Name: Aedes aegypti sivrisinek enfekte Wolbachia ile bakımını yapma (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-08-14T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 23 s
Description: Öğrenin Wolbachia ile enfekte Aedes aegypti sivrisineklerinin bakımını yapmayı. Bu protokol, sıtma ve deng gibi virüslerin bulaşmasını önlemek için vektör biyolojisi araştırmalarında kullanılabilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Heng Lin Yeap, Chris Paton, Petrina Johnson ve Clare Doig bizim koloni bakım yöntemleri gelişmesine katkılarından dolayı ve el yazması geliştirmeye yardımcı olan öneriler için üç adsız yorumcular anıyoruz. Bizim araştırma programı hibe ve dostluk tarafından AAH için Ulusal Sağlık desteklenir ve tıbbi araştırma Konseyi ve bir çeviri Wellcome Trust verin. PAR bir Avustralya hükümeti araştırma eğitim programı bursu bir alıcı var.

Sivrisinek insan denekler üzerinde kan besleme University of Melbourne insan Etik Komitesi tarafından onaylanmış (onay #: 0723847). Tüm gönüllüler sağlanan yazılı izni haberdar.
1. larva yetiştirme
Not: Sivrisinekler 26 ± 0,5 ° C ile 50-%70 bağıl nem, 12:12 h (ışık: karanlık) photoperiod bu koloni bakım protokol ile düzenlenen. Bu koşullar Ae. aegypti hayatta kalma ve gelişme44,45,46için ortalama iklim koşulları Cairns, Avustralya ve en iyi termal Aralık içinde benzer. Yüksek sıcaklık Wolbachia enfeksiyonlar sivrisinek kolonilerden kaybına neden ve kaçınılması47olmalıdır. Biz akraba evliliği en aza indirmek için başına en az 500 kişi korumak; daha küçük bir boyuta kolonileri korumak fitness [Ross vd yayınlanmamış] sonuçlara yol açabilir. Bu koşullar ve varsayarak yeterli beslenme altında 28 gün (bkz. Tablo 1) ortalama üretimi zamanı.
<ol><li>Balık yemi ~ 300 mg üzerinde substrat kasetlerine (şekil 1A) 3 L su (ters osmoz su veya yaşlı musluk suyu, musluk suyu kanalları 24 kullanılmadan önce s için bırakarak oluşturulan), içeren yumurta daldırın (ezilmiş bir tablet, Tablo malzemelerigörmek) ve bir damızlık48ikna etmek için aktif kuru maya kaç taneler.</li>
	<li>Tarama sonra bir gün bir cam pipet 4 L su (şekil 1B) içeren tepsi için yaklaşık 500 larva transferi, bir tıkırtı sayaç saymak için kullanın. İki ezilmiş balık yiyecek tabletleri her tepsisi. Gerekirse, larva (şekil 1A) yetiştirme için farklı boyutlarda kaplar kullanın ama larva yoğunluğu 0,5 larva/mL aşırı kalabalık önlemek için aşağıda tutun.</li>
	<li>Tepsiler günlük larvalar yeterli yiyecek var emin olun; yaklaşık iki gıda tabletleri tepsi için iki günde ekleyin. Gıda ad libitum sağlar, ancak 0,5 mg/larva/gün, geliştirme zaman uyumlu olarak ve vücut boyutu sağlamak için bu dönemde tutarlı olarak, aksi takdirde deneylerin sonuçlarını şaşırmış sağlamak (temsilcisi sonuçları görmek).</li>
	<li>Larva overfeeding önlemek için özen, özellikle içinde daha küçük yetiştirme kapları ile daha az yüzey alanı ve hacmi su. Su bulanık veya önemli larva ölüm ise, eski yerine koymak o ile tatlı su; Ölüm larva en iyi şekilde beslenir eğer ihmal edilebilir olmalıdır.</li>
</ol>2. yetişkin ortaya çıkması
Not: Larvaları üzerinden beş gün sonra tarama iyi beslenen Eğer YavruIar başlayacak ve çoğunluk tarafından yedi gün sonra damızlık YavruIar. Yetişkin yaklaşık iki gün pupation sonra ortaya çıkan en iyi şekilde 26 ° C'de muhafaza Eğer başlayacak ( Temsilcisi sonuçlarıgörmek). Yeterli gıda23,39,49sağlandığında larva geliştirme Wolbachia enfeksiyonları genellikle etkilenmez.
<ol><li>Yedi gün sonra damızlık dökün tepsiyi tüm içeriğini iyi bir ağ (gözenek boyutu 0.4 mm). Daha sonra kullanmak üzere filtre uygulanmış larva su ovicups içinde tutmak ("Kan besleme ve Oviposition" bölümüne bakın). Mesh ters çevir ve pupa aktarmak için su 200 mL ile plastik bir kap içine daldırma. Herhangi bir larva kalırsa ek besin içerir.</li>
	<li>Yetişkin ortaya çıkması kafesleri (şekil 1 c) % 10 Sükroz çözüm (şekil 1F) iki bardak ve nemli pamuk kuruma (şekil 1E) önlemek için iki bardak sağlayarak hazırlayın.</li>
