Name: Değerlendirme endokrin omurgalı Neural ağ işlevi çoklu elektrot dizileri kullanarak geliştirme bileşikler engellemeden etkilerinden (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-04-26T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 28 s
Description: Öğrenin çoklu elektrot dizileri kullanarak gelişim nörobiyolojisinde endokrin bozucu kimyasalların sinir ağı aktivitesi üzerindeki etkilerini. Bu yöntem çevresel toksinlerin embriyonik beyin gelişimine etki mekanizmalarını anlamaya yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışmada NSF (HBCU-UP araştırma başlatma Ödülü, HRD 1401426 ve EPSCoR EPS-0814251) ve NIH (COBRE 1P20GM103653-01A1) tarafından desteklenmektedir. K.S. Delaware INBRE-III 6404 bir bursu tarafından desteklenmektedir.

Aşağıda belirtilen iletişim kuralı etkileri BPA maruz kalma sırasında (erken) embriyo test etmek için standart ve bit/sn, BPF veya diğer EDC piliç embriyonik nöronlar içinde kullanılmak üzere değiştirilebilir.
Bu iletişim kuralı Delaware Eyalet Üniversitesi Kurumsal ilkeleri ve kuş embriyo NIH poliçesinin izler. Protokol Ayrıca onay DSU'ın malzeme ve kimyasal güvenlik yönergeleri ile mevcuttur.
1. malzeme Kur
<ol><li>BPA (m.w. 228.29) % 10 etanol (v/v) yapmak a 1 mM hisse senedi eriyik (mL % 10 etanol 0,23 mg) suda çözülür. Sonraki dilutions (0,1 µM, 0.5 µM, 1 µM, 5 mikron ve 10 µM) neurobasal ortamda yapmak. Dikkat: BPA çevresel bir toksindir ve bakım tozu ele alırken edilmelidir.</li>
	<li>Piyasada bulunan bir masa üstü kuluçka 37 ° C'de piliç yumurta kuluçkaya Yumurta E7 embriyo 7 gün kuluçkaya.</li>
	<li>3-4 h için % 70 etanol ıslatarak bana gerekli sayıda ölçü birimi Sterilize hazırlamak ve sonra üç kez içinde yaklaşık 10 mL steril distile su BSLII Hood durulayın. Not: Bana bir 8 x 8 kılavuz düzenlenmiş 64 nanoporous Platin elektrotlar içerir. Elektrot çapı 30 µm ve elektrotlar arasındaki aralığı 200 µm. Denatüre etanol gibi bu MEA korozyona yol açacaktır Guinan sterilizasyon için kullanmayın.</li>
	<li>(Steril koşullar korumak için) bana kapak ile steril bir kap içine yerleştirin ve bir masa üstü kuluçka için hareket. En az 6 saat 55 ° C'de pişirin Bu uygun sterilizasyon için kritik bir adımdır ve sıcaklık 60 ° C. geçmemelidir Kısırlık Bakımı, bana BSLII hood için depolama için daha fazla kullanımı kadar içeren yemek taşımak. Not: Biz plastik kapak ile bir fırın güvenli cam pişirme çanağı kullanın ve yüzey sterilize % 70 etanol ve kurutma için BSLII hood yerde.</li>
	<li>Aliquot ekstra hücresel matris ECM çözümü. Şişeyi 4 ° C'de gecede çözülme ve 100 µL aliquots-20 ° C'de dondurmak Not: ECM donmuş sevk edilir. ECM oda sıcaklığına kadar hazır oda sıcaklığında polymerizes ve sonra polimerli, bu ceket için imkansız gibi kat için getirilmelidir değil. ECM büyüme faktörleri olmadan Bilinmeyen faktörler nedeniyle ek etkileri önlemek için tercih edilir.</li>
	<li>Tüm diseksiyon aletleri (Dumont #5 forseps, kıvrımlı pensler, küçük makas ve bahar makas) sterilize ve kendinden contalı malzeme diseksiyon yemekleri % 70 etanol ile kaplı ve koyup diseksiyon mahallede kuruyuncaya kadar bırakın.</li>
</ol>2. piliç embriyonik nöron kültürü ve ağ etkinliğini
<ol><li>Kaplama günü, bir şişe kaldırmak % 70 etanol ile-20 ° C-dondurucu dan ECM sprey ve Buza koyun. % 25'e 300 µL soğuk neurobasal orta BSLII hood içine ekleyerek sulandırmak.</li>
	<li>Bir P200 pipetteman eklemek 100 µL % 25 ECM elektrotlar dokunmaya değil ve yüzeyde ince bir film ayrılmadan hemen kaldırmak için dikkat çekici MEA ortasına. MEA kapak ve nöronlar plaka için hazır kadar CO2 kuluçka (37 ° C ve % 5 CO2) yerleştirin.</li>
	<li>E7 yumurta (embriyonik gün 7, 7 gün süreyle 37 ° C'de inkübe) dış kabuğunun % 70 etanol ile sterilize. Embriyo soğuk steril Hank'in dengeli tuzlar çözüm (HBSS) kalsiyum olmadan içeren bir Sylgard alt diseksiyon çanak içine başını kesmek. Göz çevresi kesmek ve gözbebekleri kaldırın. DuMont #5 kullanarak ince forseps ve bahar makas ventral tarafta bir kesi yapın ve dış katmanlarını deri ön ve optik tectum ortaya çıkarmak için kaldırın. Soyma ve pial membran dikkatli bir şekilde çıkarın. Ön başka bir petri kabına aktarın ve bahar makasla yaklaşık 2 mm küçük parçalar halinde kes. Not: Değil herhangi bir kan damarları için ön pial membran çıkarıldıktan sonra bağlı olmalıdır. Aletleri ve diseksiyon alanı iyice % 70 etanol ile sterilize sürece bir başlık dışında diseksiyon gerçekleştirildiğinde oldukça iyi sonuçlar elde varsa, diseksiyon bir steril diseksiyon başlık, gerçekleştirmek için tercih olsa da .</li>
	<li>Steril transfer pipet kullanarak, bir 15 mL santrifüj tüpüne ön parçaları toplamak ve HBSS mümkün olduğunca daha fazla ön lavabo santrifüj tüpü dibine parçalarını icar sonra kaldırın.</li>
	<li>1 mL % 0.05 ekleyin tripsin/EDTA (37 ° C için önceden ısındı) ve 37 ° C'de 15 dakika boyunca kuluçkaya.</li>
	<li>Pasteur pipet kullanarak, dikkatle doku parçaları bozmadan tripsin kaldırın ve 1 mL neurobasal orta ekleyin. Doku Lavabonun altına parçaları izin ve orta kaldırın. Bu yıkama bir kez daha yineleyin. Bu adım tripsin/EDTA yıkayın etmektir.</li>
