bölümünde açıkladığımız akut Hipokampal dilim Hipokampal oluşumu (şekil 1) tahliyeleri ve orta kısmından erkek C57BL/6 fareler ve erkek Wistar rats (5-8 hafta) hazırlanması. Dilimleyici platformda hemisferlerin konumunu onları istikrarlı tutmaya yardımcı olur ve stabilization ile agar veya özel ihtiyaçlarını kaldırır. Perfüzyon sistemi yüksek rotasyon gerekli debi sıvı vermek için işletilen bir Peristaltik pompa üzerinde temel alır. Böylece, pompa iç...

Bu iletişim kuralı oksijen seviyesini geri dönüşümlü arabellek küçük bir hacim ve etkinlik bağımlı sinaptik plastisite batık akut Hipokampal dilimler halinde kayıt metodolojik açıdan istikrar açıklar.

Sinaptik plastisite akut Hipokampal dilimleri bir küçük hacimli geri dönüşüm-, perfüzyon- ve batma-tipi oda sistemi içinde tutulan kayıt

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Bu prosedürün genel amacı, küçük hacimli geri dönüşümlü ACSF'nin karbogenasyonu için basitleştirilmiş bir yöntem sağlamak ve floresan mikroskobuna monte edilmiş bir kayıt odası kullanarak alan potansiyellerinin uzun süreli kayıtlarını gerçekleştirmektir. Bu yöntem, hücresel öğrenme ve bellek modunda sinaptik iletimi ve bellek oluşumunu düzenleyen temel ligand yolaklarıyla ilişkili nöroplastisite alanındaki temel soruları yanıtlamamıza yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, spesifik antagonistler veya agonistler kullanılan deneylerin maliyet verimliliğini artırmak için küçük bir biyorezervuarın oksijen seviyesini stabilize etmeye yardımcı olmasıdır.Akut hipokampus kesitlerinin hazırlanışı, laboratuvarımızdaki doktora öğrencileri Xia ve Weiguang tarafından gösterilmektedir. Bu prosedüre başlamak için, her bir hemisferin dorsal kenarı boyunca 70 derecelik bir açıyla dorsal korteksten bir parçayı diseke etmek için soğuk bir cerrahi bıçak kullanın. Soğuk bir dental çimento spatulası ile, yüzeyi kısa süreliğine kurutmak için her bir hemisferi bir filtre kağıdı parçasına aktarın.Taze kesilmiş yüzeylere sahip iki hemisferi, hemisferlerin kaudal uçları jilet bıçağına bakacak şekilde hızlı etkili yapıştırıcı kullanarak buz gibi soğuk dilimleme platformuna sabitleyin. Ardından, dilimleme platformunu bir vibratomun soğutma haznesine yerleştirin. Hazneyi iki ila dört santigrat derece sıcaklıkta dilimleme tamponuyla doldurun ve karbogenle doyurun.Ardından, uygun vibrotom ayarlarını kullanarak 350 µm kalınlığında kesitler alın. İki enjeksiyon kanülünü makas gibi kullanarak hipokampal formasyonu subikulum ve entorhinal kortekslerden ayırın. Daha önce hazırlanmış inkübasyon odasının kesit tutucu ağındaki hava kabarcıklarını bir pastör pipeti yardımıyla temizleyin.Ardından, stratum pyramidal bölgesinde bir miktar şeffaflık gösteren kesitleri, geniş ağızlı bir pasteur pipeti yardımıyla dilimleme platformundan inkübasyon odasının ağına aktarın. Bu adımda, geri dönüşüm sisteminin çıkışına üç yollu bir tüp konnektörü ekleyin. Üç yollu tüp konnektörünün orta kolunu bir karbogen besleme tüpüne bağlayın ve akış hızını bir hava akış ölçer ile düzenleyin.Bundan sonra, geri dönüşüm sisteminin girişine ikinci bir üç yollu tüp konnektörü ekleyin. Orta kolu hat içi ısıtıcıya bakan tüpe, üst kolu ince bir silikon tüpe ve alt kolu rezervuardan gelen giriş tüpüne bağlayın. Ardından, peristaltik pompanın dilim odasındaki ACSF pulsasyonunun minimum olduğu bir konuma, ince silikon tüp üzerine bir tüp sıkıştırıcı yerleştirin.Şimdi, lens temizleme kağıdının küçük bir parçasını ve U şeklinde bir platin tele sabitlenmiş naylon bir ağı daldırma dilim odasında birkaç dakika önceden ıslatın. Ardından, U şeklindeki platin teli çıkarın. Geri dönüşümü kapatın ve bir dilimi lens temizleme kağıdının üzerine yerleştirin.Ardından, dilim tutucu ağı hemen dilimin üzerine yerleştirin. Pompayı çalıştırın ve objektifi ACSF içine daldırmadan dilimin 30 dakika boyunca dengelenmesini sağlayın. Bu sırada, kayıt elektrodunu ACSF ile doldurun ve pipet tutucuya monte edin.Metal stimülasyon elektrodunun yalıtımını, sodyum bikarbonat çözeltisine yerleştirerek kontrol edin. Elektrodu bir DC voltaj jeneratörünün negatif kutbuna bağlayın ve bir diseksiyon mikroskobu altında uç kısımda kabarcık oluşumunu gözlemleyin. Ardından, test edilen epoksi yalıtımlı tungsten stimülasyon elektrodunu manipülatör tutucuya, referans telini ise dilim odasına yerleştirin.Hazneye ikinci bir referans elektrot ekleyin ve bunu kayıt elektrodunun kafa evresi (head stage) referans soketine bağlayın. Amplifikatör kontrol yazılımında, sıfır kenetleme (zero clamp) modu kutusuna tıklayın, ardından çıkış kazancı (output gain) liste kutusuna çift tıklayın. 