Determination of the Optimal Chromosomal Location(s) for a DNA Element in <em>Escherichia coli</em> Using a Novel Transposon-mediated Approach

Jakob Frimodt-M&#248;ller; Godefroid Charbon; Karen A. Krogfelt; Anders L&#248;bner-Olesen

doi:10.3791/55946

En iyi kromozom Location(s) belirlenmesi için yeni bir Transposon-aracılı yaklaşımın kullanarak

JoVE Journal
Genetics

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Genetics

Determination of the Optimal Chromosomal Location(s) for a DNA Element in Escherichia coli Using a Novel Transposon-mediated Approach

En iyi kromozom Location(s) belirlenmesi için yeni bir Transposon-aracılı yaklaşımın kullanarak Escherichia coli DNA öğesinde

Full Text

7,954 Views

11:12 min

September 11, 2017

DOI: 10.3791/55946-v

Jakob Frimodt-Møller¹, Godefroid Charbon¹, Karen A. Krogfelt², Anders Løbner-Olesen¹

¹Department of Biology, Section for Functional Genomics and Center for Bacterial Stress Response and Persistence (BASP),University of Copenhagen, ²Department of Microbiology and Infection Control,Statens Serum Institut

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Burada, bir transposon-aracılı rasgele ekleme kodlamayan DNA öğesinin gücünü en iyi kromozom konumunu gidermek için kullanıldı.

Bu deneyin genel amacı, transpozon aracılı rastgele yerleştirme, rekabet deneyleri ve tüm genom dizilimi kullanarak herhangi bir DNA elementinin optimal kromozomal konumunu belirlemektir. Bu yöntem, bir genetik elementin kromozomal konumunun önemi gibi DNA replikasyon alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin avantajı, büyüme avantajı ile en uygun klonun seçimi ile çiftlerin transpozon tabanlı rastgele yerleştirme olmasıdır.

Burada, E.coli DARS2 bölgesi tarafından basitleştirilmiştir. Bu yöntem Escherichia coli'nin kromozomal organizasyonu hakkında fikir verebilse de, diğer bakterilere de uygulanabilir. Metin protokolüne göre MG1655 delta DARS2 gibi elektrokompatan hücreleri hazırladıktan sonra, 40 mikrolitre hücreye bir mikrogram pNKBOR DARS2 ekleyin ve karışımı önceden soğutulmuş steril 0.2 santimetre aralıklı bir küvete aktarın.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos