Aedes aegypti sivrisinek enfekte Wolbachia ile bakımını yapma

Bu protokolün genel amacı, Wolbachia ile enfekte olmuş Aedes aegypti sivrisineklerinin bakımını tanımlamaktır. Bu sivrisinekler, dang humması ve diğer virüslerin bulaşmasını bastırmak için dünya çapında serbest bırakılıyor. Aedes aegypti sivrisinekleri yetiştirme protokolümüz, sivrisinekleri deneyler veya hastalık kontrol programları için kullanmakla ilgilenen herhangi bir araştırmacı tarafından kullanılabilir.

Bu yöntem aynı zamanda, steril böcek salınımını içerenler de dahil olmak üzere, sivrisinek popülasyon kontrol programları için genetiği değiştirilmiş sivrisineklerin yetiştirilmesi için de kullanılabilir. Bu yaklaşımda yer alan ilkeler, diğer hastalık vektör türlerinin yetiştirilmesine de uygulanabilir. Bu protokol için, sivrisinekleri ekvator fotoğraf periyodu ile yaklaşık 26 santigrat derecede ve% 50 ila 70 bağıl nemde barındırın.

Daha yüksek sıcaklıklarda yetiştirilirlerse, Wolbachia enfeksiyonları kaybolabilir, bu nedenle kolonileri aşırı ısıtmayın. Akrabalı çiftleşmeyi en aza indirmek için popülasyon başına yaklaşık 500 sivrisinek bulundurun. Bu protokolün yeterli beslenme ile kullanılması 28 günlük nesiller verecektir.

Bir alt tabaka üzerinde yumurta ile başlayın. Yumurtadan çıkmayı sağlamak için yaklaşık 300 miligram balık yemi ve birkaç tane aktif, kuru maya ile üç litre su içeren tepsilere daldırın. Yumurtadan çıktıktan bir gün sonra, yaklaşık 500 larvayı dört litre su ve taze balık yemi içeren tepsilere aktarmak için bir cam pipet kullanın.

Larvaların yeterli yiyeceğe sahip olduğundan emin olmak için tepsileri günlük olarak kontrol edin. Optimal bir gıda tedarikini sağlamak için her gün yaklaşık 600 miligram balık yemi ekleyin. Aşırı besleme, suyun bulanıklaşmasına ve dolayısıyla ölüme neden olabilir, bu nedenle suyu gerektiği gibi değiştirin.

Beslenme ve sıcaklıklar doğru bir şekilde korunursa, larvalar yumurtadan çıktıktan beş ila yedi gün sonra pupa olur. Ve yetişkinler yaklaşık iki gün sonra ortaya çıkacaktır. Yumurtadan çıktıktan yedi gün sonra, tepsinin tüm içeriğini ince bir ağdan geçirin.

Filtrelenmiş suyun bir kısmını aynı kolonide yumurta pozisyonu için beş litrelik bir kapta tutun. Ardından, ağı ters çevirin ve pupaları aktarmak için 200 mililitre su içeren plastik bir kaba daldırın. Kalan larvaları beslemek için uygun miktarda yiyecek ekleyin.

Şimdi, kurumasını önlemek için iki fincan% 10 sükroz çözeltisi ve iki fincan nemli pamuk topu içeren bir yetişkin çıkış kafesi kurun. Pupaların cinsiyete göre sıralanması gerekmiyorsa, pupa kabını bir kafese aktarın ve yetişkinlerin kaçması ve kafese girmesi için kapağı hafifçe aralık bırakın. Tüm yetişkinler ortaya çıktıktan sonra, kabı kafesten çıkarın.

Konteyneri daha erken çıkararak yavaş geliştiricilere karşı seçim yapmayın. Bakire sivrisinekleri toplamak için, pupaları larva yetiştirme tepsilerinden her 24 saatte bir 200 mililitre su içeren plastik kaplara aktarın. Cinsiyetleri boyuta göre sıralayın.

Dişiler erkeklerden daha büyüktür. Ve bunları ayrı kaplara aktarın. Yetişkinlerin kaçmaması için kapların kapaklarını kapalı tutun.

Ortaya çıkan yetişkinleri kafeslerine bırakmadan önce cinsiyetlerini onaylayın. Yanlış cinsiyete sahip yetişkinler, cinsel olarak henüz olgunlaşmamış olduklarında, ortaya çıktıktan sonraki 24 saat içinde bir aspiratör kullanılarak çıkarılmalıdır. Wolbachia ile enfekte olmuş kolonileri doğal bir popülasyona benzer tutmak için, enfekte dişileri laboratuvardan enfekte olmamış vahşi erkeklere çaprazlayın.

