Name: Bir xarakteristikaları ve fare çene kemiğinde düzgün için hücresel analiz yöntemi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-11T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: Öğrenin fare çene kemiği kıkırdaklarında morfometrik ve hücresel değişiklikleri radyografi ve histolojik analizle incelemeyi. Bu yöntem mekanik yüklenmenin kıkırdak sağlığına etkisini değerlendirmeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazar Dr David Rowe nazikçe transgenik fareler ve Li Chen'e histolojik yardım için sağlamak için teşekkür etmek istiyorum.
Bu yayında bildirilen Araştırma Ulusal Enstitüsü diş ve ulusal sağlık Enstitüleri Ödülü numarası K08DE025914 altında kraniyofasiyal araştırma ve Amerikan Derneği Sumit Yadav ortodontik Foundation'a tarafından desteklenmiştir.

<ol><li>LeResche, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+Temporomandibular+Disorders%3A+Implications+for+the+Investigation+of+Etiologic+Factors%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Oral+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of Temporomandibular Disorders: Implications for the Investigation of Etiologic Factors.</a> Crit Rev Oral Biol Med. 8 (3), 291-305 (1997).</li>
<li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+functional+loading+causes+differential+effects+in+the+subchondral+bone+and+condylar+cartilage+in+the+temporomandibular+joint+from+young+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthr+Cartil%22%5BJournal%5D)">Altered functional loading causes differential effects in the subchondral bone and condylar cartilage in the temporomandibular joint from young mice.</a> Osteoarthr Cartil. 17 (3), 354-361 (2009).</li>
<li>Pirttiniemi, P., Kantomaa, T., Sorsa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+decreased+loading+on+the+metabolic+activity+of+the+mandibular+condylar+cartilage+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Orthod%22%5BJournal%5D)">Effect of decreased loading on the metabolic activity of the mandibular condylar cartilage in the rat.</a> Eur J Orthod. 26 (1), 1-5 (2004).</li>
<li>Chavan, S. J., Bhad, W. A., Doshi, U. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+temporomandibular+joint+changes+in+Twin+Block+and+Bionator+appliance+therapy%3A+a+magnetic+resonance+imaging+study%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Orthod%22%5BJournal%5D)">Comparison of temporomandibular joint changes in Twin Block and Bionator appliance therapy: a magnetic resonance imaging study.</a> Prog Orthod. 15 (57), (2014).</li>
<li>Dutra, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+and+Matrix+Response+of+the+Mandibular+Condylar+Cartilage+to+Botulinum+Toxin%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Cellular and Matrix Response of the Mandibular Condylar Cartilage to Botulinum Toxin.</a> PLoS ONE. 11 (10), 0164599(2016).</li>
<li>Benjamin, M., Ralphs, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+of+fibrocartilage+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Rev+Cytol%22%5BJournal%5D)">Biology of fibrocartilage cells.</a> Int Rev Cytol. 233, 1-45 (2004).</li>
<li>Shen, G., Darendeliler, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Adaptive+Remodeling+of+Condylar+Cartilage-+A+Transition+from+Chondrogenesis+to+Osteogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent+Res%22%5BJournal%5D)">The Adaptive Remodeling of Condylar Cartilage- A Transition from Chondrogenesis to Osteogenesis.</a> J Dent Res. 84 (8), 691-699 (2005).</li>
<li>Utreja, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+and+matrix+response+of+temporomandibular+cartilage+to+mechanical+loading%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthr+Cartil%22%5BJournal%5D)">Cell and matrix response of temporomandibular cartilage to mechanical loading.</a> Osteoarthr Cartil. 24 (2), 335-344 (2016).</li>
<li>Kaul, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Effect+of+Altered+Loading+on+Mandibular+Condylar+Cartilage%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">The Effect of Altered Loading on Mandibular Condylar Cartilage.</a> PLoS ONE. 11 (7), 0160121(2016).</li>
<li>Dyment, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-Throughput%2C+Multi-Image+Cryohistology+of+Mineralized+Tissues%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">High-Throughput, Multi-Image Cryohistology of Mineralized Tissues.</a> J Vis Exp. , e54468(2016).</li>
<li>Kawamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+a+new+adhesive+film+for+the+preparation+of+multi-purpose+fresh-frozen+sections+from+hard+tissues%2C+whole-animals%2C+insects+and+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Histol+Cytol%22%5BJournal%5D)">Use of a new adhesive film for the preparation of multi-purpose fresh-frozen sections from hard tissues, whole-animals, insects and plants.</a> Arch Histol Cytol. 66 (2), 123-143 (2003).</li>
<li>Hayman, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tartrate-resistant+acid+phosphatase+%28TRAP%29+and+the+osteoclast%2Fimmune+cell+dichotomy%5BTitle%5D)+AND+%22Autoimmunity%22%5BJournal%5D)">Tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) and the osteoclast/immune cell dichotomy.</a> Autoimmunity. 41 (3), 218-223 (2008).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali ilgi alanlarına sahip.

