Name: Yüksek yağlı diyet beslenme ve yüksek işlem hacmi Triacylglyceride tahlil Drosophila Melanogaster (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-13T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 28 s
Description: Keşfedin yüksek yağlı diyet beslenme ve yüksek işlem hacmi triacylglyceride tahlil yöntemini Drosophila melanogaster'da obezite oluşturmak ve yağ birikimini hızla ölçmek için. Bu teknik metabolik hastalık araştırmalarını hızlandırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Erika Taylor bu el yazması düzenleme için teşekkür etmek istiyorum. Bu eser S.B.D. Ulusal Sağlık Enstitüleri (P01 HL098053, P01 AG033561 ve R01 HL054732) R.B. için bir doktora sonrası araştırma ek (R01 HL085481) ve arkadaş grubu (AAUW) hibe ve S.B.D. Amerikan Kalp Derneği'nden hibe tarafından finanse edildi ve R.T.B.

1. protokol besleme HFD <img alt="Table 1" src="/files/ftp_upload/56029/56029table1.jpg" /> Tablo 1. Sinek yemek tarifi. 
Bu tablo farklı malzemeler bizim kontrolümüz yemek hazırlamak için kullanılan özetler. Bir kez, gıda 10 mL tüpler dökülür, soğutmalı ve uzun süreli depolama için 4 ° C'de depolanan.
<ol><li>HFD hazırlık <ol><li>1 kg yüksek yağ yemek yapmak için önceden yapılmış normal sinek gıda 700 g tartmak (bkz. Tablo 1) ve 300 gr Hindistan cevizi yağı içine bir analitik denge kullanarak iki ayrı kapsayıcı.</li>
		<li>Mikrodalga, tek tek her kapta Isı içeriği tamamen eriyecek kadar. Hindistan cevizi yağı sinek gıda konteyner içine dökün. Kadar petrol de sinek gıda içine karışık bir çırpma teli kullanarak karıştırın. 
		Not: Gıda veya yağ yok parçalarını görünür olmalıdır. Sinek gıda mikrodalga eriyor, gıda mix ve üzerinde kaynar önlemek için 1 dk aralıklarla durdurur.</li>
		<li>Yüksek yağ yemek yeniden tartın. Toplam ağırlığı 1 kg az (700 g gıda + 300 gr Hindistan cevizi yağı), su (yaklaşık 10 mL) telafi etmek için Isıtma sırasında buharlaşma ve ağırlık için 1 kg. geri getirmek için ekleyin</li>
		<li>Pour yaklaşık 10 mL iyi karışık şişe (şişe hacmi yaklaşık % 25) başına yüksek yağ gıda. Ardından, sinekler önlemek için tülbent ile kapak &#39; kirlenme. Oda sıcaklığında 1 h için serin sonra 4 ° c için depolama tüpleri için 4 hafta transfer. 
		Not: Normal gıda (NF) bir denetim gıda olarak kullanılır. Aynı zamanda şişe başına 10 mL (yaklaşık % 25 flakon biriminin) NF dökün. HFD yemek için NF gıda % 30'u Hindistan cevizi yağı ile değiştirin. Denetim ve deneysel koşullar için sinekler NF ve HFD (gıda şişe başına 10 mL) aynı miktarda verildi.</li>
	</ol></li></ol> <img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56029/56029fig1.jpg" /> Resim 1 . Drosophila içinde besleme HFD. 
Düzeni farklı beslenme adımları sinekler için bir denetim gıda (Hindistan cevizi yağı-NF ilavesi olmadan normal bir diyet) veya HFD (Hindistan cevizi yağı ilavesi ile) gösterir. Tüm süreç yetişkin sinekler ilk koleksiyonu sonra 10 gün sürer. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56029/56029fig1large.jpg" target="_blank"> Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<ol start="2"> <li>HFD D. melanogaster besleme Not: Denetim gıda ve herhangi bir sinek çizgi ile uyumlu olan yordamlar besleme HFD bu iletişim kuralını içerir. Denetim ve deneysel sinekler aynı miktarda gıda (NF veya HFD) içeren şişeleri konur.
	<ol><li>Sinekler anestezi için Kullanım CO 2. 
		Not: acemi için okuma referans lütfen 21 yetiştirme ve D. melanogaster işleme genel bir bakış için.</li>
		<li>Toplamak 0-5 gün eski sinekler şişeleri ve transfer (çevirme tarafından) sinekler NF (oda sıcaklığında daha önce ısındı) içeren yeni tüpleri içine. Sinekler yaş 21 5 ek gün izin ° C.</li>
		<li>HFD ve NF 4'ten içeren şişeleri 5 günün sonunda çıkarmak ° C. 
		Soğuk sıcaklıklarda yaşam sinekler, stres gibi Not: kullanmadan önce ısınmak için oda sıcaklığında 30 dakika oturmak şişeleri izin.</li>
		<li>Mendil kullanarak, temiz ve aşırı sıvı şişeleri taraftan kaldırmak.</li>
		<li>Hakkında filtre kağıdı, küçük bir parça eklemek 1 cm x 3 cm, herhangi bir fazla sıvı emmek için yüksek yağ gıda içine. 
		Not: Bu sinekler HFD gıda yapışmasını önlemek için kritik bir adımdır.</li>
		<li>Sonra yüksek yağ yemek üzerine sinekler (saygısız) aktarın. Şişeleri (kalkmadığım) yatay olarak onların tarafında, 21-22 ° c 5 gün yattı. 
		Not: Bu kısmen yüksek yağ yemek, gıda ve ölmek için sopa sinek neden erime olabilir gibi yüksek sıcaklıklarda kaçının.</li>
		<li>Sonra 5 günü, devir (saygısız) NF ve HFD uçar bağırsaklarını 30 dk için boş için izin vermek için gıda olmadan yeni tüpleri içine. Ardından, Sineklerin ağırlığında için devam. 
		Not: Bu HFD Protokolü besleme önemli adımlardan biri iyi karışık bir HFD, herhangi bir sinek gıda veya yoğun yağ parçalarını ücretsiz hazırlamaktır. Homojen karıştırma ve 45-30 ° c HFD soğutma tavsiye edilir, tüpleri dökme ve 4 ° C. uygun yaşta Gıda Depolama önce denetim ve deneysel sinekler eşleşen kontrollü beslenme ve çevre koşulları önceden yanı sıra önemlidir HFD besleme için. Besleme aşamasında kontrol ve deneysel sinekler NF ve HFD aynı miktarda verilmelidir. Hiç sinek kalabalık tüpleri veya şişe (transgenerational etkilerinden korunmak için) toplamak. Her zaman en fazla 25 sinekler NF ve diyet kısıtlaması veya diğer crowding etkileri önlemek için besleme HFD sırasında şişe koydu. HFD % 30 Hindistan cevizi yağı oluşur, böylece 22 ° C üzerindeki sıcaklıklarda kısmen yağlı yiyecek ve die sopa sinek neden HFD, eriyebilir. HFD üzerinde sinekler koymadan önce herhangi bir kalıntı petrol kaldırmak ve herhangi bir aşırı sıvı gıda emmek için bir filtre kağıdı eklemek için şişeleri temizle. HFD üzerinde sinekler kuluçka sırasında tüpleri üzerinde sinekler için yağsız yatay bir yüzey sağlamak için yan yana koyulur.</li>
