Name: İnşaat ve bir fare grefti Osteoliz modeli aseptik gevşeme içinde CoCrMo parçacıklar maruz tarafından değerlendirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-02-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 46 s
Description: Keşfedin fare kafatası osteoliz modeli oluşturma ve CoCrMo nanopartiküllerle aseptik gevşeme patogenezini inceleme yöntemini. Bu model artroplasti başarısızlığı mekanizmalarını anlamak için değerlidir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışmada Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı Çin (81572111), klinik bilim ve teknoloji proje Vakfı, Jiangsu Province (BL2012002), bilimsel araştırma projesi, Nanjing (201402007), Doğa Bilimleri tarafından desteklenmiştir Jiangsu eyaleti (BK20161385) temeli ve Çince Tıp doktor Derneği (2015COS0810) özel temeli.

Tüm yöntem tanımlamak burada kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) Nanjing Üniversitesi tarafından onaylanmıştır.
1. CoCrMo parçacık hazırlık
<ol><li>CoCrMo parçacıklar bir fabrikasyon yüksek vakum üç elektrot doğru akım4kullanarak elde. 10-3 Pa vakum, 0,04 MPa argon ve hidrojen 3:2 (v/v) altında alet CoCrMo alaşım ve 650 A katot geçerli yerleştirin.</li>
	<li>CoCrMo parçacıklar çapı ölçmek.<ol>
<li>1 mg CoCrMo parçacıkların susuz etanol 1,5 mL ekleyin.</li>
		<li>CoCrMo parçacıklar susuz etanol ultrasonik 28 kHz ve 5 min için 600 W sallayarak resuspend.</li>
		<li>Bir damla (yaklaşık 20 µL) elde edilen süspansiyon transmisyon elektron mikroskobu (TEM) objektif masaya uygulanır. 200 kV ivme gerilim ve 0,24 nm çözünürlük TEM fotoğraf serisi yakalamak.</li>
		<li>TEM Filmler ortalama çap ve parçacık boyutu dağıtım hesaplamak için sağlanan yazılımı kullanın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Endotoxins dezenfekte etmek<ol>
<li>Basınçlı kap 15dk 121 ° C ve 15 psi için parçacıkların 50 gr.</li>
		<li>Endotoxins bir nicel Limulus Amebocyte Lysate (LAL) tahlil tarafından tespit (< % 0.25 EU/mL endotoksin devamsızlık belirtmek için olarak kabul)5.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Parçacıklar fosfat tamponlu tuz (PBS) 50 mg/mL konsantrasyonu hisse senedi çözüm6olarak, resuspend.</li>
</ol>2. inşaat grefti Osteoliz modeli
<ol><li>6 haftalık C57BL/J6 fareler (grup başına altı fareler) withpentobarbital (50 mg/kg) anestezi. Çimdik testi anestezi düzeyini değerlendirmek için kullanın. Gözleri normal salin ile kurutma önlemek.</li>
	<li>Fareler yüzükoyun sígara yerleştirin. Kafatası üzerinde kürk bir tıraş makinesi ile kaldırın ve % 75 etanol içeren tıbbi pamuk topları kullanarak cilt dezenfekte.</li>
	<li>Noktası yerelleştirme için de dahil olmak üzere iki gözüm kulağım arasında orta sırasıyla iki nokta tanımlayın. Sonra iki puan yukarıda arasındaki çizgi belirlemek ve yukarıdaki hattı boyunca cilt (şekil 1A) makasla deşmek.</li>
	<li>Kafatası kapaklarini bir neşter (şekil 1B)6calvaria kaldırın.</li>
	<li>Her iki ucunda deri ile basit kesintiye uğramış Dikiş dikiş.</li>
	<li>Belgili tanımlık kesme ortasına dikiş hattından knotting olmadan olun. Dikiş hattı iki ucu tut.</li>
	<li>CoCrMo parçacık süspansiyon (50 mg/mL, PBS), 50 µL ortasında calvarias (şekil 1 c)2gömün.</li>
	<li>Basit kesintiye uğramış dikiş (şekil 1 d) içinde son dikiş düğüm.</li>
	<li>Fareler için başka bir 2 hafta korumak.</li>
</ol>3. mikro-CT tarama grefti Osteoliz modeli değerlendirilmesi
<ol><li>Karbon dioksit ile fareler kurban. Yatay düzlemde farelerde başını kesmek. Beyin dokusu içinde ve cilt kaldırın ve dışarı kürk. Calvarias daha fazla deneyler için hasat.</li>
	<li>Yavaşça yukarı calvaria üzerinde tüm yumuşak doku cımbız ile temizleyin. %4 paraformaldehyde temizlenen calvarias calvarias mikro-CT tarama önce PBS 24 h 24 h bırakın için 4 ° C'de tamir et.</li>
	<li>Yüksek çözünürlüklü mikro-CT 18 µm izometrik bir çözünürlükte ve x-ışını enerji ayarları 45 tarafından fareler calvarias analiz kV ve 550 anne.</li>
	<li>Mikro-CT veri yazılımı ile üç boyutlu yeniden yapılandırma kuralları.</li>
	<li>Kalitatif ve kantitatif analiz.<ol>
<li>İlk olarak, kare bölgenin orta hat dikiş çevresinde faiz bölgesi olarak seçin.</li>
		<li>İkinci olarak, ölçmek kemik mineral yoğunluğu (KMY), birim/toplam kemik birim (BV/TV), Trabeküler numarası (Tb.N), Trabeküler kalınlığı (Tb.Th), Trabeküler ayırma/aralığı (Tb.Sp) ve mikro-CT için sağlanan yazılımı ile toplam gözeneklilik yüzdesi</li>
		<li>Üçüncü olarak, tek yönlü ANOVA tarafından çeşitli ölçümler için üç grup karşılaştırın. Öğleden hoc Varyans analizi için Bonferroni yöntem2uygulayın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. grefti Osteoliz Model H & E boyama tarafından değerlendirilmesi
<ol><li>Calvaria örneklerinde % 15 etilen diamin tetraacetic asit (EDTA) decalcify-4 ° C'de PBS Kalsiyumun çözüm 3 hafta boyunca her gün değiştirin.</li>
	<li>Parafin bir 2 cm x 1 cm x 1 cm küp için decalcified örnekleri katıştır ve onları 2 µm bölümlere partikül yükünün alanında dilim.</li>
	<li>Hematoksilen bölümlerle leke ve Eozin daha önce7açıklandığı gibi.</li>
	<li>Genel pathomorphism Filmler tarafından ışık mikroskobu yakalamak.</li>
</ol>

