Bir xarakteristikaları ve fare çene kemiğinde düzgün için hücresel analiz yöntemi

Bu deneyin genel amacı, radyografilerde ve histolojik analizde Morfometrik ölçümler kullanılarak farelerin mandibular kondiler kıkırdağında basınç yüklemesinin etkilerini gözlemlemektir. Bu ölçümler, kemirgenlerin mandibula kondilindeki yapısal ve hücresel değişikliklerle ilgili temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Burada gösterilen tekniğin temel avantajı, diğer küçük doğmuş veya katılmış hayvanları analiz etmek için kullanılabilmeleridir.

Bu protokol için, kullanıma hazır izole, disseke fare mandibulaları bulundurun. Bir Petri kabında, mandibulaları bir x-ray kabini sistemine aktarın. Ardından, beş saniye boyunca 26 kilovoltta radyografi çekin.

Şimdi, Morfometrik ölçümler yapmak için görüntüleri analiz yazılımında açın. İlk olarak, ölçek çubuğunu ayarlamak için birim düğmesini kullanın. Ardından, işaretleyici stili 2'yi kullanarak altı anatomik nokta seçin.

İlk olarak, mandibular kondilin en arka noktalarını birinci nokta olarak seçin. Ardından, ikinci nokta için kesici işlemi seçin. Ardından, üçüncü nokta için sigmoid çentikteki en derin noktayı seçin.

Ardından, mandibular ramusun içbükeyliğindeki en derin noktayı, dördüncü noktayı seçin ve ardından kondiler eklem yüzeyinin en ön noktasını, beşinci noktayı seçin. Şimdi, kondiler eklem yüzeyinin en arka noktasını altıncı nokta olarak seçin ve uzunluk aracını kullanarak uzunluk ölçümleri yapmaya devam edin. Ardından, birinci noktadan üç ve dördüncü noktalar arasındaki çizgiye kadar olan dikin uzunluğu olan kondil kafası uzunluğunu ölçmek için üç ila dört noktalardan dikey çizgi aracını kullanın.

Ardından, bir ve iki noktalar arasındaki mandibular uzunluğu ölçün. Son olarak, beş ve altıncı noktalar arasındaki kondil kafası genişliğini ölçün. Verileri kaydetmek için ekranın sağ tarafındaki ölçüm listesini kopyalayın.

Sabit, ancak kireçten arındırılmamış mandibulaları gömmeden önce, gece boyunca PBS'de yüzde 30 sükroz içinde bekletin. Ertesi gün, fazla yumuşak dokuyu inceleyin ve mandibular kondili dikkatlice kesin. Şimdi, numuneleri, kondilin medial yüzeyi kalıbın tabanına dayanacak ve numune kalıbın tabanına paralel olacak şekilde plastik kalıplara yerleştirin.

Ardından, reçineyi gömme reçinesine batırın ve reçineyi bir parça kuru buzla soğutun. Ardından, kalıpları daha fazla gömme reçinesi ile doldurun. Bunları bir dondurucu veya kuru buzla soğutulmuş soğuk iki metil bütan içine aktarın.

Soğuduktan sonra, numuneleri kesitleme için eksi 20 santigrat derecede veya eksi 80 santigrat derecede saklayın. Kondillerin sagital bölümlerinin MCC'sindeki Col10a1 ekspresyonunu ölçmek için, histolojik görüntüleri bir görüntü analiz yazılım paketinde açın ve kement aracını kullanarak ilgilenilen alanı seçin. Bu durumda, MM bölgesi seçilir.

Histogram kutusunda bildirilen alandaki piksel sayısını not edin. Ardından, renk aralığını ayarlayarak Col10a1 kırmızı piksellerini seçin. Görüntüden kırmızı bir piksel seçmek için damlalık aracını kullanın ve Tamam'ı tıklatın. Ardından, histogram kutusunda bildirildiği gibi alandaki kırmızı piksellerin sayısını kaydedin.

Alandaki kırmızı piksellerin kesri, Col10a1 ifadesinin miktarını temsil eder. Şimdi, aynı temel tekniği kullanarak, MCC ve subkondral kemikteki TRAP aktivitesini ölçün. İlk olarak, analiz edilecek alanlar olarak subkondral kemik bölgelerindeki kıkırdağı seçin ve toplam pikselleri not edin.

Ardından, ELF97 alt tabakası tarafından oluşturulan sarı pikselleri seçin. Pozitif piksellerin sayısını not edin ve TRAP pozitif piksellerin oranını hesaplayın. Şimdi, DEPI tarafından mavi renkte karşı boyanmış EDU pozitif hücreleri ölçün.

Yine, ilgilenilen alanı seçin ve ardından içindeki mavi pikselleri ölçün. Aynı bölgedeki EDU pozitif piksellerin sayısını belirlemek için de bu yöntemi kullanın. Basınçlı TME yüklemesine maruz kalan farelerin morfometrik ölçümleri, yüklemenin mandibula ve kondil kafa uzunluğunu önemli ölçüde artırdığını gösterdi.

Bununla birlikte, yükleme, kondil genişliğinde önemli bir değişikliğe neden olmadı. Kollajen dağılımının nicelleştirilmesi, Col10a1 ekspresyonunda ve yüklü hayvanların kondillerinin MCC'sinde önemli bir artış olduğunu ortaya koydu. Öte yandan, Col2a1 ekspresyonu kontrolden çok farklı değildi.

TRAP aktivitesi, alt proliferasyonda olduğu gibi kondillerin ve yüklü farelerin subkondral bölgesinde artmıştır. EDU boyama, proliferatif hücrelerin sayısını gösterir. MCC'deki proteoglikan dağılımı, Toluidin mavisi lekeli alan ve mesafe haritası değerlendirilerek ölçüldü.

Yüklü grubun kondillerinin MCC'sinde mesafe haritalamasında önemli bir artış oldu. Bununla birlikte, proteoglikan boyalı alan gruplar arasında istatistiksel olarak farklı değildi. Bu videoyu izledikten sonra, kemirgenlerin mandibular kondilindeki hücresel ve yapısal değişikliklerin nasıl analiz edileceğini iyi anlamalısınız.