Name: Vivo İnsan yağ elde edilen Mezenkimal kök hücrelerin sıçan diz osteoartrit modelinde floresan lipofilik membran boya ile izleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-10-08T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 31 s
Description: Keşfedin, insan yağ elde edilen mezenkimal kök hücrelerin sıçan diz osteoartrit modelinde DiD ile etiketlenip intraartiküler enjeksiyonla izlenmesini. Bu yöntem, hücre davranışlarını canlı görüntüleme ile değerlendirir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Çalışmada Shanghai yenilik (1402 H 294300) finansman bilim ve teknoloji Komisyonu, Shanghai Belediyesi (CN) Dr Wen Wang tarafından sponsor tarafından desteklenmiştir. Dr Guangdong Çu (Ulusal doku Mühendisliği merkezi Çin) onun teknik yardım ve bu el yazması için bilimsel tavsiyeler için teşekkür etmek istiyorum. Biz de Bay Huitang Xia (Shanghai dokuzuncu insanların hastane) teşekkür etmek için hayvan refah içinde onun yardım etmek istiyorum.

hayvan konular içeren yordamlar onaylanan yerel kurumsal hayvan bakım ve Etik Komitesi, tarafından hayvan acı en aza indirmek için bir çaba ile. Aşağıdaki iletişim kuralı kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) Shanghai dokuzuncu insanlar tarafından kabul edildi &#8217; hastane bağlı Shanghai JiaoTong Üniversitesi Tıp Fakültesi için iletişim kuralı ile s sayı [2017] 063.
 1. Surgically-Induced fare diz osteoartrit manken kurulması <ol><li>için bu cerrahi işlem, kullanım 8-12 hafta yaşlı erkek Sprague Dawley (SD) rats vücut ağırlığı 250 ve 300 g arasında</li>
	<li>40 mg/kg tiletamine ve kas içi enjeksiyon yolu ile 40 mg/kg zolazepam hayvanlarla anestezi.</li>
	<li>Hayvan sol yan pozisyonda bir ısıtmalı sahne alanı üzerine yerleştirin. Sağ diz iyice bir ustura ile tıraş. Cerrahi alan % 70 etanol tarafından takip % 10 providone-iyot solüsyonu ile dezenfekte, iki kez daha tekrarlayın ve sonra % 10 providone-iyot çözüm ile boyayın ve cerrahi bir yastık ile ameliyatsız alanı kapsayacak.</li>
	<li>Cerrahi bir neşter kullanmadan 2 cm kesi jointcapsules ortaya çıkarmak için yanal patellar tendon boyunca olun.</li>
	<li>Cerrahi neşter medial Kollateral bağ transect için kullanın. Menisküs femur doğru yansıtır.</li>
	<li>Steril % 0,9 Sodyum Klorür çözüm eklem kıkırdak yüzeyinde kıkırdak kurumasını önlemek için işlem sırasında damla.</li>
	<li>Medial Menisküs Forseps ile kapmak ve tibial ek bir neşter ( şekil 1A) ile dar noktasında Menisküs ile kesti. Kıkırdak yaralanmasına kaçının.</li>
	<li>4-0 absorbe dikiş ile ek kapsül kapatın.</li>
	<li>Kendine gelmek kadar cerrahi fareler izlemek.</li>
	<li>20 mg/kg gentamisin enfeksiyon ve ameliyat sonrası ağrı gidermek için kas içi bir rota üzerinden 0,05 mg/kg buprenorfin önlemek için enjekte.</li>
	<li>Fareler bir 12 h ışık/karanlık döngüsüne 3-8 hafta boyunca başlangıçlı KOA altında ısı kontrollü hayvan tesiste korumak. Hayvanlar devam ağrısı belirtileri devam ederse buprenorfin (0,05 mg/kg, sohbet) ve gentamisin (20 mg/kg, sohbet), bilhassa ağrı kesici almak.</li>
</ol> 2. Histoloji değerlendirme sıçan KOA Model <ol><li>kurban aşırı CO 2 inhalasyon (hayvan bilinçsizlik yapmak için Ekle Varolan yayına odasında karbon dioksit ile dakikada odası hacmi yaklaşık % 30 bir dolgu oranı ile rats içinde 2-3 dk. korumak CO2 akışı için en az 1 dk sonra solunum durur.) zaman puan (temsilcisi-den sonuçlanmak göstermek--dan 3-8 hafta arasında değişen KOA indüksiyon 8 hafta) sonra ameliyat. belirtilen</li> <li>deri ve kas diz eklemleri etrafında incelemek ve bir neşter ile diz eklemleri kesti.</li>
	<li>3 gün oda sıcaklığında %4 paraformaldehyde (PFA) diz eklem tamir. Daha sonra yaklaşık 4 hafta 4 ° C'de % 20 ethylenediaminetetraacetic asit (EDTA) örneklerinde decalcify ve 3 günde EDTA değiştirin. 
	Dikkat: Paraformaldehyde zehirlidir, uygun kişisel koruyucu donanımları (PPE), eldiven ve gözlük gibi.</li>
	<li>Bir otomatik doku işlemci kullanarak örnekleri kurutmak. Set menü floş bir döngü aşağıdaki gibi başlatın: % 70 etanol için 1 h; o zaman % 80 etanol ve % 95 etanol 1 h için sırasıyla; %2 100 etanol devredir 1s ardından; daha sonra Ksilen 1 h için iki kez her zaman ve her zaman alkol 3 kez 58 ° C'de 1 h için. 
