Name: Kronik obstrüktif akciğer hastalığı manken tekrarlanan ozon maruz farelerde nesil (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-08-25T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 17 s
Description: Öğrenin farelerde tekrarlanan ozon maruziyetiyle KOAH hayvan modeli oluşturmayı. Bu yöntem altı ila sekiz haftada patolojik süreçleri taklit eden güvenilir bir model sağlar ve yeni ilaç taramaları için kullanılabilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, bu iletişim kuralını µCT değerlendirilmesinde konusunda teknik yardım almak için Bay Boyin te (Şangay halk sağlığı Klinik Merkezi) için şükran ifade etmek istiyorum.

Not: OE model oluşturulan ve daha önce bildirilen araştırma 30 , 31 , 32 yılında kullanılan. Tüm hayvan deneyleri kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) Shanghai Jiaotong Üniversitesi tarafından kabul edildi.
 1. fareler <ol><li>ev patojen ücretsiz, 7 - için 9-hafta-yaşlı kadın BALB/c fareler bir hayvan bireysel havalandırılmış kafeslerde tesis altında kontrollü sıcaklık (20 ° C) ve nem (40-%60). 12 h ışık ve 12 h tesisin karanlık döngüsünde sağlar. Gıda sağlamak ve ad libitum su.</li>
</ol> 2. Ozon veya hava pozlama <ol><li>Generate ozon ile sızdırmazlık akrilik (örneğin Perspex) kutusunda bir elektrik jeneratörü. Blow hava iç ve kutunun dışında bağlı bir hava havalandırma borusu aracılığıyla küçük Hava üfleyici kullanarak kutudan. Kutusuna bir ozon sonda kullanarak ozon konsantrasyonu izlemek. Kutusunda ozon konsantrasyonu başına 2.5 parçaları ulaşır kadar bekleyin milyon (ppm). 
	Not: Ozon sonda otomatik olarak Ozon Jeneratör açık veya kapalı geçiş yapabilir ve ozon seviyesi 2.5 ppm at kutusundaki koruyabilirsiniz.</li>
	Ozon seviyesi 2.5 ppm ulaştığında <li>fareler ve metin kutusuna yerleştirin. Fareler kutusunda 3 h için her zaman için ozon karşılaşmazlar devam. 
	Not: Kutu sırasında 3 h otomatik olarak Ozon Jeneratör açık veya kapalı geçiş yaparak bir ozon düzeyi 2.5 ppm koruyabilirsiniz ve CO 2 üfleme tarafından üretilen farelerin kutunun dışında.</li>
	<li>(3 günde bir kez) 7 hafta boyunca haftada iki ozon Etkilenmeler (3 saat süren her maruz kalma) vermek; aynı zamanda ve aynı süre için hava kontrol fareler ortaya çıkarmak.</li>
</ol> 3. Mikro bilgisayarlı tomografi <ol><li>pelltobarbitalum natricum mayi enjeksiyonu ile fareler 7 haftanın sonunda, anestezi (% 1, 0.6 - 0.8 ml/100 g) göre fare değil görmek için bireysel durumlarda doz ayarlama bir ayak çimdik. için monitör yanıt ve fare sürekli nefes frekansta tutun; ve gönüllü yok hareketleri var işlemler sırasında olduğundan emin olun.</li>
	<li>Bir mikro Bilgisayarlı Tomografi (µCT) odasında imzalat fareler yer.</li>
	<li>Kalibre standart protokol ve üreticinin kullanma µCT &#39; s yönergeleri. X-ışını tüpü 50 ayarla kV ve 450 µA mevcut. 
	Not: Her ikisi de x-ışını ve Dedektör fareler döndürmek.</li>
	<li>Bir dilim için 300 MS bir çekim hızı ve bir dilim kalınlığı 0,093 mm etkili piksel boyutunu 515 projeksiyonlar 0.092 mm, kazanılması by µCT çözümlemesi yapma.</li>
	<li>Akciğer alınan görüntüleri bir yazılım kullanarak yeniden. En az ve en çok gri tonlamalı sırasıyla-750 ve-550 Hounsfield daxilində ayarlayarak gri tonlamalı görüntü parlaklığını ayarlayın. 
	Not: Yazılım otomatik olarak akciğer parankimi ve düşük-zayıflama alan (LAA) 34 , 35 hacimleri hesaplar.</li>
	<li>Toplam akciğer hacmi LAA hacimce bölerek LAA (LAA %) yüzdesini hesaplamak.</li></ol>
 4. koşu bandı Test <ol><li>fareler adaptasyon bir test üzerinde bir koşma koşu bandı makine. Not 10 m/dk 10 dk hızında vermek: yordamı yürütülen elektrik her zaman kapalı olduğunda.</li> <li>yönetici bir yorgunluk testi fareler için.
	<ol><li>Fare hızı 10 m/dak 5 dakika süreyle ısınmak</li>
		<li>Artmak belgili tanımlık hız 15 m/dk 10 dakika süreyle</li>
		<li>Egzersiz yoğunluğu artırmak: 5 m/dak, 20 m/dak başlangıç tarafından hızı artan fareler kadar her 30 dk. 36 çalıştırmak devam edemiyor.</li>
	</ol></li> <li>Çalışan mesafe ve çalışma süresi yorgunluk mesafe ve yorgunluk zaman, anılan sıraya göre toplam kayıt.</li></ol>
 5. pulmoner fonksiyon ölçümleri <ol><li>pelltobarbitalum natricum mayi enjeksiyonu ile fareler anestezi (% 1, 0.6 - 0.8 ml/100 g) göre fare yaptığını görmek için bireysel durumlarda doz ayarlama bir ayak çimdik değil yanıt vermek ve fareler spontan solunum. monitör korumuştur ve fare sürekli nefes frekansta tutun kadar bekleyin; ve gönüllü yok hareketleri var işlemler sırasında olduğundan emin olun.</li>
	<li>Dikkatle fareler tracheostomize ve bilgisayar kontrollü bir vantilatöre bağlı bir vücut Pletismograf yerleştirebilirsiniz. 