	</ol></li> <li>Sineklerin ağırlığında <ol><li>her genotip ve test edilmesi için cinsiyet için önceden etiketli, boş 1.7 mL tüpler ağırlıkları kaydetmek için Ultra-duyarlı bir ölçek kullanın.</li>
		<li>Anestezi ve aynı genotip, cinsiyet, 36 sinekler toplamak sinek anestezi veya CO 2, kullanma ve bir fırça ile durum içine bir besleme önceden 1.7 mL tüp tartılır.</li>
		<li>Aynı Ultra-duyarlı ölçek sinekli içeren tüp tartmak.</li>
		<li>Belirlemek bu formül takip ortalama sinek ağırlığı: 
		<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/56029/56029eq1.jpg" /> Not: Bu protokol sinekli 36 sayısıdır.</li>
		<li>Flash 2 dk. toplamak için sıvı azot içine dalan tarafından sinekler içeren 1.7 mL tüpler donma ve tüpler kutulara koyun. Sonra kutuları etiketi tahlil ile kullanmak kadar depolama için-80 ° C (tercih sıcaklık) transfer. 
		Dikkat: Son derece düşük bir sıcaklıkta sıvı nitrojen var. Lütfen uygun kişisel koruyucu giysiler kullanın.</li>
	</ol></li></ol> 2. ETİKET tahlil <ol><li>Etiket standart konsantrasyonları hazırlanması <ol><li>500 mL PBT hazırlamak (PBS 1 X, % 0.05 Triton).</li>
		<li>Kullanma 0.5 mL tüpler ve etiket çözüm (Tablo malzemeler), hazırlamak boş (sadece PBT) 100 µL ve altı standart etiket konsantrasyonları (2 µg/µL 1 µg/µL 0,5 µg/µL; 0,25 µg/µL; 100 µL 0,125 µg/µL; 0.0625 µg/µL) ile PBT.</li>
		<li>Tüpler Buza koyun ve sinekler taşlama ile devam edin.</li>
	</ol></li> <li>Sinekler taşlama <ol><li>-80 ° c (Adım 1.3) dondurulmuş sinekler çıkar. Buz üzerinde sinekler içeren tüpler transfer</li>
		<li>İlk olarak, yer 2 mm metal topları bir 96-iyi top dispanser taşlama, ek toplar kaldırmak için küçük bir fırça kullanın.</li>
		<li>96-şey taşlama yeri plaka topu dağıtıcı ve flip metal topları doğrudan taşlama plaka aktarmak için üstüne baş aşağı. Orada-meli var olmak iyi başına bir top.</li>
		<li>Bir çok kanallı pipet kullanarak PBT 600 µL 96-şey taşlama plaka her satır eklemek.</li>
		<li>3 şey uçar Forseps ile ekleyin. Her satır/iyi 96-şey taşlama plaka sinekli genotip, cinsiyet ve gıda durumunu.</li>
		<li>Sıkıca kapaklar 96-şey taşlama plaka üzerine yerleştirin. Teyp hiçbir sızıntı olması için üstte yer yerleştirilebilir.</li>
		<li>Düzgün 96-şey taşlama tabaklar taşlama makinesi yerleştirin. En yüksek hız ve basın için set machine &#34; çalıştırmak &#34; 3 dakika süreyle sinekler öğütmek için</li>
		<li>Sonra 3 dk, taşlama durdurmak ve plaka Santrifüjü ile devam edin: centrifu4000 x g, 4 ° c de 15 dakika Ge Santrifüjü sonra dikkatle süpernatant ile Pelet karıştırma önlemek için bileme plaka yönetmek.</li>
	</ol></li> <li>Örnek yükleme ve etiket içerik kararlılık <ol><li>yeni bir 96-şey Spektrofotometre tabak al. Bir çok kanallı pipet ile plaka her satır etiket reaktif 200 µL yüklenmesi.</li>
		<li>PBT yükü 20 µL bir boşluk oluşturmak için ilk satırın ilk kuyunun içine. Yukarı ve aşağı pipetting tarafından karıştırın. Kabarcıklar oluşturan kaçının.</li>
		İlk satır ve yukarı ve aşağı pipetting tarafından mix <li>yükü 20 µL kalan içine her standart seyreltme (Kimden adım 2.1.2), kuyu. Kabarcıklar oluşturan kaçının.</li>
		<li>Bir çok kanallı pipet kullanarak transfer süpernatant ile 20 µL taşlama plaka her satırdan 96-şey Spektrofotometre plaka karşılık gelen satırda. Yukarı ve aşağı karıştırın için pipet. Kabarcıklar oluşturan kaçının.</li>
		<li>Sonra 96-şey plaka üzerinde gaz geçirgen bir folyo yerleştirin.</li>
		<li>Kuluçkaya plaka 10 dk. 37 ° C'de 
		Not: wells kabarcıklar eğer vasıl tüm kabarcıklar kaldırmak için 2.000 x g 2 dk plaka santrifüj kapasitesi. Kabarcıklar varlığı ile Absorbans okuma karışmamasıdır.</li>
		<li>Okunur her şey 550, plaka Absorbans nm bir uyumlu Mikroplaka okuyucu kullanarak. Daha sonra standart eğri takip edip bilinmeyen örnekleri [µg/µL] konsantrasyonu belirlemek.</li>
		<li>Etiketinin içeriği başına ortalama sinek ağırlık miktarını belirlemek için aşağıdaki formülü kullanın: 
		<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/56029/56029eq2.jpg" /> Not: Bu protokol için 3 sinekler PBT 600 µL içinde kıyılmış; ortalama sinek başı 200 µL birimdir.</li>
	</ol></li> <li>Bradford tahlil ve normalleştirme etiket içerik protein içeriği ile <ol><li>yedi hazırlamak sığır serum albumin (BSA) standart dilutions 100 µL (75 µg/mL, 100 µg/mL, 150 µg/mL; 200 µg/mL; 250 µg/mL; 500 µg/mL; 1000 µg/mL) ile PBT.</li>
		<li>Yeni bir 96-şey plaka almak ve 1 X Bradford reaktif 200 µL plaka her satır yük.</li>
		<li>İlk satırının ilk kuyuda bir boşluk oluşturmak için PBT 10 µL ekleyin. Yukarı ve aşağı pipetting tarafından karıştırın. Kabarcıklar oluşturan kaçının.</li>
		İlk satır ve yukarı ve aşağı pipetting tarafından mix <li>kalan içine her standart seyreltme eklemek 10 µL kuyu. Kabarcıklar oluşturan kaçının.</li>
		<li>Bir çok kanallı pipet kullanarak transfer süpernatant sinek 10 µL taşlama plaka her satırdan karşılık gelen satırda 96-şey plaka içine. Yukarı ve aşağı karıştırın için pipet. Kabarcıklar oluşturan kaçının.</li>
		<li>96-şey plaka üzerinde gaz geçirgen bir folyo yerleştirin.</li>
		<li>Plaka, oda sıcaklığında 5 min için kuluçkaya. Wells kabarcıklar varsa, bunları kaldırmak için 2.000 x g de 2 dk plaka santrifüj kapasitesi. 
		Not: Kabarcıklar varlığı ile Absorbans okuma karışmamasıdır.</li>
		<li>Kullanım Spektrofotometre okuma boş Absorbans, standartları ve bilinmeyen örnekleri, 595 nm. Her satırda örnekleri [µg/µL] konsantrasyonları belirlemek için standart eğri kullanın.</li>
		<li>Normalize etiketi aşağıdaki formülü kullanarak protein seviyesi ile içerik: 
		<img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/56029/56029eq3.jpg" /></li></ol></li></ol>

