Name: Vivo Multimodal görüntüleme ve fare lazer kaynaklı Choroidal neovaskülarizasyon Model analizi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 56 s
Description: Öğrenin fare lazer kaynaklı koroidal neovaskülarizasyon modelinde multimodal görüntüleme yöntemlerini. SD-OCT ve fluorescein anjiyografi ile retinal değişiklikleri izleyerek tedavi etkinliğini değerlendirin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar için mükemmel teknik ve videographic destek Yuliya Naumchuk (Chicago Loyola Üniversitesi) ve Agne Žiniauskaitė (Experimentica Ltd) teşekkür etmek istiyorum. Dr. Kaja'nın araştırma programı Dr John P. ve Therese E. Mulcahy donatılmış profesörlük Oftalmoloji, Chicago Loyola Üniversitesi tarafından desteklenir.

Bütün hayvanlar göre ARVO bildirimi kullanım, onaylanmış ve Finlandiya hayvan deney Yönetim Kurulu tarafından izlenen protokolleri kullanarak hayvanlar için Ophthalmic ve vizyon araştırma ve EC Direktifi 86/609/EEC hayvan deneyleri için tedavi edildi.
1. lazer kaynaklı fare KNV modeli 5
<ol><li>Hayvan macroscopically için herhangi bir anormallik gözünde bakarak kontrol edin.</li>
	<li>Fare tartın.</li>
	<li>Hesaplamak ve anestezi kullanmak için uygun bir miktarda hayvan, örneğin medetomidine (1 mg/kg), ketamin (75 mg/kg) ve distile su (% 0.9 NaCl çözüm) 1:1.5:2.5 veya ketamin (40-75 mg/kg), bir oranında karışımı ağırlık temel hazırlamak xylazine (5 mg/kg) ve 1:2. 5:1 oranında, distile su (% 0.9 NaCl çözüm); 20 g fare için 0.1 mL karışımı enjekte.</li>
	<li>Anestezi intraperitoneally enjekte et.</li>
	<li>Hayvan anestezi kadar yer fare geri içine belgili tanımlık kafes ve bekle. Fare düzgün bir pedal refleks eksikliğinden anestezi onaylayın.</li>
	<li>Lazer güvenlik kişisel koruyucu ekipman kullanımı olun.</li>
	<li>Slit lamba ve 532 nm diode lazer açın.</li>
	<li>Kafes ve Isıtma yastığını üzerinde yer fareyi kaldırın.</li>
	<li>Tropicamide bir damla Gözbebeği genişlemesi için geçerlidir. Tam (3 mm) Gözbebeği genişlemesi için 3-5 dk beklemeye.</li>
	<li>Fare slit lamba sahnesinde yerini.</li>
	<li>Bir damla göz sıvı jel bir coverslip için applanate kornea üzerine yerleştirin.</li>
	<li>Fare göz Merkezi görme sinirine kafasıyla gelecek şekilde yönlendirin.</li>
	<li>Lazer güç 100'e ayarlamak mW, süresi 100 MS ve nokta boyutu 50 µm için.</li>
	<li>Lazer ışını retina pigment epiteli (RPE) odaklanmak.</li>
	<li>Üç lazer atış bir göz retina damarları 4, 8 ve 12 yönünde konumlarını optik sinir, etrafında, ideal olarak sırasıyla kaçınarak olun. Sonra tüm çekimleri retinal kanama olmaması için lazer göz fundus inceleyin. Kontralateral göz sigara lazerle denetimi olarak hizmet vermektedir.</li>
	<li>Coverslip ve yer fare geri Isıtma yastığını atmak.</li>
	<li>PEG jel damla bir damla her iki gözde uygulanır.</li>
</ol>2. SD-Ekim 6,7
<ol><li>Fare kemirgen hizalama sahne içine yerleştirin ve baş hareketsiz.</li>
	<li>SD-Ekim (örneğin, Bioptigen/Leica Envisu R2200) göz yüz sistem objektif vivo içinde görüntüleme için X ve Y-seviyeli denetleyicilerini kullanarak hizalayın.</li>
	<li>Bruch'ın membran sonları doğrulamak için SD-Ekim taramalar: SD-Ekim bütün göz tarar kez lazerle sitelerinde başvuru satırı el ile taşımak. Bruch'ın membran sonları (bkz. şekil 1) lazerle alanlarda açıkça görünür olmalıdır.</li>
</ol>3. floresein anjiyografi 7,8,9
<ol><li>Fare ile sahibi çıkarın ve SK sisteminde (örneğin, Heidelberg Spectralis HRA2) yerleştirin.</li>
	<li>Lazer odak optik sinir izleme pencerenin ortasında başkanı ile kızılötesi yansıma modunu kullanarak göz fundus alanlarında yakmak.</li>
	<li>0.1 mL % 5 fluoresein sodyum tuz 20 gr fare subkutan veya intraperitoneally enjekte.</li>
	<li>Choroidal düzeyde odak.</li>
	<li>Fotoðraf choroidal odak seviyesinden.</li>
	<li>Retina düzeyinde yeniden odaklanın ve fotoðraf.</li>
	<li>30 s ve Yinele adımları için 3,4-3.6 bekleyin.</li>
	<li>Fare sahibinden çıkarın ve Isıtma yastığını yerleştirin.</li>
	<li>Ters anestezi tarafından α2-antagonisti medetomidine, atipamezole (0.5 mg/kg, IP) veya anestezi hayvan kurtarma için bekleyin.</li>
	<li>In vivo SD-Ekim ve SK görüntüleme imzalat hayvanlarda takip günlerini 5, 10 ve 14 üzerinde yineleyin.</li>
</ol>4. KNV sınıflandırma
<ol><li>Sınıf Bruch'ın membran OCT görüntüleri ve choroidal SK görüntüleri hemen aşağıdaki gibi gün 0 lasering sonra alınan hasar: 0 - Bruch'ın membran hasar değil 1 - Bruch'ın membran başarılı hasar</li>
	<li>Sınıf KNV varlığı gibi bir dizi retina SK resmi olarak aşağıdaki floresein sinyal dinamikleri karşılaştırarak sızıntı vardı lazerle noktalardan: 0 - retina normal görünüm 0.5 - zayıf boyama kaçağı 1.0 - Sızıntılı KNV alanları Not: OCT görüntüleme ek onay KNV veya şüpheli SK nerede OCT görüntülerde intraretinal sıvı varlığını KNV sınıflandırma öneririz kullanın.</li>
</ol>5. retina kalınlığı ölçümleri
<ol><li>Bir otomatik bölümleme yazılımı retina kalınlığı ölçümleri için kullanın. Toplam retina kalınlık, Sinir lifi tabakası RPE (sağlıklı ölçüm siteler) veya hayali bir çizgi RPE hasar (lazerle siteler) sitenin etrafına bağlanan tüm katmanlardan kalınlığı olarak kabul edilir sağlamak (Ayrıca bkz: Şekil 7).</li>
</ol>