	Not: Havalandırma proksimale endotrakeal tüp bulunan bir vana ile kontrol edilir. Belgili tanımlık tertibat yarı statik basınç birimi manevra ve manevra hızlı akış hacminin de dahil olmak üzere farklı yarı otomatik manevralar sağlar.</li>
	<li>Her nefes döngüsü tam bitiminde elde edilir ve ortalama 150 nefes/dk düzenli nefes desen kadar basınç kontrollü havalandırma yoluyla imzalat fare sıklığını nefes empoze.</li>
	<li>Yarı statik basınç-hacim manevra aygıtla Pletismograf içinde oluşturulan negatif basınç kullanarak gerçekleştirmek.</li>
	<li>Hızlı Akış birim manevra FVC ve FEV kaydetmek için yarı statik basınç-hacim döngüler içinde gerçekleştirin. + 30 cm H 2 akciğer şişirmek O ve hemen sonrasında kalan birim FEV ilk 25, 50 ve soluk verme (FEV 25 75 ms-30 cm H 2 de O. kayıt olana sona erme zorlamak için son derece olumsuz bir basınç bağlanmak FEV 50 ve FEV 75, sırasıyla). Suboptimal manevralar reddetmek. Her tek fare ile her test için düzenleyeceği en az tüm sayısal parametreler için güvenilir bir ortalaması elde etmek için üç kabul edilebilir manevralar.</li>
</ol> 6. BALF koleksiyonu <ol><li>ardından terminal anestezi ile pelltobarbitalum natricum ((%1, 1,8-2.4 ml/100 g) fareyi bir ayak çimdik cevap değil ve nefes kaybetmek görmek için bireysel durumlarda göre doz ayarlamak), lavaj PBS 2 mL 1 mm çaplı endotrakeal tüp ve sonra al BALF 10 üzerinden ile fareler.</li>
	<li>Erişim tarihi lavaj aliquots havuz ve onlara 4 ° C ve 250 x g 10 dakika süreyle santrifüj kapasitesi</li>
	<li>İçin acele kullanma süpernatant toplamanız ve kalan-80 ° C ya da sıvı azot,.</li>
	<li>Bir hemasitometre kullanarak hücreleri toplam sayısını saymak.</li>
	<li>PBS ve sonra spin (1400 x g, 6 dk.) 250 µL slayta bir slayt spinner santrifüj kullanarak resuspended hücrelerinin hücre Pelet resuspend.</li>
	<li>İçin geçerli Wright boyama hücreleri slaytlara üreticiye göre &#39; s protokolü.</li>
	<li>Fare başına 200 hücreleri saymak; 400 X büyütme altında; Standart Morfoloji göre hücreleri makrofajlar veya nötrofil, tanımlamak ve sayıları saymak.</li>
</ol> 7. Kalp kan örnekleme <ol><li>kardiyak ponksiyon yoluyla kan toplamak, 1.5 mL tüpler, içine yük ve buz 30 dakika süreyle devam et</li>
	<li>2000 g x ve 4 5 min için kan örnekleri santrifüj kapasitesi ° C.</li>
	<li>Süpernatant (serum) için yeni bir tüp aktarın ve-80 ° C ya da sıvı azot depolayın.</li>
	<li>IL-1β için serum hazırlamak IL-10 ve ilgili ELISA Kitleri kullanarak TNF-α algılama testleri.</li>
</ol> 8. Akciğer xarakteristikaları analizi <ol><li>teşrih akciğerler ve fareler üzerinden tracheas.
	<ol><li>Cerrahi bir tahta üzerine euthanized her fare hemen kurbandan sonra konumlandırın.</li>
		<li>Uzak platysma incelemek ve görselleştirmek ve trakeal halkalar erişmek için ön trakeal kaslar.</li>
		<li>Açık yukarıya göğüs boşluğuna. Akciğerler ve nefes borusu incelemek, ama kalp akciğerlerden ayırmayın.</li>
	</ol>
	</li> <li>%4 paraformaldehyde PE90 polietilen boru aracılığıyla içeren bir şırınga endotrakeal kateter bağlanmak. 
	Dikkat: Paraformaldehyde zehirlidir. Eldiven ve koruyucu gözlük ve duman başlık içinde çözüm kullanın.</li>
	<li>Tamamen %4 paraformaldehyde (10 damla, ~ 200 µL) kullanarak akciğer endotrakeal kateter şişirmek. Kalp enflasyon tamamlandıktan sonra kaldırın.</li>
	<li>Bakım için en az 4 h %4 paraformaldehyde 10 mL içeren 15 mL tüp içinde akciğer</li>
	<li>Embed parafin akciğerde. 5-µm bölümleri parafin blok bir döner microtome ile kesit elde. Kesit sırasında maruz maksimum yüzey alanı bronş ağacının alanı içinde akciğer dokusunun.</li>
	<li>Xarakteristikaları için Hematoksilen ve Eozin çözümlemesi (H &#38; E) bölümleri boyama.</li>
	<li>Bölümleri alan parlak dik mikroskopla (objektif lens, 20 X; pozlama süresi, 1.667 ms) görüntü.</li>
	<li>İki müfettişler tedavi protokolü kör bağımsız olarak saymak histolojik kesitler var. Ortalama doğrusal kesme noktası (L m) arası alveoler septal duvar mesafe ölçmek için bir parametre olarak kullanmak. Aşağıdaki adımları uygulayarak L m belirlemek: <ol><li>bölümleri görüntüleri Photoshop açın ve beş 550 µm uzun hatları ile görüntü üzerinde reticule kılavuz çizin.</li>
		<li>Alveoller arasında kılavuz çizgisi sayısını.</li>
		<li>L m kılavuz çizgisi uzunluğunu alveoller sayısına bölünmesi ile hesaplayın. Miktar için fare başına beş bölüm görüntü. Her bölümün (alan başına bir görüntü) on görüntüleri ve rastgele değerlendirmek. Bir alan önde ya da başka bir yöne hareket ettirerek airways ve gemiler alan seçimi sırasında kaçının. 
		Not: Veri ortalama ± S.E.M. sunulmaktadır Un eşleştirilmiş bir t-test hava maruz fareler ve fareler ozon maruz arasında karşılaştırma için gerçekleştirilmiştir. Her grubun üç hayvan önemli farkı hesaplamak için kullanılmıştır. P-değeri &#60; 0,05 olarak önemli kabul.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