Bu el yazması xarakteristikaları ölçüm ve fare çene kemiğinde condyles ve sapa hücresel analizi için yöntemler açıklanmıştır. Radyografik xarakteristikaları ölçümleri de diğer küçük deneysel hayvan kemiklerinden analiz etmek için kullanılabilir. Buna ek olarak, hücresel analizi (hücre miktar ve kıkırdak mesafe eşleme) kemirgen çene kemiğinde düzgün sınırlı değildir, ama çok sayıda dokuların histolojik kesitler ölçmek için kullanılabilir.
Floresan gazetecilere ifade transgenik fare modelleri gö...

TME kraniyofasiyal bölgesinde bulunan benzersiz bir taşıma ortak ve fibrocartilage oluşturulur. TME mm için eklem fonksiyonu engellenmemiş çene hareket konuşma ve masticating, dahil olmak üzere, gerekli olduğunu ancak sık osteoartrit1de dahil olmak üzere dejeneratif hastalıklar tarafından etkilenir. TME yapısal ve hücresel değişiklik mm2,3,4,5bileşenlerine önde gelen dış uyaranlara ve yükleme değişiklikler, uyum kapasitesine sahiptir. MM taşıyıcı özelliklerini su, kollajen ağ da dahil olmak üzere ve yoğun Proteoglikanlar Paketli onun bileşenlerinin arasındaki etkileşimler tarafından açıklanabilir. MM olan kolajen ve kollajen olmayan proteinlerin farklı türleri hızlı dört ayrı hücresel bölgeleri: 1) Yüzeysel veya eklem bölgesi; 2) farklılaşmamış Mezenkimal hücreler ve bu oluşan proliferatif bölge talepleri yükleme için yanıt verir; 3) prehypertrophic bölge, kollajen tip 2 ifade olgun kondrosit oluşur; ve 4) Hipertrofik bölge, kollajen ifade Hipertrofik kondrosit 10 die girildiği bölge ve kalsifikasyon tabi. Mineralize olmayan bölge basınç Kuvvetleri6direnç sağlayan Proteoglikanlar zengindir.
İşte osteogenesis chondrogenesis geçiş oluştuğu, mm, Hipertrofik bölgede sürekli Qafqaz subchondral kemik çene kemiğinde düzgün7sağlam mineral yapısını güvence altına alınması. Unmineralized ve mineralize bölgelerde hücresel değişiklikler sonuçta çene kemiğinde düzgün ve çene kemiği morfolojik ve yapısal değişikliklere yol açar. Tüm hücresel bölgelerin MCC ve subchondral bölümü Qafqaz homeostazı bakımından temel sağlık, taşıma kapasitesi ve TME bütünlüğünü.
(Utreja ve ark.tarafından açıklandığı gibi) birden çok kollajen transgenik fare modeli 8 tüm transgenes mm ifade edilir çünkü kollajen ifade değişiklikleri anlamak için kullanmak için harika bir araçtır. Derinlemesine bir histolojik değerlendirme için histolojik lekeleri matris ifade, Qafqaz, hücre çoğalması ve Apoptozis yanı sıra protein ifadesi, farklı hücre katmanları MCC incelemek için kullanılır.
El yazması, histolojik ve xarakteristikaları analizleri bu farelerin çene kemiğinde düzgün mm ve subchondral kemik hücresel ve yapısal değişimler değerlendirmek için kullanılır. Buna ek olarak, floresan histolojik görüntüleri analiz etmek için ve ışık mikroskobu slaytlar, eşleme için bir hücre miktar yöntemi açıklanmıştır. Hangi hücresel ve morfolojik değişiklik mm ve subchondral kemik9neden olan, yöntemi, yükleme basınç statik TME da bizim yöntemleri doğrulamak için gösterilmiştir.
Yöntem tanımlamak burada xarakteristikaları ve çene kemiğinde düzgün ve mandibula kemirgenler histolojik değişiklikler belirlemek için veya diğer bölgelerinde endochondral ossifikasyon ve morfolojisi ek mineralize dokuların analiz etmek için kullanılabilir.