Erkekleri ve dişileri iki gün ayrı ayrı olgunlaştırın. Ve sonra dişileri erkek kafesine aspire edin. İdeal olarak, yaklaşık 500 kişilik bir nüfus büyüklüğü ile bire bir cinsiyet oranı ayarlayın.

En az üç ardışık nesil boyunca sivrisinekleri geçmeye devam edin. Son yetişkinlerin ortaya çıkmasından en az üç gün sonra ve iki haftalık olmadan önce, aşırı dişi ölümü meydana gelmeden önce koloniyi kan besler. Bu, özellikle ömrünü kısaltan Wolbachia enfeksiyonları olan sivrisinekler için önemlidir.

Şekerlikler bir gün önceden çıkarılmalıdır. Sivrisineklere bir önkola erişim izni verin ve elinizi ve bileği korumak için lateks bir eldiven giyin. Çoğu dişi beş dakika içinde beslenmelidir.

Ancak 15 dakika kadar sürebilir. Tüm dişiler gözle görülür şekilde tıkandığında, ön kolu çıkarın ve şeker kaplarını değiştirin. Kan beslemesinden iki gün sonra, suyla doldurulmuş ve kısmen batırılmış bir zımpara kağıdı şeridi ile kaplanmış iki plastik kabı kafese yerleştirin.

Ardından, şekerli su dışındaki diğer su kaynaklarını çıkarın. Dişiler, kan beslemesinden üç gün sonra su hattının hemen üzerindeki zımpara kağıdı üzerinde yumurtlayacaktır. Daha fazla yumurta bırakılmayana kadar zımpara kağıdını günlük olarak toplayın ve değiştirin.

Daha fazla yumurtaya ihtiyaç duyulursa, haftalık aralıklarla kanla besleme yapılabilir. Zımpara kağıdını bir kağıt havlu kullanarak yaklaşık 30 saniye hafif kurutma ile kısmen kurulayın. Yumurtaları yerinden çıkarmayın.

Ardından, şeritleri bir kuru kağıt havluya sarın ve sızdırmaz bir plastik torbaya koyun. Toplamadan üç gün sonra, yumurtaları diseksiyon mikroskobu altında inceleyin. Zımpara kağıdı çok ıslaksa, yumurtalar suya batırılmadan önce çatlayabilir.

Ancak çok sert kurursa, yumurtalar çökebilir. Yumurtalar toplandıktan üç gün sonra çatlamaya hazırdır. Gelecek nesil için büyük bir birey havuzu oluşturmak için her kolonideki tüm yumurtaları aynı su kabına daldırın.

Genel olarak, yumurtalar birkaç ay boyunca 20 santigrat derecede %80'den daha yüksek bir nem oranına sahip kapalı bir kapta saklanabilir. Ancak bazı Wolbachia enfeksiyonları canlılığı azaltır, bu nedenle bu yumurtalar toplandıktan sonraki bir hafta içinde yumurtadan çıkmalıdır. Larva kaplarına larva başına günde 0.25 miligram veya daha az yiyecek verildiğinde, gelişme süresi her iki cinsiyet için de artmış ve daha fazla yiyecek sağlanan kaplara göre daha az senkrondur.

Gelişim süresi boyunca yeterli besin sağlanmazsa, bu koloni bakımını olumsuz yönde etkileyecektir. Yavaş gelişen bireylere karşı seçim yapılabilir ve kan beslemesi gecikebilir. Üremeden önce yetişkin ölümleri bile artabilir.

Optimal olmayan beslenme yetişkin morfolojisini etkiledi. Kanat uzunlukları önemli ölçüde azaldı ve beslenme seviyeleri ile ilişkilendirildi. Tek tip vücut boyutları, vücut büyüklüğü doğurganlık ile pozitif olarak ilişkili olduğundan ve büyük sivrisineklerin tarla koşullarında daha uygun olması gerektiğinden, deneysel karşılaştırmalar için önemlidir.

Bu videoyu izledikten sonra, Wolbachia ile enfekte olmuş Aedes aegypti sivrisineklerinin nasıl korunacağını iyi anlamış olmalısınız. Protokolümüzü takip etmek, tutarlı bir kalitede sağlıklı sivrisineklerin üretilmesini sağlamalıdır. Bu sivrisinekler daha sonra hastalık kontrol programları için sahaya salınabilir veya deneyler için kullanılabilir.

Wolbachia ile enfekte olmuş sivrisineklerle çalışırken, kolonilerin Wolbachia enfeksiyonlarını sürdürmelerini sağlamak için enfeksiyon durumlarını izlemek önemlidir.