<ol><li>Dobi, E. T., Puliafito, C. A., Destro, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+model+of+experimental+choroidal+neovascularization+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Ophthalmol.+Chic.+Ill+1960%22%5BJournal%5D)">A new model of experimental choroidal neovascularization in the rat.</a> Arch. Ophthalmol. Chic. Ill 1960. 107, 264-269 (1989).</li>
<li>Tobe, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+neovascularization+in+mice+with+overexpression+of+vascular+endothelial+growth+factor+in+photoreceptors%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">Evolution of neovascularization in mice with overexpression of vascular endothelial growth factor in photoreceptors.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 39, 180-188 (1998).</li>
<li>Seo, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dramatic+inhibition+of+retinal+and+choroidal+neovascularization+by+oral+administration+of+a+kinase+inhibitor%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Dramatic inhibition of retinal and choroidal neovascularization by oral administration of a kinase inhibitor.</a> Am. J. Pathol. 154, 1743-1753 (1999).</li>
<li>Grossniklaus, H. E., Kang, S. J., Berglin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+choroidal+and+retinal+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Prog.+Retin.+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Animal models of choroidal and retinal neovascularization.</a> Prog. Retin. Eye Res. 29, 500-519 (2010).</li>
<li>Shah, R. S., Soetikno, B. T., Lajko, M., Fawzi, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Mouse+Model+for+Laser-induced+Choroidal+Neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A Mouse Model for Laser-induced Choroidal Neovascularization.</a> J Vis Exp. (106), e53502(2015).</li>
<li>Giani, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+evaluation+of+laser-induced+choroidal+neovascularization+using+spectral-domain+optical+coherence+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+Ophthalmol.+Vis.+Sci%22%5BJournal%5D)">In vivo evaluation of laser-induced choroidal neovascularization using spectral-domain optical coherence tomography.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 3880-3887 (2011).</li>
<li>Gong, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+an+Image-Guided+Laser-Induced+Choroidal+Neovascularization+Model+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Optimization of an Image-Guided Laser-Induced Choroidal Neovascularization Model in Mice.</a> PloS One. 10, e0132643(2015).</li>
<li>Sheets, K. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotectin+D1+attenuates+laser-induced+choroidal+neovascularization+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Vis%22%5BJournal%5D)">Neuroprotectin D1 attenuates laser-induced choroidal neovascularization in mouse.</a> Mol. Vis. 16, 320-329 (2010).</li>
<li>Hoerster, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In-vivo+and+ex-vivo+characterization+of+laser-induced+choroidal+neovascularization+variability+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Graefes+Arch.+Clin.+Exp.+Ophthalmol.+Albrecht+Von+Graefes+Arch.+Klin.+Exp.+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">In-vivo and ex-vivo characterization of laser-induced choroidal neovascularization variability in mice.</a> Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. Albrecht Von Graefes Arch. Klin. Exp. Ophthalmol. 250, 1579-1586 (2012).</li>
<li>Sulaiman, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Simple+Optical+Coherence+Tomography+Quantification+Method+for+Choroidal+Neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Ocul.+Pharmacol.+Ther.+Off.+J.+Assoc.+Ocul.+Pharmacol.+Ther.+Off.+J.+Assoc.+Ocul.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">A Simple Optical Coherence Tomography Quantification Method for Choroidal Neovascularization.</a> J. Ocul. Pharmacol. Ther. Off. J. Assoc. Ocul. Pharmacol. Ther. Off. J. Assoc. Ocul. Pharmacol. 31, 447-454 (2015).</li>
</ol>