<table><tbody><tr><td>MX20 Radyografi Sistemi</td><td>Faxitron X-Ray LLC&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Digimizer Image yazılımı&nbsp;</td><td>MedCalc Yazılımı</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Shandon Cryomatrix gömme reçine</td><td>Thermo Scientific</td><td>6769006</td><td></td></tr><tr><td>Manuel mikroskop Axio Görüntüleyici Z1</td><td>Carl Zeiss</td><td>208562</td><td></td></tr><tr><td>sarı floresan protein filtresi&nbsp; - EYFP</td><td>Chroma Technology Corp</td><td>49003</td><td></td></tr><tr><td>camgöbeği floresan protein filtresi - ECFP</td><td>Chroma Technology Corp</td><td>49001</td><td></td></tr><tr><td>kırmızı floresan protein filtresi - Cy5</td><td>Chroma Technology Corp</td><td>49009</td><td></td></tr><tr><td>sodyum asetat susuz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S2889</td><td></td></tr><tr><td>sodyum L-tartrat dibazik dihidrat&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>228729</td><td></td></tr><tr><td>sodyum nitrit&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>237213</td><td></td></tr><tr><td>ELF97 substrat</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>E6600</td><td></td></tr><tr><td>ClickiT EdU Alexa Fluor 594 HCS kiti</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>C10339&nbsp;</td><td>EdU (5-etinil-2'-deoksiuridin) içerir&nbsp;</td></tr><tr><td>DAPI (4 ', 6-Diamidino-2-Fenilindol, Dihidroklorür)</td> <td>Thermo Scientific</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum fosfat dibazik ve nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S3264</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum fosfat monobazik&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71505</td><td></td></tr><tr><td>Toluidin Mavisi O&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T3260</td><td></td></tr><tr><td>Adobe Photoshop&nbsp;</td><td>Adobe Systems Incorporated</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu tuzlu su tabletleri (PBS)</td><td>Research Products International</td><td>P32080-100T</td><td></td></tr><tr><td>CNA Beta III Nikel İçermeyen Archwire</td><td>Ortho Organizers, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prizma&nbsp;</td><td>GraphPad Yazılım A.Ş.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

bir xarakteristikaları ve fare çene kemiğinde düzgün için hücresel analiz yöntemi

A Morphometric and Cellular Analysis Method for the Murine Mandibular Condyle

Temporomandibuler eklem (TME) dış uyaranlara karşı uyum kapasitesine sahiptir ve değişiklikleri yükleme condyles konumunu, hem de yapısal ve hücresel bileşenleri, çene kemiğinde condylar kıkırdak (mm) etkileyebilir. Bu el yazması bu değişiklikleri ve farelerde (yüklemeYani, basınç statik TME) TME yüklenmesini değiştirme yöntemi analiz yöntemlerini açıklar. Burada resimli yapısal değerlendirme Digimizer yazılım kullanan ve küçük kemik ilerlemenin içinde gerçekleştirilen bir basit xarakteristikaları yaklaşımdır. Buna ek olarak, hücresel analizi önde gelen değişiklikler kollajen ifade, kemik remodeling, hücre bölünmesi olarak değiştirir ve proteoglikan dağıtım mm içinde anlatılan. Bu değişiklikler histolojik bölümlerde - kullanarak pozitif floresan piksel sayma tarafından miktar görüntü yazılım ve mesafe eşleme ölçme ve alan lekeli Digimizer ile - de gösterdi. Burada gösterilen yöntemleri için fare TME sınırlı değildir, ancak ek kemikleri küçük deneysel hayvan ve diğer bölgelerinde endochondral ossifikasyon üzerinde kullanılabilir.

