RESEARCH
Peer reviewed scientific video journal
Video encyclopedia of advanced research methods
Visualizing science through experiment videos
EDUCATION
Video textbooks for undergraduate courses
Visual demonstrations of key scientific experiments
BUSINESS
Video textbooks for business education
OTHERS
Interactive video based quizzes for formative assessments
Products
RESEARCH
JoVE Journal
Peer reviewed scientific video journal
JoVE Encyclopedia of Experiments
Video encyclopedia of advanced research methods
EDUCATION
JoVE Core
Video textbooks for undergraduates
JoVE Science Education
Visual demonstrations of key scientific experiments
JoVE Lab Manual
Videos of experiments for undergraduate lab courses
BUSINESS
JoVE Business
Video textbooks for business education
Solutions
Language
tr_TR
Menu
Menu
Menu
Menu
DOI: 10.3791/56244-v
Karl T. Hansson1, Tobias Skillbäck1,2, Elin Pernevik1, Jessica Holmén-Larsson1, Gunnar Brinkmalm1, Kaj Blennow1,2, Henrik Zetterberg1,2,3, Johan Gobom1,2
1Inst. of Neuroscience and Physiology, Dept. of Psychiatry and Neurochemistry,Sahlgrenska Academy at University of Gothenburg, 2Clinical Neurochemistry Laboratory,Sahlgrenska University Hospital, 3Department of Molecular Neuroscience,UCL Institute of Neurology
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This study presents a method for mass spectrometric analysis of endogenous peptides in human cerebrospinal fluid (CSF). By utilizing molecular weight cut-off filtration, chromatographic pre-fractionation, and mass spectrometric analysis, the research significantly expands the known CSF peptidome, enhancing the identification of low abundance peptides that could serve as biomarkers for neurodegenerative disorders.
Endojen peptidler insan beyin-omurilik sıvısı (bos) kitle spektrometrik analizi için bir yöntem sunulur. Moleküler ağırlık kesme filtrasyon, Kromatografik ön ayırma, kitle spektrometrik analizi ve peptid kimlik stratejileri sonraki bir arada istihdam ederek, yaklaşık on göre bilinen CSF peptidome genişletmek olası Önceki çalışmalar için.
Bu protokolün amacı, endojen peptitlerin LC-MS analizi için insan beyin omurilik sıvısı örneklerini hazırlamak ve analiz etmektir. LC-MS'den önce bir peptit ön fraksiyonlama adımı, tanımlanan peptitlerin sayısını arttırır ve nispeten düşük bolluktaki BOS peptitlerinin tespit edilmesini sağlar. BOS'taki endojen peptitler, kapsamlı bir şekilde araştırılmamış kalsiyum molekülleridir ve potansiyel olarak nörodejeneratif bozuklukların önemli yeni biyobelirteçlerini içerebilir. Bu yöntem, BOS peptidomunun kütle spektrometresi ile kapsamlı bir şekilde karakterize edilmesini sağlar. Bu yöntemin başlıca avantajları, düşük bolluktaki BOS peptitlerinin enjeksiyonunu mümkün kılması ve multipleks izobarik etiketleme teknikleriyle uyumlu olması ve klinik çalışmalar için uygulanabilir olmasıdır. Şimdiye kadar bu yöntemi esas olarak beyin omurilik sıvısının analizine uyguladık. Ancak, küçük değişikliklerle plazma ve doku örneklerinin analizi için de kullanılabileceğini gösteren ön verilerimiz var. 1.5 mililitre BOS alikotunu silindir karıştırıcı üzerinde oda sıcaklığında çözdürerek başlayın. Çözüldükten sonra, içeriği 10 mililitrelik polipropilen tüplere aktarın. Ve tamponlama maddesi olarak 80 mikrolitre bir molar TAB ekleyin. Daha sonra protein agregatlarını çözmek için 0.65 mililitre sekiz molar guanidinyum hidroklorür ekleyin ve oda sıcaklığında 10 dakika boyunca hafifçe girdap yapın. Daha sonra, 60 mikrolitre 200 milimolar sulu TCEP'de ve 55 ° C'de inkübe edin
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Related Videos
09:20
Related Videos
28.3K Views
09:26
Related Videos
15.9K Views
10:51
Related Videos
16.7K Views
07:08
Related Videos
8.2K Views
11:32
Related Videos
11.9K Views
14:48
Related Videos
7.6K Views
09:22
Related Videos
2.8K Views
09:00
Related Videos
3.7K Views
07:55
Related Videos
821 Views
09:47
Related Videos
23.8K Views