<ol><li>Dong, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antisense+oligonucleotide+targeting+TNF-alpha+can+suppress+Co-Cr-Mo+particle-induced+osteolysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Orthop+Res%22%5BJournal%5D)">Antisense oligonucleotide targeting TNF-alpha can suppress Co-Cr-Mo particle-induced osteolysis.</a> J Orthop Res. 26 (8), 1114-1120 (2008).</li>
<li>Deng, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SIRT1+protects+osteoblasts+against+particle-induced+inflammatory+responses+and+apoptosis+in+aseptic+prosthesis+loosening%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">SIRT1 protects osteoblasts against particle-induced inflammatory responses and apoptosis in aseptic prosthesis loosening.</a> Acta Biomater. 49, 541-554 (2017).</li>
<li>Langlois, J., Hamadouche, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+animal+models+of+wear-particle+osteolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Orthop%22%5BJournal%5D)">New animal models of wear-particle osteolysis.</a> Int Orthop. 35 (2), 245-251 (2011).</li>
<li>Wang, P., Zhao, F. X., Zhang, Z. Z. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/287666498_Preparation_of_ultrafine_silver_powders_by_DC_arc_plasma">Preparation of ultrafine zinc powders by DC arc plasma evaporation method.</a> Chinese Journal of Nonferrous Metals. 21 (9), 2236-2241 (2011).</li>
<li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+fibroblast+expression+of+RANKL+in+CoCrMo-particle-induced+osteolysis+is+mediated+by+ER+stress+and+XBP1s%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">The fibroblast expression of RANKL in CoCrMo-particle-induced osteolysis is mediated by ER stress and XBP1s.</a> Acta Biomater. 24, 352-360 (2015).</li>
<li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+mediated+CoCrMo+particle-induced+peri-implant+osteolysis+by+promoting+osteoblast+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22Autophagy%22%5BJournal%5D)">Autophagy mediated CoCrMo particle-induced peri-implant osteolysis by promoting osteoblast apoptosis.</a> Autophagy. 11 (12), 2358-2369 (2015).</li>
<li>Wang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Particle-induced+osteolysis+mediated+by+endoplasmic+reticulum+stress+in+prosthesis+loosening%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Particle-induced osteolysis mediated by endoplasmic reticulum stress in prosthesis loosening.</a> Biomaterials. 34 (11), 2611-2623 (2013).</li>
<li>Yang, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adeno-associated+virus-mediated+osteoprotegerin+gene+transfer+protects+against+particulate+polyethylene-induced+osteolysis+in+a+murine+model%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Adeno-associated virus-mediated osteoprotegerin gene transfer protects against particulate polyethylene-induced osteolysis in a murine model.</a> Arthritis Rheum. 46 (9), 2514-2523 (2002).</li>
<li>Liu, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+mediated+TiAl%286%29V%284%29+particle-induced+peri-implant+osteolysis+by+promoting+expression+of+TNF-alpha%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Autophagy mediated TiAl(6)V(4) particle-induced peri-implant osteolysis by promoting expression of TNF-alpha.</a> Biochem Biophys Res Commun. 473 (1), 133-139 (2016).</li>
<li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ER+Stress+Mediates+TiAl6V4+Particle-Induced+Peri-Implant+Osteolysis+by+Promoting+RANKL+Expression+in+Fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">ER Stress Mediates TiAl6V4 Particle-Induced Peri-Implant Osteolysis by Promoting RANKL Expression in Fibroblasts.</a> PLoS One. 10 (9), e0137774(2015).</li>
<li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TiAl6V4+particles+promote+osteoclast+formation+via+autophagy-mediated+downregulation+of+interferon-beta+in+osteocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">TiAl6V4 particles promote osteoclast formation via autophagy-mediated downregulation of interferon-beta in osteocytes.</a> Acta Biomater. 48, 489-498 (2017).</li>
<li>Chen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lycorine+suppresses+RANKL-induced+osteoclastogenesis+in+vitro+and+prevents+ovariectomy-induced+osteoporosis+and+titanium+particle-induced+osteolysis+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Lycorine suppresses RANKL-induced osteoclastogenesis in vitro and prevents ovariectomy-induced osteoporosis and titanium particle-induced osteolysis in vivo.</a> Sci Rep. 5, 12853(2015).</li>
<li>Neuerburg, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+calcitonin+receptor+signalling+in+polyethylene+particle-induced+osteolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">The role of calcitonin receptor signalling in polyethylene particle-induced osteolysis.</a> Acta Biomater. 14, 125-132 (2015).</li>
<li>Catelas, I., Jacobs, J. J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20415362">Biologic activity of wear particles.</a> Instr Course Lect. 59, 3-16 (2010).</li>
<li>Liu, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biological+response+to+nanometre-sized+polymer+particles%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomater%22%5BJournal%5D)">The biological response to nanometre-sized polymer particles.</a> Acta Biomater. 23, 38-51 (2015).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Aşınma parçacık kaynaklı Osteoliz farelerde için iki ana yöntem vardır: hava kesesi modeli ve grefti Osteoliz modeli. Hava kesesi modelinde, subkutan oluşturulan bir hava kesesi ilk, aşınma parçacık giriş ve implantasyon kemik doku8ardından kuruldu. Kese duvar aseptik gevşeme içinde kapaklarini taklit eder. Ancak, kemik implantasyon parçacıklar ve kemik doku arasındaki doğrudan etkileşim değerlendirmek zordur hiçbir biyolojik etkinlik ile nonvascular. Grefti Osteoliz model hava kesesi muadili birç...