Z.W.S. ve chilling geçerli çalışanları ve hücresel Biyomedikal grup hisse senedi opsiyonu sahipleri vardır (NASDAQ: CBMG). Diğer yazarlar onlar rakip hiçbir ilgi alanlarına sahip bildirin.

Bu çalışmada, biz yeni bir KOAH model oluşturmak için güvenilir bir yöntem mevcut. Diğer modeller için (Yani, LPS ya da KKE modelleri) karşılaştırıldığında, bu OE model KOAH hastaları patolojik süreci beyannamedir. Sigara dumanı KOAH insan hasta40neden olan ana tehlikeli madde olduğundan, CS model en popüler KOAH model41,42kalır. Ancak, 3 - 12 ay R CS model gerektirir &#38; D dönem için yeni ilaçlar. CS modeline göre geçerli OE mo...

KOAH, Amfizem ve kronik bronşit gibi ölüm üçüncü önde gelen nedenidir 20201,2dünyada olabilir tahmin ediyor. KOAH potansiyel insidansı 40 yıldır eski bir popülasyondaki erkeklerde % 12,7 ve dişilerde3önümüzdeki 40 yıl içinde % 8.3 olduğu tahmin edilmektedir. Hiçbir ilaç KOAH hastaları4ilerleyici bozulma tersine çevirmek şu anda mevcuttur. KOAH güvenilir hayvan modelleri sadece hastalık patolojik süreci taklit talep ediyorum ama aynı zamanda kısa nesil süresi gerektirir. LPS veya bir PPE kaynaklı modeli de dahil olmak üzere geçerli KOAH modelleri amfizem benzeri semptomlar5,6tetikleyebilir. Tek bir yönetim veya işaretli neutrophilia bronchoalveolar lavaj sıvı (BALF), artar pro-inflamatuar aracılar (Örneğin, TNF-α ve IL-1β) BALF veya serum, fare ya da sıçan sonuçlarında LPS veya KKE bir haftalık meydan okuma akciğer üretir parenkimal imha genişlemiş hava boşluk ve sınırları hava akımı5,6,7,8,9,10. Ancak, LPS veya KKE insan KOAH nedenleri değildir ve böylece patolojik süreç11taklit değil. CS kaynaklı manken üretilen bir kalıcı hava akımı sınırlama, akciğer parenkima yıkım ve fonksiyonel egzersiz kapasitesi düşük. Ancak, geleneksel bir CS Protokolü KOAH model12,13,14,15oluşturmak için en az 3 ay gerekir. Böylece, iki gereksinimlerini karşılayan yeni, daha etkili bir hayvan modeli oluşturmak önemlidir.
Son zamanlarda, ek olarak sigara, hava kirliliği ve mesleki maruz kalma KOAH16,17,18daha yaygın nedenleri olmuştur. Ozon, önemli kirletici biri olarak (değil önemli bileşeni hava kirliliği rağmen), doğrudan solunum yolu ile tepki ve çocuklar ve genç yetişkinler19,20,21 akciğer dokusuna zarar ,22,23,24,25. Ozon yanı sıra LPS, KKE ve CS, de dahil olmak üzere diğer uyarıcılar bir ciddi pulmoner oksidatif stres ve DNA hasarı biyokimyasal yolları katılmaktadırlar ve inisiyasyon ve promosyon KOAH26,27bağlantılıdır. Bazı KOAH hastaları belirtileri gösteren ozon Akciğer işlev18,28,29bozabilir ozon için maruz sonra bozulabilir başka bir faktördür. Bu nedenle, biz tekrar tekrar 7 hafta boyunca fareler için ozon yüksek konsantrasyonda açarak yeni bir KOAH model oluşturulan; Bu hava akımı kusurları ve akciğer parenkima hasarı önceki araştırmalar30,31,32benzer sonuçlandı. Biz bu çalışmada kadın farelere OE Protokolü genişletilmiş ve başarılı bir şekilde bizim önceki çalışmalar30,31,32erkek farelerde gözlenen amfizem çoğaltılamaz. KOAH ölüm oranı erkeklerde azaldı ama birçok ülkede33kadınlarda artmıştır çünkü KOAH manken dişilerde mekanizmaları çalışmaya ve kadın KOAH hastaları için tedavi yöntemleri geliştirmek için gereklidir. Tüm cins OE modeline uygulanabilirliği KOAH manken olarak kullanmak için daha fazla destek ödünç.