<ol><li>Ng, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global%2C+regional%2C+and+national+prevalence+of+overweight+and+obesity+in+children+and+adults+during+1980-2013%3A+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study+2013%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Global, regional, and national prevalence of overweight and obesity in children and adults during 1980-2013: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2013.</a> Lancet. 384, 766-781 (2014).</li>
<li>Murphy, S. L., et al. Mortality in the United States, 2014. NCHS data brief, no 229. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.cdc.gov/nchs/products/databriefs/db229.htm">https://www.cdc.gov/nchs/products/databriefs/db229.htm</a> (2015).</li>
<li>Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+development+in+Drosophila+and+its+relationship+to+vertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cardiovasc+Med%22%5BJournal%5D)">Heart development in Drosophila and its relationship to vertebrates.</a> Trends Cardiovasc Med. 5, 21-28 (1995).</li>
<li>Brumby, A. M., Richardson, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+Drosophila+melanogaster+to+map+human+cancer+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Using Drosophila melanogaster to map human cancer pathways.</a> Nat Rev Cancer. 5, 626-639 (2005).</li>
<li>Chan, H. Y., Bonini, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+models+of+human+neurodegenerative+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">Drosophila models of human neurodegenerative disease.</a> Cell Death Differ. 7, 1075-1080 (2000).</li>
<li>Levine, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+DNA+sequences+homologous+to+a+protein+coding+region+conserved+between+homeotic+genes+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Human DNA sequences homologous to a protein coding region conserved between homeotic genes of Drosophila.</a> Cell. 38, 667-673 (1984).</li>
<li>Bier, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila%2C+the+golden+bug%2C+emerges+as+a+tool+for+human+genetics%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Drosophila, the golden bug, emerges as a tool for human genetics.</a> Nat Rev Genet. 6, 9-23 (2005).</li>
<li>Bier, E., Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila%2C+an+emerging+model+for+cardiac+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Gene%22%5BJournal%5D)">Drosophila, an emerging model for cardiac disease.</a> Gene. 342, 1-11 (2004).</li>
<li>Noyes, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+expression+of+the+Drosophila+adipokinetic+hormone+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Identification and expression of the Drosophila adipokinetic hormone gene.</a> Mol Cell Endocrinol. 109, 133-141 (1995).</li>
<li>Rajan, A., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Of+flies+and+men%3A+insights+on+organismal+metabolism+from+fruit+flies%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biol%22%5BJournal%5D)">Of flies and men: insights on organismal metabolism from fruit flies.</a> BMC Biol. 11, 38(2013).</li>
<li>Rulifson, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ablation+of+insulin-producing+neurons+in+flies%3A+growth+and+diabetic+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Ablation of insulin-producing neurons in flies: growth and diabetic phenotypes.</a> Science. 296, 1118-1120 (2002).</li>
<li>Birse, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-fat-diet-induced+obesity+and+heart+dysfunction+are+regulated+by+the+TOR+pathway+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">High-fat-diet-induced obesity and heart dysfunction are regulated by the TOR pathway in Drosophila.</a> Cell Metab. 12, 533-544 (2010).</li>
<li>Musselman, L. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-sugar+diet+produces+obesity+and+insulin+resistance+in+wild-type+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Models+Mech%22%5BJournal%5D)">A high-sugar diet produces obesity and insulin resistance in wild-type Drosophila.</a> Dis Models Mech. 4, 842-849 (2011).</li>
<li>Diop, S. B., Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gaining+Insights+into+Diabetic+Cardiomyopathy+from+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Gaining Insights into Diabetic Cardiomyopathy from Drosophila.</a> Trends Endocrinol Metab. 26, 618-627 (2015).</li>
<li>Williams, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Obesity-Linked+Gene+Nudt3+Drosophila+Homolog+Aps+Is+Associated+With+Insulin+Signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">The Obesity-Linked Gene Nudt3 Drosophila Homolog Aps Is Associated With Insulin Signaling.</a> Mol Endocrinol. 29, 1303-1319 (2015).</li>
<li>Morris, S. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+diet-induced+insulin+resistance+in+adult+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Development of diet-induced insulin resistance in adult Drosophila melanogaster.</a> Biochim Biophys Acta. 1822, 1230-1237 (2012).</li>
<li>Bodmer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+gene+tinman+is+required+for+specification+of+the+heart+and+visceral+muscles+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The gene tinman is required for specification of the heart and visceral muscles in Drosophila.</a> Development. 118, 719-729 (1993).</li>
<li>Erkkila, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+fatty+acids+and+cardiovascular+disease%3A+an+epidemiological+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Dietary fatty acids and cardiovascular disease: an epidemiological approach.</a> Prog Lipid Res. 47, 172-187 (2008).</li>
<li>Ganz, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+fat+diet+feeding+results+in+gender+specific+steatohepatitis+and+inflammasome+activation%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">High fat diet feeding results in gender specific steatohepatitis and inflammasome activation.</a> World J Gastroenterol. 20, 8525-8534 (2014).</li>
<li>Wang, C. Y., Liao, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+diet-induced+obesity+and+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">A mouse model of diet-induced obesity and insulin resistance.</a> Methods Mol Biol. 821, 421-433 (2012).</li>
<li>Stocker, H., Gallant, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Getting+started%3A+an+overview+on+raising+and+handling+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Getting started: an overview on raising and handling Drosophila.</a> Methods Mol Biol. 420, 27-44 (2008).</li>
<li>Mathews, K. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sexual+Dimorphism+of+Body+Size+Is+Controlled+by+Dosage+of+the+X-Chromosomal+Gene+Myc+and+by+the+Sex-Determining+Gene+tra+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Sexual Dimorphism of Body Size Is Controlled by Dosage of the X-Chromosomal Gene Myc and by the Sex-Determining Gene tra in Drosophila.</a> Genetics. 205, 1215-1228 (2017).</li>
<li>Golay, A., Bobbioni, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+dietary+fat+in+obesity%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Obes+Relat+Metab+Disord%22%5BJournal%5D)">The role of dietary fat in obesity.</a> Int J Obes Relat Metab Disord. 21, Suppl 3 2-11 (1997).</li>
<li>Diop, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PGC-1%2FSpargel+Counteracts+High-Fat-Diet-Induced+Obesity+and+Cardiac+Lipotoxicity+Downstream+of+TOR+and+Brummer+ATGL+Lipase%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">PGC-1/Spargel Counteracts High-Fat-Diet-Induced Obesity and Cardiac Lipotoxicity Downstream of TOR and Brummer ATGL Lipase.</a> Cell Rep. 10, 1-13 (2015).</li>
<li>Chatterjee, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+metabolic+adaptation+to+fasting+by+dILP6-induced+insulin+signaling+in+Drosophila+oenocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Control of metabolic adaptation to fasting by dILP6-induced insulin signaling in Drosophila oenocytes.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 111, 17959-17964 (2014).</li>
<li>Palanker, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+HNF4+regulates+lipid+mobilization+and+beta-oxidation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Drosophila HNF4 regulates lipid mobilization and beta-oxidation.</a> Cell Metab. 9, 228-239 (2009).</li>
<li>Heinrichsen, E. T., Haddad, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+high-fat+diet+in+stress+response+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Role of high-fat diet in stress response of Drosophila.</a> PLoS One. 7, 42587(2012).</li>
<li>Kitahara, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+between+class+III+obesity+%28BMI+of+40-59+kg%2Fm2%29+and+mortality%3A+a+pooled+analysis+of+20+prospective+studies%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Med%22%5BJournal%5D)">Association between class III obesity (BMI of 40-59 kg/m2) and mortality: a pooled analysis of 20 prospective studies.</a> PLoS Med. 11, 1001673(2014).</li>
<li>Reis, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+five+lipid+extraction+solvent+systems+for+lipidomic+studies+of+human+LDL%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">A comparison of five lipid extraction solvent systems for lipidomic studies of human LDL.</a> J Lipid Res. 54, 1812-1824 (2013).</li>
<li>Turne, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Supercritical+fluid+extraction+and+chromatography+for+fat-soluble+vitamin+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Chromatogr+A%22%5BJournal%5D)">Supercritical fluid extraction and chromatography for fat-soluble vitamin analysis.</a> J Chromatogr A. 936, 215-237 (2001).</li>
<li>Na, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+model+of+high+sugar+diet-induced+cardiomyopathy%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Drosophila model of high sugar diet-induced cardiomyopathy.</a> PLoS Genet. 9, 1003175(2013).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Obezite indüksiyon farelerde ay19,20alabilir. Sinekli, aşırı yağ birikimi bir kaç gün veya daha az, (bkz: Şekil 2) sadece 18 s sonra yağ birikimi artar neden indüksiyon Protokolü besleme bu HFD sağlar. Açıklanan protokolü ile besleme HFD glikoz içerik 12 artırır ve Bmm lipaz ve PGC-1 ifade24azaltır. Bu yağ ve şekeri içeriği25,<sup class="xref"...

