Lazer Doppler: pankreas adacık mikrovasküler Vasomotion Vivo içinde ölçüm için bir araç

Bu prosedürün genel amacı, pankreas adacık mikrovasküler vazomotionunun in vivo fonksiyonel durumunu belirlemek ve ilgili hastalıklar üzerindeki etkisini değerlendirmektir. Bu yöntem, pankreas adacığı, mikrovasküler vazomotionun patolojik durumda değişip değişmediği gibi tıbbi dolaşım alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu yöntem için ilk fikrimiz, diyabetin gelişiminde evrimleşen işlevsel mekanik dolaşım olduğunu gösterdiğimizde ortaya çıktı.

Bu tekniğin en önemli avantajı, doku ve organların mikrovasküler vazomotion fonksiyonel durumunu hem klinik hem de laboratuvar ortamında değerlendirebilmesidir. Bu yöntem, pankreas adacığı ile ilgili hastalıklar hakkında fikir verebilir. Böbrek ve retina ile ilgili mikrovasküler hastalıklar gibi diğer sistemlere de uygulanabilir.

Bu tekniğin uygulamaları aynı zamanda mikrovasküler vazomotionun fonksiyonel durumundaki eğilimlerin doğasını anlamaya da uzanır. Genel olarak, bu yönteme yeni olan kişiler, deneyler sırasında lazer doppler'den elde edilen çok miktarda mikrovasküler akademik veri olduğu için mücadele edeceklerdir. Bu yöntemin gösterilmesinin kritik öneme sahip olduğundan emin olun, çünkü birçok faktör mikro sirkülasyon verilerinin doğru bir şekilde toplanmasını olumsuz etkileyebilir.

Bu protokol, farelere art arda beş gün boyunca günlük STZ enjeksiyonu yapılmasıyla başlar. STZ'yi sodyum sitrat tamponu içinde mililitre başına beş miligramlık bir çalışma konsantrasyonuna çözün. Daha sonra, bir mililitrelik şırınga ve 25 gauge iğne ile intraperitoneal enjeksiyonlar yapın.

Fareler enjeksiyondan önce dört saat oruç tutmalıdır, ancak suya erişimleri kaldırılmamalıdır. Kontrol farelerine aynı hacimde saf sodyum sitrat tamponu enjekte edin. Enjeksiyonlardan sonra, farelere düzenli yiyecek ve% 10 sükroz suyu verin.

STZ enjeksiyonunun beşinci gününden sonra,% 10 sükroz suyunu normal suyla değiştirin. Dokuz gün sonra kan şekerlerini test edin. İlk olarak, fareleri suya ücretsiz erişimle altı saat oruç tutun.

Ardından, kuyruk damarlarından kan alın ve kanı ölçmek için standart bir el tipi glukometre kullanın. Desilitre diyabetik başına kan şekeri seviyesi 200 miligramın üzerinde olan fareleri düşünün. Lazer doppler cihazını kullanmadan önce, önce prob ucunun ve prob konektörünün optik yüzeylerini yumuşak, aşındırıcı olmayan bir bezle temizleyin, ardından kabloyu cihazın portuna takın.

Ardından, kalibrasyon standını monte edin. İlk olarak, depolanan akı standardının oda sıcaklığına ulaşmasına izin verin. Bu yaklaşık yarım saat sürer.

Ardından, akı standardını 10 saniye boyunca hafifçe çalkalayın ve kalibrasyon tabanında iki dakika dinlendirin. Ardından, kelepçeyi mümkün olduğu kadar yükseğe kaldırın ve probu kelepçeye sabitleyin. Şimdi probu yavaşça akı standardına daldırın ve prob tutucuları kullanarak probu sabitleyin.

Devam etmek için oda ışıklarını kısın ve lazer doppler cihazındaki kalibrasyona basın. Şimdi probun bağlı olduğu çalışma kanalını seçin ve kalibrasyon programını çalıştırın. Anestezi uygulanmış bir fareyi çalışma platformuna sırtüstü pozisyonda yerleştirin ve cerrahi bant kullanarak sabitleyin.

Daha sonra, karın derisini servikal bölgeden kuyruğa kadar% 75 etanol ile sterilize edin, ardından bölgenin çevresini ortasında üç santimetre genişliğinde bir delik bulunan kuru bir gazlı bez süngerle örtün. Daha sonra, karın derisini forseps ile kaldırın ve bir neşter veya cilt makası kullanarak karnın orta hattı boyunca ilk dikey kesi yapın. Daha sonra karın boşluğuna girmek için alttaki kası forseps ve kesi ile kavrayın.

Hiçbir organa zarar vermeyin. Karın boşluğunu ortaya çıkarmak için, cildi ve alttaki kası göğsün üzerine katlayın, ardından bir çift künt burunlu forseps kullanarak pankreas gövdesini ve dalağı nazikçe ortaya çıkarın. Şimdi, lazer doppler aparatının kontrol yazılımında yeni bir ölçüm dosyası oluşturun, ardından bağlı monitörleri yapılandırın.