Yazar Symantas Ragauskas, doktora bir çalışan (bilim) ve hissedar Teklifler araştırma hizmetleri bu makalede kullanılan preklinik KNV modeli istihdam sözleşme Experimentica Ltd. ' dir.
Eva Kielczewski bir çalışan (araştırma uygulamaları mühendis, OCT) Bu makalede kullanılan SD-Ekim sistemleri üretir Leica Mikrosistemlerin temelleri yazarıdır.
Yazar Joseph Vance'in bir çalışandır (NA OCT satış direktörü) Bu makalede kullanılan SD-Ekim sistemleri üretir Leica Mikrosistemlerin temelleri. Joseph Vance'in Başkan ve yönetim müdürü Spective, LLC da.
Yazar Simon Kaja, doktora Danışmanı Scientific Müdürü ve hissedar, Experimentica Ltd., teklifler araştırma hizmetleri, sözleşme preklinik sözleşme araştırma kuruluşu preklinik KNV modeli bu makalede kullanılan dahil olduğunu. Simon Kaja, doktora da CEO K & bilimsel P, LLC, danışmanlık firması, Yaşam Bilimleri ve Dr. John s. ve Therese E. Mulcahy donatılmış Profesör Chicago Loyola Üniversitesi, Stritch tıp Fak., Oftalmoloji olarak hizmet vermektedir. Bu düzenleme koşulları incelenmeli ve çıkar çatışması politikasına uygun olarak Chicago Loyola Üniversitesi tarafından onaylanmalıdır.
Yazar Giedrius Kalesnykas, doktora bir çalışan (CEO) ve teklifler araştırma hizmetleri bu makalede kullanılan preklinik KNV modeli istihdam sözleşme Experimentica Ltd. hissedarı olduğunu.

Multimodal görüntüleme KNV patoloji değerlendirme için değerli araçlar sunar. Burada SK, oluşan bir görüntüleme Protokolü sunulan SD-Ekim ve KNV patoloji hızlı, tekrarlanabilir ve güvenilir değerlendirilmesi için otomatik bölümleme. Lazer yönetim doğrulandı sonra Bruch'ın membran bir mola. Buna ek olarak, SD-Ekim bu aşamada da sonuçları yorumu yıkmak olası intraretinal ve subretinal kanama hemen görselleştirme izin. Retina sızıntıları floresein sinyal SK görüntülerden göre kademeli. SD-Ekim KNV patoloji daha ayrıntılı bi...