	<li>Pupa seks tarafından sıralanır gerekiyorsa, Pupa tepecikte kapsayıcılar kafesin içine yerleştirin ve kapağı biraz yetişkin kafesin içine çıkmaya izin vermek için açık bırakın. Alternatif olarak, bir ters huni boğulma en aza indirmek için konteyner üzerinde yerleştirin. Tüm yetişkin karşı yavaş geliştiriciler seçmelerini önleme belgili tanımlık kafes gelen konteyner kaldırmadan önce ortaya çıkan emin olun.</li>
</ol>3. pupa Outcrossing için seks
<ol><li>Pupa (outcrossing içinörneğin,) seks tarafından sıralanması gerekirse, Pupa larva tepsileri üzerinden pipette ve cinsiyetler (Şekil 2) plastik kaplara (şekil 1A) 200 mL su ile her 24 h her seks için istediğiniz sayıyı kadar ayrı ulaşıldı. Kapakları üzerinde Konteyner yeri ve kapalı bırakın.</li>
	<li>Yetişkin kaplara ortaya çıkacak; onların seks kafesleri (şekil 2C) serbest bırakmadan önce onaylayın. Herhangi bir yetişkin cinsel olgunluğa ulaşmadan yanlış çıkması 24 saat içinde bir aspiratör ile sexed kaldırın. Cinsiyetler onayladıktan sonra yetişkin her 24 h kafesler bırakın.</li>
	<li>
Wolbachiaelde etmek için-bir benzer genetik arka plan doğal bir popülasyon için virüslü koloniler outcross Wolbachiaekleyerek-enfekte dişilerini laboratuvar kolonilerden kafesleri için hastalık bulaşmamış tek erkek ovitraps içinde topladığı yumurta elde 500 kişi başına öngörülen yoğunluğu Bakımı alan39.
	<ol>
<li>Outcrossing en az % 87,5 genetik olarak alan nüfus39için benzer olan koloniler üretmek en az üç ardışık nesiller için yineleyin. Kritik: cinsiyetler bu aşamada doğru olduğundan emin olun (bkz. Adım 3.1).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Kadın Ae. aegypti genellikle50çiftleşme saat içinde daha fazla inseminasyon için ateşe dayanıklı. Koloniler outcrossing izin için tüm erkekler eşit fırsat sağlamak kadın ve erkek için iki gün ayrı kafeslerde olgun ve kadın erkek kafesin içine Aspire edin.</li>
</ol>4. kan besleme ve Oviposition
<ol><li>
En az üç gün önce kan olgun için yeterli zaman izin vermek için besleme son dişi sonra bekleyin. Kan çıkması uzun ömürlü22,24,49olumsuz yönde Wolbachia enfeksiyonları ile sivrisinek için özellikle aşırı ölüm önlemek için iki hafta içinde dişilerin yem. Şeker su bardağı besleme oranlarını artırmak için besleme önce gün kaldırın.
	<ol>
<li>Onların önkol dişi sivrisinekler beslemek izin vermek için kafesin içine eklemek için bir gönüllü sor. Çoğu kadın repletion 5 dk içinde beslemesi ama yavaş besleyiciler karşı seçim azaltmak için önkol kadar bütün kadınlar gözle görülür tıkanmış veya 15dk için kafese bırakın; lateks eldiven el ısırıkları korumak için isteğe bağlıdır ancak önerilir.</li>
		<li>İki gün sonra kan besleme, larva yetiştirme su içeren ve zımpara (şekil 1G) (veya filtre kağıdı (şekil 1 H)) bir şerit ile kaplı iki plastik bardak dişiler yumurtalarını bırakmak için kafes içine yerleştirin. Kısmen su nemli tutmak için zımpara şerit daldırın. Su oviposition Kupası dışında onların yumurta koyarlar dişiler önlemek için diğer kaynakları kaldırın. Not: bardak musluk suyu kullanılabilir ama larva yetiştirme su oviposition51,52 teşvik eder ve dişiler yumurtalarını daha zaman uyumlu olarak bırakmak.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. yumurta toplama ve Klima
<ol><li>Dişiler yumurta zımpara hemen su hattı üzerinde yatıyordu; toplamak ve hiçbir daha fazla yumurta koyulur kadar zımpara şeritler her gün değiştirin. Not Bu oviposition bir hafta kadar devam edebilir.</li>
	<li>Kısmen kuru zımpara şeritler tarafından yavaşça onları 30 kağıt havlu üzerinde kurutma s, yumurta çıkarmak değil için dikkat çekici. O zaman, şeritler sabıkası kuru kağıt havlu sarın ve yapışmalı plastik torba (şekil 1I) yerleştirin.</li>
	<li>Yumurta diseksiyon mikroskop (şekil 3) altında durumunu kontrol. Zımpara şeritler (şekil 3B) suda batık önce yumurtadan, ama eğer çok sert kurutulmuş yumurta (şekil 3 c) çökebilir çok ıslak vardır.</li>
	<li>Yumurta üç gün sonrası koleksiyonu ötesinde herhangi bir zamanda yumurtadan; Tüm gün boyunca su nesil bireylerin büyük, rasgele havuzundan örneklenir emin olmak için aynı kap içinde toplanan her koloni üzerinden tüm yumurtalar çatlar.</li>