<table><tbody><tr><td>Bu çalışmada BALB/c fareleri</td><td>Slac Laboratory Animal, Shanghai, Çin</td><td>N/A</td><td>7-9 haftalık dişi BALB/c fareleri kullanıldı.</td></tr><tr><td>Bireysel havalandırmalı kafesler</td><td>Suhang, Şangay, Çin</td><td>Model Numarası: MU64S7</td><td>Kafesler, hayvan tesisinde fareleri barındırmak için kullanıldı.</td></tr><tr><td>Sızdırmazlık perspex-box</td><td>Suhang, Şangay, Çin</td><td>N/A</td><td>Kutu, ozon jeneratörünü içermek için kullanıldı. Fareler kutu içinde ozona maruz bırakıldı.</td></tr><tr><td>Elektrik jeneratörü</td><td>Zımpara Ozonizer, Uetze-Eltze, Almanya</td><td>Model 500&nbsp;</td><td>Cihaz ozon üretmek için kullanıldı.</td></tr><tr><td>Ozon probu</td><td>ATi Technologies, Ashton-U-Lyne, Greater Manchester, UK</td><td>Ozone 300</td><td>cihazı, ozon oluşumunu izlemek ve kontrol etmek için kullanıldı.</td></tr><tr><td>Pelltobarbitalum natricum</td><td>Sigma, St. Louis, MO, ABD</td><td>P3761 Fareler</td>, <td>pelltobarbitalum natricum'un intraperitoneal enjeksiyonu ile uyuşturuldu.</td></tr><tr><td>Mikro Bilgisayarlı Tomografi</td><td>GE Healthcare, Londra, ON, Kanada</td><td>RS0800639-0075</td><td>Bu cihaz, akciğerin görüntülerini elde etmek için kullanıldı.</td></tr><tr><td>Micro-view 2.01 ABA yazılımı</td><td>GE Healthcare, Londra, ON, Kanada</td><td>Micro-view 2.01&nbsp;</td><td>Bu cihaz, akciğeri yeniden yapılandırmak ve akciğerin hacmini, LAA'sını analiz etmek için kullanıldı.</td></tr><tr><td>Koşu bandı makinesi&nbsp;</td><td>Duanshi, Hangzhou, Zhejiang, Çin</td><td>DSPT-208</td><td>Bu makine yorulma testi için usd idi.</td></tr><tr><td>Vücut pletismografı</td><td>eSpira & trade; Zorunlu Manevra Sistemi, EMMS, Edinburgh, Birleşik Krallık</td><td>Zorunlu Manevra Sistemi</td><td>Bu cihaz, spirometri solunum fonksiyonunu test etmek için kullanılmıştır.</td></tr><tr><td>Vantilatör</td><td>eSpira ve ticaret; Zorunlu Manevra Sistemi, EMMS, Edinburgh, Birleşik Krallık</td><td>Zorunlu Manevra Sistemi</td><td>Bu cihaz, spirometri solunum fonksiyonunu test etmek için kullanılmıştır.</td></tr><tr><td>Slayt döndürücü santrifüj</td><td>Denville Scientific, Holliston, MA, ABD</td><td>C1183 & nbsp;</td><td>BALF hücrelerini slaytlar üzerine döndürmek için kullanıldı.</td></tr><tr><td>Wright Staining</td><td>Hanhong, Şangay, Çin</td><td>RE04000054</td><td>&nbsp; Askıya alınan BALF'taki makrofajları, nötrofilleri boyamak için kullanıldı.</td></tr><tr><td>Hemositometre</td><td>Hausser Scientific, Horsham, PA, ABD</td><td>4000</td><td>hücre saymak için kullanıldı.</td></tr><tr><td>IL-1 ve beta;</td><td>Abcam, Cambridge, MA, ABD</td><td>ab100704</td><td>Serumdaki ilgili faktörleri test etmek için kullanıldılar.</td></tr><tr><td>IL-10</td><td>Abcam, Cambridge, MA, ABD</td><td>ab46103</td><td>Serumdaki ilgili faktörleri test etmek için kullanıldılar.</td></tr><tr><td>TNF-&alfa;</td><td>Abcam, Cambridge, MA, ABD</td><td>ab100747</td><td>Serumdaki ilgili faktörleri test etmek için kullanıldılar.