	Dikkat: Ksilen toksik, çok uygun KKE, eldiven ve gözlük gibi giymek. 
	Not: İsteğe bağlı olarak, Coplin kavanozlar için otomatik doku işlemci olarak aynı kurulum ile el ile su kaybı kullanın.</li>
	<li>Olduğu gibi eklem yüzü medial yönünü yerleştirin ve merkezi gömülü dokusuyla parafin blok içine embed. 
	Not: İsterseniz, forseps parafin blok içine el ile örnekleri katıştır kullanın.</li>
	<li>Döner microtome tarafından 30 µm aralıkları ile 2 seri bölümler için 5 µm sagittal bölümleri medial kenar boşluğundan eklem kesmeye başlayın.</li>
	<li>Bölümleri cam slaytlarda dağ ve Ksilen içindeki slaytları deparaffinize. 2 seri bölümler arasındaki bir slayt Hematoksilen ile leke &#38; Eozin (H &#38; E) Boyama: % 0,1 Hematoksilen 15 dakika, % 1 Asetik asit çözüm için 10 s ve % 0,5 Eozin 10 dk için. Ve Safranin O/hızlı yeşil boyama ile diğer slayt leke: % 0,1 Hematoksilen 15 dk, %0.02 için hızlı yeşil 3 dk, % 1 Asetik asit çözüm 10 s ve %0,1 Safranin O 3 dakika süreyle 
	Dikkat: Ksilen toksik, eldiven, gözlük gibi uygun KKE giymek.</li>
	<li>Fareler 6 ' osteoartrit Araştırma Derneği International (OARSI) histopatoloji değerlendirme sistemi kullanarak lekeli slaytlar Puan edinildi.</li>
</ol> 3. Bir insan Mezenkimal Kök hücreleri floresan boya yaptım ile etiketleme <ol><li>hücre etiketleme çözüm % 100 etanol, 1 mM bir konsantrasyon hazırlamak yaptı. Hücre etiketleme çözüm ışıktan korumak ve 6 ay için oda sıcaklığında saklayın.</li>
	<li>HaMSCs Dulbecco Standart hücre kültür yordamlarda ile büyümek &#39; s modifiye kartal &#39; % 1 penisilin ve streptomisin ve %10 10 cm petri kabına içinde fetal buzağı serum (FCS) ile takıma s orta (DMEM).</li>
	<li>HaMSCs 2 mL % 0.25 tripsin ile 1 mM EDTA öncesinde yaklaşık %80 izdiham ile ayırmak.</li>
	<li>Tripsin 4 mL kültür orta ile etkisiz hale getirmek ve hücreleri 3 dakika oda sıcaklığında 800 x g de spin.</li>
	<li>Hücreleri 1 x 10 6 hücre/mL 5 mL serum serbest kültür Orta yoğunluk itibariyle askıya alma.</li>
	<li>Hücreleri 50 ekleyerek etiket µL yaptım 5 mL serum serbest kültür orta 50 dk. 37 ° C'de çözümde hücre etiketleme</li>
	<li>3 dakika süreyle 800 x g de etiketli hücreleri spin</li>
	<li>Hücreleri iki kez daha 5 mL fosfat tampon serum (PBS) vasıl 800 x g 3 dakika yıkayın.</li>
	<li>Cy5 filtre seti ile floresan mikroskop kullanarak etiketli haMSCs kontrol edin.</li>
	<li>Trypan mavi boyama ile hücreleri saymak ve hücrelerin içinde 100 µL PBS enjeksiyon için 10 6 x 2,5 elde.</li>
</ol> 4. Vivo Floresan parça haMSCs için Imaging <ol><li>sekiz hafta sonra ameliyat (Adım 1), anestezi KOA fareler tarafından kas içi enjeksiyon-25 mg/kg tiletamine ve 25 mg/kg zolazepam.</li>
	<li>Sağ diz iyice ortak alan ortaya çıkarmak için bir ustura ile tıraş. % 70 etanol ile ortak alanı dezenfekte.</li>
	<li>26 G şırınga iğne kullanarak enjekte 2.5 x 10 100 µL PBS üçgen alanının merkezinde askıya hücreleri etiketli 6 oluşan medial patellar bağ, medial femoral düzgün ve medial tibial düzgün (kenarında şekil 1B).</li>
	<li>Görüntüleme yazılımını açın ve görüntüleme sistemi içinde vivo bioluminescence başlatılamıyor.</li>
	<li>Pozisyon Rat sırtüstü pozisyon görüntüleme sistemi Merkezi aşamasında ve odasının kapısını kapatın.</li>
	<li>Kontrol &#34; floresan &#34; onay kutusunu ve Seç floresan filtre ayarlar 640 nm için uyarma ve 680 nm için emisyon ( şekil 2A).</li>
	<li>Select alan ö ayarla piksel binning orta (8), görüş, durdurmak F/2 ve pozlama zaman otomatik olarak. Optimum korumak Pozlama süresi tüm çalışma ( şekil 2A) arasında karşılaştırılabilir sonuçlar elde etmek için tutarlı.</li>
	<li>Anestezi kurtarma için monitör ve aşamada hayvan kaldırmak. 
	Not: Yer hayvan bir Isıtma yastığı üzerinde 2-3 sarılma katmanlarla kaplı.</li>
	<li>Floresan ( şekil 2B) ölçümü için radyant verimliliğini birimleri seçin. Faiz (ROI) analiz için bölgeleri seçin ve her resim ( şekil 2C) floresan sinyallerini ölçmek.</li>
	<li>İn vivo içinde düşsel sırayla haMSCs boyuna saklama eklemde çalışmaya her fare için yordamı yineleyin. 
	Not: Biz hayvanlar görüntüleme öneririz &#39; floresan sinyalleri tarafından içinde vivo görüntüleme sistemi her iki günde enjeksiyon sonra ilk hafta ve bir kez her hafta kadar sinyali tespit edilemez.</li>
</ol>