100 kazanç değerini seçin, yüksek geçiren filtre kutusuna çift tıklayarak 3 kHz seçeneğini belirleyin ve düşük geçiren filtre liste kutusuna çift tıklayarak 0,1 Hz seçeneğini seçin.Kayıt yazılımında, acquire (edin) seçeneğine tıklayın ve protokolü açın. Epizodik stimülasyonlara ve amplifiye edilmiş potansiyellerin 10 ila 20 kilohertz hızında 50 ila 100 milisaniye boyunca dijitalleştirilmesine izin veren ayarlara sahip olan ve epizodik bir kaydın başlamasından 10 milisaniye sonra otomatik olarak bir stimülasyon izolatörünü tetikleyen bir protokol seçin. Stimülasyon ve kayıt elektrotlarını stratum pyramidal ile aynı hatta ve paralel olacak şekilde yerleştirin.Ardından, acquire'a, edit protocol'e tıklayın ve açılan pencerede trigger sekmesini seçin. Tetikleme kaynağı kutusuna tıklayın ve tetikleme kaynağı olarak space bar'ı seçin. Sonra, okay düğmesine tıklayın ve veri toplama işlemini başlatmak için record düğmesine tıklayın.Uyaran izolatörü yazılımında, voltaj kontrol kutusuna tıklayın ve sıfır girin. İndirme düğmesine tıklayın. Ardından, kayıt yazılımı penceresine tıklayın ve boşluk tuşuna basın.Bu döngüyü 1000'den 8000'e kadar sırayla değerler girerek tekrarlayın. Stimülasyon gücü ile FEPSP eğim değerleri arasında korelasyon kurun ve maksimum FEPSP eğiminin %40'ını elde etmek için gereken stimülasyon gücünü belirleyin. Voltaj kontrol kutusuna tıklayın ve belirlenen değeri girin.Ardından, indirme butonuna tıklayın. Kayıt yazılımında, durdurma butonuna ve ardından edinme (acquire) menüsüne tıklayın. Protokolü düzenle'ye tıklayın ve açılan pencerede tetikleyici (trigger) sekmesini seçin.Ardından, tetikleme kaynağı kutusuna tıklayın ve tetikleme kaynağı olarak dahili zamanlayıcıyı seçin. Tamam düğmesine, ardından her 60 saniyede bir alan potansiyellerinin otomatik kaydını başlatan kayıt düğmesine tıklayın. 30 ila 60 dakika sonra durdur düğmesine tıklayın.Kayıt yazılımında acquire'a tıklayın, open protocol seçeneğini açın ve bazal kayıt ile aynı protokolü seçin. Tamam düğmesine tıklayın ve ardından record düğmesine tıklayın. Alan potansiyeli kayıtlarını iki ila dört saat boyunca otomatik olarak çalıştırmaya devam edin.İşlem tamamlandığında, kaydı sonlandırmak için durdurma düğmesine tıklayın. Bu şekil, çıkış karbogenasyonu ve küçük bir ACSF rezervuarının geri dönüşümüyle birlikte rezervuar karbogenasyonu kullanılarak yapılan sinaptik iletimin aktiviteye bağlı potansiyasyonuna ait temsili kayıtları göstermektedir. Potansiyasyon, sıfır zaman noktasından sonra saniyede 100 hertz'lik üç trenle indüklenmiştir.Bu şekil, küçük bir ACSF rezervuarının geri dönüşümlü çıkış karbogenasyonunun, yalnızca rezervuar karbogenasyonu yapılan deneylere kıyasla LTD indüksiyonunu iyileştirdiğini göstermektedir. Uzmanlaşıldığında, kesit hazırlama işlemi beş ila 10 dakika içinde tamamlanabilir ve doğru şekilde gerçekleştirilirse birçok saat boyunca stabil bir alan potansiyeli kaydı da elde edilebilir. Bu prosedürü uygularken; karbogenasyon seviyenizi, perfüzyon hızınızı, elektrotların konumunu ve kullandığınız düzeneğe özgü stimülasyon stresini ayarlamanız önemlidir.Bu prosedürü takiben, aktiviteye bağlı sinaptik plastisitenin indüklenmesine yanıt olarak ravin problarının sap hücresel lokalizasyonunun virilizasyonu gibi ek soruları yanıtlamak amacıyla, patch clamp ve adli mikroskopi gibi diğer yöntemler uygulanabilir. Geliştirilmesinin ardından bu teknik, nöroplastisite alanındaki araştırmacıların, sağlıklı ve transgenik fare genlerinin in vitro hipokampal kesitlerinde, aktiviteye bağlı sinaptik plastisiteyi öğrenme ve belleğin hücresel bir biçimi olarak keşfetmelerinin yolunu açmaktadır. Bu videoyu izledikten sonra, temporal hipokampustan akut kesit hazırlamanın nasıl yapılacağı ve düşük hacimli geri dönüştürülmüş ACSF kullanarak sinaptik iletimlerin uzun süreli kaydı için kararlı koşulların nasıl sağlanacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.Hayvanlarla ve kimyasal bileşiklerle çalışmanın tehlikeli olabileceğini unutmayın; bu prosedür gerçekleştirilirken eldiven giymek ve uygun şekilde dezenfeksiyon yapmak gibi önlemler her zaman alınmalıdır.