Biz bir zaman obezite ve onun ilişkili ekonomik güçlükler, nerede bir dünya çapında sorun1vardır. İki her üç Amerikalı dışında fazla kilolu ya da obez ilgili kalp patolojiler, ölüm2yetişkin nüfus içinde birincil nedeni ile vardır. Yeni verimli yöntemleri yeterince metabolik sendrom model organizmalar kullanarak yönetmelikte karıştığı genetik ve moleküler bileşenleri araştırmaya ihtiyaç vardır. 3,4,5,6fareler ve insanlar da dahil olmak üzere memelilerin ile en temel biyolojik süreçlerin hisse çünkü bu nedenle, biz meyve sineği Drosophila modeli seçin. Drosophila' ın genom son derece korunmuş evrim sırasında ama genel olarak çok daha küçük daha az gen ikilenmesi ve metabolik karmaşıklığı, birçok insan hastalıkları4 ' te karıştığı temel mekanizmaları anlamak için idealdir , 7 , 8. Ayrıca, karakteristik süreçleri yağ dokusu, gut tarafından yürütülen ve pankreas sinek içinde gösterilir ve insanlar9' a, benzer olan düzenleyici işlevleri glikoz ve lipid metabolizması, örneğin, aracılık 10,11. Ayrıca, temel moleküler yolları obezite, insülin direnci ve insanlarda diyabet kontrol dahil işlevsel olarak Drosophila melanogaster12,13,14 ' te konservasyonu , 15 , 16. daha yüksek organizmalar gibi Drosophila geliştirme sırasında memeli kalp3,17' e benzer işlemler tarafından kurulmuş bir kalbi vardır. Böylece, besleme protokolü ve yüksek işlem hacmi etiket tahlil, Drosophila, genetik araç kutusunu kullanarak verimli tarama amaçlı adapte güvenilir bir HFD gelişimi sağlayan çalışma ve temel genetik temeli anlamak için önemli bir araç temel karmaşık metabolik hastalıklar.
HFD yemek ile Hindistan cevizi yağı, çoğunlukla doymuş yağ asitlerinin metabolik sendrom18ile ilişkili olduğu bilinen oluşan takıma bir standart laboratuvar sinek yemek yapılır. Obezite gibi kemirgenler, memeli modellerinde inducing, ay19,20alırken, bizim en iyi duruma getirilmiş HFD Protokolü besleme Drosophila içinde etkili ve tekrarlanarak birkaç içinde organizma yağ içeriği artar gün12,14. Bu iletişim kuralı, bir yüksek işlem hacmi etiket tahlil ile birlikte genetik faktörler, çevresel etkilere ve yağ metabolizmasının yeni modülatörler keşfetmek için ilaç adaylarının etkileri için verimli kitle tarama sağlar. Sonuç olarak, bu protokoller olasılığı anlamak ve/veya insan patolojiler obezite ile ilişkili ve obezite ile mücadele ilgili.
Besleme protokolü çok yönlü ve tek doymuş veya doymamış yağ asidi metabolik ve fonksiyonel etkilerini incelemek için uygulanabilir. Bu yüksek işlem hacmi etiket tahlil kullanımını D. melanogasteriçin sınırlı değildir, ancak küçük model organizmalar kütikül veya zor ekstraselüler matrisler (örneğin, diğer Drosophila türler, C. elegans ile çeşitli adapte ve diğer omurgasız canlılar gelişmekte olan) farklı çevresel, genetik veya fizyolojik koşullar altında yağ içeriği geliştirme, yetişkinlik veya metabolik hastalık aşaması herhangi bir aşamasında ölçmek için. ETİKET tahlil Renkölçer ölçüm etiketleri içine serbest yağ asitleri, gliserol, gliserol 3-fosfat ve sonunda H2O2 4-aminoantipirin (4-AAP) ve 3,5 - ile tepki veren aşağılamak enzimatik reaksiyonlar bir dizi dayanmaktadır dichloro-2-hydroxybenzene Sülfonat (96-şey Spektrofotometre ölçülür bir kırmızı renkli ürün üretmek için 3,5 DHBS).