Başarılı ilk insan KNV Rodents patoloji taklit girişimi neredeyse otuz yıl önce uzun-Evans fareler1Kripton lazer ile gösterilmiştir. Bundan sonra bir Kripton lazer Bruch'ın membran en popüler fare gerginliği, C57BL/6J2,3,4kırmak için kullanıldı. KNV indüksiyon başarı oranını SK ve histolojik lekeleri ile doğrulandı. EKM gibi noninvaziv görüntüleme yöntemleri, hızlı bir gelişme alanı kemirgen Preklinik modellerin büyüme destekledi. Aynı göz içinde birden çok kez noktalarda retina morfolojik değişiklikler önemli ölçüde izleme olanağı hayvan kullanımı azaltma için katkıda bulunur ve deneysel çalışmalarda verimliliği artırır. KNV lezyonların histolojik değerlendirme oldukça basittir ve anormal damar büyüme lazer yönetim, resim alma ve alan/hacim tahmini bir görüntü analiz yazılımı kullanarak site etrafında etiketleme gerektirir. Buna ek olarak, daha karmaşık analizleri KNV patoloji ve onun yorumunu vivo içinde görüntüleme yöntemleri tanıtmak.
Burada SK, SD-Ekim, kullanarak sınıf indüksiyon, ilerleme ve gerileme KNV nispeten hızlı ve basit bir yöntem mevcut ve fare otomatik bölümleme yöntem lazer kaynaklı KNV modeli.

<table><tbody><tr><td>Medetomidin (ticari adı Domitor)</td><td>Orion</td><td>Vnr 01 56 02</td><td>Anestezi</td></tr><tr><td>Ketamin</td><td>Intervet</td><td>Vnr 51 14 85</td><td>Anestezi</td></tr><tr><td>%0,9 NaCl</td><td>B Braun</td><td>357 0340</td><td>Anestezi</td></tr><tr><td>Xylazine (ticari adı Rompun vet)</td><td>Bayer</td><td>vnr 14 89 99</td><td>Anestezi</td></tr><tr><td>Tropicamide</td><td>Santen</td><td>Vnr 04 12 36</td><td>Mydriatic ajan</td></tr><tr><td>Viscotears</td><td>Alcon</td><td>Vnr 44 54 81</td><td>Yağlayıcı</td></tr><tr><td>Systane</td><td>Alcon</td><td>&nbsp;-</td><td>Yağlayıcı</td></tr><tr><td>%5 Floresein sodyum tuzu</td><td>Sigma Aldrich</td><td>F6377-100G</td><td>Floresan ajan</td></tr><tr><td>Atipamezol (ticari adı Antisedan)</td><td>Orion</td><td>Vnr 47 19 53</td><td>Anestezi</td></tr></tbody></table>

vivo multimodal görüntüleme ve fare lazer kaynaklı choroidal neovaskülarizasyon model analizi

In Vivo Multimodal Imaging and Analysis of Mouse Laser-Induced Choroidal Neovascularization Model

