Name: Monosit posta ve tümör ile ilgili angiogenez periferik arter hastalığı, bir fare modeli intravital mikroskobu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-08-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 38 s
Description: Keşfedin monosit enjeksiyonu ve intravital mikroskopi kullanarak periferik arter hastalığında anjiyogenez mekanizmalarını fare modelinde. Bu yöntem vasküler remodelleme ve hücre davranışlarını gerçek zamanlı görüntülemeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu eser ELSE-Kröner-Stiftung tarafından desteklenen ve DFG (Deutsche Forschungsgemeinschaft, Alman Araştırma Vakfı) SFB 854 (Sonderforschungsbereich, ortak araştırma merkezi). Teknik destek için özel Hans-Holger Gärtner, Audiovisuelles Medienzentrum, Otto von Guericke Üniversitesi Magdeburg, Magdeburg, Almanya, teşekkürler.

bizim çalışma Bölüm 8 hayvan koruma için Alman hukuk göre Saxony-Anhalt, Landesverwaltungsamt Halle, durumunu izni ile gerçekleştirildi. (§ 8, paragraf 1 Alman hukuk hayvan 18.05.2016 - BGBI korunmak için. 1206, S. 1313, § 31 TierSchVersV 13.08.2013 gelen).
 Not: burada deneyler için 8-12 hafta yaşlı erkek BALB/c fareler kullanıldı ve kan bağış insan monosit monosit intravital mikroskobu ile görselleştirme için kullanıldı.
 1. hücre hazırlık Not: monosit yalıtım için lütfen bizim önceki yayımlanan video JoVE yönergeler için bkz: &#34; yalıtım ve intravenöz enjeksiyon, fare kemik iliği elde Monosit &#34; tarafından Wagner vd. 4 Not: otelde tüm adımları içeren hücreleri çalışma kirlenmesini önlemek için steril olmalı.
<ol><li>Hücre boyama 3,3 ile &#39;-Dioctadecyloxacarbocyanine perklorat <ol><li>Resuspend serum serbest kültür orta yoğunluklu olarak 1 x 10 6 hücre/mL hücrelerde. 
		Not: Yalnızca serum ücretsiz orta lipofilik boya aksi takdirde zaten serum lipofilik bileşenleri tarafından esir edilemeyen bu yana bir verimli, boyama etkinleştirir.</li>
		<li>Ekleyin 5 µL 1 mm 3,3 &#39;-dimethylformamide 1 ml hücre süspansiyon Dioctadecyloxacarbocyanine perklorat ve dikkatle resuspend.</li>
		<li>Incubate 20 dakika süreyle 37 ° C'de hücre çözümü</li>
		<li>Hücreleri 37 ° C ve 500 x g 5 dakika süreyle santrifüj kapasitesi</li>
		<li>Süpernatant çıkarmak ve 37 ° C sıcak fetal buzağı serum takıma orta hücrelerle resuspend.</li>
		<li>1.1.4 ve 1.1.5 adımları iki kez yineleyin.</li>
		<li>Formül içeren hücreleri saymak: 
		<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/56290/56290eq1.jpg" /></li> <li>150 µL steril % 0,9 NaCl çözüm hücrelerle resuspend.</li>
		<li>Hücreleri kuyruk damar içine enjekte.</li>
	</ol></li></ol> 2. Anestezi <ol><li>İnhalasyon anestezi <ol><li>bir kimyasal güvenlik başlık altında kapalı bir depo gözünde % 5'lik bir konsantrasyon kullanarak bir Buharlaştırıcı yardımıyla isoflurane buharlaştırmak.</li>
		<li>Fare dikkatli bir şekilde ele ve depo gözüne koydu.</li>
		<li>Hareketli durduktan sonra hayvan arka boyun cilt tarafından ele.</li>
	</ol></li> <li>Mayi anestezi Not: kullanım isoflurane anestezi, mayi iğne gerçekleştirmek için adım 2.1, açıklanan. Hızlı kurtarma ve kısa etkili narkotik isoflurane anestezi etkisi ile fareyi işlemek ve mayi anestezi enjekte kolaydır.
	<ol><li>2,4 mL ketamin (% 10), 0.8 mL Xylazine (% 2) ve 6.8 mL NaCl (% 0,9) bir çözüm için mayi enjeksiyon kullanın.</li>
		<li>Anestezi uygulamadan önce hayvan tartmak. 
		Not: Anestezi için formül şöyledir: <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/56290/56290eq2.jpg" /></li> <li>1 mL insülin şırınga 30 G iğne ile çözüm sol bel altı enjekte etmek kullanın.</li>
		<li>Onun kafes içinde fareyi getirin ve narkotik etkisi için bekleyin. 
		Not: enjeksiyon başarılı narkotik etkisi normalde 5 dk içinde görünür. Anestezi doğru derinliği kapak refleks veya ayak çimdik tepki yokluğu, hem de nefes düzenli, kontrollü oranında tarafından belirlenebilir.</li>