<ol><li>Loeser, R. F., Goldring, S. R., Scanzello, C. R., Goldring, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoarthritis%3A+a+disease+of+the+joint+as+an+organ%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Osteoarthritis: a disease of the joint as an organ.</a> Arthritis Rheum. 64 (6), 1697-1707 (2012).</li>
<li>Lane, N. E., Shidara, K., Wise, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoarthritis+year+in+review+2016%3A+clinical%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthritis+Cartilage%22%5BJournal%5D)">Osteoarthritis year in review 2016: clinical.</a> Osteoarthritis Cartilage. 25 (2), 209-215 (2017).</li>
<li>Wang, W., Cao, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+osteoarthritis+with+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+China+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Treatment of osteoarthritis with mesenchymal stem cells.</a> Sci China Life Sci. 57 (6), 586-595 (2014).</li>
<li>Burke, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+potential+of+mesenchymal+stem+cell+based+therapy+for+osteoarthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Therapeutic potential of mesenchymal stem cell based therapy for osteoarthritis.</a> Clin Transl Med. 5 (1), 27(2016).</li>
<li>Bendele, A. M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15758487">Animal models of osteoarthritis.</a> J Musculoskelet Neuronal Interact. 1 (4), 363-376 (2001).</li>
<li>Gerwin, N., Bendele, A. M., Glasson, S., Carlson, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+OARSI+histopathology+initiative+-+recommendations+for+histological+assessments+of+osteoarthritis+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthritis+Cartilage%22%5BJournal%5D)">The OARSI histopathology initiative - recommendations for histological assessments of osteoarthritis in the rat.</a> Osteoarthritis Cartilage. 18, Suppl 3. S24-S34 (2010).</li>
<li>Janusz, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+osteoarthritis+in+the+rat+by+surgical+tear+of+the+meniscus%3A+Inhibition+of+joint+damage+by+a+matrix+metalloproteinase+inhibitor%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthritis+Cartilage%22%5BJournal%5D)">Induction of osteoarthritis in the rat by surgical tear of the meniscus: Inhibition of joint damage by a matrix metalloproteinase inhibitor.</a> Osteoarthritis Cartilage. 10 (10), 785-791 (2002).</li>
<li>Li, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+human+adipose-derived+mesenchymal+stem+cell+tracking+after+intra-articular+delivery+in+a+rat+osteoarthritis+model%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">In vivo human adipose-derived mesenchymal stem cell tracking after intra-articular delivery in a rat osteoarthritis model.</a> Stem Cell Res Ther. 7 (1), 160(2016).</li>
<li>Zhou, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Administering+human+adipose-derived+mesenchymal+stem+cells+to+prevent+and+treat+experimental+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Administering human adipose-derived mesenchymal stem cells to prevent and treat experimental arthritis.</a> Clin Immunol. 141 (3), 328-337 (2011).</li>
<li>Desando, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intra-articular+delivery+of+adipose+derived+stromal+cells+attenuates+osteoarthritis+progression+in+an+experimental+rabbit+model%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Intra-articular delivery of adipose derived stromal cells attenuates osteoarthritis progression in an experimental rabbit model.</a> Arthritis Res Ther. 15 (1), 22(2013).</li>
<li>Riester, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+Studies+for+Use+of+Adipose+Tissue-Derived+Mesenchymal+Stromal%2FStem+Cells+in+a+Rabbit+Model+for+Osteoarthritis+to+Support+a+Phase+I+Clinical+Trial%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Safety Studies for Use of Adipose Tissue-Derived Mesenchymal Stromal/Stem Cells in a Rabbit Model for Osteoarthritis to Support a Phase I Clinical Trial.</a> Stem Cells Transl Med. 6 (3), 910-922 (2017).</li>
<li>Bai, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tracking+long-term+survival+of+intramyocardially+delivered+human+adipose+tissue-derived+stem+cells+using+bioluminescence+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Imaging+Biol%22%5BJournal%5D)">Tracking long-term survival of intramyocardially delivered human adipose tissue-derived stem cells using bioluminescence imaging.</a> Mol Imaging Biol. 13 (4), 633-645 (2011).</li>
<li>Wolbank, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Labelling+of+human+adipose-derived+stem+cells+for+non-invasive+in+vivo+cell+tracking%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Bank%22%5BJournal%5D)">Labelling of human adipose-derived stem cells for non-invasive in vivo cell tracking.</a> Cell Tissue Bank. 8 (3), 163-177 (2007).</li>
<li>Heymer, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iron+oxide+labelling+of+human+mesenchymal+stem+cells+in+collagen+hydrogels+for+articular+cartilage+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Iron oxide labelling of human mesenchymal stem cells in collagen hydrogels for articular cartilage repair.</a> Biomaterials. 29 (10), 1473-1483 (2008).</li>