Choroidal neovaskülarizasyon (KNV) lazer kaynaklı yaşa bağlı makula dejenerasyonu (AMD) ıslak şeklinde taklit etmek için köklü bir modeldir. Bu protokol için amacımız neovasküler süreçleri, ama oldukça multimodal boyuna elde edilebilir güçlü bilgi odaklanmak tetiklemek için değil, sadece teknik konuları lazer kaynaklı lezyonlar oluşturma üzerinden okuyucu rehberlik etmek içinde vivo takip süresi görüntüleme.
Lazer kaynaklı fare KNV modeli bir diyot lazer yönetim tarafından oluşturuldu. Multimodal vivo içinde görüntüleme teknikleri KNV indüksiyon, ilerleme ve gerileme izlemek için kullanılmıştır. İlk, spektral etki alanı optik Koherens tomografi (SD-Ekim) gerçekleştirilen hemen Bruch'ın membran bir mola doğrulamak için lasering sonra. Floresein anjiyografi (FA) kullanarak sonraki vivo içinde görüntüleme Bruch'ın membran choroidal düzeyinde alınan seri görüntüleri üzerinden başarılı hasarı doğruladı. KNV yayılması ve regresyon lasering sonra gün 5, 10 ve 14 boyuna takip SD-Ekim ve SK kullanılarak gerçekleştirildi. Basit ve güvenilir sızan KNV leasions SK görüntülerden, sınıflandırma sunulur. Otomatik bölümleme için KNV sitelerdeki retina kalınlığı ölçümü için el ile kalibre uygulama ile birlikte toplam retina kalınlık ölçüm yapılmasına izin ödem varlığı tarafsız değerlendirilmesi. Son olarak, histolojik KNV doğrulanması isolectin GS-IB4 choroidal flatmounts boyama kullanılarak gerçekleştirilir. Boyama thresholded ve isolectin-pozitif alan ImageJ ile hesaplanır.
Bu iletişim kuralı gibi hızlı, multimodal sağlar yüksek üretilen iş gibi tarama KNV patoloji gerektiren tedavi çalışmaları ve güvenilir KNV patoloji ve retina ödem sınıflandırılması özellikle yararlıdır. Buna ek olarak, yüksek çözünürlük SD-Ekim subretinal veya intraretinal sıvı birikimi gibi diğer patolojik işaretlerinden kayıt sağlayan. Ancak, bu yöntem bir olasılık el ile gerçekleştirilecek olan KNV cilt analizi SD-Ekim görüntüleri, otomatikleştirmek için sağlamaz.

Kabarcık veya subretinal hemen lasering sonra kanama her zaman görünür değil. Bu nedenle, SD-Ekim Bruch'ın membran hasar doğrulamak özellikle önemlidir. Şekil 1 lazer yönetim sonra farklı zaman noktalarda OCT görüntüleme bir örneği gösterilir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56173/56173fig1.jpg"> Resim 1 : OCT tr yüz göz fundus (VIP...

Burada, boyuna vivo içinde görüntüleme kullanışlılığı lazer kaynaklı choroidal neovaskülarizasyon farelerde morfolojik değişiklikler takip içinde mevcut.

Vivo Multimodal görüntüleme ve fare lazer kaynaklı Choroidal neovaskülarizasyon Model analizi

Laser-induced choroidal neovascularization (CNV) is a well-established model to mimic the wet form of age-related macular degeneration (AMD). In this ...