	<li>Neurobasal orta 2 mL ekleyin ve triturating başlar. Toz steril bir yangın cilalı Pasteur pipet alarak ve doku yok daha fazla parçalar görülür kadar doku o ile birkaç kez hafifçe geçen içerir. Herhangi bir adet sonra tekrarlanan geçer kalırsa, sadece altına yerleşmek bırakın. Not: köpük oluşturmak, durup, aspirasyon tarafından kaldırmak - triturating süre renginde solma kaçının.</li>
	<li>Yeniden askıya alınan hücreler 1:10 neurobasal orta ile sulandırmak ve hücrelerin Trypan mavi boya ve bir hemasitometre kullanarak say. Mix 50 µL 0.5 mL santrifüj tüpü Trypan mavi çözümün 50 µL ile seyreltilmiş hücre. Coverslip koyduktan sonra hemacytometer için 10 µL ekleyin ve parlak açık hücreleri (mavi hücreler öldü ve yok sayılması) saymak. Not: Tipik cep numaraları 1 ile 5 x 107 hücre/mL arasında tek E7 optik tectum aralığından.</li>
	<li>Disosiye plaka ECM hücrelerdeyse 2200 hücreler/kare mm bir yoğunluk Guinan kaplı. MEA sistemimiz için bu MEA başına yaklaşık 130.000 hücre çevirir. Birim içinde MEA için 1 mL getirmek ve CO2 kuluçka hücre eki ve neurite (şekil 1) uzantısı için bir gecede bana yer neurobasal orta ekleyin. Not: Farklı alanlarda ve elektrot numaraları Guinan farklı hücre yoğunluğu çalıştı - genel olarak, daha yüksek hücre yoğunluğu büyük ağ faaliyet sonuçları, ama aynı zamanda daha kısa ömürlü kültürler için yol açar.</li>
	<li>Ertesi gün, adım 1.1 için tedavi MEA yapılan 1 mM stoktan neurobasal ortamda 10 µM son bir konsantrasyon için BPA ekleyin. Denetime MEA, % 10 etanol aynı birim su (v/v) çözüm ekleyin.</li>
	<li>Harcanan orta neurobasal orta içeren 10 µM ile BPA her geçen gün 7 gün vitro (7DIV) ve bundan sonra her gün kadar ağ aktivite arttıkça değiştirin. Not: ağ aktivite arttıkça, metabolik aktiviteyi artırır ve medya değişikliklerini daha sık olması gerekir. Turuncu açmak orta izin vermeyin.</li>
</ol>3. kayıt nöronal ağ etkinliğini
<ol><li>Satın alma günü, taze neurobasal orta ile Kültür ortam değişimi ve ölçü CO2 kuluçka en az 2 h kayıt önce geri dönün. Kayıt yazılımı çalıştırın ve MEA sıcaklığı 37 ° C sıcaklık ikonuna tıklayarak ayarlayın (tamamlayıcı şekil 3.1a-b). Not: Kayıt günü 3 kaplama olarak erken başlayabilir ve kültürler hayatta olduğu sürece devam edebilirsiniz.</li>
	<li>(Altında akarsu sol pencerede Masası'nda) "Muse" ikonuna tıklayarak satın alma parametrelerini ayarlamak ve "işleme Ekle" ve "Spike dedektörü" seçin ve pencere açılır içinde Tamam'ı tıklatın. "Spike dedektörü (6 x STD)" dosya adının altında görünür (tamamlayıcı şekil 3.2a-b).</li>
	<li>Sonraki Spike Dedektör üzerinde sağ tıklayın, "İşleme Ekle" ve "Patlama dedektörü" seçin ve pencere açılır içinde Tamam'ı tıklatın. "Dedektör patlama" (ısı) Muse simgenin altında görünecektir (tamamlayıcı şekil 3.3a-b).</li>
	<li>Sonraki patlama Dedektör üzerinde doğru tıkırtı, seçme "Eklemek işleme" ve "Sinir istatistikleri derleyici." Pencere açılır, dosya üstbilgisi, de toplanan istatistikleri ve senkronizasyonu seçili olduğuna emin olun. Tamam'ı tıklatın. "İstatistikler derleyici"-ecek gözükmek altında (tamamlayıcı şekil 3.4a-b). Not: Bu adaptif eşik geçiş (6 x STD filtre), 100 ms arası spike aralıklarla sivri 5, 10 oranı algılama ateş demek en az sayıda ile ayarlar 20 ms bir senkronizasyonu parametrelerinin ve 0.083333 sivri min başına en az spike oranda s.</li>
	<li>Zamanlanmış kayıt kayıt süresini 5 dakika (300.000 ms) için alt saat simgesine tıklayarak ayarlayın. Bu 5.1 dakikada kaydetmek ve 5 dakika boyunca kaydetmek için ayar bölümünde yer alan bilgileri değiştirerek elde edilir. Bu hemen başlatılır ve bir kez yürütülür (tamamlayıcı şekil 3.5).</li>
	<li>MEA sıcaklığı 37 ° C MEA taşımadan önce ulaştığını emin olun. MEA kuluçka makinesi kaldırmak, kayıt biriminde yer ve MEA kilitleyin. Ağ etkinlik başlangıç kayıt zamanlanmış kayıt bölümünde ya da "Dosyayı yürütmek" penceresinde kayıt simgesini tıklayarak kayıt işlemini başlatmak. 10 dakika daha uzun kayıtları elde edilebilir, ancak genellikle, bir kayıt süresini 5 dakika (300.000 ms), yeterlidir.</li>
	<li>Kaydettikten sonra bana da kuluçka için dönmek. Not: MEA İnkübatör dışında zaman en aza indirmek için ve kısırlık korumak için özen göstermelidir.</li>
</ol>4. veri analizi
<ol><li>Çevrimdışı kayıt yazılımı kullanarak ham veri analizi yapılabilir. Dosya açılır menüsü tıklayın ve kayıt açık. Çözümlenmesi için ham veri dosyası seçin. Gerekli spiking parametreleri yakalamak için ham kayıtlar tekrarlanır.</li>
	<li>Sivri ortalama sayı elde etmek için Spike dedektörü modülü kullanmak ve senkronizasyonu dizini elde etmek için sinirsel istatistikleri derleyici modülü kullanmak.</li>
	<li>Spike dedektörü, patlama dedektörü ve istatistik derleyici modül olarak daha önce (Bölüm 3) yükleyin.</li>
	<li>Spike bulmak, patladı dedektörü ve istatistik derleyici modülü windows içinde aşağı açılır menülerden Spike listesi, ağ veri bloğu liste ve ölçümleri, Gelişmiş seçmenizi sağlar.</li>
	<li>Bir .csv dosyası yönettiği klasöründe oluşturur veri dosyası kaydetmeye başlamak için kayıt düğmesini tıklatın. Spike parametreleri - toplam sayısı sivri ve senkronizasyonu dizin - .csv dosyasında kaydedilir. Not: Bu işlemci zamanını ve hesaplama kaynaklarını tüketmek gibi gerçek zamanlı analiz ham veri kaydederken tavsiye edilmez.</li>
</ol>