	<li>Uzun süreli depolama için yumurta yüksek (> %80) nem, kapalı bir kapta yaklaşık 20 ° C'de tutmak Bu koşullar altında yumurta Wolbachia olmadan yüksek kapağı oranları53,54korurken birkaç ay depolanabilir.</li>
	<li>Bazı Wolbachia enfeksiyonlar, büyük ölçüde yaş49,55ile yumurta canlılığı azaltmak gibi Wolbachiagelen yumurtadan-enfekte satırları önlemek için ilgili aşırı ölüm koleksiyonunun bir hafta içinde suşları. Daha fazla yumurta gerekirse kan dişiler daha bir hafta sonra besleme.</li>
</ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Gün</td>
			<td colspan="3">Adım</td>
		</tr>
<tr>
<td>0</td>
			<td colspan="3">Kapak yumurta</td>
		</tr>
<tr>
<td>1</td>
			<td colspan="3">Count larva tepsileri içine</td>
		</tr>
<tr>
<td>7</td>
			<td colspan="3">Larva ve pupa koloni kafesleri için transfer</td>
		</tr>
<tr>
<td>17</td>
			<td colspan="3">Kan kadın yetişkin feed</td>
		</tr>
<tr>
<td>21</td>
			<td colspan="3">Yumurta toplama başlar</td>
		</tr>
<tr>
<td>25</td>
			<td colspan="3">Yumurta toplama bitirmek</td>
		</tr>
<tr>
<td>28</td>
			<td colspan="3">Kapak yumurta</td>
		</tr>
</tbody></table>Tablo 1: Genel bakış Ae. aegypti koloni bakım zamanlamayı 26 ° C. Kadın kan besleme ve yumurta hatching zamanlaması esnek olsa da, Bu aşamalar uzun süreler, özellikle ölüm en aza indirmek için Wolbachiaile enfekte sivrisinekler için kaçınılmalıdır. Bu programı aşağıdaki seçim şartıyla larva en iyi şekilde beslenir hızlı veya yavaş geliştirmek veya tüm yaşam evreleri olgun olan sivrisinek karşı en aza indirir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56124/56124fig1.jpg"> Resim 1: Ae. aegypti laboratuvarda yetiştirme için kullanılan ekipman. (A)plastik kaplar yumurta kuluçkalık veya 500, hacimleri ile larva yetiştirme için kullanılan 750 ve 5000 mL (soldan sağa). (B) tepsiler larvalar genelde 500 larvalar 4 L su içinde kontrollü bir yoğunluk, yetiştirme için kullanılan. (C) 19,7 L ve konut yetişkinler için kullanılan (D) 3 L kafesleri. 25 yetişkin yoğunluğu veya litre başına daha az yeterli alan sağlamak için sağlanmalıdır. (E) 35 mL bardak su kaynağı olarak yetişkin için sağlanan nemli Pamuk yün ile. (F) 35 mL bardak şeker kaynağı olarak bir kordon veya diş fitil üzerinden sağlanan Sükroz çözümü ile. (G-H) Bardak larva yetiştirme su ve bir oviposition substrat zımpara veya filtre kağıdı ile kaplı (G ve H, sırasıyla). Zımpara şeritler ya da filtre kağıdı depolanmasında kullanılan (ben) Zip kilit çanta. Siyah noktalar zımpara üzerinde Sivrisinek yumurta vardır. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56124/56124fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56124/56124fig2.jpg"> Resim 2: Lateral (A) ve dorsal (B) görüş yetişkin Ae. aegypti (C) kendi cinsel dimorfizm gösteren ve pupa. Erkek, kadın her panelinde sağ ve sol konumlandırılır. Ne zaman en iyi şekilde fed, erkek ve dişi pupa boyutuna göre ayrılır; Dişiler daha erkek(a)daha büyük ve düz iki tarafın (B) olduğundan erkek için karşılaştırıldığında nispeten soğanlı bir cephalothorax. Erkek yetişkin öncelikle onların tüysü anten ve uzun dokunacı tarafından kolayca ayırt edici kadın tüm yetiştirme koşullarında üzerinden. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56124/56124fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56124/56124fig3.jpg"> Şekil 3. Farklı koşullar altında dört gün eski Ae. aegypti yumurta. (A)bozulmamış yumurta yüksek (> %80) nem, ama görünür herhangi bir nem olmadan tutulan zımpara şeritler üzerinde. Hatch oranları vahşi tipi Ae. aegypti için % 90'ı yukarıda düzgün muhafaza olmalıdır. Su (Erken gelişmiş tarama) sular altında önce yumurtadan (B) yumurta bir müstakil yumurta kap ve görünür larva tarafından ayırt edilir. Bu zımpara şerit çok nemli tutuldu gösterir. Çok sert kurutulmuş (C) yumurta çökebilir ve içbükey görünümlerini tarafından açıkça görülebilir. Zımpara sert olursa bu da yumurtaları çok kuru olabileceğini gösterir. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56124/56124fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Yazarlar onlar rakip hiçbir mali çıkarları var bildirin.

