Vivo Multimodal görüntüleme ve fare lazer kaynaklı Choroidal neovaskülarizasyon Model analizi

Burada, boyuna vivo içinde görüntüleme kullanışlılığı lazer kaynaklı choroidal neovaskülarizasyon farelerde morfolojik değişiklikler takip içinde mevcut.

Neovasküler süreçler, çeşitli yaygın oküler patolojilerin karakteristik bir özelliğidir. En belirgin olarak, eksüdatif yaşa bağlı makula dejenerasyonu veya kısaca Islak AMD, proliferatif diyabetik retinopati ve prematüre retinopatisi. Birlikte, bu bozukluklar dünya çapında çoğu yasal körlük örneğini oluşturur ve vitreus kanaması ve neovasküler glokom gibi ek oküler komplikasyonlarla ilişkilidir.

Bununla birlikte, prevalansına rağmen, oküler neovasküler bozukluklar için terapötik seçenekler sınırlıdır. YBMD ve proliferatif diyabetik retinopati ile ilişkili neovaskülarizasyon için mevcut bakım standardı, anjiyogenez ve neovaskülarizasyonun kritik bir aracısı, vasküler endotelyal büyüme faktörü veya VEGF'ye yönelik insanlaştırılmış antikorların intravitreal enjeksiyonudur. Bununla birlikte, hastalığın ilerlemesini durdurma ve fonksiyonel görmeyi iyileştirmedeki etkinliğine rağmen, intravitreal enjeksiyonlar maliyetlidir ve risksiz olmaktan uzaktır.

Komplikasyonlar arasında enfeksiyonlar, endoftalmi, retina dekolmanı ve oküler kanama sayılabilir. Bu nedenle, etkili, güvenli ve daha az maliyetli yeni tedavi seçeneklerinin geliştirilmesine acil bir ihtiyaç vardır. Neovasküler bozukluklar için ilaç geliştirmeyi ilerletmek için, küçük hayvan modelleri kritik öneme sahiptir.

Bu tür modellerin tekrarlanabilir olması, okumalar ve uç noktalar oluşturması ve doğrulanması ve ideal olarak pozitif kontrol olarak hizmet etmek için klinik olarak ilgili bir referans bileşiği kullanması gerekir. Bu protokolde, hem KNV'ye katkıda bulunan patofizyolojik mekanizmaların incelenmesi hem de yeni anti-neovasküler ajanların geliştirilmesi için en sık kullanılan modellerden biri olan fare koroidal neovaskülarizasyonu veya CNV modeli sunulacaktır. CNV modelinde, Bruch'un zarı bir argon lazeri kullanılarak yırtılır.

Böylece koroidden kaynaklanan neovasküler süreçleri başlatır. Spektral alan optik koherens tomografi veya kısaca SD-OCT ve floresein anjiyografi ile uzunlamasına in vivo görüntüleme, CNV'nin proliferasyonunu ve regresyonunu takip etmek için bir araç sağlar. Ve böylece, yeni farmasötik müdahalelerin etkinliğini ve zaman seyrini değerlendirmek.

Görüntü işlemedeki son gelişmeler ayrıca retina kalınlığının ölçümü için otomatik segmentasyona izin vererek, ödem varlığını değerlendirmek için araştırmacı yanlılığından arınmış bir metodoloji sağlar. Burada, fare CNV modelinde retina katmanlarının otomatik segmentasyonu için Leica Microsystems tarafından geliştirilen yeni InVivoVue Diver yazılımının kullanışlılığını tartışacağız. Son olarak, bu modelde retinal tüm yuvaların histolojik analizinin boylamsal in vivo görüntülemeyi nasıl tamamlayabileceğini tartışacağız.

Göz bebeği genişlemesi için her göze tek bir damla tropikamid uygulanır. Daha sonra, hayvan nazikçe kemirgen hizalama aşamasına yerleştirilir. Fare, gözü açıkta bırakacak şekilde ayarlanır ve burun tutucu ve sırtın üzerine nazikçe yerleştirilmiş bir laboratuvar bandı parçası kullanılarak sabitlenir.

Daha sonra, nemlendirmek için göze bir damla kayganlaştırıcı uygulanır ve fazla sıvı, filtre kağıdı çubukları kullanılarak dikkatlice çıkarılır. Son olarak, temel OCT görüntüleme için sahne alanı OCT cihazının önünde hizalanır. İn vivo spektral alan optik koherens tomografi görüntüleme, herhangi bir retina anormalliğinin olmadığını doğrulamak için lazer uygulamasından önce başlangıçta yapılır.

