Kromatin İmmunopresipitasyon için Çapraz Bağlı İskelet Kasında Yüksek Kaliteli Nükleerlerin Hazırlanması İçin Filtrasyona Dayalı Bir Yöntem

Bu deneysel prosedürün genel amacı, daha sonra kromatin immünopresipitasyon çalışmaları için kullanılabilecek çapraz bağlı iskelet kasından yüksek kaliteli çekirdeklerin hazırlanmasına izin vermektir. Bu yöntem, sirkadiyen veya diğer zamana duyarlı bağlamda kas dokuları ve hücreleri kullanan genomik çalışmalar gibi kas ve sirkadiyen alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin ana avantajı, numunelerin anında çapraz bağlanmasına izin vermesi ve filtrasyon tabanlı prosedürün, minimum miyofibril kontaminasyonu ile yüksek kaliteli çekirdekleri izole etmek için güvenilir bir şekilde yürütülebilmesidir.

Bu yöntem iskelet kası hakkında bilgi verebilse de, kalp ve düz kaslar gibi diğer sistemlere de uygulanabilir. Daha önce tarif edildiği gibi buz gibi soğuk fosfat tamponlu salin içinde yaklaşık 20 haftalık C57 siyah altı erkek fareden izole edilen arka bacak iskelet kasını tartın ve doğrayın. Kıyılmış iskelet kası dokusunu buz üzerinde 10 mililitre PBS içeren 50 mililitrelik konik bir tüpe yerleştirin.