Vivo Multimodal görüntüleme ve fare lazer kaynaklı Choroidal neovaskülarizasyon Model analizi

Neovasküler süreçler, yaygın olan birçok oküler patolojinin karakteristik bir özelliğidir. Bunların başında eksüdatif yaşa bağlı makula dejenerasyonu (kısaca Islak AMD), proliferatif diyabetik retinopati ve prematüre retinopatisi gelmektedir. Bu bozukluklar birlikte, dünya çapındaki yasal körlük vakalarının çoğunluğunu oluşturur ve vitreus kanaması ile neovasküler glokom gibi ek oküler komplikasyonlarla ilişkilidir.

Bununla birlikte, yaygın olmalarına rağmen, oküler neovasküler bozukluklar için terapötik seçenekler sınırlıdır. AMD ve proliferatif diyabetik retinopati ile ilişkili neovaskülarizasyon için mevcut standart bakım, anjiyogenez ve neovaskülarizasyonun kritik bir mediyatörü olan vasküler endotelyal büyüme faktörü veya VEGF'ye karşı yöneltilmiş humanize antikorların intravitreal enjeksiyonudur. Ancak, hastalığın ilerlemesini durdurma ve fonksiyonel görmeyi iyileştirme konusundaki etkinliğine rağmen, intravitreal enjeksiyonlar maliyetlidir ve risklerden uzak değildir.

Komplikasyonlar arasında enfeksiyonlar, endoftalmi, retina dekolmanı ve oküler hemoraji yer alabilir. Bu nedenle, etkili, güvenli ve daha düşük maliyetli yeni tedavi seçeneklerinin geliştirilmesine acil ihtiyaç vardır. Neovasküler bozukluklar için ilaç geliştirmeyi ilerletmek amacıyla, küçük hayvan modelleri kritik öneme sahiptir.

Bu tür modellerin tekrarlanabilir olması, yerleşmiş ve doğrulanmış okumaları ve uç noktaları bulunması ve ideal olarak pozitif kontrol olarak hizmet edecek klinik olarak ilgili bir referans bileşik kullanması gerekir. Bu protokolde, hem CNV'ye katkıda bulunan patofizyolojik mekanizmaların incelenmesi hem de yeni anti-neovasküler ajanların geliştirilmesi için en yaygın kullanılan modellerden biri olan fare koroid neovaskülarizasyon veya CNV modelini sunacağız. CNV modelinde, argon lazer kullanılarak Bruch membranı yırtılır.

Böylece koroidden köken alan neovasküler süreçler başlatılır. Spektral alan optik koherens tomografisi (kısaca SD-OCT) ile boylamsal in vivo görüntüleme ve flüoresein anjiyografinin kullanımı, CNV'nin proliferasyonunu ve regresyonunu takip etme imkanı sağlar. Bu sayede, yeni farmasötik müdahalelerin etkinliği ve zaman seyri değerlendirilebilir.

Görüntü işlemedeki güncel gelişmeler, ayrıca retinal kalınlığın ölçümü için otomatik segmentasyona olanak tanıyarak ödem varlığını değerlendirmek için araştırmacı yanlılığından arındırılmış bir metodoloji sunmaktadır. Burada, fare CNV modelinde retinal tabakaların otomatik segmentasyonu için Leica Microsystems tarafından geliştirilen yeni InVivoVue Diver yazılımının kullanışlılığını tartışacağız. Son olarak, retinal bütün montajların histolojik analizinin bu modeldeki boylamsal in vivo görüntülemeyi nasıl tamamlayabileceğini ele alacağız.

Pupilla dilatasyonu için her göze bir damla tropikamid uygulanır. Ardından, hayvan nazikçe kemirgen hizalama aşamasına yerleştirilir. Gözün açığa çıkması için fare ayarlanır ve burun tutucu ile sırtın üzerine nazikçe yerleştirilen bir parça laboratuvar bandı kullanılarak sabitlenir.

Ardından, nemlendirme amacıyla göze bir damla yağlayıcı uygulanır ve fazla sıvı filtre kağıdı tamponlar kullanılarak dikkatlice temizlenir. Son olarak, bazal OCT görüntüleme için sahne OCT cihazının önüne hizalanır. Herhangi bir retinal anomali olmadığını doğrulamak amacıyla, lazer uygulaması öncesinde bazal düzeyde in vivo spektral alan optik koherens tomografi görüntülemesi gerçekleştirilir.

Fareyi tutucudan nazikçe çıkarın. Korneayı düzleştirmek için bir lamelin üzerine bir damla Viscotears Gel damlatın. Fareyi, optik sinir başı merkezde olacak şekilde konumlandırın ve lazer ışınını retinal pigment epiteline odaklayın.