</td></tr><tr><td>Paraformaldehit&nbsp;</td><td>Sigma, St. Louis, MO, ABD</td><td>P6148</td><td>Akciğer% 4 paraformaldehit ile şişirildi.</td></tr><tr><td>Parafin</td><td>Hualing, Şangay, Çin</td><td>56#</td><td>Akciğeri gömmek için kullanıldı.</td></tr><tr><td>Döner Mikrotom</td><td>Leica, Wetzlar,&nbsp; Hessen, Almanya</td><td>RM2255</td><td>Akciğeri kesitlemek için kullanıldı.</td></tr><tr><td>Hgaematoksilen ve Eozin (H & E) boyama çözeltisi</td><td>Solarbio, Pekin, Çin</td><td>G1120</td><td>H & Morfometrik analiz için E boyama yapıldı.</td></tr><tr><td>Dik parlak alan mikroskobu</td><td>Olympus, Center Valley, PA, ABD</td><td>CX41</td><td>H& E boyama slaytları.</td></tr><tr><td>Adobe Photoshop 12</td><td>Adobe, San Jose, CA, ABD</td><td>Adobe Photoshop 12</td><td>H üzerindeki alveollerin sayısını saymak için kullanıldı. E lekeli görüntüler.</td></tr><tr><td>GraphPad prizma 5</td><td>Graphpad Software Inc., San Diego, CA</td><td>GraphPad prizma 5</td><td>veri analizi ve rakamların üretimi için kullanılmıştır.</td></tr></tbody></table>

kronik obstrüktif akciğer hastalığı manken tekrarlanan ozon maruz farelerde nesil

Generation of a Chronic Obstructive Pulmonary Disease Model in Mice by Repeated Ozone Exposure

Kronik obstrüktif akciğer hastalığı (KOAH) tarafından kalıcı hava akımı sınırlama ve akciğer parenkima imha karakterizedir. Nüfus yaşlanma içinde bir çok yüksek insidansı vardır. Geçerli geleneksel tedaviler KOAH odak çoğunlukla açık belirti-modifiye ilaçlar için; Böylece, yeni tedavilerin geliştirilmesi acilen ihtiyacı vardı. KOAH nitelikli hayvan modelleri temel mekanizmaları karakterize etmek için yardımcı olabilir ve yeni ilaç tarama için kullanılabilir. Lipopolysaccharide (LPS) gibi geçerli KOAH modelleri veya domuz pankreas elastase (PPE)-indüklenen amfizem modeli, akciğerler ve airways KOAH benzeri lezyonlar oluşturur ancak aksi takdirde insan KOAH patogenezinde benzer değil. Bir sigara dumanı (CS)-indüklenen model kalır en popüler çünkü sadece solunum sistemi lezyonlarının KOAH gibi taklit eder, ama bu da insanlarda KOAH neden ana tehlikeli madde birini dayanır. Ancak, CS kaynaklı modeli zaman alıcı ve emek yoğun yönlerini önemli ölçüde kendi uygulamasında yeni uyuşturucu tarama sınırı. Bu çalışmada, biz başarıyla yeni KOAH manken fareler için ozon yüksek düzeyde maruz tarafından oluşturulan. Bu modeli aşağıda gösterilmiştir: 1) zorunlu Ekspiratuar cilt 25, 50 ve 75/zorla vital kapasite azalmıştır (FEV25/FVC, FEV50/FVC ve FEV75/FVC), akciğer fonksiyonu; bozulma gösteren 2) büyütülmüş akciğer alveoller akciğer parenkima imha ile; 3) yorgunluk zaman ve mesafe azalır; ve 4) artış iltihabı. Birlikte ele alındığında, bu veriler ozon pozlama (OE) modeli ozon dozun KOAH etyolojik faktörlerden biri olduğu için insanlara benzer bir güvenilir hayvan modeli olduğunu ispat. Ayrıca, sadece 6-8 hafta, 3-12 ay OE modeli KOAH araştırma için iyi bir seçim olabilir gösteren sigara dumanı modeli ikna etmek için gerektirir, ancak bir OE modeli oluşturmak için önceki çalışmalarımız, temel aldı.