<li>Hemmrich, K., Meersch, M., von Heimburg, D., Pallua, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applicability+of+the+dyes+CFSE%2C+CM-DiI+and+PKH26+for+tracking+of+human+preadipocytes+to+evaluate+adipose+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Cells+Tissues+Organs%22%5BJournal%5D)">Applicability of the dyes CFSE, CM-DiI and PKH26 for tracking of human preadipocytes to evaluate adipose tissue engineering.</a> Cells Tissues Organs. 184 (3-4), 117-127 (2006).</li>
<li>Shim, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacokinetics+and+in+vivo+fate+of+intra-articularly+transplanted+human+bone+marrow-derived+clonal+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Dev%22%5BJournal%5D)">Pharmacokinetics and in vivo fate of intra-articularly transplanted human bone marrow-derived clonal mesenchymal stem cells.</a> Stem Cells Dev. 24 (9), 1124-1132 (2015).</li>
<li>Chen, B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+safety+study+on+intrathecal+delivery+of+autologous+mesenchymal+stromal+cells+in+rabbits+directly+supporting+Phase+I+human+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">A safety study on intrathecal delivery of autologous mesenchymal stromal cells in rabbits directly supporting Phase I human trials.</a> Transfusion. 55 (5), 1013-1020 (2015).</li>
<li>Chan, M. M., Gray, B. D., Pak, K. Y., Fong, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+in+vivo+imaging+of+arthritis+in+a+collagen-induced+murine+model+with+phosphatidylserine-binding+near-infrared+%28NIR%29+dye%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Non-invasive in vivo imaging of arthritis in a collagen-induced murine model with phosphatidylserine-binding near-infrared (NIR) dye.</a> Arthritis Res Ther. 17, 50(2015).</li>
<li>Texier, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cyanine-loaded+lipid+nanoparticles+for+improved+in+vivo+fluorescence+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Opt%22%5BJournal%5D)">Cyanine-loaded lipid nanoparticles for improved in vivo fluorescence imaging.</a> J Biomed Opt. 14 (5), 054005(2009).</li>
<li>Honig, M. G., Hume, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescent+carbocyanine+dyes+allow+living+neurons+of+identified+origin+to+be+studied+in+long-term+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Fluorescent carbocyanine dyes allow living neurons of identified origin to be studied in long-term cultures.</a> J Cell Biol. 103 (1), 171-187 (1986).</li>
<li>Rahmati, M., Mobasheri, A., Mozafari, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+mediators+in+osteoarthritis%3A+A+critical+review+of+the+state-of-the-art%2C+current+prospects%2C+and+future+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Inflammatory mediators in osteoarthritis: A critical review of the state-of-the-art, current prospects, and future challenges.</a> Bone. 85, 81-90 (2016).</li>
<li>Detante, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+administration+of+99mTc-HMPAO-labeled+human+mesenchymal+stem+cells+after+stroke%3A+in+vivo+imaging+and+biodistribution%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">Intravenous administration of 99mTc-HMPAO-labeled human mesenchymal stem cells after stroke: in vivo imaging and biodistribution.</a> Cell Transplant. 18 (12), 1369-1379 (2009).</li>
<li>Hu, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+magnetic+resonance+imaging+tracking+of+SPIO-labeled+human+umbilical+cord+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biochem%22%5BJournal%5D)">In vivo magnetic resonance imaging tracking of SPIO-labeled human umbilical cord mesenchymal stem cells.</a> J Cell Biochem. 113 (3), 1005-1012 (2012).</li>
<li>Xia, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intra-articular+transplantation+of+atsttrin-transduced+mesenchymal+stem+cells+ameliorate+osteoarthritis+development%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Intra-articular transplantation of atsttrin-transduced mesenchymal stem cells ameliorate osteoarthritis development.</a> Stem Cells Transl Med. 4 (5), 523-531 (2015).</li>
<li>Jasmin,, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+labeling+of+bone+marrow+mesenchymal+cells+with+superparamagnetic+iron+oxide+nanoparticles+and+in+vivo+visualization+by+magnetic+resonance+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nanobiotechnology%22%5BJournal%5D)">Optimized labeling of bone marrow mesenchymal cells with superparamagnetic iron oxide nanoparticles and in vivo visualization by magnetic resonance imaging.</a> J Nanobiotechnology. 9, 4(2011).</li>
<li>Lehmann, T. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coculture+of+human+nucleus+pulposus+cells+with+multipotent+mesenchymal+stromal+cells+from+human+bone+marrow+reveals+formation+of+tunnelling+nanotubes%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Med+Rep%22%5BJournal%5D)">Coculture of human nucleus pulposus cells with multipotent mesenchymal stromal cells from human bone marrow reveals formation of tunnelling nanotubes.</a> Mol Med Rep. 9 (2), 574-582 (2014).</li>
<li>Wang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+adipose-derived+mesenchymal+progenitor+cells+engraft+into+rabbit+articular+cartilage%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Human adipose-derived mesenchymal progenitor cells engraft into rabbit articular cartilage.</a> Int J Mol Sci. 16 (6), 12076-12091 (2015).</li>
</ol>