<table><tbody><tr><td>Talboys Top damlalık/boncuk Dispenseri</td><td>Talboys</td> <td>#: 930150</td><td></td></tr><tr><td>Talboys Yüksek Verimli Homojenizatör</td><td>Talboys</td> <td>#: 930145</td><td></td></tr><tr><td>Taşlama Bilyaları, Paslanmaz Çelik &nbsp;</td><td>OPS Diagnostics, LLC</td> <td># GBSS 156-5000-01</td><td>5000 top</td></tr><tr><td>Masterblock 96 Kuyu derin Mikroplakalar</td><td>Greiner Bio-One</td> <td># T-3058-1</td><td>80 plakalı kasa</td></tr><tr><td>Greiner & nbsp; 96 kuyulu mikroplaka düz tabanlı</td><td>Sigma Aldrich</td> <td># M4436</td><td>40 plaka</td></tr><tr><td>Çok kuyulu plakaları sızdırmaz hale getirmek için Greiner CapMat</td><td>Sigma Aldrich</td> <td># C3606</td><td>50 sızdırmazlık plakası</td></tr><tr><td>Reaktif Rezervuarları ve nbsp;</td><td>Thomas Scientific</td> <td># 1192T71</td><td>12 / PK</td></tr><tr><td>Thermo Scientific Finnpipette 4661040</td><td>Thermo Scientific</td> <td>#</td><td>4661040 1-10 ul çoklu pipet</td></tr><tr><td>Thermo Scientific Finnpipette 4661070</td><td>Thermo Scientific</td> <td># 4661070</td><td>30-300ul çoklu pipet</td></tr><tr><td>Thermo Scientific Finnpipette 4661020</td><td>Thermo Scientific</td> <td>#</td><td>4661020 10-100ul çoklu pipet</td></tr><tr><td>Çok Kanallı uçlar</td><td>Denville Scientific Inc</td># <td>10 uL pipet için</td> <td>P3131-S</td></tr><tr><td>Çok kanallı uçlar</td><td>Denville Scientific Inc</td><td># P3133-S</td><td>200 uL pipet için</td></tr><tr><td>Çok kanallı uçlar</td><td>Denville Scientific Inc</td><td></td><td>#P1125 100 uL pipet için</td></tr><tr><td>Forseps&nbsp;</td><td>Roboz Cerrahi</td><td># 5 Dumonts</td><td>Süper ince forseps</td></tr><tr><td>Mettler Toledo Excellence XS Analitik Terazi Mfr# XS64</td><td>Cole-Parmer bilimsel uzmanları</td><td># EW-11333-00</td><td></td></tr><tr><td>Metler Toledo Excellence XS Üstten Yüklemeli Terazi</td><td>Cole-Parmer bilimsel uzmanları</td><td># EW-11333-49</td><td></td></tr><tr><td>96 Kuyulu Mikroplaka Santrifüj</td><td>Hettich Zentrifugen</td><td># Rotina 420R</td><td></td></tr><tr><td>Mikroplaka Okuyucu</td><td>Moleküler cihazlar</td> <td># SpectraMax 190</td><td></td></tr><tr><td>Lab-Line Tezgah Üstü Orbit Environ Shaker İnkübatör</td><td>Biostad</td> <td># 3527</td><td></td></tr><tr><td>Infinity Trigliserit reaktifi</td><td>Thermo Scientific</td> <td># TR22421</td><td></td></tr><tr><td>Trigliserit Standardı</td><td>Stanbio</td> <td># 2103 - 030</td><td></td></tr><tr><td>Hızlı Başlangıç Bradford Protein Tahlili</td><td>Bio-RAD</td> <td># 500-0205</td><td>1x boya Reaktifi</td></tr><tr><td>Hindistan cevizi yağı</td><td>Nutiva</td><td># 692752200014</td><td>15 0z kavanoz</td></tr><tr><td>PBS 10X</td><td>Thermo Scientific</td><td># AM9625</td><td>500 ml</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma Aldrich</td><td># 9002-93-1</td><td></td></tr><tr><td>Gaz geçirgen Folyo</td><td>Macherey-Nagel</td><td>#</td><td>740675 50 adet</td></tr><tr><td>filtre Kağıdı</td><td>VWR</td> <td># 28317-241</td><td>100</td></tr><tr><td>Drosophila şişesi</td> <td>paketiGenesee Scientific</td><td>Cat #: 32-116SB</td><td></td></tr><tr><td>Hızlı Başlangıç Sığır Serumu Albümin Standardı</td><td>Bio-Rad</td><td># 5000206</td><td></td></tr><tr><td>FlyNap Anestezik</td><td>Carolina</td><td># 173025</td><td>100 mL</td></tr><tr><td>Kimwipes Düşük Tüylü</td><td>Uline</td> <td># S-8115</td><td>1 Katlı, 4.4 x 8.4"</td></tr></tbody></table>