recording-synaptic-plasticity-acute-hippocampal-slices-maintained

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu makale, sıçan ve transgenik farelerin hipokampal dilimler sinaptik değişiklikler, beynin yaşlanma ve Alzheimer hastalığı gibi nörodejeneratif hastalıklar, yaşa bağlı ile ilgili çalışma için hazırlamak için prosedürler sıralanıyor.

Yaşlanma ve Amiloid Patoloji sırasında sinaptik değişiklikler Çalışması Sıçanlar ve Transgenik Farelerde akut Hipokampal Dilimleri hazırlanması

İzole hipokampi akut beyin kesitleri, hem de astrosit ve nöronların eşzamanlı elektrofizyolojik...

Akut Hipokampal Dilimler içinde Synaptically-uyarılmış astroglial ve Nöronal Cevaplarının İkili Elektrofizyolojik Kayıtlar

Bu video, sinaptik aktiviteyi kaydetmek için bir daldırma odasında bir beyin dilimi oluşturma prosedürünü göstermektedir. İşlem, dilimin lens kağıdına sabitlenmesini, nöronal canlılığı sağlamak için sürekli bir yapay beyin omurilik sıvısı (aCSF) akışının sürdürülmesini ve stimülasyonun ve kayıt elektrotlarının belirli bir beyin ilgi alanına göre doğru bir şekilde konumlandırılmasını içerir. Bu kurulum, temel sinaptik aktivitenin ve elektriksel stimülasyonun etkilerinin hassas bir şekilde...