Meng Li, Ming Hao ve Wen Wang geçerli çalışanları ve hücresel Biyomedikal grup hisse senedi opsiyonu sahipleri vardır (Nasdaq: CBMG). Diğer yazarlar hiçbir çıkar çatışması beyan ederim.

Başucu için tezgah KOA rejeneratif kök hücre tedavisinde getirebiliriz önce güvenlik standartları ve kök hücre tedavisi biodistribution çalışmaları acilen ihtiyaç vardır. Ancak, hastalığın patolojik ortam sebat ve Transplante haMSCs10biodistribution önemli bir rol oynar. Son zamanlarda, bizim grup enjeksiyonları8normal şartlar altında daha haMSCs intra artiküler enjeksiyon artık patolojik bir KOA ortamında kalıcı gösterdi. Enflamatuar ve dejeneratif microenvironment Mezenki...

Diz Osteoartriti (KOA) eklem kıkırdak kaybı ve dünya1çevresinde Yaşlılarda büyük kronik bir hastalık haline gelmiştir ilerici iltihap kaynaklanan bir dejeneratif hastalığıdır. Ancak, geçerli terapiler anti-inflamatuar ilaçlar, fiziksel takviyeleri ve cerrahi işlemler kullanarak yalnızca semptomatik ağrı2için geçici bir rahatlama sağlayabilir.
İnsan yağ elde edilen Mezenkimal Kök hücre (haMSCs) onların multipotent farklılaşma kıkırdak rejenerasyon ve immunomodulatory özellikleri3için potansiyel sayesinde diz osteoartrit için umut verici bir rejeneratif ilaç haline gelmiştir, 4. Eylem içinde vivomekanizmaları araştırmak için farmakolojik yolları ile karşılaştırıldığında, küçük KOA hayvan modellerinde canlı haMSCs izleme için gerekçe ve fizibilite haMSC terapi klinik uygulamadan önce kurmak için şu anda öğreticidir. Preklinik test etmek için medial Menisektomi (MM) ile tutarlı tekrarlanabilirlik5nispeten uygun bir model sağlayan KOA de, fareler, ikna etmek için eklem mekanik yük oynattığını. MM tarafından indüklenen KOA başlangıcı ön çapraz bağ transeksiyon tek başına veya kombine ile kısmi medial Menisektomi6daha öncedir. Bu nedenle, enjekte haMSCs KOA patolojik microenvironment ile uzun vadeli Hofstede kez MM7,8tarafından indüklenen Sıçanlarda değerlendirilir.
HaMSCs tedavi edici etkinliği yaygın olarak bildirilen, ilgili bilgi üzerinde olmasına rağmen intra artiküler (IA) enjeksiyon yolu ile implante haMSCs in vivo sebat kıt9,10' dur. Bu nedenle, çeşitli hücresel etiketleme yöntemleri, immunohistology11, luciferase12, yeşil flüoresan protein13 transfection, demir oksit manyetik rezonans görüntüleme (MRG)14 etiketleme de dahil olmak üzere geliştirilmiştir. ve çok sayıda hücre floresan boyalar8,15,16. Emek yoğun Histoloji analizleri ile karşılaştırıldığında, vivo non-invaziv görüntüleme bulmak belgili tanımlık gerçek zamanlı dağıtım ve floresan sinyallerini10ile,17etiketli hücre dinamiği için Optik aygıtları kullanır. Fonksiyonel canlı hücre görüntüleme için cytocompatible floresan etiketlemeyi hücresel aktiviteler kök hücre nakli18sonra ortaya çıkarmak için bir gelişmiş izleme radyoaktif ücretsiz bir tekniktir. Ayrıca, çok renkli floresan lipofilik boyalar hidrofilik amino-reaktif boyalar veya floresan proteinler, onların gelişmiş hücre geçirgenliği ve gelişmiş Floresans kuantum sayıları19gibi avantajlara sahip.
Böylece, bir kırmızı burada dahil iletişim kurallarını kullanmak lazer ile lipofilik carbocyanines etiketli hücreleri heyecanlandırmak için mi (DilC18(5)), hangi bir far-red floresan Dil (dialkylcarbocyanines) analog20' dir. Bir kırmızı kaymıştır uyarma ve emisyon spectra autofluorescent girişim önler ve derin doku canlı hayvan8uzun bir süre görüntüleme sağlar. Bu yöntem izleme ile etiketli vivo içinde hücreleri mi anlamak ve geçerli kök hücre Yenileyici tedavisi geliştirmek için gerekli olduğu gibi haMSCs, hayvan modellerinde transplante kök hücre izlemek için geçerlidir.