	</ol></li></ol> 3. Membran benzeri matris implantasyonu Not: Bu yöntem bizim grup monosit enjeksiyon sonra tümör angiogenez incelemek için kullanılır. Deneyler bağlı olarak büyüme faktörleri membran benzeri matris eklenir. Biz fareyi kanadını tümör enjekte önce femoral arter ligasyonu uygulandı. Matrisin bir sıcaklık enjeksiyon için 4 ° c olması gerekir. Bu sıcaklıkta matrix sıvıdır; bir katı, vücut sıcaklığında (37 ° C) için jel sertleşir. Subkutan matris daha iyi görüş için fiş, enjeksiyon yerinde fare cilt tıraş.
 Not: isteğe bağlı: eklemek 100 ng temel fibroblast büyüme faktörü, 300 ng vasküler endotelyal büyüme faktörü ve membran benzeri matris için steril koşullarda 26 IU heparin.
<ol><li>Kadar kullanmak 30 G insülin şırınga ve mağaza buz Matrix 1 mL yüklemek.</li>
	<li>Hayvan açayım ve enjeksiyon izi kanatta yanındaki fareyi cilt tutun.</li>
	<li>Enjekte membran benzeri matris 500 µL subkutan. 
	Not: pratik nedenlerden dolayı bu membran benzeri matris subkutan dağılım önlemek için sıkı bir yerde enjekte etmek gereklidir. Deney sonunda fare ödün sonra yapay doku tümöründen çıkarmak daha kolay olacak.</li>
</ol> 4. Kuyruk damar enjeksiyon Not: kuyruk ven enjeksiyon NaCl çözümü deneme önce test hayvanlar üzerinde ile pratik. Monosit yeterince kuyruk damarda enjekte olamaz, collateralization sistemik etkisi olacaktır. Bu protokol için 2.5 milyon monosit enjekte. Vücut ağırlığı en fazla 5 µL/g enjekte çalışın.
<ol><li>Adım 2.5 milyon monosit içeren 1.1.8 altında hazırlanan monosit çözüm kullanın.</li>
	<li>Enjeksiyon için 30 G iğne ve 1 mL insülin şırınga kullanın.</li>
	<li>Dikkatle fare işlemek, restrainer hayvan dizginlemek ve fare değil zarar ve nefes almak için yeterli alan bulunduğundan emin olun.</li>
	<li>Kuyruk plaka ulaşabilirsiniz restrainer Isıtma yastığını koymak.</li>
	<li>Kuyruk yan tarafında bulunan kuyruk damarlar tanımlamak.</li>
	<li>90 °, kuyruk kuyruk ven kuyruk üst tarafında görüntülenen aç.</li>
	<li>Enjeksiyon yan monosit enjekte önce dezenfekte.</li>
	<li>Düz bir açı monosit çözümde yukarıya bakacak şekilde iğne eğim ile enjekte çalışın 
	Not: bir blister görünürse, bu başarısız bir enjeksiyon belirtisi olarak enjeksiyon durdurmak. Yordam yeniden denemeden daha proksimale.</li>
	<li>Enjeksiyon yerinde yaklaşık 60'lar için kuyruğu üzerinde hafif basınç uygulayarak kanamayı durdurmak.</li>
	<li>Hayvan hayvan tam olarak kurtarıldı sonra onun kafes içinde fareyi getirin ve sistemik yan etkileri için izlemek 30 dk için gözlemlemek.</li>
</ol> 5. İntravital mikroskopi <ol><li>hazırlık <ol><li>yapışkan bant ile yer imzalat fare üzerinde sabit bir sıcaklıkta tutmak ve pençeleri yerde düzeltmek için Isıtma yastığını (37 ° C).</li>
		<li>Deri bacak ya da mikroskopi için kullanılan yan yerinde dezenfekte.</li>
		<li>Bölgenin ilgi daha iyi kullanım ve saç girişimi engellemek için tıraş.</li>
		<li>Tüketim steril neşter ve 0.5 x 0.5 cm kare bir alanda iyi Forseps ile cildi. 
		Not: İlgi bölgenin nemli tutmak önemlidir; Aksi takdirde, resim ve doku kalitesi tehlikeye girer. NaCl eriyik-ebilmek var olmak kullanılmış-alan nemlendirmek için.</li>
		<li>Bacak arasında iki ayarlanabilir pul yerleştirin ve bir cam pulları üzerine konumlandırın.</li>
		<li>Doku ıslak ve cam ile temas halinde olun.</li>
		<li>INJECT 50 µL rodamine dextran retrobulbar damarlarının daha iyi görüş için Venöz sisteme.</li>
		<li>Başlamak mikroskobu ve gerekirse bacak konumunu ayarlamak.</li>
	</ol></li> <li>İntravital mikroskobu ayarları <ol><li>mikroskop, bilgisayar, elektronik arabirimleri ve lazerler açın.</li>
		<li>Kuluçka odası ısıtıcının üzerinde açmak ve/veya Isıtma sahne (plaka/tuş takımı) ve sıcaklığı ayarlamak için 37 ° c</li>
		<li>Edinme yazılımını başlatın. Mikroskop ile rezonans tarayıcı donanımlı, bu hızlı tarama modunu seçin.</li>
		<li>Sıcaklığı sabit düzey (35-37 ° C) ulaşıncaya kadar bekleyin 
		Not: İstikrarlı bir sıcaklık için önemlidir: anestezi altında vücut ısısı ve (b) kaçınmak veya en azından minimizing odak kayması kontrol edemez (a) fare,. Bu 1 h olarak (örneğin, Klima sistemi ve ısı kaynaklarının insanlar dahil Oda sayısı) çevre koşullarına bağlı olarak birkaç saat sürebilir. Daldırma hedefleri kullandıysanız, objektif ve cam (veya doku) arasındaki temas bölgesi istikrarsızlık tipik bir kaynağıdır. Objektif ile objektif bir Kalorifer Isıtma yardımcı olabilir; Alternatif olarak, bir otomatik odaklama sistemi mikroskopla önerilir.</li>
