Görselleştirme ve Oligodendrocyte organelleri Adeno ilişkili virüs ve Confocal mikroskobu kullanılarak Organotypic beyin dilimleri içinde canlı görüntüleme

Bu viral transdüksiyon ve hızlandırılmış kaydın genel amacı, organotipik beyin dilimlerinde oligodendrosit mitokondrinin hareketini görselleştirmektir. Bu yöntem, oligodendrosit alanındaki temel soruları yanıtlamaya yardımcı olabilir. Oligodendrositlerin ve organellerinin yerel ortamdaki değişikliklere nasıl tepki verdiği gibi. Bu tekniğin en büyük avantajı, tüm farklı beyin hücrelerinin bulunduğu ve oligodendrositlerin kompakt miyelin ürettiği bir preparatta oligodendrosit yapısı ve organel dinamikleri hakkında detaylı bilgi vermesidir. Oligodendrositleri in vitro olarak yedinci günde dilim kültürlerinde transdüksiyon yapın. İlk olarak, dilim başına 1.3 mikrolitre seyreltilmiş AAV çizin. Pipet ucunun dışının kuru olduğundan emin olarak, pipet ucuyla dilime dokunmadan pipeti korteksin üzerinde mümkün olduğunca yakın tutun ve solüsyonu yavaşça pipetten dışarı itin. Solüsyon dilime dokunduğunda, solüsyonu tüm korteks alanına yaymak için pipet ucunu korteksin üzerine getirin. Bir tabaktaki tüm dilimler dönüştürüldükten sonra, tabağı inkübatöre geri koyun ve ardından işlemi diğer tabaklar üzerinde tekrarlayın. Floresan işaretleyicilerin ifadesi için dilimleri inceleyin ve floresan işaretleyicilerin ifade düzeyleri yeterli olduğunda ve dilimler sağlıklı göründüğünde dilimleri görüntüleyin. 45'lik bir şekilde bükülmüş şırınga iğnelerini takmak için modelleme kili kullanarak görüntüleme banyosunu kurmaya başlayın