<table><tbody><tr><td>Matrx VMR hayvan anestezi sistemi</td><td>Midmark</td><td>VIP3000</td><td></td></tr><tr><td>4-0 sütür</td><td>Şangay Jinhuan</td><td>KC439</td><td></td></tr><tr><td>Tıraş Bıçağı</td><td>Pritech</td><td>LD-9987</td><td></td></tr><tr><td>Gentamicin</td><td>Zhejiang Jindakang Hayvan Sağlığı Ürünleri Co., Ltd.</td><td>Hiçbiri</td><td></td></tr><tr><td>% 0.9 Sodyum klorür çözeltisi</td><td>Hunan Kelun Pharmaceutical Co., Ltd.</td><td></td><td></td>H43020455</tr><tr><td>Penisilin</td><td>Şangay Kangfu kimyasal ilaç Co., Ltd.</td><td>Yok</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfin</td><td>Tianjin İlaç Araştırma Enstitüsü Pharmaceutical Co., Ltd.</td><td>Yok</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>16005</td> PBS EDTA Sigma-Aldrich E9884'te <td>%10'luk nihai konsantrasyona seyreltin</td></tr> PBS %0.1 <tr><td></td><td></td><td></td> Hematoksilen <td>Çözeltisinde %20'lik nihai konsantrasyona seyreltin</td></tr><tr><td>, Mayer' s</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>MHS16</td><td></td></tr>% <tr><td>0.5 Eozin Y çözeltisi, alkollü</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT110116</td><td></td></tr><tr><td>Safranin O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S8884</td><td></td></tr><tr><td>Hızlı Yeşil</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F7258</td><td></td></tr><tr><td>Shandon Excelsior ESTM Doku İşlemcisi</td><td>Thermo Fisher</td><td>A78400006</td><td></td></tr><tr><td>Shandon Histocentre & trade; 3 Doku Gömme Center</td><td>Thermo Fisher</td><td>B64100010</td><td></td></tr><tr><td>Tam Otomatik Döner Mikrotom</td><td>Leica</td><td>RM2255</td><td></td></tr><tr><td>DiD</td><td>Moleküler Problar, Life Teknolojileri</td><td>V-22887</td><td></td></tr><tr><td>D-MEM Yüksek Glikoz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5648</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>GIBCO, Yaşam Teknolojileri</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>%0.25 Tripsin-EDTA</td><td>İnvitrojen</td><td>25200-114</td><td></td></tr><tr><td>10 cm Petri Kabı</td><td>Corning</td><td>V118877</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>Beckman</td><td>Optima MAX-TL</td><td></td></tr><tr><td>Floresan mikroskop</td><td>Olympus</td><td>BX53</td><td></td></tr><tr><td>%0,4 Tripan Mavisi çözeltisi</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>93595</td><td></td></tr><tr><td>Titetamme</td><td>Virbac (Zoletil 50)</td><td>1000000188</td><td></td></tr><tr><td>Zolazepam</td><td>Virbac (Zoletil 50)</td><td>1000000188</td><td></td></tr><tr><td>Tek kullanımlık steril hiposermik şırınga 26G</td><td>Şangay Misawa Tıp</td><td>Endüstrisi Yok</td><td></td></tr><tr><td>IVIS Spectrum In Vivo Görüntüleme Sistemi</td><td>PerkinElmer</td><td>124262</td><td></td></tr><tr><td>Living Imaging 4.0 yazılımı</td><td>PerkinElmer</td><td>Yok</td><td></td></tr></tbody></table>

vivo İnsan yağ elde edilen mezenkimal kök hücrelerin sıçan diz osteoartrit modelinde floresan lipofilik membran boya ile izleme