Aseptik gevşeme en yaygın nedeni olan toplam kalça protezi (THA) ve total Diz protezi (TKA) hata, hangi düzeltme ameliyatı1gerektirir. Ancak, altta yatan mekanizma belirsiz2kalır. Uzun bir takip olan bir durum nadirdir, parçacık kaynaklı Osteoliz algılamak için gereklidir; Bu nedenle, klinik durumlarda onun patogenezinde keşfetmeye davet ediyor. Bu nedenle, daha fazla çalışmaları karmaşık cep ve doku mekanizmaları üzerinde odaklanarak hem in vivo deneyler parçacık kaynaklı Osteoliz modelleri ve vitro deneyleri homeostazı3kemik ile ilgili hücrelerde giymek gerektirir. Geçerli bir hayvan modeli daha da hücresel deneyleri için kanıt sağlayan kemik kaybı, aşınma partikülleri etkilerini ortaya önemlidir.
Bir fare grefti Osteoliz model CoCrMo parçacıklar maruz inşa parçacıklar ve aseptik gevşeme çeşitli hücreler arasındaki etkileşimler değerlendirmek için etkili ve geçerli bir yöntemdir. Bu modelde, CoCrMo parçacıklar grefti Osteoliz makrofajlar içinde inflamatuar sitokinlerin inducing, Osteoklastlar etkinleştirme, osteoblast yayılması inhibe ve osteoblast apoptosis teşvik neden.
Sadece bu modeli kurmak için iki hafta sürer. Osteoliz görüntülenir ve Hematoksilen Eozin (H & E) boyama ile sayısal ve mikro Bilgisayarlı Tomografi (mikro-CT)2. Buna ek olarak, bu modeli nispeten düşük maliyetli ve transgenik ve nakavt fare modelleri çeşitli dozlarda3bileşikler çok sayıda ekran için kullanılabilir vardır.
Kurmak ve bu model değerlendirmek için basit bir yöntemdir. İlk olarak, CoCrMo parçacıklar yüksek vakum üç elektrot doğru akım tarafından elde edilen ve fosfat tamponlu tuz (PBS) 50 mg/mL bir konsantrasyon, resuspended. Sonra sonra kafatası kapaklarini tarafından ayrılması keskin diseksiyon elde edilen süspansiyon 50 µL fare calvaria ortasına kadar uygulandı. Fareler iki hafta sonra kurban edildi ve calvaria örnekleri hasat edildi; nitel ve nicel analizler H & E andmicro-CT boyama tarafından gerçekleştirilmiştir
Bir fare grefti Osteoliz model CoCrMo parçacıklar maruz inşa CoCrMo parçacıklar ve makrofajlar, fibroblastlar, dokusunu ve aseptik gevşeme içinde Osteoklastlar, gibi çeşitli hücreler arasındaki etkileşimler değerlendirmek için ideal bir araçtır.