Akut Hipokampal Dilimlerde Nöronal Alan Uyarıcı Postsinaptik Potansiyellerin Kaydedilmesi

Bu videoda, bir sıçan hipokampal diliminde CA3-CA1 sinaptik yanıtlarını kaydetme yöntemi gösterilmektedir. Sinaptik yanıt gücünü değerlendirmek için uyarıcı ve kayıt elektrotlarının hipokampal dilim üzerine yerleştirilmesi ve alan uyarıcı postsinaptik potansiyelinin (fEPSP) ölçülmesinde yer alan adımları ana hatlarıyla belirtir.

Bir Sıçan Hipokampal Diliminde CA3-CA1 Sinaptik Yanıtlarının Kaydedilmesi

Bu video, izole bir hipokampusta teta salınımları olarak da bilinen ritmik nöronal ağ aktivitesinin kaydını göstermektedir. Elektrotlar, teta salınımlarını tespit etmek ve analiz etmek için çeşitli katmanlara ve uzamsal konumlara yerleştirilir. Bu, benzersiz nöronal bileşimleri ve nöronal ağın hipokampusun farklı katmanları arasındaki bağlantısını gösterir.

Fare hipokampusundaki teta salınımlarının in vitro kaydı

Bu makale hazırlamak ve korumak için tam bir metodoloji...

Uzun vadeli potansiyelize bir çok Kararlı ve tekrarlanabilir Kayıt için geliştirilmiş Hazırlık ve Hipokampal Fare Dilimleri korunması

Bu video makalesinde, kemirgenlerden alınan akut hipokampal dilimler kullanılarak CA1 piramidal nöronlarında sinaptik etiketleme, yakalama ve çapraz etiketleme gibi uzun vadeli plastisiteyi ve ilişkisel süreçlerini incelemek için deneysel prosedürler açıklanmaktadır.

Kemirgenler gelen akut Hipokampal Dilimleri kullanarak Synaptic Etiketleme / yakalama ve Çapraz yakalama İncelenmesi

Biz postitudinal hipokampal beyin dilimleri ve uzunlamasına konumlandırılmış kayıt ve stimülasyon elektrotlar in vivo hücre dışı postinaptik potansiyelleri uyandırmak ve göstermek için kullanılan kayıt ve stimülasyon elektrotlar uzunlamasına interlamellar CA1 boyunca uzun vadeli sinaptik plastisite.

Elektrofizyolojik Alan Kaydı ile Interlamellar Hipokampus CA1'de Uzun Süreli Sinaptik Plastisitenin Araştırılması

Sunulan protokol, potansiyel antiepileptik maddeler için bir preklinik değerlendirme aracı olarak hayati beyin dilimleri kullanmak nihai hedefi ile rezeke insan hipokampal doku taşıma ve hazırlanması açıklar.

Elektrofizyolojik Kayıtlar için Akut İnsan Hipokampal Dilimlerinin Hazırlanması

Bu protokol, spontan keskin dalga dalgalanma aktivitesi sergileyen farelerden yatay hipokampal-entorhinal korteks (HEC) dilimlerinin hazırlanmasını açıklar. Dilimler basitleştirilmiş bir arayüz tutma odasında inkübe edilir ve kayıtlar, doku oksijenlenmesini ve ağ düzeyinde aktivitenin kendiliğinden ortaya çıkmasını teşvik etmek için hızlı akan yapay beyin omurilik sıvısı ile su altında koşullar altında gerçekleştirilir.

Spontan Hipokampal Ağ Aktivitesini Araştırmak için Akut Fare Beyin Dilimlemeyi

Öğrenin akut hipokampal dilimlerde sinaptik plastisite kaydı için küçük hacimli geri dönüşüm sisteminde oksijen seviyesi stabilizasyonu. Bu yöntem uzun süreli elektrofizyolojik kayıtlarda maliyet verimliliğini artırır.

Sinaptik plastisite akut Hipokampal dilimleri bir küçük hacimli geri dönüşüm-, perfüzyon- ve batma-tipi oda sistemi içinde tutulan kayıt (Video) | JoVE Journal

Sinaptik plastisite akut Hipokampal dilimleri bir küçük hacimli geri dönüşüm-, perfüzyon- ve batma-tipi oda sistemi içinde tutulan kayıt

Daha fazla video keşfet