3D µCT görüntüleri her grubun örnekleri şekil 1biriçinde görüntülenir. Önemli ölçüde daha büyük bir toplam akciğer hacim ozon maruz fareler vardı (şekil 1bir ve b) ve LAA % (şekil 1c) hava maruz kontrol fareler daha. Akciğer hacmi ve LAA % ozon pozlama31,32altı hafta sonra yükseltilmiş kaldı....

Bu çalışmada art arda fareler için ozon yüksek konsantrasyonda açarak yeni bir kronik obstrüktif akciğer hastalığı (KOAH) hayvan modeli başarılı nesil açıklar.

Kronik obstrüktif akciğer hastalığı manken tekrarlanan ozon maruz farelerde nesil

Chronic obstructive pulmonary disease (COPD) is characterized by persistent airflow limitation and lung parenchymal destruction. It has a very high ...

Bu deneyin genel amacı, farelerde ozon maruziyeti (OE) yoluyla kronik obstrüktif akciğer hastalığı veya KOAH indüklemektir. Bu yeni OE modeli, KOAH'ın altında yatan mekanizmanın karakterizasyonunda kullanılabilir ve yeni ilaçların taranması için uygulanabilir. Bu OE modelinin temel avantajı, KOAH hastalarının patolojik süreçlerini yeniden canlandırmasıdır.Sadece altı ila sekiz hafta içinde üretilebilir. Prosedürü benimle birlikte grubumuzdaki bir araştırma görevlisi olan Weijaian Sang uygulamalı olarak gösterecektir. Ozon üretmek için, kutunun içine ve dışına bağlı bir hava tahliye borusu aracılığıyla havayı sızdırmaz Perspex kutudan dışarı üflemek üzere bir elektrik jeneratörü ve küçük bir hava üfleyici kullanın; kutudaki ozon konsantrasyonunu izlemek için bir ozon probu kullanın.Ozon konsantrasyonu 2,5 ppm seviyesine ulaştığında, fareleri 3 saat boyunca kutuya yerleştirin. 7. haftanın sonunda, ozonla işlem görmüş hayvanları standart protokollere uygun olarak mikro-bilgisayarlı tomografi ile görüntüleyin. Ozonun neden olduğu değişimleri ve akciğer yorgunluğu gibi fonksiyonel kapasiteleri test etmek için, öncelikle fareleri bir koşu bandında dakikada 10 metre hızla ısıtın.5 dakika sonra, hızı 10 dakika boyunca dakikada 15 metreye yükseltin. Fareler artık koşamaz hale gelene kadar her 30 dakikada bir hızı dakikada beş metre artırmaya devam edin. Her hayvan için toplam koşu mesafesi ve koşu süresi, sırasıyla yorgunluk mesafesi ve yorgunluk süresi olarak kaydedilir.Ozon maruziyeti uygulanmış hayvanların pulmoner fonksiyonlarını ölçmek için, anestezi uygulanmış bir fareyi bilgisayar kontrollü bir ventilatöre bağlı vücut pletismografına yerleştirin. Düzenli bir solunum paterni ve her solunum döngüsünde tam ekspirasyon elde edilene kadar, anestezi altındaki hayvana basınç kontrollü ventilasyon kullanarak dakikada ortalama 150 solukluk bir solunum frekansı uygulayın. Ardından, suboptimal manevraları reddederek ekshalasyonun ilk 25, 50 ve 75 milisaniyesindeki zorlu ekspiratuar hacmi kaydedin.Terminal anestezi sonrası, hayvanları her yıkamada 1 mL PBS kullanarak iki kez yıkamak için bir milimetre çapında endotrakeal tüp kullanın. Santrifüj işlemi için her hayvandan alınan yıkama örneklerini birleştirin ve süpernatantları sıvı azot üzerinde toplayın. Sayım için peletleri taze PPS içinde yeniden süspanse edin ve fare başına iki tutucuyu bir mikroskop lamı, filtre kartı ve huni ile donatın.Yeniden süspande edilen hücrelerden her bir huniye yaklaşık 100 ila 125 µL ekleyin. Tutucuları bir sitosantrifüje yerleştirin ve hücreleri lamların üzerine çöktürün. Ardından, üretici talimatlarına uygun olarak hücrelere uygun boyama çözeltisini uygulayın ve 400 kat büyütme altında fare başına 200 hücre sayın.Kardiyak kan örneği almak için, ozona maruz bırakılan hayvanlardan kardiyak ponksiyon yoluyla yaklaşık 500 microliters kan toplayın. Kanı buz üzerinde 1.5 milliliter tüplere ekleyin. Buz üzerinde 30 dakika beklettikten sonra kan örneklerini santrifüjleyin ve serum süpernatantlarını sıvı azot üzerinde saklamak üzere yeni tüplere aktarın.