<table><tbody><tr><td>Protez Waldemar Link GmbH'den CoCrMo alaşımı</td><td>& Co</td><td>GEMINI MK II</td><td>CoCrMo nanopartiküllerini elde etmek için hammadde</td></tr><tr><td>Fabrikasyon yüksek vakumlu üç elektrotlu doğru akım</td><td>Malzeme Bilimi ve Koleji Mühendislik, Nanjing Teknoloji</td><td></td> Üniversitesi <td>Kendi kendine tasarlanmış makine</td></tr><tr><td>6 haftalık erkek C57BL / 6J fareler</td><td>Nanjing Üniversitesi Model hayvan araştırma merkezi</td><td>N000013</td><td></td></tr><tr><td>% 100 Etanol</td><td>Nanjing Reaktifi</td><td>C0691514023</td><td>Transmisyon elektron mikroskobu taraması için CoCrMo nanopartiküllerinin Çözücüsü</td></tr><tr><td>1.5 ml Mikrosantrifüj tüpleri</td><td>Taizhou Weierkang Tıbbi Malzemeler co., LTD</td><td>W603</td><td></td></tr><tr><td>Mikroanalitik denge</td><td>Shenzhen Qun long Enstrüman Ekipmanları Co,. LTD</td><td>EX125DZH</td><td></td></tr><tr><td>Ultrasonik çalkalayıcı</td><td>Şangay Yuhao bilimsel enstrüman co., LTD</td><td>YH-200DH</td><td>CoCrMo nanopartiküllerini askıya almak için</td></tr><tr><td>Transmisyon Elektron Mikroskobu</td><td>FEI</td><td>Tecnai G20</td><td></td></tr><tr><td>SimplePCI yazılımı</td><td>Compix Inc.</td><td>6.6 versiyonu</td><td>Ortalama çap ve parçacık boyutu dağılımını hesaplamak için.</td></tr><tr><td>Yüksek elli sterilizasyon tavası</td><td>QIULONGYIQI</td><td>KYQL-100DS</td><td>Endotoksini dekontamine etmek için</td></tr><tr><td>Limulus Amebosit Lizat (LAL) Testi</td><td>Charles River</td><td>R13025</td><td>Endotoksini ve nbsp'yi tespit etmek için;</td></tr><tr><td>15 ml Mikrosantrifüj tüpleri</td><td>Taizhou Suyi Medical</td><td>B122</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu tuzlu su Boster</td><td>Biyolojik Teknoloji</td><td>AR0030</td><td>CoCrMo nanopartikül stok çözeltisinin çözücüsü</td></tr><tr><td>Pentobarbital Sodyum</td><td>Sigma</td><td>P3761</td><td>Fareleri uyuşturmak için</td></tr><tr><td>Normal tuzlu</td><td>SACKLER</td><td>SR8572EP-15</td><td>Farelerin gözlerinin kurumasını önlemek için</td></tr><tr><td>% 75 Etanol</td><td>Nanjing Reaktifi</td><td>C0691560275</td><td>Dezenfeksiyon</td></tr><tr><td>Tıbbi pamuk topu</td><td>Shuitao</td><td>1278298933</td><td>Dezenfeksiyon</td></tr><tr><td>Tıraş Makinesi</td><td>Kemei</td><td>KM-3018</td><td>Kürkü tıraş etmek için</td></tr><tr><td>Makas</td><td>RWD LIFE SCIENCE</td><td>S12005-10</td><td>Cildi kesmek için</td></tr><tr><td></td><td>Sütür RWD LIFE SCIENCE</td><td>F34001-01</td><td>Cildi dikmek için</td></tr><tr><td>İğne tutucu</td><td>RWD LIFE BİLİM</td><td>F33001-01</td><td>Cildi dikmek için</td></tr><tr><td>İğne</td><td>RWD LIFE SCIENCE</td><td>R14003-12</td><td>Cildi dikmek için</td></tr><tr><td>Damar forsepsleri</td><td>RWD LIFE SCIENCE</td><td>F22003-09</td><td>Cildi dikmek için</td></tr><tr><td>Neşter NEŞTER</td><td>RWD LIFE SCIENCE</td><td>S31010-01</td><td>Calvaria toplamak için</td></tr><tr><td>Cımbız</td><td>RWD LIFE SCIENCE</td><td>F12006-10</td><td>Calvaria</td></tr><tr><td>100 & micro'yu hasat etmek için; L pipetler</td><td>Eppendorf</td><td>3120000240</td><td>Calvatias 100 & micro'ya partikül süspansiyonu gömmek için</td></tr><tr><td>; L pipet uçları</td><td>AXYGEN</td><td>T-200-Y</td><td>Buzağılara partikül süspansiyonu gömmek için</td></tr><tr><td>5 ml Mikrotüpler</td><td>Taizhou Weierkang Medical Supplies co., LTD</td><td>W621</td><td></td></tr><tr><td>%4 Paraformaldehit</td><td>Servicebio</td><td>G1101</td><td>Fiksasyon</td></tr><tr><td>Mikro Bilgisayarlı Tomografi&nbsp;</td><td>SkyScan</td><td>SkyScan1176</td><td></td></tr><tr><td>Etilen Diamin Tetraasetik Asit</td><td>Servicebio</td><td>G1105</td><td>Dekalsifikasyon</td></tr><tr><td>Parafin</td><td>Servicebio</td><td>#0001</td><td></td></tr><tr><td>Parafin dilimleme makinesi</td><td>Leica</td><td>RM2125RTS</td><td></td></tr><tr><td>Cam slayt</td><td>Servicebio</td><td>G6004</td><td></td></tr><tr><td>Kapak camı</td><td>Servicebio</td><td>200</td><td></td></tr><tr><td>HE boyama kiti</td><td>Servicebio</td><td>#1-5</td><td>HE boyama</td></tr><tr><td>Işık mikroskobu</td><td>Nikon</td><td>E200</td><td></td></tr></tbody></table>