In Vivo Tracking of Human Adipose-derived Mesenchymal Stem Cells in a Rat Knee Osteoarthritis Model with Fluorescent Lipophilic Membrane Dye

İnsan yağ elde edilen Mezenkimal Kök hücre (haMSC) tedavisinin klinik uygulama diz osteoartrit (KOA) desteklemek için hücre sebat etkinliği ve haMSCs hayvan modellerinde biodistribution inceledi. Lipofilik floresan boya ile haMSCs hücre membran etiketlemek için bir yöntem gösterdi. Daha sonra intra artiküler enjeksiyon cerrahi müdahale ile indüklenen KOA fareler etiketli hücre dinamik olarak görüntüleme sistemi bir vivo içinde tarafından izlenen. Lipofilik istihdam carbocyanines yaptım (DilC18 (5)), hangi üzerinden dokuları çevreleyen doğal yeşil autofluorescence uyarma önlemek için kırmızı bir lazer kullanmak bir far-red floresan Dil (dialkylcarbocyanines) analog,. Ayrıca, kırmızı kaymıştır emisyon spectra ile izin derin doku görüntüleme içinde canlı hayvan ve etiketleme işlemi sitotoksik efekt veya haMSCs fonksiyonel hasar yok neden. Bu yaklaşım bir verimli izleme yöntemini haMSCs bir sıçan KOA modeli için olmak gösterilmiştir. Bu yöntemin uygulama da en uygun yönetim rota ve MSCs önceden klinik çalışmalarda diğer kaynaklardan doz belirlemek için kullanılabilir.

KOA modeli ikna etmek için MM SD fareler (şekil 3) sağ diz eklemi gerçekleştirildi. Sekiz hafta sonra ameliyat fareler kurban ve diz eklemleri seri bölümlerini her iki H ile değerlendirildi &#38; E ve Safranin O/hızlı yeşil boyama (şekil 4). H için &#38; E boyama, eklem kıkırdak yüzeyinde daha ameliyat olmadan normal eklem cerrahisi diz kaba sınırları sergiledi. Safranin-O/hızlı yeşil, boyama için gözlenen azalma proteoglikan (kı...

Bu iletişim kuralı tarafından far-red floresan intra artiküler (IA) enjeksiyon yoluyla bir sıçan diz osteoartrit (KOA) modelinde etiketleme hücre sebat ve biodistribution insan yağ elde edilen Mezenkimal kök hücrelerin (haMSCs) izlemek için etkili bir yöntem açıklanır.

Vivo İnsan yağ elde edilen Mezenkimal kök hücrelerin sıçan diz osteoartrit modelinde floresan lipofilik membran boya ile izleme

In order to support the clinical application of human adipose-derived mesenchymal stem cell (haMSC) therapy for knee osteoarthritis (KOA), we examined the ...

Bu prosedürün genel amacı, in vivo floresan görüntüleme kullanarak, bir sıçan diz osteoartriti veya KOA modelinde insan adipoz kaynaklı mezenkimal kök hücrelerin hücre kalıcılığı ve biyodağılım etkinliğini değerlendirmektir. In vivo kök hücre takibi, KOA hayvan modellerinde insan adipoz kaynaklı mezenkimal kök hücrelerin yerleşimi ve dağılımı hakkında rejeneratif tıp alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. DiD kullanmanın temel avantajı, sıçanlara kaydırılmış emisyon spektrumunun, boya ile işaretlenmiş hücrelerde sitotoksik etkiler veya fonksiyonel hasar oluşturmadan canlı hayvanlarda derin doku görüntülemesine izin vermesidir.İşe, anestezi uygulanmış 250 ila 300 gram ağırlığında, sekiz ila 12 haftalık erkek Sprague Dawley sıçanı ısıtmalı bir ped üzerinde sol lateral pozisyona getirerek başlayın. Sağ dizi bir jiletle tamamen tıraş edin ve cerrahi alanı %10 povidon iyot çözeltisi ve %70 etanol ile dezenfekte edin. Cerrahi olmayan alanı bir cerrahi pedle örtün.Eklem kapsüllerini ortaya çıkarmak için patellar tendon boyunca lateral olarak iki santimetrelik bir insizyon yapmak üzere bir bistüri kullanın. Ardından, menisküsü femur yönüne doğru refleksiyon yaparak me

in-vivo-tracking-human-adipose-derived-mesenchymal-stem-cells-rat

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Bu video floresan boya ile insan embriyonik kök hücreler ve mezenkimal kök hücreler etiketleme teknikleri gösterir. Bu teknik, in vivo olarak bir optik görüntüleme ile nakledilen kök hücrelerin izleme ve floresan mikroskobu ile histopatolojik korelasyon kullanılabilir.