Genel sekmesi altında, izleme süresini serbest çalışma olarak ayarlayın ve LDF monitör sekmesi için fabrika varsayılanını kullanın. Ardından, ekran kurulum iletişim kutusunu açın ve uygun kanalları seçin. Ardından, aşağıdaki parametreleri değiştirin: kanal ve etiket, birimler ve renk için veri kaynağı, ardından ileri'ye tıklayın.

Ardından, dosya bilgileri iletişim kutusuna konu ve ölçümle ilgili tanımlayıcı bilgileri girin ve tekrar ileri'ye tıklayarak ilerleyin. Şimdi, konfigürasyon tamamlandı ve bir ölçüm penceresi açılacak. Ardından, elektrodu manuel olarak pankreasın bir milimetre yakınına kadar ilerletin.

Ölçümün doğruluğu, prob ile pankreas adacık dokusu arasındaki mesafe ile ilgilidir. Dokular ve prob arasında bir milimetre boşluk olduğu sürece kan akışı okuması yanlış olacaktır. Kayda başlamak için başlat simgesine tıklayın ve mikrovasküler kan PU verileri kaydedilmeye başlayacaktır.

Bunu tam bir dakika boyunca yapın ve kayıt sırasında görüntülenen efekti ayarlamak için sıkıştır ve genişlet ekran düğmelerini ve grafik izlerinin yüksekliğini artır veya azalt düğmelerini kullanın ve ardından kaydı durdurun. Ardından, dosyayı uygun bir adla kaydedin. Şimdi, ilave etkilerden ve kasılma ve gevşeme kapasitesinin lokalize tükenmesinden kaçınmak için probu manuel olarak yeniden konumlandırın.

Toplamda, her fare için pankreas üzerindeki rastgele üç noktadan PU verileri toplayın. Deney sırasında bir noktada, bir temel kontrol değeri elde etmek için yansıtıcı olmayan bir plakadan PU verilerini ölçün. Üç ölçümü yaptıktan sonra, kas katmanlarını kapatmak için üçlü sütür ve ardından cilt tabakasını kapatmak için dörtlü oh sütür kullanın.

Şimdi, temiz bir ev kafesine aktarmaya hazır olana kadar fareyi bir kurtarma kafesinde izleyin. Genel olarak, pankreas adacığının mikro dolaşım durumu, periyodik kasılma ve gevşeme aşamaları ile temsil edilir. Genel hemodinamik fenomen, bir kan akışı perfüzyon paterni oluşturur.

Lazer doppler cihazı kullanılarak, diyabetik olmayan ve diyabetik farelerde mikrovasküler kan perfüzyonunun dağılım modelini göstermek için PU verileri toplandı. Sonuçlar tamamen farklıydı. Pankreas adacık mikrovasküler vazomotionunun kasılma ve gevşeme ritmi, STZ'nin neden olduğu diyabetik farelerde kaotik ve düzensizken, diyabetik olmayan kontrollerde ritmik salınımlar vardı.

Daha sonra, vazomotion PU profilleri kullanılarak ölçüldü. Kontrollerle karşılaştırıldığında, STZ'nin neden olduğu diyabetik farelerde pankreas adacık mikrosirkülasyonunun ortalama kan perfüzyonu azalmıştır. Bu fareler ayrıca, bu vazomotionun genliğinde ve frekansında ve ayrıca pankreas adacığına kan perfüzyonunun nispi hızında önemli düşüşler gösterdi.

Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik uygun şekilde yapılırsa 30 dakika içinde yapılabilir. Bu prosedürü denerken, prob ile pankreas dokusu arasındaki mesafenin bir milimetre içinde olduğundan emin olmayı unutmamak önemlidir. Uygun olmayan bir mesafe, yapay olarak artmış veya azalmış bir kan akışı okuması verir.

Bu prosedürü takiben, iskemi görselleştirme, kan akışı değerlendirmesi, mikrovasküler vazomotion değerlendirmesinin fonksiyonel durumu gibi ek soruları yanıtlamak için lazer benek ve oksijenin yer değiştirmesi gibi diğer yöntemler uygulanabilir. Bu teknik, geliştirilmesinin ardından endokrinoloji ve metabolizma alanındaki araştırmacıların ve klinisyenlerin pankreas adacığı ile ilgili hastalıkların ardında saklı olan mikro dolaşım mekanizmalarını keşfetmelerinin önünü açmıştır. Lazer cihazı ile çalışmanın radyasyona maruz kalma nedeniyle son derece tehlikeli olabileceğini ve bu işlemi yaparken ortamın gözden en az 200 milimetre uzakta olması gibi önlemlerin her zaman alınması gerektiğini unutmayın.