Optik sinirin etrafındaki saat dört, sekiz ve 12 konumlarında, retinal kan damarlarından kaçınarak üç lazer atışı yapın. Tüm lazer atışlarından sonra, herhangi bir retinal kanama olmadığını doğrulamak için gözün sertliğini kontrol edin. Daha önce olduğu gibi, fareyi tutucuya hizalayın ve Bruch membranının hasar gördüğünü onaylamak için floresan anjiyografi ve OCT görüntüleme gerçekleştirin.

Floresan anjiyografi için, öncelikle lazerin uygulandığı bölgelerin görselleştirilmesini sağlayan kızılötesi yansıma modunu kullanarak lazer yanığı alanlarına odaklanın. Fare gözünün konumunu değiştirmeden, yaklaşık 20 gram fare vücut ağırlığı için 0,1 mililitre %5 floresein sodyum tuzu dikkatlice enjekte edin. Yaklaşık her 30 saniyede bir, koroid düzeyinde ve retina düzeyinde floresan anjiyografi görüntüleri almaya başlayın.

Gözü daha önce olduğu gibi OCT görüntüleme için hizalayın ve görüntülemeye başlayın. Bu sekansta gösterildiği gibi, SD-OCT sinyalinin ortalamasını almak, ayrıntılı retinal morfolojinin daha iyi görselleştirilmesine yardımcı olur. SD-OCT görüntüleme tamamlandıktan sonra, fareyi tutucudan dikkatlice çıkarın.

Her iki göze kayganlaştırıcı uygulayın. Bu noktada, medetomidin için alfa-2 antagonisti olan atipamezolu deri altına enjekte ederek anesteziyi geri çevirmeyi seçebilir veya hayvanın anesteziden kendiliğinden uyanmasını bekleyebilirsiniz. Anestezili hayvanlarda in vivo SD-OCT ve FA görüntülemesini takip günleri olan beşinci, onuncu ve on dördüncü günlerde tekrarlayın.

Retinal kalınlık ölçümleri için InVivoVue Diver yazılımının otomatik segmentasyon özelliğini kullanın. Sağlıklı retinada toplam retinal kalınlık, sinir lifi tabakasından RPE'ye kadar tüm tabakaların kalınlığı olarak kabul edilir. Bu örnekte görüldüğü gibi, sağlıklı retinada otomatik segmentasyon, bireysel retinal tabakaları doğru bir şekilde tespit edebilir.

CNV'nin mevcut olduğu bölgelerde, her bir CNV lezyon sahası için retinal kalınlık ölçümünün manuel olarak ayrı ayrı gerçekleştirilmesi gerektiğini belirtmekte fayda vardır. Ölçüm, sinir lifi tabakasından RPE tabakasından geçen hayali bir hatta kadar yapılır. Bu dizi, CNV lezyonlarının bulunduğu bölgelerdeki manuel kalınlık ölçümleri için iş akışını göstermektedir.

Görüntünün üst kısmında sinir lifi tabakası, alt kısmında ise koroid yer almaktadır. Fare veya dokunmatik yüzey kullanılarak sinir lifi tabakasının ve koroidin sınırları manuel olarak belirlenir ve yazılım bu koordinatlara dayanarak toplam retinal kalınlığı otomatik olarak hesaplar. Bu şekil, koroid düzeyinde her 20 saniyede bir alınan ardışık görüntüleri göstermektedir.

Birinci görüntü kızılötesi yansıma modunda elde edilmiştir. Diğerleri ise intraperitoneal floresein enjeksiyonundan sonra alınmıştır. Birinci görüntüdeki beyaz oklar, lazer uygulanan bölgeleri göstermektedir; bu bölgeler 18. görüntüdeki beyaz oklarla vurgulandığı üzere daha sonraki zaman noktalarında floresein sızıntısı göstermektedir.

Bu görüntü, retinal düzeyde elde edilen FA seri görüntülemesini göstermektedir. Görüntü 18'deki beyaz ok, görüntü 18'de dairelerle çevrelenen diğer ikisinden daha hızlı ortaya çıkan floresein sızıntısını gösteren lazerli bir bölgeyi işaret etmektedir. Bu özet şekil, SD-OCT görüntülerinin bir zaman çizelgesini göstermektedir.

Başlangıçta, lazerleme işleminden hemen sonra ve beşinci, 10. ve 14. günlerdeki takip zaman noktalarında. Özetle, SD-OCT ve FA görüntüleme kullanılarak CNV lezyonlarının boylamsal in vivo görüntülemesine yönelik protokol, CNV patolojisinin ve retinal ödem varlığının hızlı, multimodal ve güvenilir bir şekilde sınıflandırılmasına olanak tanır. İlginiz için teşekkür ederiz.