Örnekler, daha sonra standart protokollere göre ELISA ile serum sitokin ekspresyon seviyelerinin değerlendirilmesi için çözülebilir. Akciğer morfometrik analizi için, kardiyak örnekleme sonrası ilk fareyi sırtüstü pozisyona getirin. Ardından, trakeal halkalara erişmek için toraks boşluğunu açın ve platizma ile anterior trakeal kasları diseke ederek uzaklaştırın.Kalbi akciğerlerden ayırmadan akciğerleri ve trakeyi hasat edin. Ardından, endotrakeal kateteri %4'lük formaldehit içeren bir şırıngaya bağlamak için bir PE90 polietilen tüp kullanın ve akciğerleri yaklaşık 200 µL paraformaldehit ile tamamen şişirin. Daha sonra akciğerleri, 10 mL taze %4'lük formaldehit içeren 15 mL'lik bir tüpe en az dört saat süreyle yerleştirin.Mikrobilgisayarlı tomografi ile değerlendirildiğinde, ozona maruz kalan fareler, ortam havasına maruz kalan kontrol hayvanlarına kıyasla anlamlı derecede daha büyük bir toplam akciğer hacmi ve düşük atenüasyon alanı yüzdesi sergilemektedir. Amfizem fenotipi, aynı zamanda genişlemiş akciğer alveolleri ve artmış ortalama lineer kesişimlerle de kanıtlanmıştır. Pletismograf ile yapılan akciğer fonksiyon değerlendirmesi, ozona maruz kalan farelerde azalan tüm parametrelerin, kronik obstrüktif akciğer hastalığı olan hastalarda gözlemlenen tipik akciğer fonksiyonel kusurlarıyla tutarlı olduğunu göstermektedir.Ayrıca, ozon maruziyeti egzersiz tolerans testlerinde yorgunluk süresini ve yorgunluk mesafesini önemli ölçüde azaltır. Ozonla tedavi edilen hayvanlar, makrofajlar ve nötrofiller dahil olmak üzere inflamatuar hücrelerde belirgin bir artışın yanı sıra IL-10'da önemli bir azalma ve IL-1 beta ile TNF alpha'da bir artış sergileyerek, ozon maruziyeti modelinin insan kronik obstrüktif akciğer hastalığı benzeri semptomları taklit ettiğini göstermektedir. Bu prosedürün C57 BR6 fareleri gibi diğer fare suşları üzerinde uygulanması, bu OE modelini oluşturmak için kullanılabilir. Geliştirilmesinin ardından bu teknik, akciğer hastalıkları alanındaki araştırmacıların KOAH'ın altında yatan mekanizmaları keşfetmelerinin önünü açmaktadır.Paraformaldehit ile çalışmanın tehlikeli olabileceğini ve bu reaktifle çalışırken eldiven ve koruyucu gözlük takmak, çözeltiyi çeker ocak içerisinde kullanmak gibi önlemlerin her zaman alınması gerektiğini unutmayın.

generation-chronic-obstructive-pulmonary-disease-model-mice-repeated

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

SCIREQ Inc, Montreal, Qc; İşbu Protokol solunum sistemi mekaniği ölçümleri yanı sıra zorla salınım tekniği kullanarak farelerde inhale metakoline hava yolu duyarlılığı değerlendirilmesi (flexiVent yürütmek için gerekli prosedürleri ayrıntılı bir adım adım açıklamasını sağlar , Kanada).

Zorla Salınım Tekniği kullanarak Fare Solunum Sistemi Mekanik Değerlendirilmesi

Bu fare modelinde kalıcı, uzun vadeli kronik Pseudomonas aeruginosa enfeksiyonu kurmak için agar-boncuklar bir yöntem tarif eder.

Uzun Vadeli Kronik<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</emFarelerde&gt; Havayolu Enfeksiyon

Bu protokolün amacı, KOAH'ın bir fare modelinde kronik akciğer patolojilerini ölçmek için otomatik yöntemler sağlamaktır. Protokol, fareleri sigara dumanına (CS) maruz bırakmayı, pulmoner fonksiyonu ölçmeyi, akciğerleri şişirmeyi ve farelerde amfizem ve küçük hava yolu yeniden şekillenmesini ölçmek için morfometri yöntemlerinin kullanılmasını içerir.