<ol><li>Anahara, R., Yoshida, M., Toyama, Y., Maekawa, M., Masayuki, K., Ishino, F., Toshimori, K., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16819149">Estrogen agonists, 17 beta-estradiol, bisphenol A, and diethylstilbestrol, decrease cortactin expression in the mouse testis.</a> Arch. of Histol. Cytol. 69 (2), 101-107 (2006).</li>
<li>Dodds, C. <a target="_blank" href="https://academic.oup.com/bmb/article-abstract/11/2/131/256818/SYNTHETIC-OESTROGENS?redirectedFrom=fulltext">Synthetic oestrogens.</a> Br. Med. Bull. 11 (2), 131-134 (1955).</li>
<li>Grignard, E., Lapenna, S., Bremer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Weak+estrogenic+transcriptional+activities+of+Bisphenol+A+and+Bisphenol+S%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology+In+Vitro%22%5BJournal%5D)">Weak estrogenic transcriptional activities of Bisphenol A and Bisphenol S.</a> Toxicology In Vitro. 26 (5), 727-731 (2012).</li>
<li>Herbst, A. L., Ulfelder, H., Poskanzer, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenocarcinoma+of+the+vagina%3A+association+of+maternal+stilbestrol+therapy+with+tumor+appearance+in+young+women%5BTitle%5D)+AND+%22New+Eng.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Adenocarcinoma of the vagina: association of maternal stilbestrol therapy with tumor appearance in young women.</a> New Eng. J. Med. 284, 878-881 (1971).</li>
<li>Jenkins, S., Raghuraman, N., Eltoum, I., Carpenter, M., Russo, J., Lamartiniere, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+exposure+to+bisphenol+A+increases+dimethylbenzanthracene-induced+mammary+cancer+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Health+Persp%22%5BJournal%5D)">Oral exposure to bisphenol A increases dimethylbenzanthracene-induced mammary cancer in rats.</a> Environ Health Persp. 117 (6), 910-915 (2009).</li>
<li>Okada, A., Kai, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+estradiol-17beta+and+bisphenol+A+administered+chronically+to+mice+throughout+pregnancy+and+lactation+on+the+male+pups%27+reproductive+system%5BTitle%5D)+AND+%22Asian+J+Androl%22%5BJournal%5D)">Effects of estradiol-17beta and bisphenol A administered chronically to mice throughout pregnancy and lactation on the male pups' reproductive system.</a> Asian J Androl. 10 (2), 271-276 (2008).</li>
<li>Palanza, P., Gioiosa, L., Vom Saal, F. S., Parmigiani, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+developmental+exposure+to+bisphenol+A+on+brain+and+behavior+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Environ.+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of developmental exposure to bisphenol A on brain and behavior in mice.</a> Environ. Res. 108 (2), 150-157 (2008).</li>
<li>Mimoto, A., Fujii, M., Usami, M., Shimamura, M., Hirabayashi, N., Kaneko, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+an+estrogenic+hormone+receptor+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Biophys.+Res.+Commun%22%5BJournal%5D)">Identification of an estrogenic hormone receptor in Caenorhabditis elegans.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 364 (4), 883-888 (2007).</li>
<li>Allard, P., Colaiacovo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bisphenol+A+impairs+the+double-strand+break+repair+machinery+in+the+germLine+and+causes+chromosome+abnormalities%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+Natl.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Bisphenol A impairs the double-strand break repair machinery in the germLine and causes chromosome abnormalities.</a> Proceedings Natl. Acad. Sci. 107 (47), 20405-20410 (2010).</li>
<li>Mersha, M. D., Patel, B. M., Patel, D., Richardson, B. N., Dhillon, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+BPA+and+BPS+exposure+limited+to+early+embryogenesis+persist+to+impair+non-associative+learning+in+adults%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Brain+Funct.+%3A+BBF%22%5BJournal%5D)">Effects of BPA and BPS exposure limited to early embryogenesis persist to impair non-associative learning in adults.</a> Behav. Brain Funct. : BBF. 11, 27(2015).</li>
<li>Chen, Y., Shu, L., Qiu, Z., Lee, D. Y., Settle, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+to+the+BPA-Substitute+Bisphenol+S+Causes+Unique+Alterations+of+GermLine+Function%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+Genetics%22%5BJournal%5D)">Exposure to the BPA-Substitute Bisphenol S Causes Unique Alterations of GermLine Function.</a> PLOS Genetics. 12 (7), 1006223(2016).</li>
<li>Shein Idelson, M., Ben-Jacob, E., Hanein, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+Synchronous+Oscillations+in+Freely-Organized+Small+Neuronal+Circuits%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Innate Synchronous Oscillations in Freely-Organized Small Neuronal Circuits.</a> PLoS ONE. 5 (12), 14443(2010).</li>
<li>Baltz, T., Herzog, A., Voigt, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Slow+Oscillating+Population+Activity+in+Developing+Cortical+Networks%3A+Models+and+Experimental+Results%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Slow Oscillating Population Activity in Developing Cortical Networks: Models and Experimental Results.</a> J. Neurophysiol. 106 (3), 1500-1514 (2011).</li>
<li>Pettmann, B., Louis, J. C., Sensenbrenner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+and+Biochemical+Maturation+of+Neurones+Cultured+in+the+Absence+of+Glial+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Morphological and Biochemical Maturation of Neurones Cultured in the Absence of Glial Cells.</a> Nature. 281 (5730), 378-380 (1979).</li>
<li>Zhang, H., Wu, C. Y., Wang, W., Harrington, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interneuronal+Synapses+Formed+by+Motor+Neurons+Appear+to+Be+Glutamatergic%5BTitle%5D)+AND+%22NeuroReport%22%5BJournal%5D)">Interneuronal Synapses Formed by Motor Neurons Appear to Be Glutamatergic.</a> NeuroReport. 22 (16), 809-813 (2011).</li>
<li>Paiva, A. R. C., Park, I., Príncipe, J. C. <a target="_blank" href="http://www.sci.utah.edu/~arpaiva/pubs/2010b.pdf">A Comparison of Binless Spike Train Measures.</a> Neural Comp. and Appl. 19 (3), 405-419 (2010).</li>
<li>Cretu, A., Fotos, J. S., Little, B. W., Galileo, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+and+Rat+Glioma+Growth%2C+Invasion%2C+and+Vascularization+in+a+Novel+Chick+Embryo+Brain+Tumor+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Human and Rat Glioma Growth, Invasion, and Vascularization in a Novel Chick Embryo Brain Tumor Model.</a> Clin Exp Metastasis. 22, 225-236 (2005).</li>
<li>Chiappalone, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissociated+cortical+networks+show+spontaneously+correlated+activity+patterns+during+in+vitro+development%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Dissociated cortical networks show spontaneously correlated activity patterns during in vitro development.</a> Brain Res. 93, (2006).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+recording+on+multi-electrode+array+reveals+degraded+inhibitory+connection+in+neuronal+network+development%5BTitle%5D)+AND+%22Biosens+Bioelectron%22%5BJournal%5D)">Long-term recording on multi-electrode array reveals degraded inhibitory connection in neuronal network development.</a> Biosens Bioelectron. 22 (7), 1538-1543 (2007).</li>
</ol>