Neovasküler süreçler, yaygın olan birçok oküler patolojinin karakteristik bir özelliğidir. Bunların başında eksüdatif yaşa bağlı makula dejenerasyonu (kısaca Islak AMD), proliferatif diyabetik retinopati ve prematüre retinopatisi gelmektedir. Bu bozukluklar birlikte, dünya çapındaki yasal körlük vakalarının çoğunluğunu oluşturur ve vitreus kanaması ile neovasküler glokom gibi ek oküler komplikasyonlarla ilişkilidir.Bununla birlikte, yaygın olmalarına rağmen, oküler neovasküler bozukluklar için terapötik seçenekler sınırlıdır. AMD ve proliferatif diyabetik retinopati ile ilişkili neovaskülarizasyon için mevcut standart bakım, anjiyogenez ve neovaskülarizasyonun kritik bir mediyatörü olan vasküler endotelyal büyüme faktörü veya VEGF'ye karşı yöneltilmiş humanize antikorların intravitreal enjeksiyonudur. Ancak, hastalığın ilerlemesini durdurma ve fonksiyonel görmeyi iyileştirme konusundaki etkinliğine rağmen, intravitreal enjeksiyonlar maliyetlidir ve risklerden uzak değildir.Komplikasyonlar arasında enfeksiyonlar, endoftalmi, retina dekolmanı ve oküler hemoraji yer alabilir. Bu nedenle, etkili, güvenli ve daha düşük maliyetli yeni tedavi seçeneklerinin geliştirilmesine acil ihtiyaç vardır. Neovasküler bozukluklar için ilaç geliştirmeyi ilerletmek amacıyla, küçük hayvan modelleri kritik öneme sahiptir.Bu tür modellerin tekrarlanabilir olması, yerleşmiş ve doğrulanmış okumaları ve uç noktaları bulunması ve ideal olarak pozitif kontrol olarak hizmet edecek klinik olarak ilgili bir referans bileşik kullanması gerekir. Bu protokolde, hem CNV'ye katkıda bulunan patofizyolojik mekanizmaların incelenmesi hem de yeni anti-neovasküler ajanların geliştirilmesi için en yaygın kullanılan modellerden biri olan fare koroid neovaskülarizasyon veya CNV modelini sunacağız. CNV modelinde, argon lazer kullanılarak Bruch membranı yırtılır.Böylece koroidden köken alan neovasküler süreçler başlatılır. Spektral alan optik koherens tomografisi (kısaca SD-OCT) ile boylamsal in vivo görüntüleme ve flüoresein anjiyografinin kullanımı, CNV'nin proliferasyonunu ve regresyonunu takip etme imkanı sağlar. Bu sayede, yeni farmasötik müdahalelerin etkinliği ve zaman seyri değerlendirilebilir.Görüntü işlemedeki güncel gelişmeler, ayrıca retinal kalınlığın ölçümü için otomatik segmentasyona olanak tanıyarak ödem varlığını değerlendirmek için araştırmacı yanlılığından arındırılmış bir metodoloji sunmaktadır. Burada, fare CNV modelinde retinal tabakaların otomatik segmentasyonu için Leica Microsystems tarafından geliştirilen yeni InVivoVue Diver yazılımının kullanışlılığını tartışacağız. Son olarak, retinal bütün montajların histolojik analizinin bu modeldeki boylamsal in vivo görüntülemeyi nasıl tamamlayabileceğini ele alacağız.Pupilla dilatasyonu için her göze bir damla tropikamid uygulanır. Ardından, hayvan nazikçe kemirgen hizalama aşamasına yerleştirilir. Gözün açığa çıkması için fare ayarlanır ve burun tutucu ile sırtın üzerine nazikçe yerleştirilen bir parça laboratuvar bandı kullanılarak sabitlenir.Ardından, nemlendirme amacıyla göze bir damla yağlayıcı uygulanır ve fazla sıvı filtre kağıdı tamponlar kullanılarak dikkatlice temizlenir. Son olarak, bazal OCT görüntüleme için sahne OCT cihazının önüne hizalanır. Herhangi bir retinal anomali olmadığını doğrulamak amacıyla, lazer uygulaması öncesinde bazal düzeyde in vivo spektral alan optik koherens tomografi görüntülemesi gerçekleştirilir.Fareyi tutucudan nazikçe çıkarın. Korneayı düzleştirmek için bir lamelin üzerine bir damla Viscotears Gel damlatın. Fareyi, optik sinir başı merkezde olacak şekilde konumlandırın ve lazer ışınını retinal pigment epiteline odaklayın.Optik sinirin etrafındaki saat dört, sekiz ve 12 konumlarında, retinal kan damarlarından kaçınarak üç lazer atışı yapın. Tüm lazer atışlarından sonra, herhangi bir retinal kanama olmadığını doğrulamak için gözün sertliğini kontrol edin. Daha önce olduğu gibi, fareyi tutucuya hizalayın ve Bruch membranının hasar gördüğünü onaylamak için floresan anjiyografi ve OCT görüntüleme gerçekleştirin.Floresan anjiyografi için, öncelikle lazerin uygulandığı bölgelerin görselleştirilmesini sağlayan kızılötesi yansıma modunu kullanarak lazer yanığı alanlarına odaklanın. Fare gözünün konumunu değiştirmeden, yaklaşık 20 gram fare vücut ağırlığı için 0,1 mililitre %5 floresein sodyum tuzu dikkatlice enjekte edin. Yaklaşık her 30 saniyede bir, koroid düzeyinde ve retina düzeyinde floresan anjiyografi görüntüleri almaya başlayın.Gözü daha önce olduğu gibi OCT görüntüleme için hizalayın ve görüntülemeye başlayın. Bu sekansta gösterildiği gibi, SD-OCT sinyalinin ortalamasını almak, ayrıntılı retinal morfolojinin daha iyi görselleştirilmesine yardımcı olur. SD-OCT görüntüleme tamamlandıktan sonra, fareyi tutucudan dikkatlice çıkarın.Her iki göze kayganlaştırıcı uygulayın. Bu noktada, medetomidin için alfa-2 antagonisti olan atipamezolu deri altına enjekte ederek anesteziyi geri çevirmeyi seçebilir veya hayvanın anesteziden kendiliğinden uyanmasını bekleyebilirsiniz. Anestezili hayvanlarda in vivo SD-OCT ve FA görüntülemesini takip günleri olan beşinci, onuncu ve on dördüncü günlerde tekrarlayın.Retinal kalınlık ölçümleri için InVivoVue Diver yazılımının otomatik segmentasyon özelliğini kullanın. Sağlıklı retinada toplam retinal kalınlık, sinir lifi tabakasından RPE'ye kadar tüm tabakaların kalınlığı olarak kabul edilir. Bu örnekte görüldüğü gibi, sağlıklı retinada otomatik segmentasyon, bireysel retinal tabakaları doğru bir şekilde tespit edebilir.CNV'nin mevcut olduğu bölgelerde, her bir CNV lezyon sahası için retinal kalınlık ölçümünün manuel olarak ayrı ayrı gerçekleştirilmesi gerektiğini belirtmekte fayda vardır. Ölçüm, sinir lifi tabakasından RPE tabakasından geçen hayali bir hatta kadar yapılır. Bu dizi, CNV lezyonlarının bulunduğu bölgelerdeki manuel kalınlık ölçümleri için iş akışını göstermektedir.Görüntünün üst kısmında sinir lifi tabakası, alt kısmında ise koroid yer almaktadır. Fare veya dokunmatik yüzey kullanılarak sinir lifi tabakasının ve koroidin sınırları manuel olarak belirlenir ve yazılım bu koordinatlara dayanarak toplam retinal kalınlığı otomatik olarak hesaplar. Bu şekil, koroid düzeyinde her 20 saniyede bir alınan ardışık görüntüleri göstermektedir.Birinci görüntü kızılötesi yansıma modunda elde edilmiştir. Diğerleri ise intraperitoneal floresein enjeksiyonundan sonra alınmıştır. Birinci görüntüdeki beyaz oklar, lazer uygulanan bölgeleri göstermektedir; bu bölgeler 18. görüntüdeki beyaz oklarla vurgulandığı üzere daha sonraki zaman noktalarında floresein sızıntısı göstermektedir.Bu görüntü, retinal düzeyde elde edilen FA seri görüntülemesini göstermektedir. Görüntü 18'deki beyaz ok, görüntü 18'de dairelerle çevrelenen diğer ikisinden daha hızlı ortaya çıkan floresein sızıntısını gösteren lazerli bir bölgeyi işaret etmektedir. Bu özet şekil, SD-OCT görüntülerinin bir zaman çizelgesini göstermektedir.Başlangıçta, lazerleme işleminden hemen sonra ve beşinci, 10. ve 14. günlerdeki takip zaman noktalarında. Özetle, SD-OCT ve FA görüntüleme kullanılarak CNV lezyonlarının boylamsal in vivo görüntülemesine yönelik protokol, CNV patolojisinin ve retinal ödem varlığının hızlı, multimodal ve güvenilir bir şekilde sınıflandırılmasına olanak tanır. İlginiz için teşekkür ederiz.