Sigara Duman maruz kalan Fare Akciğer Amfizem ve Küçük Havayolu Yaptırma otomatik ölçüm

Burada sunulan amfizem bir fare modeli akciğer örneklerinin histolojik değerlendirilmesi için istikrarlı bir durum oluşturur akciğer fiksasyonu için yararlı bir protokoldür. Bu modelin ana avantajı akciğer çökmesi veya deflasyon olmadan aynı sabit basınç ile birçok akciğer düzeltebilirsiniz.

Farelerde AmfizemIn Değerlendirilmesi İçin Sabit Basınç Altında Akciğer Fiksasyonu

Burada biz akciğer ifade değerlendirmek için bir yöntem tarif tahmin edilmektedir miRNAs inflamatuar genler düzenleyen fare kullanarak ozon için maruz veya hava estrous döngüsünün farklı aşamalarında filtre.

Akciğer mikroRNA profil oluşturma arasında Estrous döngüsünde ozon maruz fareler

Bu el yazması, hava kirletici bir kriter olan ozon maruziyetinin alveoler makrofaj efferositozisinin in vivo'yu bozup bozmadığını belirleyen bir protokolü açıklamaktadır. Bu protokol yaygın olarak kullanılan reaktifler ve teknikler kullanır ve alveoler makrofaj eferositoz üzerindeki etkilerini belirlemek için pulmoner yaralanma birden fazla modeladapte edilebilir.

Ozon Maruziyetinden Sonra Alveoler Makrofaj Eferositozun Vivo Değerlendirilmesi

Kombine ozon ve bakteriyel endotoksin maruz fareler nötrofiller de dahil olmak üzere geniş yayılmış hücre ölümü gösterir. Sitoskeletal lamellipodia'nın bozulması, karmaşık V ATP sintaz alt β birliğinin hücresel ekspresyonunun artması ve bronko-alveoler lavajda anjiyostatin, akciğer immün yanıtının baskılanması ve nötrofil alımının gecikmesi gibi hücresel adaptasyonları gözlemledik.

Kombine Ozon ve LPS kaynaklı Murine Akut Akciğer Hasarı Sırasında Akciğer Hücresel Adaptasyonlarının Görselleştirilmesi

Pulmoner fibrozisin patogenezini aydınlatmak ve yeni ilaç hedefleri bulmak için bleomisin kullanılarak çeşitli hayvan pulmoner fibrozis modelleri oluşturulmuştur. Bununla birlikte, akciğer dokusunu hedef alan çoğu pulmoner fibroz modelinde eşit olmayan ilaç uygulaması vardır. Burada, nazal bleomisin nebulizasyonunun neden olduğu tek tip pulmoner fibrozis modelini öneriyoruz.

Nazal Bleomisin Nebulizasyonunun Neden Olduğu Pulmoner Fibrozisin Bir Fare Modeli

Bu protokol, bir burun damlası yoluyla silika süspansiyonlarına tekrar tekrar maruz kalma yoluyla bir fare silikoz modeli oluşturmak için bir yöntemi açıklar. Bu model, yüksek tekrarlanabilirlik ve ekonomi ile insan silikozunun patolojik sürecini verimli, rahat ve esnek bir şekilde taklit edebilir.

Kristal silika tozunun tekrar tekrar solunmasıyla oluşturulan bir silikoz fare modeli

Bu protokol, tekrarlanan orofaringeal bleomisin uygulaması yoluyla farelerde pulmoner fibrozu indüklemek için bir yöntemi tanımlar ve idiyopatik pulmoner fibrozisunkine çok benzeyen patolojik özellikler verir.

İdiyopatik Pulmoner Fibrozisin Rafine Murin Modeli

Burada, trakea yoluyla taşınan aerosol bleomisin kullanarak farelerde pulmoner fibrozisin modeli için bir protokol sunuyoruz. Bu optimize edilmiş yöntem, cerrahi kesi olmadan tekiz, nicel ve hassas bir doğum sağlar ve bleomisin kaynaklı fibrozun tekrarlanabilirliğini ve güvenilirliğini artırır.

Tekrarlanabilir ve minimal invaziv fare modelleri için Rafine Aerosol Tabanlı intratrakeal bleomicin teslimat yöntemi

Öğrenin farelerde tekrarlanan ozon maruziyetiyle KOAH hayvan modeli oluşturmayı. Bu yöntem altı ila sekiz haftada patolojik süreçleri taklit eden güvenilir bir model sağlar ve yeni ilaç taramaları için kullanılabilir.

Kronik obstrüktif akciğer hastalığı manken tekrarlanan ozon maruz farelerde nesil

Daha fazla video keşfet