		<li>Deneme çözümleme gereksinimleri karşılayan yüksek bir rakam diyafram açıklığı ile büyütme lens seçin (bu bölümün sonundaki nota bakın).</li>
		<li>İle ilgili kazanç, kanal ayarları, inceden inceye gözden geçirmek hız, pixel kararlılık, derinlik birim, adım boyu ve Sahne Alanı'nda deneysel hayvan yerleştirmeden önce ortalama mikroskop ayarlarını optimize.</li>
		<li>Tarama edinme süresini azaltmak için uzmanlığından.</li>
		<li>Yer imzalat fare prewarmed mikroskop Sahne Alanı'nda sonra mikroskop kararlı koşullar ulaştı ve ayarları bir kukla yardımı ile test ettik.</li>
		<li>Faiz bölgesi membran benzeri matris içinde parlak ışık aydınlatma kullanarak odak haline getirmek ve kısaca tarafından uygulanan fluorophores için yeterli süzgeç ayarları ultraviyole ışıkla kılcal incelemek.</li>
		<li>Geçiş için tarama modu; düşük çözünürlük 256 x 256 modu taramaya başlayın ve kazanç geliştirmek ve lazer güç kadar bir sinyal monitörde görülmektedir.</li>
		<li>Odak faiz yapısı üzerinde. Tüm ayrıntıları görünür hale gelene kadar yakınlaştırın.</li>
		<li>Tanımla &#34; başlangıç &#34; ve &#34; son &#34; eksenel yönde pozisyon.</li>
		<li>Taramayı durdur.</li>
		<li>Bozkır boyutu (örneğin, 0,5 µm) ve odak uçaklar (örneğin, 10-20) sayısını tanımlamak.</li>
		<li>Anahtar için belgili tanımlık hareket eden hücre altı yapıları veya hücreleri ve seçme tarama hızına bağlı olarak son piksel çözünürlük (512 x 512 ya da 1024 x 1024) hızı (tarama frekans) hareketleri için en uygun. Çift yönlü tarama yığınları edinimi tutturmak için önerilir. 
		Not: yeterli resim kalitesi verir tarama en yüksek tarama hızı seçin. Tipik noktası tarayıcılar hızları 400 Hz ve 1.4 kHz arasında sağlar. Rezonans tarayıcılar bir ek 8 kHz veya 12 kHz sağlar. Y-yönde satır sayısını azaltarak, tarama hızı daha da arttırılabilir (tipik değerlerdir 512 x 512, 512 x 256 veya 512 x 200 piksel çözünürlük). Sinyal-gürültü oranı bağlı olarak bir saat 2 ile 4 arası ortalama satır ekleyerek görüntü kalitesini artırmak deneyebilirsiniz. Genellikle, bir ortamda 512 x 200 ortalama sonuç bir satın alma/süre 8 KHz rezonans tarayıcı ile çift yönlü modda 18 ms; 512 x 200 ve ortalama x 4 ile kare başına 56 ms aşağı yavaşlatır.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol><li>World Health Organization. WHO | The top 10 causes of death. World Health Organization. , 
 <a target="_blank" href="http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs310/en/.">http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs310/en/.</a> (2017).</li>
<li>Volz, K. S., Miljan, E., Khoo, A., Cooke, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+pluripotent+stem+cells+for+vascular+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Vascular+pharmacology%22%5BJournal%5D)">Development of pluripotent stem cells for vascular therapy.</a> Vascular pharmacology. 56 (5-6), 288-296 (2012).</li>
<li>Henry, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+VIVA+trial%3A+Vascular+endothelial+growth+factor+in+Ischemia+for+Vascular+Angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">The VIVA trial: Vascular endothelial growth factor in Ischemia for Vascular Angiogenesis.</a> Circulation. 107 (10), 1359-1365 (2003).</li>
<li>Wagner, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+intravenous+injection+of+murine+bone+marrow+derived+monocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+JoVE%22%5BJournal%5D)">Isolation and intravenous injection of murine bone marrow derived monocytes.</a> Journal of visualized experiments JoVE. (94), (2014).</li>