yüksek yağlı diyet beslenme ve yüksek işlem hacmi triacylglyceride tahlil drosophila melanogaster

High Fat Diet Feeding and High Throughput Triacylglyceride Assay in Drosophila Melanogaster

Kalp hastalığı insan ölüm dünya çapında bir numaralı nedenidir. Çok sayıda çalışmalar insanlarda güçlü bağlantıları arasında obezite ve kalp arıza göstermiştir ama daha fazla araç ve araştırma çabalarını daha iyi mekanizmaları dahil aydınlatmak için ihtiyaç vardır. İçin bir yüzyılı aşkın süredir, Drosophila genetik olarak son derece uysal modelinin anahtar genlerin ve türler arasında son derece korunmuş kanıtladı moleküler yollar keşfi vesile olmuştur. Birçok biyolojik süreçlerin ve hastalık mekanizmaları işlevsel olarak geliştirme (örneğin, vücut planı, kalp), kanser ve nörodejeneratif hastalık gibi anında korunmuş. Son zamanlarda, obezite ve model organizmalar, kalp hastalığı gibi ikincil patolojiler çalışma anahtar düzenleyiciler metabolik Sendromu insanlarda dahil tanımlama son derece kritik bir rol oynamıştır.
Burada, neden obezite, Yani, aşırı yağ birikimi ve yağ içeriği Etiketler birikimi şeklinde izlemek için verimli bir iletişim kuralı geliştirmek için etkili bir araç olarak bu model organizma kullanmayı öneriyorum. Ek olarak son derece korunmuş, ancak daha az karmaşık genom, anında da hızlı deneme, maliyet-etkililik ile kombine için kısa bir ömrü vardır. Bu inceleme obezite ve yağ içeriği yüksek tekrarlanabilir olmak amacı ile ilişkili artış ölçmek için bir yüksek üretilen iş triacylglyceride (TAG) tahlil ikna etmek için Drosophila yüksek yağlı diyet (HFD) beslenme için detaylı bir protokol sağlar ve büyük ölçekli genetik veya kimyasal tarama için etkili. Bu protokoller verimli düzenleyici mekanizmaları obezite ilgili araştırmak, aynı zamanda ilaç bulma araştırma geliştirme ilaç adaylarının etkisinin hızlı test etmek için standart bir platform sağlamak için yeni fırsatlar sunmak veya Obezite, diyabet ve ilgili metabolik hastalıkları önleme.

D. melanogasteriçinde diğer türler ile olduğu gibi işte cinsel dimorfizm kadın ve erkek22arasında. İyi kadınlar daha büyük, onların abdomens daha fazla yağ daha erkek22ile bilinmektedir. Bizim iletişim kuralı etkinliğini test etmek için etiket deneyleri Etiketinin içeriği standart laboratuvar wildtype (w1118) kadınlar ve erkekler arasındaki farklılıkları uçar belirlemek için gerçekleştirilen. Kadın erkek meslekta...

Yüksek yağlı diyet beslenme obezite Drosophila, anlayış temel moleküler mekanizmalar içinde lipotoxicity karıştığı için bir model olarak ikna etmek için iletişim kuralı bu. Ayrıca yüksek işlem hacmi triacylglyceride tahlil Drosophila ve potansiyel olarak diğer (böcek) modelleri çeşitli diyet, çevresel, genetik veya fizyolojik koşullar altında yağ birikimi ölçmek için sağlar.

Yüksek yağlı diyet beslenme ve yüksek işlem hacmi Triacylglyceride tahlil Drosophila Melanogaster

Heart disease is the number one cause of human death worldwide. Numerous studies have shown strong connections between obesity and cardiac malfunction in ...