Yazarlar onlar rakip hiçbir ilgi alanlarına sahip bildirin.

Hızlı büyüme ve embriyogenez gibi geliştirme aşamalarını BPA de dahil olmak üzere çeşitli endokrin engellemeden bileşikler zararlı etkilerini özellikle güvenlik açığından etkilenir. Detaylı iletişim kuralları etkileri BPA maruz kalma bir vitro omurgalı nöronal ağ modeli eğitim için sağlar. Bu iletişim kuralını kullanan, BPA spike oranı yanı sıra gelişmekte olan nöron ağları (Şekil 2a-b) senkronizasyonu dizinde düşürür kurdu.
Metodolojimiz BPA maruz kalma sırasında erken embriyogenez çalışmak için tasarlanmış ve kolayca diğer EDCs etkileri çalışmaya adapte edilebilir. Civciv embriyonik nöronal kültürler fare veya fareyi de dahil olmak üzere diğer omurgalı modellerle karşılaştırıldığında kurmak nispeten kolaydır. Ayrıca, ayrı bir hayvan odası için bir gereksinim olduğunu — bir laboratuvar tezgah üzerinde basit bir kuluçka bu deneyleri taşımak için yeterli. Biz EDC, BPA, etkisi ağ etkinliğini değerlendirmek için bir çoklu elektrot sistemi (MEA) nasıl kullanılacağını açıklar. Burada açıklanan protokoller diğer sistemlere uygulanabilir. Önemli bir özelliği bu iletişim kuralı, kısırlık korumaktır. Bu embriyo steril koşullar altında diseksiyon içerir — % 70 etanol ve steril Hank'in dengeli çözüm tuzlar kullanımı ile aletleri sterilize yeterli. Bir hafta boyunca toplanan verileri gibi bana steril işleme korumak için önemlidir. Kez kurulan nöronal kültürler uzun vadeli - en fazla üç ay için kültürlü — ve böylece uzun vadeli maruz EDCs ve diğer bileşikler nöronal ağ üzerinde çalışmak için yararlıdır. Bu iletişim kuralı bir başka önemli yönü kaplama diseksiyon üzerinden vakti geldi. 30 dk kuluçka dokusunun tripsin ile de dahil olmak üzere, en iyi zamanı. Uzun geçen, hücrelerin yoksul hayatta kalma süre.
Biz burada, herhangi bir kimyasal veya davranış ve sinir işlevi etkiler uyuşturucu değerlendirilmesi için uygulanacak temel protokol tanımlamak. Burada, mm2başına 2.200 hücre hücre yoğunluğu kullandık; Ancak, bu değiştirilebilir ve diğer hücre yoğunluğu kullanılabilir. Genel olarak, hücre yoğunluğu artan ağ aktivite - daha kısa sürede daha fazla sivri artar bulduk. Yöntem tarif, ağ etkinliğinin değerlendirilmesi etkileri kimyasalların çok yararlı olsa da kısıtlamalar bulunmaktadır. Bir yöntemin en büyük sınırlamalar bu tüp bebek kültürleri iki boyutlu omurgalı beyin üç boyutlu mimari yansıtmıyor olabilir olmasıdır. Bu dilim kayıtları kullanarak üstesinden gelebilir. Başka bir alternatif tedaviler gelişmekte olan civciv embriyo tarafından uygulamak için yumurta15geniş sonuna kesip küçük bir pencere tedavi rejimi sonunda beynini incelememize, kalın bir vibratome bölümlerde yapmak ve MEA için üzerine yerleştirin. ağ etkinliğini kaydetme.
Bizim iletişim kuralı ağ etkinliğini geliştirme EDCs etkisi incelenmesi sağlar ve bir mekanik olarak bu kimyasalların etkileri için keşif sunmaktadır önemlidir.