Fareyi yavaşça tutucudan çıkarın. Korneayı aplanize etmek için bir kapak fişine bir damla Viscotears Jel damlatın. Fareyi optik sinir başı merkezde olacak şekilde yönlendirin ve lazer ışınını retina pigment epiteline odaklayın.

Optik sinirin etrafındaki saat dört, sekiz ve 12 pozisyonlarında retina kan damarlarından kaçınarak üç lazer atışı yapın. Tüm lazer çekimlerinden sonra herhangi bir retina kanaması olup olmadığını kontrol edin. Daha önce olduğu gibi, fareyi tutucuya hizalayın ve Bruch zarının hasarını doğrulamak için floresein anjiyografi ve OCT görüntüleme yapın.

Floresein anjiyografi için, öncelikle lazerin uygulandığı bölgeleri görselleştirmeye izin veren kızılötesi yansıtma modunu kullanarak lazer yanık alanlarına odaklanın. Fare göz pozisyonunu değiştirmeden yaklaşık 20 gram fare vücut ağırlığı için 0,1 mililitre% 5 floresein sodyum tuzunu dikkatlice enjekte edin. Yaklaşık her 30 saniyede bir, koroid seviyesinde ve retina seviyesinde floresein anjiyografi görüntüleri almaya başlayın.

OCT görüntüleme için gözü daha önce olduğu gibi hizalayın ve görüntülemeye başlayın. SD-OCT sinyalinin ortalamasının alınması, bu dizide gösterildiği gibi ayrıntılı retina morfolojisini daha iyi görselleştirmeye yardımcı olur. SD-OCT görüntüleme gerçekleştirildikten sonra, fareyi tutucudan dikkatlice çıkarın.

Her iki göz için kayganlaştırıcı sürün. Bu noktada, medetomidin, atipamezol için alfa-2 antagonistinin deri altı enjeksiyonu ile anesteziyi tersine çevirmeyi seçebilir veya anesteziden hayvan iyileşmesini bekleyebilirsiniz. Anestezi uygulanmış hayvanlarda beş, 10 ve 14. günlerde in vivo SD-OCT ve FA görüntülemeyi tekrarlayın.

Retina kalınlığı ölçümleri için InVivoVue Diver yazılımının otomatik segmentasyon özelliğini kullanın. Sağlıklı retina için toplam retina kalınlığı, sinir lifi tabakasından RPE'ye kadar tüm tabakaların kalınlığı olarak kabul edilir. Sağlıklı retinada, otomatik segmentasyon, bu örnekte görülebileceği gibi, tek tek retina katmanlarını doğru bir şekilde tespit edebilir.

CNV'nin bulunduğu yerlerde, retina kalınlığının manuel ölçümünün her CNV lezyon bölgesi için ayrı ayrı yapılması gerektiğini belirtmekte fayda var. Sinir lifi tabakasından RPE tabakasından geçen hayali bir çizgiye kadar. Bu dizi, CNV lezyonlarının mevcut olduğu bölgelerde manuel kalınlık ölçümleri için iş akışını gösterir.

Sinir lifi tabakası görüntünün en üstünde, koroid ise en altta yer alır. Fare veya dokunmatik yüzey kullanılarak, sinir lifi tabakasının ve koroidin sınırları manuel olarak belirlenir ve yazılım bu koordinatlara göre toplam retina kalınlığını otomatik olarak hesaplar. Bu şekil, koroid seviyesinde her 20 saniyede bir çekilen seri görüntüleri göstermektedir.

Birinci görüntü, kızılötesi yansıma modunda elde edilmiştir. Diğerleri ise intraperitoneal floresein enjeksiyonundan sonra. Birinci resimdeki beyaz oklar, resim 18'deki beyaz oklarla vurgulanan, daha sonraki zaman noktalarında floresein sızıntısını gösteren lazerli bölgelere işaret eder.

Bu görüntü, retina düzeyinde elde edilen FA seri görüntülemeyi göstermektedir. Resim 18'deki beyaz ok, resim 18'de daireler halinde özetlenen diğer ikisinden daha hızlı görünen floresein sızıntısını gösteren lazerli bir bölgeye işaret etmektedir. Bu özet şekil, SD-OCT görüntülerinin zaman seyrini göstermektedir.

Başlangıçta, lazerlemeden hemen sonra ve takip süresi beş, 10 ve 14. günlerde olur. Özetle, SD-OCT ve FA görüntüleme kullanılarak KNV lezyonlarının uzunlamasına in vivo görüntülenmesi için protokol, KNV patolojisinin ve retinal ödem varlığının hızlı, multimodal ve güvenilir bir şekilde sınıflandırılmasına olanak tanır. İlginiz için teşekkür ederiz.