<li>Herold, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+monocytes%3A+a+novel+strategy+for+in+vivo+augmentation+of+collateral+vessel+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Human+gene+therapy%22%5BJournal%5D)">Transplantation of monocytes: a novel strategy for in vivo augmentation of collateral vessel growth.</a> Human gene therapy. 15 (1), 1-12 (2004).</li>
<li>Ito, W. D., Arras, M., Scholz, D., Winkler, B., Htun, P., Schaper, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiogenesis+but+not+collateral+growth+is+associated+with+ischemia+after+femoral+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+journal+of+physiology%22%5BJournal%5D)">Angiogenesis but not collateral growth is associated with ischemia after femoral artery occlusion.</a> The American journal of physiology. 273 (3 Pt 2), H1255-H1265 (1997).</li>
<li>Herold, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tetanus+toxoid-pulsed+monocyte+vaccination+for+augmentation+of+collateral+vessel+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Heart+Association%22%5BJournal%5D)">Tetanus toxoid-pulsed monocyte vaccination for augmentation of collateral vessel growth.</a> Journal of the American Heart Association. 3 (2), e000611(2014).</li>
<li>Matrigel Matrix. , 
 <a target="_blank" href="https://www.corning.com/au/en/products/life-sciences/products/surfaces/matrigel-matrix.html">https://www.corning.com/au/en/products/life-sciences/products/surfaces/matrigel-matrix.html</a> (2017).</li>
<li>Eubank, T. D., Galloway, M., Montague, C. M., Waldman, W. J., Marsh, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((M-CSF+induces+vascular+endothelial+growth+factor+production+and+angiogenic+activity+from+human+monocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+immunology+%28Baltimore%2C+Md.+1950%29%22%5BJournal%5D)">M-CSF induces vascular endothelial growth factor production and angiogenic activity from human monocytes.</a> Journal of immunology (Baltimore, Md. 1950). 171 (5), 2637-2643 (2003).</li>
<li>Fridman, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+tumor+growth+of+both+primary+and+established+human+and+murine+tumor+cells+in+athymic+mice+after+coinjection+with+Matrigel%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+National+Cancer+Institute%22%5BJournal%5D)">Enhanced tumor growth of both primary and established human and murine tumor cells in athymic mice after coinjection with Matrigel.</a> Journal of the National Cancer Institute. 83 (11), 769-774 (1991).</li>
<li>Woodman, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caveolin-1+knockout+mice+show+an+impaired+angiogenic+response+to+exogenous+stimuli%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+journal+of+pathology%22%5BJournal%5D)">Caveolin-1 knockout mice show an impaired angiogenic response to exogenous stimuli.</a> The American journal of pathology. 162 (6), 2059-2068 (2003).</li>
<li>Francke, A., Weinert, S., Strasser, R. H., Braun-Dullaeus, R. C., Herold, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+bone+marrow+derived+monocytes%3A+a+novel+approach+for+augmentation+of+arteriogenesis+in+a+murine+model+of+femoral+artery+ligation%5BTitle%5D)+AND+%22American+journal+of+translational+research%22%5BJournal%5D)">Transplantation of bone marrow derived monocytes: a novel approach for augmentation of arteriogenesis in a murine model of femoral artery ligation.</a> American journal of translational research. 5 (2), 155-169 (2013).</li>
<li>Houthuys, E., Movahedi, K., Baetselier, P., de Van Ginderachter, J. oA., Brouckaert, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+the+isolation+and+purification+of+mouse+peripheral+blood+monocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol.+Methods%22%5BJournal%5D)">A method for the isolation and purification of mouse peripheral blood monocytes.</a> J. Immunol. Methods. 359 (1-2), 1-10 (2010).</li>
<li>Berthold, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+human+monocytes+by+Ficoll+density+gradient+centrifugation%5BTitle%5D)+AND+%22Blut%22%5BJournal%5D)">Isolation of human monocytes by Ficoll density gradient centrifugation.</a> Blut. 43 (6), 367-371 (1981).</li>
</ol>