in-vivo-multimodal-imaging-analysis-mouse-laser-induced-choroidal

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

In vivo biyolüminesans ve manyetik rezonans görüntüleme (i) ve (ii) post mortem histolojik analiz: Bu makale ile kemirgen beyinde hücresel greft multimodal görüntüleme için optimize edilmiş olaylar dizisi anlatılmaktadır. Tek bir hayvan bu görüntüleme yöntemleri birleştirerek, yüksek çözünürlüklü, duyarlılık ve özgüllük ile hücresel greft değerlendirilmesine olanak tanımaktadır.

Fareler ve Merkezi Sinir Sisteminde Kök Hücre İmplantasyonu Multimodal Görüntüleme

Kaynak: Bosco, A.,  et al.  Nörodejenerasyon Sırasında Retinal Mikroglial Aktivasyonun İn Vivo Dinamiği: Fare Glokomunda Konfokal Oftalmoskopik Görüntüleme ve Hücre Morfometrisi. J. Vis. Uzm. (2015) Bu video, bir fare glokom modelinde retinal mikroglianın in vivo görüntülemesini göstermektedir. Floresan protein eksprese eden retinal mikrogliaya sahip transgenik bir fare, bir oftalmoskop altına yerleştirilir. Kızılötesi aydınlatma, optik sinir başını (ONH) bulmak için kullanılır ve odak düzlemi,...