Optik Görüntüleme ile non-invaziv Algılama için Floresan Boyalar Kök Hücreler Etiketleme

Küçük Hayvan Kas Aşı dinamiği ile Takip In Vivo Floresan Görüntüleme

Biz, çok açılı bir dönme optik görüntüleme saposin C (SapC)-dioleoylphosphatidylserine (DOPS) nanovesicles tarafından sağlanan bir floresan marker in vivo nicelendirilmesi için (Maroi) sistemi tarif eder. Kanser ve artrit fare modelleri istihdam biz Maroi sinyal eğrisi analizi kesin haritalama ve hastalık süreçlerinin biyolojik karakterizasyonu için nasıl kullanılabileceğini göstermektedir.

Floresan SapC-DOPS Nanovesicles kullanma Beyin Tümörleri ve Artrit Vivo Optik Görüntüleme

Monositler, doğuştan gelen bağışıklığın anahtar düzenleyicileridir ve periferik mononükleer fagositik sistemin yenilenmesinde ve iltihaplanma durumunda kritik bir rol oynarlar. Bu el yazması, monosit mobilizasyon mekanizmasını incelemek için fare kalvaria kemik iliğinin gerçek zamanlı görüntüleme prosedürünü açıklamaktadır.

Fare Kemik İliği monositlerin Takip<em&gt; İn Vivo</em

Bu protokol, gama sintigrafisi kullanarak hücre sağkalımını ve doku dağılımını belirlemek için at mezenkimal kök hücrelerinin radyo-etiketlenmesini ve bunların attaki tendon yaralanmalarına implantasyonunu açıklar.

Atçılık tendinopatisinde Kemik İliği Mezenkimal Kök Hücreler Etiketli Teknesyum- 99m Vivo Görüntüleme ve Takip

Protokol, femoral kemik iliğindeki hücrelerin hareketini in vivo olarak izlemek için kullanılabilecek yeni bir murin femur pencere odası modelini tanımlar. İntravital multifoton floresan mikroskobu, zaman içinde femur kemik iliğinin üç bileşenini (vaskülatür, kollajen matrisi ve nötrofiller) görüntülemek için kullanılır.

için Femur Pencere Odası Modeli<em&gt; İn Vivo</emFare Kemik İliği içinde&gt; Hücre Takibi

Fare modelleri kolon iltihabı çalışmalarda Mezenkimal Kök hücre (MSC) küçük bir yüzdesi (% 1-5) intravenöz enjekte veya intraperitoneally iltihaplı kolon1,2için ev gösterdi. Bu çalışmada ultrason destekli MSCs İntrakardiyak enjeksiyonlari bağırsak için artan yerelleştirme neden gösterir.

Ultrason destekli İntrakardiyak enjeksiyon bağırsak için giriş için deneysel iltihabi bağırsak hastalıkları fare modellerinde kullanım artırmak için insan Mezenkimal Kök hücre

Adipojenik farklılaşma değerlendirirken geleneksel yöntemleri ucuz ve kullanımı kolay, ama gen ekspresyonu değişiklikler için belirli değildir. Mezenkimal hücre farklılaşması içine olgun adiposit bir soy belirli işaretçisi kullanarak ölçmek için bir tahlil geliştirdik. Bu tahlil temel araştırma ve klinik tıp arasında çeşitli uygulamalar vardır.

Görselleştirme ve miktar Mezenkimal hücre Adipojenik farklılaşma potansiyeli bir Lineage belirli Marker ile

Burada, insan deri altı yağ dokusundan (hSATMVEC'ler) mikrovasküler endotel hücrelerinin izole edilmesi, kültürlenmesi ve fenotiplendirilmesi için bir protokol tanımlanmıştır. Ek olarak, deneysel bir hSATMVEC-adiposit çapraz konuşma modelini açıklıyoruz.

İnsan Subkutan Yağ Dokusunda Adipoz Endotel Hücresi/Adiposit Çapraz Konuşmasının İncelenmesi

Ex vivo explant modeli kullanılarak, yağsız farelerden alınan visseral beyaz yağ dokusunun rostral kısmının küçük parçaları 7–10 gün boyunca kültürlenir; bu da yüksek yağlı diyet sırasında meydana gelen yağ dokusu iltihabının indüksiyonu ve incelenmesini mümkün kılar.

Yüksek Yağlı Diyet Benzeri Yağ Dokusu İltihaplanması için Deneyimli Fare Modeli

Keşfedin, insan yağ elde edilen mezenkimal kök hücrelerin sıçan diz osteoartrit modelinde DiD ile etiketlenip intraartiküler enjeksiyonla izlenmesini. Bu yöntem, hücre davranışlarını canlı görüntüleme ile değerlendirir.

Vivo İnsan yağ elde edilen Mezenkimal kök hücrelerin sıçan diz osteoartrit modelinde floresan lipofilik membran boya ile izleme

Daha fazla video keşfet