Burada Wolbachiabakım için sunulan protokol sonrası-virüslü Ae. aegypti sağlamak tutarlı bir kalite sağlıklı sivrisinekler deneyler için üretilen ve açık alan bültenleri. (Bkz: başvuru57) sivrisinek miktarda üretim öncelik diğer iletişim kuralları aksine, onların zindelik, hem rahat yetiştirme koşulları uygulayarak ve arasında nesiller içinde en üst düzeye çıkarma yöntemleri odaklı akraba evliliği, seçim ve laboratuvar uyum en aza nesiller. Bu iletişim kuralı da Ae. aegypti</...

Aedes aegypti sivrisinek Dang, Zika ve chikungunya1de dahil olmak üzere dünyanın en önemli arboviruses bazıları iletmek için sorumludur. 2,3,4genişletmek Ae. aegypti tropikal yaygın dağıtım devam ederken bu virüsler küresel sağlık için artan bir tehdit hale gelmektedir. Kadın Ae. aegypti tercihen insan kanı5 besleme ve böylece insanlar, özellikle kentsel alanlarda nüfusun en yoğun olduğu yakın yaşamak eğilimindedir. İnsanlar ile bu yakın ilişki yoluyla onlar da lastikleri, tencere, oluklar ve su tankları6,7de dahil olmak üzere, yapay yaşam alanları içinde üremek için adapte olması. AE. aegypti da kolayca nerede onlar herhangi bir özel gereksinimleri olmadan doğrudan alanından farklı olarak bazı diğer türler Aedes cins8toplanan sonra korunabilir laboratuvar ortamlarına uyum, 9,10. Bakım kolaylığı onları geniş alanları geniş bir laboratuvarda Okulu'nu gördü, sonuçta hastalıkları sivrisinek kontrolü amaçlayan iletmek.
Geleneksel olarak, arboviral denetim ağır sivrisinek örneğin alınma olasılığını azaltmak için böcek öldürücüler kullanımına dayanıyor. Ancak, değiştirilmiş sivrisinek nereye laboratuvarda yetiştirilen ve sonra doğal nüfus serbest yaklaşımlar artan ilgi vardır. Yayımlanan sivrisinekler11,12,13, biyolojik olarak14,15, ışınlama16, kimyasal arıtma17,18genetik olarak değiştirilmiş, ya da sivrisinek nüfus bastırmak veya bunların yerine arboviral iletim20' ye ateşe dayanıklı sivrisinekler teknikleri-19 ile birlikte.
Wolbachia olan bir biyolojik mücadele ajanı olarak arboviruses. için kullanılmakta olan bakteri Birkaç soy-in Wolbachia son zamanlarda deneysel olarak embriyonik mikroenjeksiyon21,22,23,24kullanarak Ae. aegypti tanıtıldı. Bu suşların yaymak ve onların iletim potansiyel23,25,26,27,28 azalan sivrisinek içinde çoğaltmak için arboviruses kapasitesini azaltmak . Ancak hastalık bulaşmamış tek kadın22ile enfekte erkek dostum zaman belirli suşları kısırlık neden Wolbachia enfeksiyonlar çoluk, anneden iletilir. Wolbachia-virüslü erkekler bu nedenle doğal sivrisinek nüfus, son diğer Aedes türler15,29gösterdi bastırmak için büyük miktarlarda yayınlanacak. Wolbachia da inhibe bu yana arboviral Ae. aegyptiiletimde, ancak, sivrisinekler de yerli nüfus ile yoksul vektörel çizimler yerine yayınlanacak. Deneysel olarak Wolbachia ile enfekte Ae. aegypti are şimdi serbest bırakmak içine alan birçok ülkede bu ikinci yaklaşımı14,30,31kullanarak.