Glokomun Fare Modelinde Retinal Mikroglia'nın İn vivo Görüntülenmesi

Burada, neovasküler yaşa bağlı makula dejenerasyonunun (AMD) vasküler özelliklerini yeniden yaratan deneysel bir model olan fare lazer kaynaklı koroidal neovaskülarizasyon (CNV) protokolünü sunuyoruz. Bir kez ustalaştıktan sonra, çeşitli deneysel önlemleri test etmek için bir model sistem olarak CNV'yi güvenilir ve etkili bir şekilde indükleyebilir.

Lazer kaynaklı Koroid Neovaskülarizasyonlarında A Fare Modeli

Bu protokolü nasıl yüksek çözünürlüklü spektral etki alanı optik Koherens tomografi gibi görüntüleme teknikleri açıklar ve lazer ophthalmoscopy tarama bir oftalmik görüntüleme platformu üzerinde bilgi edinme sistemiyle küçük Rodents yararlı olabilir dağıtım, hücre sırasıyla retina kalınlığı ve mikroglial.

Vivo Tayf alanlı optik Koherens tomografi ve lazer Ophthalmoscopy tarama Cx3cr1gfp/gfp muhabir farelerin görüntüleme

Burada sunulan canlı fare oküler yüzey görüntüleme için bir multifoton mikroskobik platformdur. Floresan transgenik fare hücre çekirdekleri, hücre zarları, sinir lifleri ve oküler yüzey içinde kılcal damarların görüntülenmesi sağlar. Kolaj nasyonal yapılardan elde edilen doğrusal olmayan ikinci harmonik nesil sinyalleri stromal mimariler için etiketsiz görüntüleme sağlar.

Fare Kornea ve Konjonktiva Canlı Görüntüleme için Özel Multifoton Mikroskop platformu

İn vivo görüntüleme, sağlık ve hastalıkta biyoloji çalışmaları için güçlü bir araçtır. Bu protokol, standart iki foton mikroskobu ile fare retinasının transpupiller görüntülemesini tanımlar. Ayrıca, retinanın birden fazla hücresel kohortunu floresan olarak etiketlemek için farklı in vivoimaging yöntemleri göstermektedir.

Transpupiller İki Foton Fare Retinasının In vivo Görüntülenmesi

Burada, gül bengal kullanarak retinal ven tıkanıklığı için optimize edilmiş bir protokol ve genetiği değiştirilmiş suşlarda tekrarlanabilirliğini en üst düzeye çıkarmak için önerilerle lazer rehberliğinde retinal görüntüleme mikroskop sistemi açıklanmaktadır.

Değişkenliği Sınırlamak için Retinal Ven Tıkanıklığı Fare Modelinin Optimizasyonu

Burada, farelerde retinopatinin tanısını ve kantitatif ölçümünü kolaylaştırmak için optik koherens tomografi kullanan bir in vivo görüntüleme tekniğini tanımladık.

Optik Koherens Tomografinin Retinopatinin Bir Fare Modeline Uygulanması

Burada, Retinal Ven Tıkanıklığı (RVO) çalışmasında floresein anjiyografi (FA) ve optik koherens tomografi (OCT) görüntüleri için üç veri analizi protokolü sunulmuştur.

İn vivo Tekrarlanabilirliği Artırmak için Fare Retinasında Vasküler Yaralanma Okumaları

Bu protokol, optik koherens tomografi kullanılarak murin koroidine melanomun implantasyonu ve değerlendirilmesini tanımlamaktadır.

Murin Koroidinde Melanomun İmplantasyonu ve Optik Koherens Tomografi ile Değerlendirilmesi

Öğrenin fare lazer kaynaklı koroidal neovaskülarizasyon modelinde multimodal görüntüleme yöntemlerini. SD-OCT ve fluorescein anjiyografi ile retinal değişiklikleri izleyerek tedavi etkinliğini değerlendirin.

Vivo Multimodal görüntüleme ve fare lazer kaynaklı Choroidal neovaskülarizasyon Model analizi

Daha fazla video keşfet