İnşaat ve bir fare grefti osteoliz modeli aseptik gevşeme içinde cocrmo parçacıklar maruz tarafından değerlendirilmesi

Construction and Evaluation of a Murine Calvarial Osteolysis Model by Exposure to CoCrMo Particles in Aseptic Loosening

Aşınma parçacık kaynaklı Osteoliz aseptik gevşeme artroplasti başarısızlık büyük bir nedeni ama altta yatan mekanizma belirsizdir. Algılama ve sporadik oluşumu için gerekli takibi nedeniyle uzun, Patogenez ofparticle kaynaklı Osteoliz klinik durumlarda değerlendirmek için davet ediyor. Bu nedenle, en iyi hayvan modelleri daha fazla çalışmalar için gereklidir. Grefti Osteoliz CoCrMo parçacıklar maruz tarafından kurulan fare modeli parçacıklar ve aseptik gevşeme çeşitli hücreler arasındaki etkileşimler değerlendirmek için etkili ve geçerli bir araçtır. Bu modelde, CoCrMo parçacıklar ilk yüksek vakum üç elektrot doğru akım tarafından elde ve fosfat tamponlu tuz konsantrasyonu 50 mg/mL, resuspended. Sonra sonra kafatası kapaklarini tarafından ayrılması keskin diseksiyon elde edilen süspansiyon 50 µL fare calvaria ortasına kadar uygulandı. İki hafta sonra fareler kurban edildi ve calvaria numuneler hasat edildi; nitel ve nicel Değerlendirmeler Hematoksilen ve Eozin boyama ve mikro bilgisayarlı tomografi tarafından yapıldı. Bu modelin güçlü yordamı basitlik, kemik kaybı kantitatif değerlendirilmesi, hız Osteoliz geliştirme, potansiyel kullanım transgenik veya nakavt modelleri ve nispeten düşük maliyetli içerir. Ancak, bu model mekanik kuvvet ve aseptik gevşeme içinde parçacıklar kronik etkilerini değerlendirmek için kullanılacak uygulanamıyor. CoCrMo parçacıklar maruz tarafından oluşturulan fare grefti Osteoliz modeli aşınma partikülleri ve çeşitli hücreler, örneğin, makrofajlar, fibroblastlar, dokusunu ve aseptik gevşeme içinde Osteoklastlar, arasındaki etkileşimler değerlendirmek için ideal bir araçtır.

Kurum içi üretilen Nano CoCrMo parçacıklar 50 civarında olduğunu TEM (Şekil 2) tarafından sayısal olarak çapı, nm (3,56 standart hatası). Fare calvarias maruz CoCrMo parçacıklar, hayvanlar için kaldıktan sonra (n = 6 grup başına) için başka bir iki hafta muhafaza. İki hafta içinde grefti kesi tamamen iyileşmiş olarak ve dikişi düşebilir. Herhangi bir yerel enfeksiyon veya sendikasız Mayıs kemik kaybı değerlendirme etkiler. Fare kurbandan sonra calvaria örnekl...

Bu el yazması CoCrMo parçacıklar, aşınma partikülleri ve aseptik gevşeme çeşitli hücreler arasındaki etkileşimler değerlendirmek için ideal bir hayvan modeli oluşturan maruz bir fare grefti Osteoliz modeli açıklar.

İnşaat ve bir fare grefti Osteoliz modeli aseptik gevşeme içinde CoCrMo parçacıklar maruz tarafından değerlendirilmesi

Wear particle-induced osteolysis is a major cause of aseptic loosening in arthroplasty failure, but the underlying mechanism remains unclear. Due to long ...

