Alzheimer hastalığı Composited amiloid Beta protein Intracerebroventricular enjeksiyonla sıçan hayvan modelinde değerli bir taklit kurulması

Bu yöntem, Alzheimer hastalığı gibi nörodejeneratif hastalık alanındaki anahtar soruyu yanıtlamaya yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, sıçan hayvan modelinde Alzheimer hastalığını, alüminyum triklorür ve rekombinant insan dönüştürücü büyüme faktörü beta bir ile kombine edilmiş A-beta 25 ila 35'in intraserebroventriküler enjeksiyonu ile taklit etmesidir. Aynı zamanda, yüksek hayvan hayatta kalma oranı, yüksek model başarı oranı ve daha ekonomik olduğu gösterilen yüksek çoğaltma oranı ile hızlı ve nispeten basit bir deneysel protokol sağlar.

Bu tekniğin sonuçları, ilacın AD'ye karşı tarama etkinliğine kadar uzanır, çünkü bu hayvan modeli, AD hastalarının durumlarına yakın hafıza bozukluklarına ve nöronal bozukluğa sahiptir. Prosedürü göstermek, laboratuvarımdan bir teknisyen olan Cheng Jianjun olacak. Anestezi uygulanmış bir sıçanda, başın üst kısmındaki kürkü cerrahi makasla keserek başlayın ve iyodofor ile dezenfekte edin.

Daha sonra, cerrahi bisturi ve makasla medyan longitudinal kalvarya boyunca baş derisi üzerinde bir kesi yapın. Deri altı dokuyu ve fasyayı ayırın, kafatası kalvaryumunu% 0.3 hidrojen peroksit ile silin ve bregmayı bir işaretleyici kalemle işaretleyin. Daha sonra, üç noktayı, RHTGF beta birini enjekte etmek ve bir vidayı sabitlemek için anterodorsal talamik çekirdeği, A-beta 25-35 ve AICI3'ü enjekte etmek için lateral ventrikül veya LV alanını ve son olarak ikinci vida sabitleme yerini işaretleyin.

Kafatasındaki işaretli üç noktaya esnek bir kemik matkabı ile birer milimetre çapında üç adet delik açın. Kanamayı durdurun ve kafatası yüzeyini steril kuru pamukla tekrar tekrar temizleyin. Daha sonra, mikroenjeksiyon pompasına bağlı bir iğneyi beyne 4,2 milimetre derinlikte sokun ve reklam alanına nazikçe bir mikrolitre RHTGF beta one enjekte edin.

Mikroenjeksiyonu enjeksiyondan iki dakika sonra tutun. Sonra yavaşça dışarı çekin. İki vidayı, daha önce işaretlenmiş noktalarda belirtilen kafatasına küçük bir tornavidayla sabitleyin.

Vida yerleştirmeyi takiben, 24 saat boyunca %75 alkole daldırma ile dezenfeksiyondan sonra önce kukla kanülü kılavuz kanüle yerleştirerek kanül implantasyon sistemini monte edin. Daha sonra, paslanmaz çelik boru kılavuz kanülünü, farenin stereotaksik aparatındaki bir kanül tutucu yardımıyla, kafatası deliğinden LV alanına 4.6 milimetrede beyne yerleştirin. Daha sonra, protez taban malzemesini protez tabanı suyu ile bir mililitre başına 1,5 gram oranında karıştırın.

Macunu, kılavuz kanülü, plastik kaide ve kılavuz kanülü hareketsiz hale getirmek için iki vidayı kaplayacak şekilde koyun. Cilt enfeksiyonunu önlemek için tüm cilt kesisini kapatın. Ertesi gün, sahte kanülü çıkarın ve iç kanülü kılavuz kanüle yerleştirin.

İç kanülü hareketsiz hale getirmek için sabitleme vidasını vidalayın. Mikroenjeksiyon pompasını iç kanüle bağlayan polietilen boruyu ayarlayın ve enjeksiyon hızını dakikada bir mikrolitre olarak ayarlayın. Enjeksiyonu bitirdikten sonra beş dakika bekleyin ve iç kanülü yavaşça dışarı çekin.