Yazarlar onlar rakip hiçbir mali çıkarları var bildirin.

Burada açıklanan yöntemi Kollateral damar, monosit bu damarları davranışını ve arteriogenesis sürecinin geliştirilmesi ışık tutuyor. Bu iletişim kuralı uygulamak için belgili tanımlık merdiven are basit-e doğru öğrenmek ve diğer bilim alanlarında kullanılabilir. Bu avantajlara rağmen bazı dezavantajları vardır. Örneğin, mikroskobik ekipman açıklanan teknikleri yürütmek için gereklidir. Aygıtların paylaşmak için diğer kuruluşlarla işbirliği yapmak önemlidir bu yüzden bir deneme için ekipman edinme sürdürülemez,.
<p cl...

Kalp-damar hastalıkları koroner kalp hastalığı veya periferik arter hastalığı, dahil olmak üzere, genel olarak ölüm en yaygın nedeni vardır1. Hücre tedavisi ve cerrahi müdahaleler geçmesi mümkün olmayan insanlar için özellikle kalp-damar hastalıkları, tedavi etmek için umut verici bir yaklaşımdır. Hücreleri ya da onların salgılanan maddeler olarak bir tedavi aracı2,3, perfüzyon geliştirmek ve iskemik ve underperfused doku fonksiyonu sağlamak için genel amacı ile kullanmak için birkaç yaklaşım vardır. Bu hedefe ulaşmak için bir girişim arteriogenesis, Kollateral damar gelişimini artırır geliştirmektir. Monosit collateralization ile ilişkili bir önemli hücre türü vardır. Bizim grup alanlarında inflamasyon4,5, monosit etkilerini araştırma özellikle iskemi ve sonraki iltihap6ikna etmek için hindlimb iskemi modeli kullanarak odaklanmıştır. Monosit ve inflamasyon bölgelerine ev collateralization7gelişmesine yol karmaşık sistemik tepkiler.
İntravital mikroskobu kullanımı ile bu hücrelerin içinde vivo davranışını çalışma ve inflamasyon bölgelerine enjekte monosit posta gözlemlemek. En eski çalışmaları sadece post mortem analizleri, histolojik eser ve çok sayıda hayvan ürünleri için gerekli bir giriş de dahil olmak üzere dezavantajları tutun tarif. Yaklaşımımız, immünolojik süreçleri araştırabilirsiniz ve teminat oluşumu ile canlı görüntüleme birden fazla zaman noktalarda.
Kollateral damar iskemik alanlarda geliştirme ek olarak, monosit da tümör büyümesini etkiler. Bu işlemler araştırmak için Engelbreth-Holm-Swarm fare sarkomu, bir tümör hücre dışı matriks proteinleri8' de, zengin çıkarılan bir membran benzeri matris enjekte edip intravital mikroskobu kullanarak analiz. Bu matris ekran test moleküllerine endotel hücre ağ oluşumu veya anjiogenik inhibisyonu yoluyla anti-kanser tedavileri için kullanılır; Bu durumda, monosit hücre terapisi9,10,11tümör anjiogenik potansiyelinin değerlendirecek.
Bu iletişim kuralı, immünolojik süreçleri içinde vivo modelinde iskemi neden eğitim için kolay ve verimli bir şekilde göstermek için amaçtır. Post mortem kas dokusu histolojik testleri için karşılaştırıldığında daha gerçekçi bir test ortamı oluşturabilirsiniz.