Bu prosedürün genel amacı, kobalt-krom-molibden nanoparçacıklara maruziyet yoluyla Murine Kalvaryal Osteoliz Modelini oluşturmak ve değerlendirmektir. Aşınma parçacıklarının tetiklediği osteoliz, artroplasti başarısızlığında aseptik gevşemenin temel nedenlerinden biridir, ancak bunun altında yatan mekanizmalar belirsizdir. Uzun takip süresi ve sporadik görülme sıklığı nedeniyle, klinik vakalarda aseptik gevşemenin patogenezini araştırmak güçtür.Bu nedenle, daha ileri çalışmalar için bir aşınma hayvan modeline ihtiyaç duyulmaktadır. Laboratuvarımızda, kobalt alaşımı partikülleri ile oluşturulan murial kalvarial osteoliz modeli, aseptik gevşemenin patogenezini incelemek için etkili bir modeldir. Bu işlem, öncelikle kobalt alaşımlı protezden nan ölçekli kobalt krom molibden partiküllerinin üretilmesi ve ardından bunların 15 mg/mL konsantrasyonda fosfat tamponlu salin içerisinde yeniden süspande edilmesiyle gerçekleştirilir.Bir sonraki adım, sırasıyla iki göz ve iki kulak arasındaki orta noktaları birleştiren hat üzerinde insizyon konumunu belirlemektir. Ardından, kafa kemiğinin üzerindeki periostu şok diseksiyon yöntemiyle uzaklaştırın. Sonrasında, 50 µL kobalt alaşımlı nanopartikül stok çözeltisi alın ve bunları kalvaryumun orta sütürüne yerleştirin.İki haftalık bakım sürecinin ardından, bazı fareleri sakrifiye edin ve osteoliz değerlendirmesi için kalvaryaları toplayın. Kobalt alaşımlı nanopartikül ile tedavi edilen farelerde osteoliz, hem mikro-BT hem de H ve E boyama görüntülerinde belirgindir. Kobalt alaşımlı protezden kobalt krom molibden alaşımı elde edin; ardından yüksek vakumlu üç elektrotlu doğru akım yöntemiyle kobalt krom molibden alaşımından kobalt krom molibden partikülleri üretin.Kobalt krom molibden parçacıklarının ortalama çapını belirlemek için, bir miligram parçacığı 1,5 mililitre susuz etanol içine alın ve ultrasonik çalkalama ile süspansiyon haline getirin. Süspansiyondan yaklaşık 20 mikrolitre olan bir damlayı transmisyon elektron mikroskobunun objektif tablasına uygulayın ve bir dizi görüntü elde edin. TEM görüntülerindeki ortalama çapı ve parçacık boyutu dağılımını hesaplamak için sağlanan yazılımı kullanın.Sol panelde temsili TEM görüntüleri yer alırken, sağdaki panel ticari yazılımımız tarafından hesaplanan kobalt krom molybdem alaşımı nanopartikül boyut dağılımını göstermektedir. Ortalama çap yaklaşık 50 nanometredir. Endotoksinleri uzaklaştırmak için partikülleri 15 dakika boyunca otoklavlayın.Ardından, bunları stok çözelti olarak 15 mg/mL konsantrasyonunda fosfat tamponlu salyende yeniden süspande edin. Bir sonraki adım, kalvaryal osteoliz modelinin oluşturulmasıdır. Altı haftalık fareleri seçin ve anestezi altına alın: grup başına altı fare.Hayvanları primer pozisyona getirin. Kürkünü temizleyin ve kranyum üzerindeki deriyi %75 etanol ile dezenfekte edin. İnsizyon için, sırasıyla iki göz ve iki kulak arasındaki iki orta noktayı belirleyin ve bu noktaları birleştiren hat boyunca deriyi kesin.Kranial periost, şok diseksiyon yoluyla kalvaryumdan dikkatlice ve tamamen uzaklaştırılır. Periostun temiz bir şekilde diseksiyonu, kalvaryadaki partiküller arasındaki etkileşimleri artırır. Kesi hattının her iki ucunda, basit ayrı dikişler şeklinde dikkatle sütürleme yapılır.Genellikle tam bir sütür için üç dikiş gereklidir. Son aşamada, sütür hattının her iki ucunu tutarak, düğüm atmadan sütür hattını insizyondan geçirin. 15 µL kobalt alaşımı stok çözelti nanoparçacıkları alın ve bunları kalvaryumun orta sütürüne yerleştirin.Basit ayrı dikişlerde son dikişi düğümleyin. Fareleri iki hafta daha besleyin. İki hafta sonra hayvanı sakrifiye edin ve kalvaryumları toplayın.Kafatası numuneleri üzerindeki tüm yumuşak dokuları cımbız yardımıyla nazikçe temizleyin ve dokuyu dört derece Celsius sıcaklıkta yüzde dört paraformaldehit içerisinde sabitleyin. Kobalt krom molibden nanoparçacıkla indüklenen modelde osteoliz değerlendirmesi için, mikro-CT taramasından 24 saat önce yüksek çözünürlüklü mikro-CT gerçekleştirin. Kafatası numunelerini paraformaldehitten fosfat tamponlu saline aktarın.Mikro-CT tarama gününde, kalvaria örneklerini fosfat tamponlu salinden toplayın ve cihazla ilişkili bir tutucuya sabitleyin. Kalvaryaları mikro-CT cihazında tarayın. Çeşitli yazılımlar kullanarak üç boyutlu rekonstrüksiyon gerçekleştirin.H ve E boyaması, nanopartikülle indüklenen bir modelde osteoliz değerlendirmesi için kullanılan bir diğer araçtır. Kalvaria örneklerini, yüzde 15 etilendiamintetraasetik asit içeren fosfat tamponlu salyonda, dört derece Celsius'ta üç hafta boyunca dekalsifiye edin. Dekalsifiye edilmiş kalvaryaları parafine gömün ve partikül birikim bölgesinden iki mikrometrelik kesitler alın.Kesitleri hematoksilin ve eozin ile boyayın. Genel morfolojiyi ışık mikroskobu ile inceleyin ve mikrograflar edinin. İşte temsilci mikro-BT görüntüleri.Micro-CT verilerinin üç boyutlu rekonstrüksiyon görüntüleri sol panelde gösterilmiştir. Kontrol, sham operasyon ve nanoparçacık uygulanan farelerden alınan kesit görüntüleri sağ panelde gösterilmiştir. Nanoparçacık tedavi grubunda osteoliz belirgindir.Cihazla ilişkili yazılım tarafından gerçekleştirilen mikro-BT fotoğraflarının kantitatif analizi burada sunulmuştur. Ölçümler kemik mineral yoğunluğu, kemik hacmi veya toplam hacim oranı, toplam gözeneklilik yüzdesi, trabeküler sayı, trabeküler kalınlık ve trabeküler ayrılma veya aralık değerlerini içermektedir. Kobalt alaşımlı nanoparçacıklarla tedavi edilen fareler, kontrol hayvanlarına kıyasla anlamlı derecede daha düşük kemik mineral yoğunluğu ve kemik hacminin yanı sıra daha yüksek toplam gözeneklilik yüzdesi göstermektedir.Kontrol, sham operasyon ve nanopartikül uygulanan farelerden alınan kalvaria örneklerine ait temsilci H ve E boyama görüntüleri burada sunulmuştur. Nanopartikül uygulama grubunda osteoliz belirgindir. Kobalt alaşımı nanopartiküllerle oluşturulan fare kalvarial osteoliz modeli, aşınma partikülü kaynaklı osteolizin modellenmesinde yüksek başarı oranına sahiptir.Aşağıda birkaç temel faktör yer almaktadır. Birincisi, kobalt alaşımlı nanoparçacıklar, aşınma parçacıkları ile kalvaryum arasındaki etkileşimi artırır. İkincisi, kalvaryumun yeterince açığa çıkarılması ve periostumun net bir şekilde diseke edilmesi, parçacıklar ile kalvaryum arasındaki etkileşimi daha yoğun hale getirir.Üçüncü olarak, mikro-BT ile kemik kaybının kantitatif ölçümleri, çeşitli tedaviler arasındaki kemik kaybı farklarına erişimi kolaylaştırarak, geleneksel kemik histomorfometrisi ile karşılaştırıldığında osteolize dair bize sağlam kanıtlar sunar. Kobalt alaşımı partikülleri ile oluşturulan aşınma kalvaryum osteoliz modeli, aseptik gevşemede aşınma partikülleri ile makrofajlar, fibroblastlar, osteoklastlar ve osteoblastlar gibi farklı hücreler arasındaki etkileşimi araştırmak için ideal bir modeldir.Modelimizin, gelecekteki aseptik gevşeme çalışmaları için faydalı olacağını umuyoruz.