Wolbachia-arboviral denetimi için tabanlı yaklaşımlar itimat Wolbachia, Sivrisinek ve çevre arasındaki etkileşimler ses bir anlayış. Wolbachia ortaya doğal olarak çok çeşitli böcekler ve sivrisinekler tanıttı suşları onların etkileri32çeşitlidir. Yeni Wolbachia enfeksiyon türü Ae. aegypti24tanıtıldı gibi sivrisinek fitness, üreme ve koşulları bir dizi altında arboviral girişim üzerindeki etkileri için her zor karakterize etmek gereklidir. Titiz deney Laboratuvarı bu nedenle alanında başarılı olmak Wolbachia suşları potansiyeli değerlendirmek için gereklidir.
Ae. aegypti açık alan bültenleri Wolbachia enfeksiyonları ile kez sivrisinek olmak serbest bölge başına, on binlerce binlerce her hafta14,30,31yetiştirilen gerektirebilir. İlk bültenleri başarısı sivrisinekler onların verimlilik33 ve çiftleşme başarı34,35en üst düzeye çıkarmak için büyük bir boyutta serbest bırakarak geliştirilebilir. Sivrisinekler de alanında, ancak uzun vadeli laboratuvar yetiştirme değişiklikler davranış ve alan performans36,37etkileyen Fizyoloji neden olabilir yaşayacaksınız koşullarına adapte edilmelidir, 38.
Biz Ae. aegypti temel ekipman kullanarak laboratuvar yetiştirme için basit bir protokol tanımlamak. Bu iletişim kuralı için her iki vahşi türü uygundur ve Wolbachia-enfekte sivrisinekler, ikincisi olan gerektirebilir özel ilgi gibi bazı Wolbachia suşları sivrisinek hayat-Tarih özellikleri39, üzerinde önemli etkileri 40. aşırı kalabalık ve vektör yetkinlik ve fitness deneyler için önemlidir ve sivrisinekler için alan serbest bırakmak41 sağlıklı olmasını sağlar tutarlı bir boyuta sivrisinekler üretmek gıda için rekabet yetiştirme durumlardan kaçınmak . Biz laboratuvar adaptasyon ve akraba evliliği seçici baskıların azaltılması ile en aza indirmek önlemler almak ve yeni nesil sağlamak büyük, rasgele havuzundan örneklenir. Ancak, laboratuvar ortamları alan koşullarından farklı ve rahat koşullarda uzun vadeli bakım yayın içine alan37,42,43 üzerine sivrisinek fitness azaltabilir . Bu nedenle kadın alan toplanan erkeklerin periyodik olarak, laboratuvar satırlarından, deneysel karşılaştırmalar için genetik olarak benzeyen, ve için hedef alan nüfus39adapte olan koloniler sonuçlanan geçeriz. Yöntemleri herhangi bir özel ekipman gerektirmez ve arka on binlerce her hafta alan sürümleri için bireylerin ölçeklendirilebilir. Protokol ayrıca fitness kuruluş doğal nüfus için mukadder böcekler için önemli bir göz sivrisinek içinde ve nesiller arasında öncelik. Protokol sivrisinekler ve relatability alanı için tutarlı bir kalite nerede önemli özellikle deneysel karşılaştırmalar için Ae. aegypti, bakım gerektiren çoğu laboratuarlar için uygundur.