4, 4 '-Isopropylidenediphenol, yaygın olarak Bisfenol-A atıfta veya BPA, bir anti-oksidan katkı polikarbonat zengin çeşitte bulundu ve epoksi reçine bazlı ürünler, termal kağıt arasında değişen CD ve paramparça geçirmez Cam, iç kaplanması İçecek kutular. BPA östrojen1taklit eden dağıtmak menajer endokrin anılmasına karşın, hasta etkileri BPA her gün rahat maruz üzerinde çalışmalar çoğunlukla son 10-15 yıl içinde dışarı geldi. BPA maruz kalma bile düşük düzeylerinin en derin embriyogenez aracılığıyla pozlama anneler2,3sırasında da dahil olmak üzere erken gelişimsel dönemlerde sonuçlarıdır. Kadın embriyolar rahim içinde maruz kimyasallar engellemeden endokrin da artan hastalığı duyarlılık vajinal meme kanseri4,5üzerinden bağlanmıştır. Hayvan çalışmaları atipik beyin yapısı ve fonksiyonel anormallikler davranış6' tecelli BPA maruz yol gösterdi. Sonuç olarak, bebek besleme şişe BPA kullanımında Avrupa ve Kuzey Amerika, FDA da dahil olmak üzere en düzenleyici kurumlar tarafından yasaklandı. Düzenlemeleriyle uyum sağlamak için birçok üretici 4, 4'-sulfonyldiphenol ya da Bisfenol-S (BPS) geçiş yaptınız. BPA ve BPS yapısal analogları ve son raporlar östrojenik transkripsiyon7' BPS karşılaştırılabilir potens gösterdi vardır dayanarak gerçeğine, bileşik bu göreceli olarak BPA toksisite eğitim önemlidir.
Burada nöronların omurgalı manken civciv embriyo kullanarak ağlar üzerinde BPA (ve diğer EDCs) etkilerini sınamak için bir protokol açıklayın. Vitro kültür nöronların sinaptik kişiler oluşturmak ve aksiyon potansiyelleri (ani olarak da bilinir) oluşturur. Bu kültürlerin spiking etkinlik çoklu elektrot dizi (MEA) sistemleri kullanılarak kaydedilir. Sivri 5 ms içinde oluştuğunda senkronizasyonu kabul edilir. Sonunda eşitler ilk rastgele spiking faaliyet nöronal ağları8,9geliştirme önemli bir özelliktir. Senkronizasyonu çeşitli yöntemlerle ölçülebilir ve çeşitli algoritmalar edebiyat9,10,11' açıklanmıştır. Bizim analizleri, MEA koordinat belirleme sistemi sürücüler kayıt yazılımı entegre Paiva ve iş12 tarafından geliştirilen bir algoritma kullanıyoruz. Sağlam spiking faaliyeti embriyonik piliç nöronların BPA etkisi neural ağ etkinlik13eğitim için bir prototip sağlar. Kayıt spiking etkinlik için çoklu elektrot dizileri kullanarak, BPA maruz kalma nöronal spiking senkronizasyonu9,14gelişimi inhibe görülmektedir. Burada, BPA maruz civciv embriyo nöronlar piliç embriyonik kültürlerde nöronal spiking senkronizasyonu geliştirme temsilcisi sonuçları ile birlikte kültür üzerinde çalışmak için detaylı bir metodoloji sağlamak.

<table><tbody><tr><td>#5 foreceps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11251-10</td><td></td></tr><tr><td>Axion Muse MEA</td><td>Axion Biosystems</td><td>M64-GL1-30Pt200</td><td>El yazmasında MEA sistemi olarak adlandırılacak</td></tr><tr><td>Axis Software</td><td>Axion Biosystems</td><td></td><td>El yazmasında kayıt yazılımı olarak adlandırılacak</td></tr><tr><td>BPA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>239658-250g</td><td></td></tr><tr><td>kavisli forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11272-50</td><td></td></tr><tr><td>EtOH</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>Herhangi bir yerel çiftlikten veya Spafas'tan</td><td>döllenmiş tavuk yumurtası</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Fisher</td><td>14170112</td><td></td></tr><tr><td>Hemacytometer</td><td>Fisher</td><td>&nbsp; 02-671-6</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel Büyüme Faktörü Azaltılmış, Fenol Kırmızısı İçermeyen</td><td>BD Biosciences</td><td>356231</td><td>El yazmasında Ekstra Hücresel Matris (ECM) olarak adlandırılacaktır</td></tr><tr><td>Neurobazal ortam</td><td>BrainBits</td><td>Nb4-500</td><td></td></tr><tr><td>Neuroexplorer istatistik yazılımı</td><td>Nex Technologies</td><td>Neuroexplorer sürüm 5</td><td></td></tr><tr><td>Pasteur pipetleri</td><td>Fisher</td><td>&nbsp; 13-678-20A</td><td></td></tr><tr><td>yaylı makas</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>15514-12</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard alt diseksiyon tabakları</td><td>Canlı Sistemler Enstrümantasyon</td><td>DD-90-S-BLK-3PK</td><td></td></tr><tr><td>Tripan Mavi boya</td><td>Fisher</td><td>15-250-061</td><td></td></tr><tr><td>Tripsin-EDTA</td><td>Fisher</td><td>15400054</td><td></td></tr></tbody></table>

değerlendirme endokrin omurgalı neural ağ işlevi çoklu elektrot dizileri kullanarak geliştirme bileşikler engellemeden etkilerinden

Assessment of the Effects of Endocrine Disrupting Compounds on the Development of Vertebrate Neural Network Function Using Multi-electrode Arrays