construction-evaluation-murine-calvarial-osteolysis-model-exposure-to

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu protokol izolasyonu açıklar adipoz-türetilmiş lipoaspirate ve iskelet rejenerasyon değerlendirmek için 4 mm kritik ölçüdeki kalvaryal defekt oluşturmadan stromal hücreler.

Lipoaspirate itibaren hasat Yağ kaynaklı stromal hücreler kullanarak Kritik ölçekli Kalvaryum Defekt Model tamiri

Fare modelleri kemik dokusu mühendisliği için paha biçilmez araçlar olmasına rağmen, uzun kemik defektlerinin modelleri seyrektir. Bu ihtiyaç, düşük morbiditeye sahip tekrarlanabilir, femoral, kritik boyutlu bir defekti gerçekleştirmek ve stabilize etmek için dört vidalı bir kilitleme plakası ve özel bir aparat kullanan mevcut protokolün geliştirilmesini motive etti.

Farelerde bir Segmental Femoral Kritik boyutlu Defekt Modelinde kurulması Plaka Osteosentez tarafından Stabilize

Adipoz kaynaklı stromal hücreler, bir hastanın kendi hücrelerinden yeni doku mühendisliği için yararlı olabilir. Artmış osteojenik potansiyele sahip insan adipoz kaynaklı stromal hücrelerin (ASC'ler) bir alt popülasyonunun izolasyonu için bir protokol sunuyoruz, ardından hücrelerin in vivo kalvarial iyileşme testinde uygulanması izleyeceğiz.