<table><tbody><tr><td>% 10 fetal buzağı serumu (FCS)</td> <td>Sigma Aldrich, Hamburg, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>% 1 penisilin / streptomisin</td><td>Sigma Aldrich, Hamburg, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 mL Omnifix -F insülin şırınga</td><td>B. Braun, Melsungen AG, Melsungen, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>50 ml şırınga;</td><td>Fresenius Kabi AG, Bad Homburg, Almanya</td><td></td><td>Injectomat-şırınga 50 ml, kanüllü</td></tr><tr><td>6 kuyulu ultra düşük ataşman-plakalı</td><td>Corning Incorporated, NY, ABD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>8-12 haftalık, erkek, C57BL/6, BalbC fareler&nbsp;</td><td>Charles River, Sulzfeld, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Yapışkan bant</td><td>TESA SE, Hamburg, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Satın Alma Yazılımı</td><td>Leica, Wetzlar, Deutschland&nbsp;</td><td></td><td>Leica Uygulama Paketi Gelişmiş Floresan (LAS AF); Versiyon: 2.7.3.9723</td></tr><tr><td>Canules</td><td>B. Braun, Melsungen AG, Melsungen, Almanya</td><td></td><td>29G, 30G</td></tr><tr><td>Hücre kültürü kabı</td><td>Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hücre kültürü ortamı</td><td>Grubumuz tarafından tek bileşenli</td><td></td><td>olarak üretilmiştir Medium199, %10 Fetal baldır serumu, %1 Antibiyotik (penisilin/streptomisin)</td></tr><tr><td>Santrifüj</td><td>Beckman Coulter GmbH, Krefeld, Almanya</td><td></td><td>Allegra X-15R santrifüj</td></tr><tr><td>Tüy dökücü krem</td><td>Veet, Mannheim, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DiO</td><td>Invitrogen Eugene, Oregon, ABD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dezenfeksiyon maddesi</td><td>Sch&uuml; lke& Mayr GmbH, Norderstedt, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tek kullanımlık neşter No.10&nbsp;</td><td>Tüy emniyetli tıraş bıçağı Co.Ltd, Osaka, Japonya&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma Aldrich, Hamburg, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Erlenmeyer şişesi</td><td>GVB, Herzogenrath, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Etanol %70Otto</td> <td>Fischar GmbH und Co KG, Saarbr&uuml; cken, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fetal Buzağı Serumu</td><td>Sigma Aldrich, Hamburg, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>İnce Forseps</td><td>Rubis, Stabio, İsviçre</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Flurophor/Rhodamindextran</td><td>Thermo Fischer Scientific, Waltham, MA ABD</td><td>Katalognummer: D-1819</td><td></td></tr><tr><td>Eldiven</td><td>R&ouml; sner-Matby Meditrade GmbH, Kiefersfelden, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isıtma yastığı&nbsp;</td><td>Labotect GmbH, G&ouml; ttingen, Almanya&nbsp;</td><td></td><td>Hot Plate 062</td></tr><tr><td>İnsan makrofaj-koloni uyarıcı faktör</td><td>Sigma Aldrich, Hamburg, Almanya</td><td>SRP3110&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>İnsancıl lökosit filtreleri</td><td>Kan koruma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>İnkübatörü</td><td>Ewald Innovationstechnik GmbH, Bad Nenndorf, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Baxter Deutschland GmbH, Unterschlei&szlig; heim, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ketamin (%10)</td><td>Ketavet, Pfizer Deutschland GmbH, Berlin, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lökosit ayırma tüpleri (filtreli tüpler)&nbsp;</td><td>Bio one GmbH, Frickenhausen, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Işık mikroskobu&nbsp;</td><td>Carl Zeiss SMT GmbH, Oberkochen, Almanya</td><td></td><td>Axiovert 40 C</td></tr><tr><td>Lenfosit ayırma besiyeri LSM1077</td><td>GE Healthcare, Pasching, Avusturya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Matrigel&nbsp;</td><td>Becton, Dickinson and Company, Franklyn Lakes, New Jersey, ABD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Orta M199&nbsp;</td><td>PAA Laboratories GmbH, Pasching, Avusturya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikrobiyolojik çalışma tezgahı</td><td>Thermo Electron, LED GmbH, Langenselbold, Almanya</td><td></td><td>Hera güvenli</td></tr><tr><td>Mikroskop lamı</td><td>Carl Roth GmbH + Co. KG, Karlsruhe</td><td>Art. Nr. 1879</td><td></td></tr><tr><td>İnkübatörlü ve ısıtma üniteli mikroskop standı</td><td>&nbsp; Leica DMI 6000, Pecon, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Monosit yıkama tamponu</td><td>Grubumuz tarafından tek bileşenli</td><td></td><td>PBS, %0,5 BSA, 2mM EDTA</td></tr><tr>ile üretilmiştir Fare tutucu <td>Çeşitli</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Çoklu foton mikroskobu&nbsp;</td><td>Leica, Wetzlar, Deutschland&nbsp;</td><td></td><td>Leica SP5 Konfokal mikroskop, Cameleon, Koherent</td></tr><tr><td>NaCl (%0,9)</td><td>Berlin Chemie AG, Berlin, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Neubauer sayım odası&nbsp;</td><td>Paul Marienfeld GmbH und Co.KG, Lauda-K&ouml; nigshofen, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Objective</td><td>Leica, Wetzlar, Deutschland&nbsp;</td><td></td><td>Leica HC PL APO 10x/0.4 CS</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Life technologies GmbH, Darmstadt, Almanya</td><td></td><td>ph 7,4 steril</td></tr><tr><td>Penisilin/Streptomisin</td><td>Sigma Aldrich, Hamburg, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Percoll</td><td>Grubumuz tarafından tek bileşenli</td><td></td> üretilmiştir <td>%90 Percoll, %10 1,5M NaCl, &rho;= 1,064 g cm-3</td></tr><tr><td>Percoll çözeltisi</td><td>GE Healthcare, Bio-Science AB, Uppsala, İsveç</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipetler</td><td>Eppendorf AG, Hamburg, Almanya</td><td></td><td>10&mikro; L / 100 ve mikro; L / 200 ve mikro; L / 1000 ve mikro; L</td></tr><tr><td>Pipetler serolojik</td><td>Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, Almanya</td><td></td><td>&nbsp; Cellstar2ml, 5ml, 10ml</td></tr><tr><td>Pipetleme kafaları</td><td>Eppendorf AG, Hamburg, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipetus</td><td>Eppendorf AG, Hamburg, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Polistirol tüp</td><td>Cellstar, Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Makas</td><td>Kelimesi Hassas Aletler, Inc., Sarasota, ABD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Terazi</td><td>Mettler PM4800 Delta Serisi, Mettler-Toledo GmbH, Gie&szlig; en, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aspirasyon ünitesi</td><td>Integra bioscience, Fernwald, Almanya</td><td></td><td>Vacusafe konfor</td></tr><tr><td>Cerrahi makas</td><td>Word Precision Instruments, Inc., Sarasota, ABD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tripan mavisi çözeltisi 0,4 %</td><td>Sigma Aldrich, Hamburg, Almanya</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kapaklı tüpler</td><td>Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, Almanya</td><td></td><td>15ml, 50ml Cellstar</td></tr><tr><td>Ksilazin (%2)</td> <td>Ceva Tiergesundheit GmbH, D&uuml; Sseldorf, Almanya</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

monosit posta ve tümör ile ilgili angiogenez periferik arter hastalığı, bir fare modeli intravital mikroskobu

Intravital Microscopy of Monocyte Homing and Tumor-Related Angiogenesis in a Murine Model of Peripheral Arterial Disease