BIS-fenoller, bis-fenol A (BPA) ve BIS-fenol-S (bit/sn) gibi yaygın olarak kullanılan plastik ve çok sayıda günlük ürünleri üretiminde aracılar polymerizing. Endokrin dağıtmak bileşikler (EDC) estradiol benzeri özelliklere sahip olarak sınıflandırılır. EDCs, uzun süreli maruz kalma düşük dozlarda bile, erken gelişim dönemleri sırasında büyük güvenlik açığı ile kanser, davranış bozuklukları ve kısırlık, dahil olmak üzere çeşitli sağlık kusurları ile bağlantılı olmuştur. BPA nöronal fonksiyon gelişimi üzerine etkisi, biz erken piliç embriyonik beyin bir model olarak türetilen bir vitro nöron ağı çalışırdım. Bu maruz kalma bulduk BPA etkilenen ağ etkinliğini, gelişimi özellikle etkinlik ve eşitleme yükseliyor. Bir ilacın veya bileşik moleküler hedef ve davranış sonucu üzerindeki etkisi arasında çok önemli bağlantı ağ etkinliğini bir değişimdir. Çoklu elektrot dizilerin giderek ağ aktivite içinde in vitroilaç etkilerini incelemek için yararlı araçlar hale gelmektedir. Var birkaç sistemleri elde edilebilir içinde belgili tanımlık çarşı ve rağmen elektrotlar, türü ve elektrot dizi ve analiz yazılımı, temel temel ilkeleri, kalite farklılığı ve elde edilen veriler arasında aynıdır farklı sistemleri. Şu anda iki boyutlu vitro kültür analizi için sınırlı olmasına rağmen in vivo ağ etkinliğini beyin dilimleri içinde etkinleştirmek için bu MEA sistemleri geliştirilmektedir. Burada, embriyonik pozlama ve nöronal ağ etkinliğini ve senkronizasyonu, temsilcisi sonuçları ile birlikte kaydetmek için detaylı bir protokol sağlar.

Senkronizasyonu geliştirme civciv embriyo nöronal kültürlerde BPA etkisi incelenmiştir. Etkinlik spiking eşitleme nöronal ağları içinde vitronormal gelişimi bir göstergesidir. İki sivri 5 ms içinde oluştuğunda, onlar zaman uyumlu olarak kabul edilir. Vitro nöron kültürler başlangıçta rasgele spiking etkinliği görüntülemek — sivri ortaya rastgele ve arası spike aralıkları bir normal dağılım gösterir. Kültürler olgun, spiking etkinlik daha senkronize olur ve arası spike aralıkları sabittir. Zaman uyumlu spiking etkinliği bir kültürün çapraz korelasyon analizi spike senkronizasyonu dizin (SI) türetmek için yazılım12 kayıt kullanarak kez quantitated. BPA maruz kalma olumsuz azaltarak spiking etkinlik ve senkronizasyonu dizin (Şekil 2bir ve 2b) ağ etkinliğini geliştirme etkiler bulduk. Özet olarak, biz bir embriyo zararlı etkileri BPA maruz kalma kültür nöronlarda piliç senkronizasyonu geliştirilmesi yoluyla tespit edilebilir nöronal işlevi de dahil olmak üzere onun gelişme etkileri göstermiştir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56300/56300fig1.jpg"> Şekil 1: Şematik diseksiyon piliç ön adımları ayrılma, kaplama ve ağdaki etkinliğini kaydetmek için tasvir Protokolü'nün. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56300/56300fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56300/56300fig2.jpg"> Resim 2: (A) sivri ortalama sayısı önemli ölçüde daha düşük BPA tedavi kontrol kültürler için karşılaştırıldığında E7 piliç ön kültürler. Sivri ortalama sayısı kayıt yazılımı kullanarak ayıklandı. Anlamına gelir (kontrolü, 14,890 ± 949.0, N = 15 ve BPA, 5,624 ± 465.9, N = 22) önemli ölçüde farklı olduğunu (unpaired t-Testi, p &lt; 0.0001). (B) ortalama senkronizasyonu (SI) önemli ölçüde daha düşük dizinidir BPA tedavi kontrol kültürler için karşılaştırıldığında E7 piliç ön kültürler. SI sinirsel istatistikleri derleyici modülü içinde kayıt yazılımı kullanarak ayıklandı. SI anlamına gelir (kontrolü, 0.5159 ± 0.06547 N = 15 ve BPA, 0.1140 ± 0.01840 N = 22) önemli ölçüde farklı olduğunu (unpaired t-Testi, p &lt; 0.0001). Hata çubukları standart sapma tasvir. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56300/56300fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Çevresel toksinlere maruz akut gelişmekte olan embriyo etkileyebilir. Bisphenols sinir sistemi üzerinde olumsuz bir etkisi olduğu bilinmektedir gibi kimyasallar engellemeden endokrin. Burada bir vitro Omurgalılar (civciv embriyo) nöronal ağ modeli toksin pozlama erken embriyo üzerinde fonksiyonel etkisini incelemek için bir iletişim kuralı'nı açıklar.

Değerlendirme endokrin omurgalı Neural ağ işlevi çoklu elektrot dizileri kullanarak geliştirme bileşikler engellemeden etkilerinden

Bis-phenols, such as bis-phenol A (BPA) and bis-phenol-S (BPS), are polymerizing agents widely used in the production of plastics and numerous everyday ...