Tanımlayıcı istatistik xarakteristikaları ölçümleri (çene kemiğinde uzunluğu, condylar uzunluğu, condylar genişlik) ve histolojik analizler dağıtımını incelemek için yapıldı. Sonuçlar yüklü grup (Örneğin, beta titanyum bahar ile basınç yükleme tabi fareler) ve kontrol grubu (did değil almak herhangi bir yordam denetim fareler eşleşenYani ) arasında karşılaştırıldı. Ortalamaları arasındaki istatistiksel olarak anlamlı fark tespit unpaired t-Testi ve p-değeri < 0,05 istati...

Bu el yazması xarakteristikaları ve kemirgenler çene kemiğinde düzgün içinde hücresel değişikliklerin analizi için yöntemler sunar.

Bir xarakteristikaları ve fare çene kemiğinde düzgün için hücresel analiz yöntemi

The temporomandibular joint (TMJ) has the capacity to adapt to external stimuli, and loading changes can affect the position of condyles, as well as the ...

Bu deneyin genel amacı, radyograflardaki morfometrik ölçümler ve histolojik analizler kullanarak farelerin mandibuler kondiler kıkırdağındaki kompresif yüklemenin etkilerini gözlemlemektir. Bu metrikler, kemirgenlerin mandibula kondilindeki yapısal ve hücresel değişikliklere ilişkin temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Burada gösterilen tekniğin temel avantajı, diğer küçük kemikli veya eklemli hayvanların analiz edilmesi için de kullanılabilmesidir.Bu protokol için izole edilmiş, diseke edilmiş fare mandibula örneklerini kullanıma hazır hale getirin. Mandibulaları bir Petri kabı içerisinde röntgen kabini sistemine aktarın. Ardından, 26 kilovolt değerinde beş saniye boyunca radyografileri çekin.Şimdi, morfometrik ölçümler yapmak için görüntüleri analiz yazılımında açın. İlk olarak, ölçek çubuğunu ayarlamak için birim düğmesini kullanın. Ardından, marker stili 2'yi kullanarak altı anatomik nokta seçin.İlk olarak, mandibuler kondilin en posterior noktalarını birinci nokta olarak seçin. Ardından, ikinci nokta için incisura process'i seçin. Daha sonra, üçüncü nokta için sigmoid çentiğinin en derin noktasını seçin.Ardından, mandibuler ramus konkavitesinin en derin noktası ol

a-morphometric-cellular-analysis-method-for-murine-mandibular

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Kraniyofasiyal kemiklerin Hücre organizasyonu uzun öne sürülmüştür ancak doğrudan görüntülenmiştir olmamıştı. Çok spektral hücre etiketleme ve in vivo canlı olarak   Görüntüleme Zebra balığı alt çene dinamik hücre davranışı görselleştirme sağlar. Burada, biz detay protokolü Zebrabow transgenik balık işlemek için doğrudan hücre ardalanması ve Meckel kıkırdak kondrosit morfolojik değişiklikleri gözlemek.

Embriyonik Meckel Kıkırdak içinde Zebrabow klonal Hücre Analizi aracılığıyla Kondrosit interkalasyonu ve Yön Yayılması Görselleştirme

Birçok biyolojik yapılar zor, modern morfometrik yöntemleri uygulamak için yapım, kolayca tanımlanabilir yerlerinden yoksundur. İşte biz boyutunu ölçmek ve varyasyonu şekillendirmek için kullanılan yarı işaretlerini belirlemek için hesaplama yöntemleri takip diseksiyon ve MikroBT'lerin tarama dahil fare baculum (penis bir kemik), çalışma yöntemleri göstermektedir.

Baculum diseksiyonu, mikroBT Tarama ve Morfometrik Analizleri

Biz hücre ölümü yaralanma/olduğu gibi fare eklemlerin eklem yüzeyinde kayma ölçüde kontrollü mekanik yükler veya etkileri uygulamadan sonra değerlendirmek için bir yöntem mevcut. Bu yöntem, osteoartrit, genetik faktörler ve/veya farklı yükleme rejimleri içinde situ kondrosit güvenlik açığı nasıl etkilediğini araştırmak için kullanılabilir.