BMPR-IB + hızlı İzolasyon Kalvaryum Hata Şifa Modeli Kullanılan Stromal Hücreleri yağ kaynaklı

Burada, damar oluşumu içinde vivo görselleştirmek için bir iletişim kuralı mevcut ve gerçek zamanlı olarak 3D İskele tarafından multiphoton mikroskobu. Genetiği değiştirilmiş iskele anjiogenez bir fare grefti kritik Kemik defekti modelinde incelenmiştir. Daha fazla yeni kan damarları tedavi grubunda denetimlerde tespit edildi.

Angiogenez Multiphoton mikroskobu In Vivo genetiği değiştirilmiş 3D-PLGA/nHAp İskele tarafından grefti kritik Kemik defekti tamir için görselleştirme

Kemik eksektijinin ex vivo kültürü kemik fizyolojisi ve kemik remodeling ve kemik hastalıklarında ilaçların potansiyel değerlendirilmesi çalışmaları için değerli bir araç olabilir. Sunulan protokol, yeni doğan fare kafataslarından izole edilen calvariaların hazırlanmasını ve kültürünün yanı sıra uygulamalarını da açıklamaktadır.

Calvaria Co-culture ve Histomorfometri Kullanarak Kemik Remodeling ve Tümör-Kemik Mikroortamı yeniden oluşturma

Burada kemik değiştirme malzemelerini kemik rejenerasyon kapasiteleri açısından değerlendirmek amacıyla tavşanlarda cerrahi bir protokol sunacağız. Tavşan kafataslarına sabitlenmiş PEEK silindirleri kullanılarak, osteokondasyon, osteoindüksiyon, osteonezogenez ve vaskülogenez indüklenen malzemeler canlı veya ötenazi yapılan hayvanlarda değerlendirilebilir.

Kemik İkmal Malzemelerinde Kemik Büyümesi ve Neaskülarizasyonunun Değerlendirilmesi İçin Tavşanda Kemik Büyütmenin Kalvarial Modeli

Bu protokol, canlı hayvan intravital mikroskopisi kullanılarak CCL5 aracılı periosteal iskelet kök hücre göçünün gerçek zamanlı olarak saptanmasıdır.

Farelerde Periosteal İskelet Kök Hücrelerinin CCL5 Kaynaklı Göçünün Gerçek Zamanlı Görüntülenmesi

Burada, Wistar albino sıçanlarının femurunun şaftını iyatrojenik olarak kırmak ve nasır gelişimini takip etmek için bir protokol sunuyoruz. Bu femur osteotomi modeli, araştırmacıların kırık iyileşme sürecini değerlendirmelerine ve bir ilacın kırık iyileşmesini nasıl etkileyebileceğini incelemelerine yardımcı olabilir.

Wistar Albino Sıçanlarında Femur Osteotomi Modeli Geliştirme Protokolü

Bu protokol, faredeki mandibular ilk azı dişinin nasıl çıkarılacağına dair adım adım ayrıntıları gösterir. Çene kemiği iyileşmesi ve yenilenmesine odaklanan araştırmacılar için alternatif bir yöntem sunar.

Murin Mandibuler Molar Ekstraksiyon Soket İyileştirme Modelinin Kurulması

Burada, sıçan femoral diyafiz dokusunda kutu boşluğu defekti oluşturmak için bir protokol sunuyoruz. Bu model, biyomekanik stres altında biyomalzeme performansını değerlendirebilir ve intramembranöz osteogenez ile ilgili kemik rejenerasyon mekanizmalarını keşfedebilir.

Sıçan Femora'nın Kortikal Kemiğinde Bir Kutu Boşluğu Defekti Modeli Oluşturma

Murin kemik iliği yaralanması modeli, intramembranöz ossifikasyon yoluyla doğum sonrası osteogenezi incelemek için yararlı bir araçtır. Bu basitleştirilmiş cerrahi protokol, yaralanma sonrası yeni kemik oluşumunun ve hücresel yanıtların aşağı akış değerlendirmesi için kemik iliği ablasyon prosedürünü tanımlar.

Bir Murin Kemik İliği Yaralanması Modelinde İntramembranöz Ossifikasyon Yoluyla Postnatal Osteogenezi İncelemek için Geliştirilmiş Metodoloji

Keşfedin fare kafatası osteoliz modeli oluşturma ve CoCrMo nanopartiküllerle aseptik gevşeme patogenezini inceleme yöntemini. Bu model artroplasti başarısızlığı mekanizmalarını anlamak için değerlidir.

İnşaat ve bir fare grefti Osteoliz modeli aseptik gevşeme içinde CoCrMo parçacıklar maruz tarafından değerlendirilmesi

Daha fazla video keşfet