<table><tbody><tr><td>Yabani tür Aedes aegypti</td><td></td><td></td><td>Queensland, Avustralya'daki tarla konumlarından toplanmıştır, ayrıntılar için Yeap ve diğerleri39 bölümüne bakın</td></tr><tr><td>w Mel ile enfekte olmuş Aedes aegypti</td><td></td><td></td><td>Monash Üniversitesi tarafından sağlanmıştır. Monash Üniversitesi tarafından sağlanan suş<</td></tr>em<tr><td>>w AlbB ile enfekte olmuş <>Aedes aegypti</td> hakkında bilgi için Walker ve diğerleri <td></td><td></td> bölümüne bakın<td>. Monash Üniversitesi tarafından sağlanan suşw MelPop ile enfekte olmuş Aedes aegypti suş hakkında bilgi için Xi ve diğerleri21</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td> bölümüne bakın<td>. Anında kurutulmuş maya Lowan Yumurta çatlamasını uyarır türü hakkında bilgi için McMeniman ve diğerleri22</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td> bölümüne bakın<td>. Genel marketlerde bulunur. Diğer markalar kullanılabilir</td></tr><tr><td>5 L plastik küvet</td><td>Quadrant</td><td>Q110950</td><td>Larvaların kuluçkalanması ve yetiştirilmesi için kullanılır. Diğer ürünler kullanılabilir</td></tr><tr><td>Balık Yemi (Tetramin Tropikal Tabletler)</td><td>Tetra</td><td>16152</td><td>Larvalara besin kaynağı olarak sağlanır. Web adresi: https://www.amazon.com/Tetra-16152-TetraMin-Tropical-10-93-Ounce/dp/B00025Z6SE</td></tr><tr><td>Plastik kaplar</td><td></td><td></td><td>Larva yetiştirmek için kullanılır. 500 mL'nin üzerindeki herhangi bir plastik kap uygun olmalıdır</td></tr><tr><td>Cam pipet</td><td></td><td></td><td>Larva ve pupaları kaplar arasında aktarmak için kullanılır. Web adresi: https://www.aliexpress.com/item/10Pcs-Durable-Long-Glass-Experiment-Medical-Pipette-Dropper-Transfer-Pipette-Lab-Supplies-With-Red-Rubber-Cap/32704471109.html?spm=2114.40010308.4.2.py4Kez</td></tr><tr><td>Tıklama sayacı</td><td>RS Pro</td><td>710-5212</td><td>Larva, pupa ve yumurtaların sayımına yardımcı olmak için kullanılır. Web adresi: http://au.rs-online.com/web/p/products/7105212/?grossPrice=Y</td></tr><tr><td>Yetiştirme tepsileri</td><td>Gratnells</td><td></td><td>Larva yetiştirmek için kullanılır. Web adresi: http://www.gratnells.com</td></tr><tr><td>Naylon ağ</td><td></td><td></td><td>Larvaları ve pupaları tatlı su kaplarına aktarmak için kullanılır. Diğer markalar kullanılabilir. Web adresi: https://www.spotlightstores.com/fabrics-yarn/specialty-apparel-fabrics/nettings-tulles/nylon-netting/p/BP80046941001-white</td></tr><tr><td>Kafesler</td><td>BugDorm</td><td>DP1000</td><td>Yetişkin sivrisinekleri barındırır. Alternatif ürünler kullanılabilir. Web adresi: http://bugdorm.megaview.com.tw/bugdorm-1-insect-rearing-cage-30x30x30-cm-pack-of-one-p-29.html</td></tr><tr><td>35 mL plastik bardak</td><td>Huhtamaki</td><td>AA272225</td><td>Yetişkin sivrisineklere su veya sakkaroz sağlamak için kullanılır. Diğer markalar kullanılabilir</td></tr><tr><td>35 mL plastik bardak kapağı</td><td>Huhtamaki</td><td>GB030005</td><td>Yetişkin sivrisineklere sakkaroz sağlamak için kullanılır. Diğer markalar kullanılabilir</td></tr><tr><td>Pamuk yünü</td><td>Cutisoft</td><td>71841-13</td><td>Nemli pamuk yünü yetişkinlere su kaynağı olarak sağlanır. Diğer markalar kullanılabilir</td></tr><tr><td>Beyaz Şeker</td><td></td><td></td><td>Yetişkin sivrisineklere şeker kaynağı olarak sağlanır. Genel marketlerde bulunur</td></tr><tr><td>Halat</td><td>M Recht Aksesuarları</td><td>C323C/W</td><td>Yetişkinlere sükroz çözeltisi sağlamak için kullanılır. Diğer markalar kullanılabilir. Web adresi: https://mrecht.com.au/haberdashery/braids-cords-and-tapes/cords/plaited-cord/cotton/</td></tr> <tr><td>Plastik bardak (büyük)</td><td></td><td></td><td>Yumurtlama kabı olarak kullanılır. 100 mL su tutan herhangi bir plastik kap uygun olmalıdır</td></tr><tr><td>Zımpara</td><td>kağıdı Norton Master Painters</td><td>CE015962</td><td>Yumurtlama substratı olarak sağlanır. Alternatif ürünler kullanılabilir ancak nispeten kokusuz olduğu için bu markayı kullanıyoruz. Yumurta ile kontrast için daha açık renkler kullanılır. Web adresi: https://www.bolt.com.au/115mm-36m-master-painters-bulk-roll-p80-medium-p-9396.html</td></tr><tr><td>Filtre kağıdı</td><td>Whatman</td><td>1001-150</td><td>Alternatif bir yumurtlama substratı olarak kullanılır. Diğer markalar kullanılabilir</td></tr><tr><td>Lateks eldiven</td><td>SemperGuard</td><td>Z560979</td><td>Kan beslerken ellerde sivrisinek ısırıklarını önler. Diğer markalar kullanılabilir. İnternet adresi: http://www.sempermed.com/en/products/detail/semperguardR_latex_puderfrei_innercoated/</td></tr></tbody></table>