Bu yüksek yağlı besleme protokolünün ve yüksek verimli triasilgliserit analizinin genel amacı, drosophila melanogaster gibi bir model organizmada obezite oluşturmak ve çeşitli koşullar altında yağ içeriğindeki ilişkili değişimleri izlemektir. Bu yöntem; organizmal obezite ile metabolik bir sendrom olan diyabet, karaciğer ve kardiyak steatozla ilgili organa özgü lipotoksisite dahil olmak üzere metabolizma alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, drosophila'da aşırı yağ birikiminin birkaç gün içinde oluşturulabilmesi ve yağ içeriğinin yaklaşık bir saat içinde eş zamanlı olarak belirlenebilmesidir.Bu tekniğin etkileri, yüksek kapasiteli protokolün bu model sistemini kullanarak hızlandırılmış ilaç keşif çalışmalarına olanak tanıması nedeniyle, metabolik hastalıkların teşhisine ve tedavisine kadar uzanmaktadır. Deneye başlamak için, analitik bir terazi kullanarak iki ayrı kaba bir kilogram yüksek yağlı yem hazırlayın; bunun için önceden hazırlanmış 700 gram sinek yemi ve 300 gram Hindistan cevizi yağı tartın. Her bir kabı, içerik tamamen eriyene kadar mikrodalga fırında ayrı ayrı ısıtın.Eritilmiş hindistan cevizi yağını sinek besin kabına dökün ve yağ besinle karışana kadar bir çırpıcıyla karıştırın. Yüksek yağlı besini yeniden tartın. Toplam ağırlık bir kilogramdan azsa, ağırlığı tekrar bir kilograma çıkarmak için yaklaşık 10 millilitersu ekleyin.Ardından, iyice karıştırılmış yüksek yağlı gıdadan her tüpe 10 milliliters dökün. Kontaminasyonu önlemek için gıdanın üzerini tülbentle örtün ve gıdanın oda sıcaklığında bir saat boyunca soğumasını bekleyin. Soğuma işleminden sonra, tüpleri dört haftaya kadar saklamak üzere dört derece Celsius sıcaklığa transfer edin.Sinekleri anestezi etmek için CO2 kullanın. Sıfır ila beş günlük sinekleri flakonlardan toplayın ve sinekleri, önceden ısıtılmış normal yem veya NF içeren yeni flakonlara aktarın. Sineklerin 21 °C'de beş gün daha yaşlanmasını bekleyin. Beş günün sonunda, yüksek yağlı diyet veya HFD ve NF içeren flakonları 4 °C'den çıkarın.Sineklerin HFD yemine yapışmasını önlemek için mendil kullanarak tüplerin kenarlarını temizleyin ve fazla sıvıyı alın. Fazla sıvıyı emmesi için yüksek yağlı yeme yaklaşık bir santimetreye üç santimetrelik küçük bir filtre kağıdı parçası yerleştirin. Ardından, sinekleri yüksek yağlı yem üzerine aktarın.Flakonları 21 ila 22 °C'de, beş gün boyunca yan yatırarak yatay konumda tutun. Beş gün sonra, bağırsaklarının boşalması için NF ve HFD gruplarındaki sinekleri yemsiz yeni flakonlara aktarın ve 30 dakika bekletin. Ardından sineklerin tartım işlemine geçin.Test edilecek her bir genotip ve cinsiyet için, önceden etiketlenmiş boş 1.7 mililitre tüplerin ağırlıklarını kaydetmek amacıyla ultra hassas bir terazi kullanın. Aynı genotipe, cinsiyete ve beslenme durumuna sahip 36 sineği anestezi altına alın ve bir fırça yardımıyla önceden tartılmış tek bir 1.7 mililitre tüpe toplayın. Ardından, sinekleri içeren tüpü aynı ultra hassas terazi ile tartın.Sinekleri içeren 1.7 mililitrelik tüpleri, iki dakika boyunca sıvı azotun içine daldırarak hızlıca dondurun. Tüpleri toplayın ve kutulara yerleştirin. Ardından, kutuları TAG analizi ile kullanılana kadar saklamak üzere -80 °C dondurucuya aktarın.İlk olarak, dondurulmuş sinekleri -80 °C dondurucudan çıkarın ve tüpleri buz üzerine yerleştirin. 96 kuyucuklu bilye dağıtıcıya 2 mm'lik metal öğütme bilyeleri yerleştirin ve fazla bilyeleri temizlemek için küçük bir boya fırçası kullanın. Ardından, 96 kuyucuklu öğütme plakasını bilye dağıtıcının üzerine ters şekilde yerleştirin ve metal bilyelerin doğrudan öğütme plakasına aktarılması için plakayı ters çevirin.Her kuyucukta bir adet bilye olduğundan emin olun. Ardından, çok kanallı bir pipet kullanarak 96 kuyucuklu öğütme plakasının her sırasına 600 µL PBT ekleyin. Pens yardımıyla, her kuyucuğa üç adet sinek ekleyin.96 kuyucuklu öğütme plakasının her satır veya kuyucuğundaki sineklerin genotipini, cinsiyetini ve beslenme durumunu belirtin. Kapakları 96 kuyucuklu öğütme plakasına sıkıca kapatın. Sızıntı olmadığından emin olmak için üzerine bant yapıştırın.96 kuyucuklu öğütme plakalarını öğütme makinesine düzgünce yerleştirin. Makineyi en yüksek hıza ayarlayın ve sinekleri üç dakika boyunca öğütmek için çalıştırma düğmesine basın. Üç dakika sonra öğütmeyi durdurun ve santrifüjleme işlemine geçin.Santrifüj işleminden sonra, süpernatantın pellet ile karışmasını önlemek için öğütme plakasını dikkatlice yönetin. Çok kanallı bir pipet kullanarak, yeni bir 96 kuyucuklu spektrofotometre plakasının her sırasına 200 µL TAG reaktifi ekleyin. Kör örneği oluşturmak için ilk sıranın ilk kuyucuğuna 20 µL PBT ekleyin.Pipetle yukarı-aşağı çekerek karıştırın. Her bir standart dilüsyonun 20 µL'sini ilk sıranın kalan kuyucuklarına yükleyin ve pipetle yukarı-aşağı çekerek karıştırın. Çok kanallı bir pipet kullanarak, öğütme plakasının her sırasından 20 µL süpernatanı, 96 kuyucuklu spektrofotometre plakasındaki karşılık gelen sıraya aktarın.İyice karıştırmak için pipetle yukarı aşağı çekme işlemi yapın. Ardından, 96 kuyucuklu plakanın üzerine gaz geçirgen bir folyo yerleştirin. Plakayı 37 °C'de on dakika boyunca inkübe edin.Uyumlu bir mikroplaka okuyucu kullanarak plakanın her kuyusunun absorbansını 550 nanometrede okuyun. Standart laboratuvar vahşi tip sineklerinde yapılan etiket analizleri, dişilerin erkek muadillerine göre daha fazla tüm vücut yağına sahip olduğunu göstermektedir. Veriler ayrıca, analizin stabil olduğunu, etiket miktar belirlemede zamanla herhangi bir varyasyon oluşmadığını ve biyolojik örnek boyutuna bağlı bir varyasyon görülmediğini göstermiştir.Yüksek yağlı diyet (HFD) ve kontrol diyeti ile beslenen dişi sineklerin TAG analizleri, drosophila'da HFD tüketiminin, zamanla kademeli olarak biriken yağ içeriğinde artışa neden olduğunu ortaya koymuştur. Sadece 18 saatlik HFD beslemesinin ardından, sineklerde yağ içeriğinde anlamlı bir artış tetiklenmiştir. Bu prosedür uygulanırken, yüksek yağlı diyet beslemesi için iyice temizlenmiş flakonlar kullanılması gerektiği unutulmamalıdır.Sinekleri 22 °C veya altında saklayın; ayrıca etiket analizi sırasında pipetleme yaparken süpernatantı kalıntılarla karıştırmayın. Gelişiminin ardından bu teknik, metabolizma ve ilgili hastalıkları çalışan araştırmacıların, besin fazlalığının etkilerini ve drosophila'da yağ birikiminin genetik temelini ve lipotoksik kardiyomiyopati gibi ilgili organ disfonksiyonlarını incelemelerinin önünü açmıştır.

high-fat-diet-feeding-high-throughput-triacylglyceride-assay

Research

JoVE Journal

Genetics

Genetik

Bu videoda, meyve sinekleri için renkli gıdaların beslenmeyi izlemek için kullanıldığı bir besleme testi ve eklenen bileşiklerin besleme aktivitesi üzerindeki etkisi açıklanmaktadır. Örnek protokol, çeşitli endokrin bozucu kimyasalların (EDC) etkilerini test eder.

