İdrar yolu Junction obstrüksiyonu kusurları Metilen mavisi boya enjeksiyonla değerlendirilmesi

Bu işlemin genel amacı, böbreklere metilen boya enjeksiyonu yoluyla idrar yolu bağlantılarının tıkanıklıklarını belirlemektir. Bu yöntem, üretal mesane bağlantısı gibi böbrek ve alt idrar yolu gelişim alanındaki önemli soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin en büyük avantajı, en kötü durumda kitle gelişiminde idrar yolu yapısını görselleştirmek için basit bir yöntem sunması ve idrar yolu gelişim analizine olanak sağlamasıdır.

Deneye başlamak için 0.1 gram metilen mavisi tozu ölçün. Metilen mavisini 10 mililitre 1x fosfat tamponlu tuzlu su veya PBS içinde çözün ve karışımı girdaplayın. Daha sonra, enjeksiyon sırasında tıkanmayı önlemek için mililitre metilen mavisi başına 10 miligram çözeltiyi bir şırınga filtresi ile filtreleyin.

Daha sonra üç mililitrelik tek kullanımlık bir şırınga ile steril bir kafa derisi damarı seti birleştirin ve şırıngayı üç mililitre filtrelenmiş metilen mavisi çözeltisi ile doldurun. Diseksiyon makasını ve forsepsleri %70 etanol ile temizleyin. E18.5 veya E19.5'te perinatal embriyoları toplamak için, önce karbondioksit inhalasyonu kullanarak hamile farelere ötenazi yapın.

Daha sonra NIH yönergelerine göre servikal çıkık yapın. Daha sonra hayvanın ventral karın yüzeyine% 70 etanol püskürtün. Daha sonra steril diseksiyon makası ve forseps kullanarak karın boşluğunu ventral olarak açın.

Tüm uterusu kaldırın ve uterus boynuzlarının uçlarında vücuttan ayırın. Daha sonra tüm uterusu bir petri kabında 1x PBS ile durulayın. Uterusu diseksiyon makası ile segmental olarak kesin ve embriyoları ve yumurta sarısı keselerini ortaya çıkarmak için plasental desiduayı diseksiyon forseps ile çıkarın.

Önce yumurta sarısı kesesini çıkarın ve ardından perinatal embriyoları serbest bırakmak için amniyotik zarı diseksiyon forsepsleri ile çıkarın. Embriyoyu diseksiyon makası ile dekapite edin. Embriyoyu, görüntüleme için bir dijital kamera ile donatılmış bir diseksiyon mikroskobu üzerinde ventral yüzeyi yukarı bakacak şekilde sabitleyin.

Genotipleme için kuyruğunu toplayın. Forseps kullanarak, embriyonun karın boşluğunu açmak için cildi dikkatlice yırtın. Daha sonra karaciğer, mide ve bağırsaklar gibi fazla organ ve dokuları forseps ile keserek veya dışarı çekerek böbrekleri, üreterleri ve dorsalde bulunan mesaneyi ortaya çıkaracak şekilde dikkatlice çıkarın.

Steril gazlı bez pedleri ile diseke edilen embriyodan fazla kanı emdirin ve ardından boya enjeksiyonuna devam edin. metilen mavisi çözeltisini iğne ucundan hidrostatik basınçla dışarı atarak iğne ve borudaki kabarcıkları çıkarın. Akışı başlatmak için boya solüsyonunu içeren şırıngayı iğne ucu seviyesinin üzerine kaldırın.

Ve sonra akışı durdurmak için şırıngayı indirin. Daha sonra, iğneyi proksimal üreterin yakınındaki renal pelvise yerleştirin ve yerleştirildikten sonra rahatsız etmemeye dikkat edin. İdrar yolu tıkanıklığını belirlemek için böbreğe boya enjeksiyonu yapın.

Renal pelvise bir iğne batırıldıktan sonra, bu testin başarısı içine, renal pelvise üretere doğru, ne böbrekten ne de kan damarına doğru bir iğne batırılmalıdır. Hidrostatik basınç sağlamak için şırıngayı yaklaşık 20 santimetre yukarı kaldırın ve 15 ila 16 mikrolitre boya çözeltisinin akmasına izin verin. Daha sonra, önce renal pelvisten başlayarak, daha sonra üreterin uzunluğunda ve son olarak mesane lümeninde boyanın mavi rengini izleyin.

Boya akışını durdurmak için şırıngayı yere yerleştirin ve iğneyi böbrekten çıkarın. Bir laboratuvar not defterinde böbreğin hidronefrozu, hidroüreter ve boya çözeltisinin son pozisyonunun bir kaydını yapın. Son olarak, kontralateral böbreğin enjeksiyonunu yapın ve boyanın toplam 20 saniye boyunca akmasına izin verin.

Stereo mikroskoba bağlı kamera ve görüntüleme programını kullanarak boya solüsyonu ile izlenen böbrek, üreter ve mesanenin görüntülerini alın. Bir böbreğe enjeksiyondan sonra, metilen mavisi boya renal pelvisten üreterden ve mesaneye akar ve üreter ve mesane lümeninde gözle görülür mavi bir renge neden olur. Her iki böbreğin enjeksiyonundan yaklaşık 20 saniye sonra daha uzun bir akış nedeniyle mesane lümeninde daha güçlü bir mavi belirir, bu da ikinci üriner sistemde idrar yolu kavşağı tıkanıklığının olmadığını gösterir.

Anormal şekilde genişlemiş bir hidroüreter enjekte edilirken, boya çözeltisinin son konumu belirsizdir. Ve üreterovezikal bileşke tıkanıklığı veya UVJO, mesane lümeninde boya olmamasına rağmen doğrulanamaz çünkü anormal hidroüreter ortada hasar görmüştür. Bu işlemi denerken, sağlam üriner sistem elde etmek için perinatal embriyoların boya kesesini hesaplamayı unutmamak önemlidir.

Ve boya akışını engellememek için kabarcıkları çıkarın.