Terapötik periferik arter hastalığı ve iskemik kalp hastalığı için iskemik alanları tarafından hemodinamik darlığına neden kan akışını artırmak için hedeftir. Damar cerrahisi seçili durumda, ama ilerleme gibi cerrahi için belli olmayan hastalar ağrı, kritik uzuv iskemi veya hayat büyük kesintileri dinlenme ya da iş için uygun bir seçenek, kendi hastalık Azaltıcı için birkaç olasılık vardır. Hücre tedavisi monosit gelişmiş perfüzyon teminat oluşumu uyarılması yoluyla üzerinden birkaç non-invaziv seçeneklerden biri.
Bizim grup monosit nakli hindlimb iskemi modeli kullanarak fare içine sonra arteriogenesis inceliyor. Daha önce hindlimb perfüzyon syngeneic monosit tetanoz uyarılmış nakli kullanarak artış göstermiştir. Teminat oluşumu üzerine etkisi yanı sıra, tümör büyüme bu terapi tarafından etkilenebilir. Bu etkileri araştırmak için biz Engelbreth-Holm-Swarm sarkomu hücre dışı matriks fareyi, kanat femoral arter tıkanıklığı sonra enjekte edilerek bir membran benzeri matris fare modeli kullanın.
Yapay tümör çalışmaları sonra biz intravital mikroskobu vivo içinde tümör-anjiogenez ve Kollateral damar içinde homing monosit incelemek için kullanın. Önceki çalışmalarda hayvan modelleri, öldükten sonra yapılara daha sonraki analiz gerektirir histolojik incelenmesi anlatmıştık. Yaklaşımımız monosit posta collateralization gerçek zamanlı sekanslarında bölgelerine görüntüler, gerçekleştirmek, kolay ve arteriogenesis ve tümör angiogenez içinde vivosüreci inceler.

Tümör ve monosit tarafından tetiklenen Kollateral damar büyüme incelenmesi için intravital mikroskobu tümör anjiogenez ve arteriogenesis moleküler mekanizmaları yeni yönlerini ortaya çıkarmak yardımcı olabilir. Hücreleri hazır olmalı ve dikkatlice adımları protokolü kullanarak enjekte. Farklılıklar arasında tek deneyler varyasyonları için yol açabilir. Monosit Venöz sistem (sistemik etkileri korumak ve emboli, eğer enjeksiyon Arteryel sistemde yapılır hangi oluşabilir önlemek için,<strong...

Monosit arteriogenesis periferik arter hastalığı bağlamında önemli arabulucu vardır. Bu iletişim kuralı bir membran benzeri matris ve intravital mikroskobu kullanarak, monosit enjeksiyon femoral arter ligasyonu fare modeli sonra monosit izleme ve tümör ile ilgili angiogenez inceler.

Monosit posta ve tümör ile ilgili angiogenez periferik arter hastalığı, bir fare modeli intravital mikroskobu

The therapeutic goal for peripheral arterial disease and ischemic heart disease is to increase blood flow to ischemic areas caused by hemodynamic ...

Merhaba, benim adım Christian Deffge. Magdeburg'daki üniversite hastanesinde tıp doktoruyum ve Dr. Herold ile Profesör Braun-Dullaeus'un kardiyovasküler araştırma grubunda çalışıyorum. Kollateral büyümenin artırılmasını araştırıyoruz.Bu nedenle, görüntüleme yöntemini kullanıyoruz. Bu videoda, yöntemlerimizi açıklamak istiyoruz. Hücreleri, mililitre başına 1x10⁶ hücre yoğunluğunda, serum içermeyen kültür ortamında yeniden süspande edin.Bir mililitre hücre süspansiyonuna beş mikrolitre bir milimolar DIO ve dimetilformamid ekleyin ve dikkatlice yeniden süspanse edin. Hücre solüsyonunu 37 °C'de 20 dakika inkübe edin. Hücreleri 500 g'de beş dakika santrifüjleyin.Süpernatanı uzaklaştırın ve hücreleri 37 °C'ye ısıtılmış FCS takviyeli besiyeri ile yeniden süspande edin. Bu adımı iki kez tekrarlayın. Neubauer sayım kamarası ve ışık mikroskobu yardımıyla hücreleri sayın.Hücreleri sodyum klorür çözeltisi ile yeniden süspande edin. Hücreleri kuyruk venine enjekte edin. Matrigel matrisi, skuamöz sarkomdan ekstrakte edilmiş, yeniden oluşturulmuş bir bazal membran preparasyonudur.Endotel hücre ağı oluşumu veya anjiyojenik inhibisyon yoluyla anti-kanser tedavileri için test moleküllerini tarar. Hü

intravital-microscopy-monocyte-homing-tumor-related-angiogenesis

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Intravital mikroskopi pial mikrosirkülasyon zamansal ve mekansal hemodinamik ve inflamatuar olayları takip etmek.

Kapalı Kranial Pencere kullanarak Fare Beyin Mikrosirkülasyon intravital Mikroskopi

Bu videoda, intraperitoneal olarak lipopolisakkarit enjekte edilen bir fare modelinin mezenterial damarlarındaki kan hücresi-endotel etkileşimlerinin gerçek zamanlı görselleştirmesini gösteriyoruz.

Bir Enflamasyon Fare Modelinde Kan Hücresi-Endotel Etkileşimlerini Analiz Etmek için İntravital Mikroskopi

Burada vasküler inflamasyon ve canlı farelerde trombüs oluşumu sırasında aktive endotel üzerindeki heterotipik trombosit-nötrofil etkileşimleri görselleştirmek için floresan intravital mikroskobu deneysel bir tekniktir rapor. Bu mikroskobik teknoloji vasküler hastalığın moleküler mekanizmasını incelemek ve patofizyolojik durumlardaki farmakolojik ajanları test için değerli olacaktır.