Ardından, sahte kanülü tekrar kılavuz kanüle yerleştirin. Ameliyattan sonraki 15. günde, protez taban materyalini cerrahi makas ve forseps ile katı bir şekilde çıkararak ve yarayı iyodofor ile dezenfekte ederek kanül implantasyon sistemini sökün. Son olarak, kafatasının deliğini kemik çimentosu ile doldurun ve cildi basit bir kesintili dikiş yöntemi ile dikin.

Havuz suyunu biraz siyah gıda boyası ile karartarak başlayın. Suyun derinliğini 31,5 santimetrede ve sıcaklığı 23 artı veya eksi bir santigrat derecede tutun. Ardından, su yüzeyinin altına 1,5 santimetre, dairesel, şeffaf bir pleksiglas platform yerleştirin.

Ardından, tanımlayıcı veri toplama için havuzu hayali çizgilerle dört eşit çeyreğe bölün. Gizli platformu su labirentinin ilk çeyreğine veya Q birine yerleştirin. Son olarak, bilgisayar tabanlı bir grafik analiz yazılımına bağlı su labirenti üzerinde bir video kamera aracılığıyla sıçan yüzme davranışlarını yakalayın.

Bu sonuçlar, sahte olarak çalıştırılan sıçan grubunun her zaman serbestçe yüzdüğünü, bileşik A-beta ile muamele edilmiş grup sıçanlarının ise Morris su labirentinde uyarlanabilir yüzmede her zaman havuz çevresinde yüzdüğünü göstermektedir. Hafıza bozukluğu modeli sıçanlar için dört günlük tarama boyunca, tüm sıçanların gizli platformu bulmak için giderek azalan süreleri vardı. Ayrıca, birleştirilmiş A-beta ile muamele edilmiş grubun gizli platformu bulmak için geçirdiği gecikmeler, sahte olarak çalıştırılan grubunkinden önemli ölçüde daha uzundu, bu da birleştirilmiş A-beta'nın sıçanlarda hafıza yeniden öğrenme bozukluğunu artırabileceğini gösterdi.

Bir günlük hafıza tutma denemesinde, birleştirilmiş A-beta ile muamele edilen grup, sahte olarak çalıştırılan gruba kıyasla 60 saniye içinde daha az yüzme süresi, yüzme mesafesi ve geçiş sayısı aldı. Son olarak, patolojik değişikliklere ek olarak, nöron sayısı, bileşik A-beta ile tedavi edilen grupta hipokampus ve serebral kortekste, sahte ameliyatlı gruba kıyasla önemli ölçüde azalmıştır. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik düzgün bir şekilde uygulanırsa 20 ila 30 dakika içinde tamamlanabilir.

Bu prosedürü denerken, yönlendirilmiş kanülün beyin vidasından düşmesini önlemeyi unutmamak önemlidir. Bu prosedürü takiben, taklit edilen AD modelinin başarılı olup olmadığı gibi ek soruları yanıtlamak için labirent testi gibi diğer yöntemler gerçekleştirilebilir. Geliştirilmesinden sonra bu teknik, sinirbilim alanındaki araştırmacıların in vivo olarak nörodejeneratif hastalıkları keşfetmelerinin yolunu açtı.

Bu videoyu izledikten sonra, sıçanlarda alüminyum triklorür ve rekombinant insan dönüştürücü büyüme faktörü beta bir ile birlikte A-beta 25 ila 35'in intraserebroventriküler enjeksiyonu yoluyla başarılı taklit AD hayvan modellerinin nasıl kurulacağını iyi anlamış olmalısınız. Polimetil metakrilat ile çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve bu işlemi gerçekleştirirken her zaman maske ve eldiven takmak gibi önlemlerin alınması gerektiğini unutmayın.