aedes aegypti sivrisinek enfekte wolbachia ile bakımını yapma

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Deneysel olarak Wolbachia ile enfekte aedes aegypti sivrisinek arboviruses Dang, chikungunya ve Zika gibi yayılmasını kontrol programlarında kullanılmaktadır. Wolbachia-virüslü sivrisinekler de nüfus boyutları arasında uyumsuz matings azaltmak veya virüs iletim için ateşe dayanıklı sivrisinek ile nüfus dönüştürmek için alana piyasaya sürülmelidir. Bu stratejiler başarılı olmak laboratuvar alanından içine serbest sivrisinek yerli sivrisinek ile rekabetçi olmalı. Ancak, sivrisinekler laboratuvarda Bakımı akraba evliliği, genetik sürüklenme ve onların zindelik alanını azaltabilir ve deneylerin sonuçlarını yıkmak laboratuvar adaptasyon neden olabilir. Farklı Wolbachia enfeksiyonlar dağıtımı için uygunluğu sahada test için sivrisinek kontrollü laboratuvar ortamında birden çok nesiller boyunca korumak gereklidir. Her iki Wolbachiaiçin uygundur laboratuvarında Ae. aegypti sivrisinek korumak için basit bir protokol tanımlayan-virüslü ve vahşi-türü sivrisinekler. Yöntemler laboratuvar adaptasyon en aza indirmek ve deneyler alaka alan sivrisinekler için artırın için outcrossing uygulamak. Ayrıca, koloniler onların zindelik açık alan sürümleri için en üst düzeye çıkarmak için en uygun koşullarda korunur.

Şekil 4 Ae. aegypti larva gelişimine suboptimal beslenmenin etkisi gösterir. Ne zaman kapsayıcı gıda larva günlük başına 0,25 mg ile sağlanır veya daha az, hem kadın ve erkek için Geliştirme süresini artırır, ve daha az kaplar içinde zaman uyumlu gıda 0.5 mg ile sağlanır. Yeterli gıda larva geliştirme süresi boyunca sağlanmazsa, bu bakım planı üzerinde olumsuz bir etkisi olabilir. Yavaş gelişen bireylerin karşı seçilmiş olmanın riski vardır, kan besl...

Wolbachia ile enfekte aedes aegypti sivrisinek arboviruses iletimini bastırmak için doğal nüfus serbest edilmektedir. Biz laboratuvar adaptasyon ve seçimi en aza indirmek önlemler alarak deneyler ve alan açıklaması, arka Ae. aegypti laboratuvarda Wolbachia enfeksiyonları ile yöntemleri açıklanmaktadır.

Aedes aegypti sivrisinek enfekte Wolbachia ile bakımını yapma

Aedes aegypti mosquitoes experimentally infected with Wolbachia are being utilized in programs to control the spread of arboviruses such as dengue, ...

Bu protokolün genel amacı, Wolbachia ile enfekte edilmiş Aedes aegypti sivrisineklerinin bakımını tanımlamaktır. Bu sivrisinekler, dengue ve diğer virüslerin iletimini baskılamak amacıyla dünya genelinde salınmaktadır. Aedes aegypti sivrisineklerini yetiştirme protokolümüz, deneyler veya hastalık kontrol programları için sivrisinek kullanmak isteyen tüm araştırmacılar tarafından kullanılabilir.Bu yöntem, kısır böcek salımını içerenler de dahil olmak üzere, sivrisinek popülasyon kontrol programları için genetiği değiştirilmiş sivrisineklerin yetiştirilmesinde de kullanılabilir. Bu yaklaşımdaki prensipler, diğer hastalık vektörü türlerinin yetiştirilmesine de uygulanabilir. Bu protokol için sivrisinekleri yaklaşık 26 °C'de, %50 ila %70 bağıl nemde ve ekvatoral bir fotoperiyotta barındırın.Daha yüksek sıcaklıklarda yetiştirilirlerse Wolbachia enfeksiyonları kaybolabilir, bu nedenle kolonileri aşırı ısıtmayın. Akrabalı çiftleşmeyi en aza indirmek için popülasyon başına yaklaşık 500 sivrisinek bulundurun. Bu protokolün yeterli besleme ile uygulanması, 28 günlük nesiller sağlayacaktır.Bir substrat üzerindeki yumurtalarla başlayın. Kuluçkanın başlamasını sağlamak için yumurtaları, yaklaşı

maintaining-aedes-aegypti-mosquitoes-infected-with-wolbachia

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu video hücre orta endosymbiont Anofel gambiae hücre hattı Wolbachia pipientis arındırıcı ve sonra kültür için bir yöntem açıklanır. Bakterinin canlılığı için bir test olduğunu göstermiştir.

Hücre Orta Wolbachia bakımı

RIDL® (Baskın Ölümcül Taşıyan Böceklerin Salınımı) sistemini kullanarak Aedes aegypti'nin popülasyon baskısını elde etmek için çok sayıda erkek sivrisinek salınmalıdır. Bu, maksimum sayıda yüksek kaliteli erkek sivrisinek elde etmek için güvenilir sistemler sağlamak için kitlesel yetiştirme tekniklerinin ve teknolojisinin kullanılmasını gerektirir.

Brezilya'da Saha Sürümleri için Genetiği Değiştirilmiş Aedes aegypti'nin Seri Üretimi

Sunulan protokol, Aedes aegypti sivrisinek popülasyonlarının Zika gibi belirli bir virüs için vektör yeterliliğini bir muhafaza ortamında belirleyebilir.