Canlı Fare Damar İltihabı ve trombüs oluşumu sırasında Activated Endotel üzerinde heterotypic Trombosit nötrofil Etkileşimleri Gerçek zamanlı Görüntüleme

Transgenik raportör fareler ve enjekte edilebilir floresan etiketler kullanarak, uzun süreli intravital eğirme diski konfokal mikroskobu, ApcMin/+ kolorektal kanser modelinde miyeloid hücre davranışının bağırsak adenomuna doğrudan görselleştirilmesini sağlar.

Miyeloid hücrelerin Dynamics Gerçek zamanlı Görüntüleme Süm Min / + Bağırsak Tümörleri Disk Eşodaklı Mikroskopi Spinning tarafından

Farelerde mezenter damarlarının intravital mikroskopisinin bu basitleştirilmiş uygulaması, lökosit-endotel ve trombosit-lökosit etkileşimlerini gözlemlemek için farklı inflamasyon modellerinde kullanılabilir.

Farelerde mesenteriumda Damarlardaki intravital Mikroskopi Lökosit-endotelyal ve Trombosit-lökosit Etkileşimleri

Anestezi uygulanmış farelerde intravital konfokal mikroskopi kullanarak kararlı durum ve enflamatuar koşullar altında mezenterik venlerdeki nötrofillerin ve monositlerin davranışını izlemek için bir protokolü detaylandırıyoruz.

Real Time Anestetize Farelerde Intravital Mikroskopi Mezenterik Damarlardaki nötrofiller ve monositler Görüntüleme

Bu iletişim kuralı transgenik fareler hücre özgü floresan işaretleri ifade intravital görüntüleme açıklar. İntravital görüntüleme implante edilebilir windows üzerinden süreçlerin mikroskobik görselleştirme mümkündür kullanarak yaşayan hayvanlarda yüksek çözünürlüklü gözlemler için non-invaziv bir yöntem sağlar. Bu yöntem boyuna işlemleri incelemek özellikle kullanışlıdır.

Tümör ilişkili damarlara kullanmanın intravital mikroskobu gelişmiş Dorsal deri kıvrım pencere Chambers transgenik floresan fareler üzerinde

Bu el yazması transgenik muhabir fare kullanımı ve bağışıklık hücrelerinin aktivasyonu değerlendirmek için kan damarlarının intravital video mikroskobu kullanılarak Anjiyotensin II kaynaklı hipertansiyonda floresan boyalar farklı yönetim yollarını açıklar ve onların yetenek rulo ve endotel için uygun.

Lökosit haddeleme ve yapışma Anjiyotensin II-infüzyon farelerde görselleştirme: teknikleri ve Püf noktalar

Biz metastazın tümör mikroortamı ile ilişkili geçici vasküler geçirgenliği değerlendirmek için iki yöntem tarif (tmem) kapı fonksiyonu ve kanser hücresi konvülsyon yüksek molekül ağırlığı İntravenöz enjeksiyon kullanarak (155 kDa) farelerde dekstran. Yöntemleri, canlı hayvanların intravital görüntüleme ve immünofluorescence kullanarak sabit doku analizi içerir.

Intravital görüntüleme ve sabit doku analizi kullanılarak kanserli hücre yaygınlaştırılması ile Ilişkili Metasküler kapı-aracılı vasküler geçirgenlik tümör Mikroortamının değerlendirilmesi

Lökosit ve trombositlerin işe alınması, arteriyogenez sırasında kollateral arterlerin etkili büyümesi için gerekli olan önemli bir bileşeni oluşturur. Multifoton mikroskopisi, arteriyogenez sırasında lökosit alımını ve ekstravazasyonunu incelemek için in vivo yüksek uzay-zamansal çözünürlüğe ve daha az foto-toksisiteye sahip hücre dinamiklerini izlemek için etkili bir araçtır.

Bir Murin Arka Bacak Modelinde Arteriyogenez Sırasında Lökosit Alımını İzlemek için Multifoton İntravital Görüntüleme

Bu protokol, FVB farelerde arka bacak kangrenini indüklemek için femoral arter ve ven elektrokoagülasyonunu nitrik oksit sentaz inhibitörü uygulamasıyla birleştiren benzersiz, klinik olarak ilgili bir periferik arter hastalığı modelini tanımlamaktadır. İntrakardiyak DiI perfüzyonu daha sonra ayak yastığı vaskülatürünün yüksek çözünürlüklü, üç boyutlu görüntülenmesi için kullanılır.

Murin Arka Ekstremite Kangren Modelinde Footpad Vaskülatürünün Yüksek Çözünürlüklü Üç Boyutlu Görüntülenmesi

Keşfedin monosit enjeksiyonu ve intravital mikroskopi kullanarak periferik arter hastalığında anjiyogenez mekanizmalarını fare modelinde. Bu yöntem vasküler remodelleme ve hücre davranışlarını gerçek zamanlı görüntülemeyi sağlar.

Monosit posta ve tümör ile ilgili angiogenez periferik arter hastalığı, bir fare modeli intravital mikroskobu

Daha fazla video keşfet