Gerçek zamanlı görselleştirme ve analiz nedeniyle tam olarak olduğu gibi fare kıkırdak Explants mekanik yükleme kondrosit yaralanma

Bu protokol, fare embriyosu taze dondurulmuş bölümlerinden kıkırdak ve kemik izolasyonu için lazer yakalama mikrodizeksiyon açıklar. Kıkırdak ve kemik hızla cresyl menekşe boyama ile görselleştirilmiş ve transkripsiyonanalizi için yüksek kaliteli RNA verim hassas toplanabilir.

Gen Ekspresyonu Analizi için Fare Embriyonik Kıkırdağı ve Kemiğinin Lazer Yakalama Mikrodizmesi

Farelerde ortodontik diş hareketi oluşturmak için bir protokol ve periodontal ligamentin kollajen liflerinin ve kan damarlarının bölümlenmeden 3D görselleştirilmesi için yöntemler sunuyoruz.

Mandibular Murine Modelinde Ortodontik Diş Hareketi Sırasında PDL Kollajen Liflerinin 3D Görüntülenmesi

Mevcut protokol, medial miniskotibial ligamenti keserek fare dizinin dengesini bozduktan sonra eklem kıkırdağının yüzeyindeki kontrollü mikrobıçak çiziklerini tanımlamaktadır. Bu hayvan modeli, osteofit oluşumunu, osteosklerozu ve erken evre ağrıyı incelemek için uygun hızlandırılmış bir osteoartrit (OA) formu sunar.

Hızlandırılmış Osteoartritin Medial Menisküs ve Kıkırdak Çizik Murin Modelinin Destabilizasyonu

Bu protokol, faredeki mandibular ilk azı dişinin nasıl çıkarılacağına dair adım adım ayrıntıları gösterir. Çene kemiği iyileşmesi ve yenilenmesine odaklanan araştırmacılar için alternatif bir yöntem sunar.

Murin Mandibuler Molar Ekstraksiyon Soket İyileştirme Modelinin Kurulması

Burada, bir murin maksiller modelinde ameliyat edilen yönetilebilir, ortodontik bir diş hareketi protokolünü adım adım gösteriyoruz. Her adımın açık bir şekilde açıklanması ve görsel gösterim ile araştırmacılar bu modelde ustalaşabilir ve birkaç değişiklikle deneysel ihtiyaçlarına uygulayabilirler.

Murin Maksiller Ortodonti Modelinin Kurulması

Bu protokol, mandibular kemik onarımını analiz etmek için kapsamlı ve etkili bir yöntem sunar. Bir fare modelinde stabilize olmayan mandibular kırık için tekrarlanabilir bir teknik tanımladık ve minimum doku hasarı ve kemik kaybı ile endokondral kemik onarımı sürecinin analizine izin verdik.

Fare Modellerinde Stabilize Olmayan Mandibular Kırık için Daha Az İnvaziv Teknik

Burada, ortodontik diş hareketini (OTM) incelemek için kemik adaptasyonu, kök rezorpsiyonu ve kemik hücrelerinin mekanik uyaranlara tepkisi mekanizmalarını araştırmak için uygun bir model olarak hizmet veren bir protokol sunuyoruz. Bu kapsamlı kılavuz, OTM modeli, mikro bilgisayarlı tomografi alımı ve sonraki analizler hakkında ayrıntılı bilgi sağlar.

Farelerde Ortodontik Diş Hareketinin İncelenmesi

Burada, farelerde kraniyomaksillofasiyal kemik gelişiminin mevcut yöntemlerle mümkün olandan daha iyi değerlendirilmesi için farelerde kraniyomaksillofasiyal kemiklerin 3D modellerini segmentlere ayırmak ve ölçmek için mikrobilgisayarlı tomografiye dayanan bir yöntemi derinlemesine açıklıyoruz.

Üç Boyutlu Mikrobilgisayarlı Tomografi Kullanılarak Farelerde Kraniyomaksillofasiyal Malformasyonların Analizi

Öğrenin fare çene kemiği kıkırdaklarında morfometrik ve hücresel değişiklikleri radyografi ve histolojik analizle incelemeyi. Bu yöntem mekanik yüklenmenin kıkırdak sağlığına etkisini değerlendirmeye yardımcı olur.

Bir xarakteristikaları ve fare çene kemiğinde düzgün için hücresel analiz yöntemi

Daha fazla video keşfet