Bu deneysel protokolün genel amacı, bisfenoller gibi endokrin bozucu bileşiklerin, çok elektrotlu diziler üzerinde kurulan omurgalı nöronal ağlarının ağ oluşturma aktivitesi üzerindeki etkilerini test etmektir. Bu yöntem, gelişimsel nörobiyoloji ve çevresel toksikolojide, çevresel toksinlerin embriyonik beyindeki ağ aktivitesinin gelişimi üzerindeki etki mekanizması gibi temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin ana avantajı, ortalama ateşleme hızı, toplam sivri uç sayısı ve sivri uç genliği ve senkronizasyon gibi nöronal ağ parametreleri üzerindeki etkilerin artık incelenebilmesidir.Önceki çalışmamız, EDC'lerin nöronal ağların doğrudan bir çıktısı olan kelime ve davranışı etkilediğini gösterdi ve protokolümüz şimdi EDC'lerin bu ağlar üzerindeki etkisini anlamayı amaçlıyor. Nöron kaplama gününde, negatif 20 santigrat derece dondurucudan bir hücre dışı matris şişesini çıkarın,% 70 etanol püskürtün ve% buzun üzerine yerleştirin. Hücre dışı matrisi buz üzerinde çözdüğünüzden emin olun.ECM sıfır santigrat derecenin üzerinde polimerize olduğu için oda sıcaklığında çözdürmeyin. 2 mikrolitrelik alikota 25 mikrolitre soğuk nörobazal ortam ekleyerek hücre dışı matrisi %300'e seyreltmek için BSL100 davlumbazında çalışın. Ardından, elektrotlara dokunmamaya dikkat ederek çoklu elektrot dizisinin merkezine 100 mikrolitre %25 hücre dışı matris çözeltisi eklemek için bir P200 pipeti kullanın.Yüzeyde ince bir film tabakası bırakarak ECM'yi hemen çıkarın. Çoklu elektrot dizisini kapatın ve nöronları kaplamaya hazır olana kadar doku kültürü inkübatörüne yerleştirin. Bir E7 yumurtasının dış kabuğunu %70 etanol ile sterilize ederek civciv nöron izolasyonuna başlayın.Bu noktadan itibaren steril koşulları korumak önemlidir. Tüm aletlerin %70 etanol ile sterilize edildiğinden ve solüsyonların steril olduğundan emin olun. Diseksiyon başlığı kullanmak faydalıdır, ancak hızlı bir şekilde yapılırsa diseksiyonlar için kesinlikle gerekli değildir.Daha sonra embriyoyu alıp başını kestikten sonra, göz çevresini kesin ve göz kürelerini çıkarın. Ardından, ventral tarafta bir kesi yapmak için Dumont numaralı beş ince forseps ve yaylı makas kullanın ve ön beyni ve optik tektumu ortaya çıkarmak için cildin dış katmanlarını çıkarın. Kabuk zarını dikkatlice soyun ve çıkarın.Ön beyni HBSS içeren başka bir Petri kabına aktarın ve yaylı makasla yaklaşık iki milimetrelik küçük parçalar halinde kesin. Ön beyin parçalarını 15 mililitrelik bir santrifüj tüpüne aktarmak için steril bir transfer pipeti kullanın. Ön beyin parçaları santrifüj tüpünün dibine battıktan sonra, mümkün olduğunca fazla HBSS'yi çıkarın.Daha sonra, bir mililitre önceden ısıtılmış,% 0.5 tripsin EDTA ekleyin ve 37 santigrat derecede 15 dakika inkübe edin. Doku parçalarını rahatsız etmeden tripsini dikkatlice çıkarmak için bir Pasteur pipeti kullanın. Bir mililitre nörobazal ortam ekleyin ve doku parçalarının dibe çökmesine izin verin.Ortamı çıkardıktan ve yıkamayı tekrarladıktan sonra, iki mililitre nörobazal ortam ekleyin ve daha fazla doku parçası görülmeyene kadar hafifçe ezin. Yeniden askıya alınan hücreleri nörobazal ortam ile bir ila 10 oranında seyreltin. Tripan mavisi boya ve bir hemositometre kullanarak canlı hücreleri sayın.Saydıktan sonra, ayrışmış hücreleri milimetre kare başına 2.200 hücre yoğunluğunda ECM kaplı, çok elektrotlu diziler üzerine yerleştirin. Ertesi gün, tedavi edilen çok elektrotlu dizilere nörobazal ortamda 10 mikromolar BPA ekleyin. Edinme gününde, kültür ortamını taze nörobazal ortamla değiştirin ve dizileri kayıttan önce en az iki saat CO2 inkübatörüne geri koyun.Kayıt yazılımını başlatın ve sıcaklık simgesine tıklayarak çoklu elektrot dizisinin sıcaklığını 37 santigrat dereceye ayarlayın. Sol pencere panelinde akışları seçerek ve muse simgesini sağ tıklatarak alım parametrelerini ayarlayın. Ardından, işleme ve ani yükselme dedektörü ekle'yi seçin ve açılır pencerede Tamam'a tıklayın.STD'nin ani dedektör altısı, dosya adının altında görünecektir. Ardından, ani yükselme algılayıcısına sağ tıklayın, işleme ve patlama algılayıcısı ekle'yi seçin ve açılır pencerede Tamam'a tıklayın. Patlama dedektörü ISI, ilham perisi simgesinin altında görünecektir.Ardından, patlama algılayıcısına sağ tıklayın, işleme ve sinir istatistikleri derleyicisi ekle'yi seçin. Açılan pencerede, dosya başlığının, toplu kuyu istatistiklerinin ve senkronizasyonun seçili olduğundan emin olun, Tamam'a tıklayın. İstatistik derleyicisi aşağıda görünecektir. Ekranın alt kısmında bulunan saat simgesine tıklayın ve ayarlar bölümündeki bilgileri her 5.1 dakikada bir kayıt yapacak ve beş dakika boyunca kayıt yapacak şekilde değiştirin.Bu hemen başlatılacak ve bir kez yürütülecektir. Çoklu elektrot dizisini inkübatörden aldıktan sonra, kayıt ünitesine yerleştirin ve yerine kilitleyin. Zamanlanmış kayıt bölümünde kaydı başlat'a tıklayarak ağ etkinliğini kaydetmeye başlayın.Tipik olarak, beş dakikalık bir kayıt süresi yeterlidir, ancak 10 dakikaya kadar daha uzun kayıtlar elde edilebilir. Kayıttan sonra, çoklu elektrot dizisini inkübatöre geri koyun. BPA ile tedavi edilen E7 civciv ön beyin kültürlerinde ortalama sivri uç sayısı, kontrol kültürlerine kıyasla önemli ölçüde daha düşüktür.BPA ile tedavi edilen E7 civciv ön beyin kültürlerinde ortalama senkronizasyon indeksi, kontrol kültürlerine kıyasla anlamlı derecede düşüktür. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik düzgün bir şekilde yapılırsa üç saatten daha kısa sürede yapılabilir. Bu prosedürü denerken, spike aktivitesini kaydederken bile her zaman steril koşulları korumayı unutmamak önemlidir.Bu prosedürü takiben, antiepileptikler ve antidepresanlar gibi potansiyel ilaçların ağ aktivitesi üzerindeki etkisi, etki mekanizmalarını anlamaya yönelik bir adım olarak değerlendirilebilir. Birçok EDC'nin gelişim sırasında beyin üzerinde ince etkileri vardır ve bu etkiler kendilerini davranış değişiklikleri olarak gösterir. Davranış, temel alınan ağ etkinliğinin doğrudan bir çıktısıdır.Protokolümüz, bu bileşiklerin ağ aktivitesi üzerindeki etkilerini incelemeyi amaçlamaktadır.

assessment-effects-endocrine-disrupting-compounds-on-development

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Bu protokol kurmak, bakımını, kayıt ve elektriksel uyarıcı ÇÇA üzerindeki kültürleri için gerekli bilgileri sağlar.