Zika Virüsü Kullanan Aedes aegypti Sivrisineklerinde Vektör Yetkinlik Analizleri

Açıklanan, yumurtaları saymak ve 24 kuyu doku kültürü plakası kullanarak bireysel sivrisineklerin kuluçka oranlarını belirlemek için zaman ve yerden tasarruf sağlayan bir yöntemdir, bu da doğurganlık ve doğurganlık testlerinin ölçeğini ve hızını önemli ölçüde artırabilir.

24 Kuyu Doku Kültürü Plakası (EAgaL Plakaları) kullanılarak Aedes aegypti için Geliştirilmiş Doğurganlık ve Doğurganlık Tahlilleri

Bu protokol, CRISPR/Cas9 gen düzenleme araçlarıyla çalışmak üzere optimize edilmiş Culex quinquefasciatus embriyoları için mikroenjeksiyon prosedürlerini açıklar. Bu teknik, bu yetersiz hastalık vektörde genetik teknolojiler oluşturmak için kullanılabilecek bölgeye özgü, kalıtsal, germline mutasyonlarını verimli bir şekilde üretebilir.

Culex quinquefasciatus'ta Verimli Bölgeye Özgü Mutagenezi için Embriyo Mikroenjeksiyon Teknikleri

Kültür mikrosporidian parazit Edhazardia aedisiçin bir protokol . Parazit aedes aegypti sivrisinek bir nesil sonraki larva aşamasında yatay transfer ve yetişkin aşamasında dikey iletim takip yoluyla geçit edilir. Canlı sporoplazmlar enfekte yumurtalarda uzun süreli hayatta kalırlar.

Aedes aegypti Sivrisinekmikrosporidian Parazit Edhazardia aedis yayılması

Steril böcek tekniği (SIT), kimyasal kontrollere dirençli olabilecek spesifik, tıbbi açıdan önemli sivrisinek popülasyonlarını kontrol etmek için kullanılır. Burada, Aedes aegypti sivrisineğini hedef alan operasyonel bir SIT programında salınmak üzere steril erkek sivrisineklerin kitlesel olarak yetiştirilmesi ve hazırlanması yöntemini açıklıyoruz.

Işınlanmış ve İşaretlenmiş Erkek Aedes aegypti Sivrisineklerinin Operasyonel Steril Böcek Tekniği Programında Salınıma Hazırlanması

Burada, erkek Aedes aegypti'nin çiftleşme rekabet gücünün bir işaretleyici olarak floresan boyası kullanılarak incelenmesi için bir protokol sunuyoruz. Dişi sivrisinekler çiftleşme için hem işaretli hem de işaretlenmemiş erkeklere maruz kalır. Çiftleşme sonrası spermathecae'leri çiftleşme partnerlerini belirlemek için floresan mikroskop altında incelenir.

Erkek Aedes aegypti Sivrisineklerinde Çiftleşme Rekabet Gücünü Incelemek için Floresan Boyası Rhodamine B'yi Kullanmak

Hücre içi Wolbachia'yı tespit etmek için birbirini tamamlayan ve Aedes albopictus'tan türetilmiş Aa23 ve Aa23-T'nin Wolbachia enfeksiyonunun antibiyotik kullanılarak tedavi edilen Wolbachia enfeksiyonunun tespit doğruluğunu artıran  dört yöntem kullanıldı.

Aedes albopictus Hücre Hatlarında Wolbachia Suşu wAlbB'nin Tespiti

Mevcut protokol, Aedes aegypti sivrisineklerinde doğurganlık, kanat boyutu, doğurganlık, cinsiyet oranı, canlılık, gelişme süreleri, erkek katkısı ve yetişkin ömrü dahil olmak üzere ortak yaşam parametresi verilerinin nasıl ölçüleceğini açıklamaktadır. Bu ölçümler, transgenik sivrisineklerin uygunluğunu değerlendirmek için kullanılabilir.

Transgenik Aedes aegypti Sivrisineklerinde Kondisyon Maliyetlerinin Ölçülmesi

Hücre hatları, konakçı hücrelerinin dışında kültürlenemeyen hücre içi organizmalar üzerinde yapılan çalışmalarda faydalıdır. Wolbachia ile enfekte olmuş hatlar birçok keşfi mümkün kılmış olsa da, bu hatlardaki heterojenlik değişken deneysel sonuçlara yol açabilir. Wolbachia ile enfekte JW18 hücrelerinden tek hücreli klonlar ve sürekli kültürler oluşturmak için bir protokol sunuyoruz.

Wolbachia ile enfekte Drosophila melanogaster JW18 Hücre Hattından Monoklonal Kültürlerin Üretilmesi

Öğrenin Wolbachia ile enfekte Aedes aegypti sivrisineklerinin bakımını yapmayı. Bu protokol, sıtma ve deng gibi virüslerin bulaşmasını önlemek için vektör biyolojisi araştırmalarında kullanılabilir.

Aedes aegypti sivrisinek enfekte Wolbachia ile bakımını yapma

Daha fazla video keşfet