Beslenme Testi: Drosophila melanogaster'de Beslenme Tercihlerinin Değerlendirilmesi

Bu protokol, Drosophila melanogaster'in yumurtlama tercihlerini tek hayvan çözünürlüğünde test etmek için yüksek verimli bir testi tanımlar.  Bu tahlil, basit bir karar verme sürecini kontrol eden genleri ve devre bileşenlerini tanımlamak için basit, verimli ve ölçeklenebilir bir platform sağlar.

Yüksek Verimli Testi Bireyin Yumurta Yumurtlayan Tercihler incelemek için<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Burada üçüncü instar (L3) Drosophila melanogaster larva evresi içinde organizma yağ seviyelerini ölçmek için bir yöntem mevcut. Bu yöntem, değişmiş yağ mağazaları ile larva ayırt etmek için yağ dokusunun nispeten düşük yoğunluğa patlatır. Yüzdürme-tabanlı analiz, hızlı, tekrarlanabilir ve ekonomik tarama için değerli bir araçtır.

Yağ Düzeylerinin Belirlenmesi A Yüzdürme tabanlı Yöntemi<em&gt; Drosophila</em

Biz ödüllendirici uyaran ve ödül devletlerde değişiklikler için bir tedbir olarak gönüllü etanol tüketimi ile meyve sinekleri (Drosophila melanogaster) deneyimleri nonrewarding için bir protokol açıklar.

Kullanımı Ödül arayan davranış değişiklikleri Tedbir Basit Yolu<em&gt; Drosophila melanogaster</em

CApillary FEeder (CAFE) testi, gıda alımının altında yatan mekanizmaları araştırmak için basit, bütçe dostu, son derece güvenilir bir yöntemdir. Çok yönlü genetik model organizma Drosophila melanogaster ile birlikte kullanıldığında, gıda alımının düzenleyici mekanizmaları hakkında yeni bilgiler edinmenin güçlü bir yolunu sunar.

Kılcal Besleyici Testi Gıda Alımını içinde Tedbirler<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Nicel gıda alımı deneyleri boyalı gıda ile sağlam sağlamak ve yüksek üretilen iş besleme motivasyon değerlendirileceği anlamına gelir. Gıda tüketimi tahlil ile thermogenetic birleştiren ve optogenetic ekranlar iştah yetişkin temel sinir devreleri araştırmak için güçlü bir yaklaşımdır Drosophila melanogaster.

Nicel gıda alımı deneyleri birleştirerek ve zorla iştah Drosophila içinde çalışmaya nöronların aktive

TreadWheel dönme hareketi yavaşça yetişkin Drosophila melanogaster alıştırmada uçar doğuştan gelen, negatif geotaxis sömürerek ikna etmek için kullanır. Metabolik sağlık değerlendirmek için egzersiz ve genotip, cinsiyet ve diyet ve fizyolojik ve moleküler deneyleri üzerindeki etkileri gibi faktörler arasındaki etkileşimler çözümlenmesi için sağlar.

TreadWheel: Aralığı eğitim protokolü yavaşça indüklenen egzersiz Drosophila melanogaster için

Burada açıklanan, farklı makro besin kalitesinde diyetlere maruz kalan Drosophila melanogaster larvaları tarafından belirli bir zaman aralığında yenen yiyecek miktarının kolorimetrik olarak ölçülmesini sağlayan bir protokoldür. Bu tahliller nöronal termogenetik ekran bağlamında gerçekleştirilir.

Drosophila Larvaları Kullanılarak Termogenetik Nöronal Ekranda Makro besin alımının nicelleştirilmesi

Sinekler için iki seçenekli bir besleme tahlilleri için bir protokol sunuyoruz. Bu besleme testini çalıştırmak hızlı ve kolaydır ve sadece küçük ölçekli laboratuvar araştırmaları için değil, aynı zamanda sineklerdeki yüksek verimli davranışsal ekranlar için de uygundur.

Drosophila&apos;da Hızlı Bir Yemek Tercihi Tahlil

Mikro plaka besleyici tahlili, Drosophila'dakisıvı gıda tüketimini ölçmek için ekonomik, yüksek verim yöntemi sunar. 3D baskılı bir cihaz, sineklerin barındırıldığı 96 kuyulu bir mikro plakayı, sineklerin bir izleyici boyası ile bir besleme çözeltisi tükettiği 1536 kuyulu bir mikro plakaya bağlar. Çözelti hacmi düşüşü spektrofotometrik olarak ölçülür.

Drosophila'da Tüketimin Nicelleştirilmesi için Yüksek Verimli Mikro Plaka Besleyici Tahlili

Bu protokol, kimyasal toksik maddelerin yetişkin Drosophila melanogaster'in yaşayabilirliği üzerindeki etkilerini değerlendirmek için sıvı ortam kullanan verimli ve ucuz bir yöntemi tanımlamaktadır.

Erişkin Drosophila Melanogaster'de Kimyasal Toksisitenin Değerlendirilmesi

Keşfedin yüksek yağlı diyet beslenme ve yüksek işlem hacmi triacylglyceride tahlil yöntemini Drosophila melanogaster'da obezite oluşturmak ve yağ birikimini hızla ölçmek için. Bu teknik metabolik hastalık araştırmalarını hızlandırır.

Yüksek yağlı diyet beslenme ve yüksek işlem hacmi Triacylglyceride tahlil Drosophila Melanogaster

Daha fazla video keşfet