Nasıl Kültür, Kayıt ve mikro-elektrot Diziler Sinir Ağları Teşvik (ÇÇA)

Bu video, erken evre bir civciv embriyosunun ön beyninden nöronları izole etmek ve bir nöronal ağ oluşturmak için bunları bir mikroelektrot dizisi üzerinde kültürlemek için bir yöntemi göstermektedir.

Civciv Embriyonik Nöronlarının Çok Elektrotlu Bir Dizi Üzerinde İzole Edilmesi ve Kültürlenmesi

Video, insan kaynaklı pluripotent kök hücrelerden (hiPSC'ler) türetilen nöronların elektrofizyolojik aktivitesini kaydetmek için bir mikroelektrot dizisinin (MEA) nasıl kullanılacağını gösterir. Bir nöron-astrosit ko-kültürü içeren çok kuyulu bir MEA'dan elde edilen elektrofizyolojik aktivite, ağdaki birden fazla nörondan gelen aksiyon potansiyellerini tespit etmek için kaydedilir ve hiPSC'lerin nöronlara başarılı bir şekilde farklılaştığını doğrular.

Mikro-elektrot dizileri kullanılarak nöronal ağların elektrofizyolojik aktivitesinin ölçülmesi

Bu video, fare omurilik bölümlerinde nöronal ağ aktivitesini incelemek için mikroelektrot dizisi tabanlı bir testi göstermektedir. İlk olarak, dilimin yüzeysel dorsal boynuzundan (SDH) gelen elektrofizyolojik aktivite kaydedilir. Daha sonra, depolarizasyonu uzatmak için bir potasyum kanal inhibitörü eklenir ve bu da nöronal ağ boyunca senkron ritmik aktivite ile sonuçlanır.

Fare Omurilik Dilimlerinde Nöronal Ağların Mikroelektrot Dizisi Tabanlı Değerlendirmesi

Bu video, toksinlerin erken embriyonik civciv nöronal kültürleri üzerindeki etkilerini incelemek için çok elektrotlu dizilerin (MEA) kullanımını göstermektedir. MEA, nöronal ağdaki nöronların senkron aktivitesini izleyerek, toksin maruziyetine yanıt olarak nöronal ağın fonksiyonel dinamiklerini yakalar. Toksin maruziyeti üzerine azalan senkronizasyon ve ateşleme oranları, nöronal ağ olgunlaşması ve işlevi üzerindeki zararlı etkisini vurgulamaktadır.

Toksinlerin Civciv Embriyo Sinir Ağı Gelişimi Üzerine Etkilerinin Çok Elektrotlu Diziler Kullanılarak Değerlendirilmesi

Farklı elektrot kaplamalar elektrokimyasal, kimyasal ve mekanik özellikleri değişiklikler yoluyla sinir kayıt performansını etkileyebilir. In vitro elektrot karşılaştırması, ancak in vivo yanıt karşılaştırılması tipik olarak elektrot / nöron mesafede ve hayvanlar arasında farklılıklar ile komplike nispeten basittir. Bu makalede, nöral kayıt elektrotları karşılaştırmak için sağlam bir yöntem sağlar.

Sinir Kayıt Elekrtotların Sistematik Elektrokimyasal ve Elektrofizyolojik Değerlendirme için Bir Yöntem

Nöronal yanıt profillerini incelemek ve stimülasyon parametrelerini optimize etmek için çoklu elektrot dizileri üzerinde primer murin spiral ganglion nöron eksplantlarını kültürlemek için bir protokol sunuyoruz. Bu tür çalışmalar, koklear implantların nöron-elektrot arayüzünü, hastalarda işitmeye ve cihazın enerji tüketimine fayda sağlayacak şekilde iyileştirmeyi amaçlamaktadır.

Çok elektrot dizilerde Spiral Ganglion Nöron Eksplantasyon Kültür ve Elektrofizyoloji

Çok elektrotlu diziler üzerinde kültürlenen fare nöronal hücreleri, elektrik stimülasyonunu takiben yanıtta bir artış sergilemektedir. Bu protokol, nöronların nasıl kültürlendiğini, aktivitenin nasıl kaydedildiğini ve uyarılma modellerine cevap vermek için ağları eğitmek için nasıl protokol oluşturacağını gösterir.

Mikro Elektrod Dizilerinde Nöronal Hücre Kültürlerinin Uyarılmasına Ağ Yanıtına Zamana Bağlı Artış

Burada, özellikle hipokampal, koku soğanı devreleri ve insan nöronal ağlarında, büyük ölçekli nöronal toplulukların hesaplama dinamiklerini araştırmak için HD-MEA'yı kullanıyoruz. Hesaplama araçlarıyla birlikte uzay-zamansal aktiviteyi yakalamak, nöronal topluluk karmaşıklığı hakkında içgörüler sağlar. Yöntem, beyin fonksiyonlarının anlaşılmasını geliştirir, potansiyel olarak biyobelirteçleri ve nörolojik bozukluklar için tedavileri tanımlar.

CMOS Entegre Yüksek Yoğunluklu Mikroelektrot Dizisi Üzerinde Multimodal Büyük Ölçekli Nöronal Topluluk Dinamiğinin Kaydedilmesi ve Analizi

Bu protokol, in vitro epilepsiyi modellemek için dorsal-ventral kaynaşmış asembloidleri çoklu elektrot dizileri üzerinde stabil bir şekilde plakalamayı amaçlamaktadır.

İnsan Pluripotent Kök Hücre Kaynaklı Beyin Topluluklarını Kullanarak Epilepsiyi Modellemek için Çok Elektrotlu Bir Dizi Platformu

Öğrenin çoklu elektrot dizileri kullanarak gelişim nörobiyolojisinde endokrin bozucu kimyasalların sinir ağı aktivitesi üzerindeki etkilerini. Bu yöntem çevresel toksinlerin embriyonik beyin gelişimine etki mekanizmalarını anlamaya yardımcı olur.

Değerlendirme endokrin omurgalı Neural ağ işlevi çoklu elektrot dizileri kullanarak geliştirme bileşikler engellemeden etkilerinden (Video) | JoVE Journal

Değerlendirme endokrin omurgalı Neural ağ işlevi çoklu elektrot dizileri kullanarak geliştirme bileşikler engellemeden etkilerinden

Daha fazla video keşfet