Name: Bir atmosferik basınç plazma Jet yeni uygulama SH-SY5Y hücrelerin glikoz yoksunluğu kaynaklı yaralanma karşı bir nöro-koruyucu ajan olarak (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-10-09T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 34 s
Description: Keşfedin atmosferik basınç plazma jeti ile SH-SY5Y hücrelerinde glikoz yoksunluğu kaynaklı hasara karşı nöro-koruyucu tedavi protokolü. Bu düşük doz yöntem, iskemik beyin tedavileri için umut vadediyor.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser Pekin Nöroşirürji Enstitüsü (2014-11), Çin (NOS 11475019 ve 81271286) Ulusal Doğa Bilimleri temeli ve Pekin doğal Bilim Vakfı (No. 7152027) yenilik Fonu tarafından desteklenmiştir.

1. APPJ aygıt hazırlanması dikkat: ilgili tüm malzeme güvenlik bilgi formları (MSDS) kullanmadan önce lütfen danışın. Lütfen uygun güvenlik yöntemleri bir duman hood ve kişisel koruyucu ekipman (koruyucu gözlük, koruyucu eldiven, önlük, vb) kullanımı da dahil olmak üzere tüm deneyler yaparken kullanın. Standart hücre işleme teknikleri (sterilizasyon, hücre kurtarma, cep passaging, hücre dondurma, hücre boyama, vb) protokolü gerektirir.
<ol><li>Bir iç çapı 1 mm ile bir kuvars tüp seçin ve bir dış çapı 3 mm. düzgün kesit parlatma folyo kullanarak her iki ucunda.</li>
	<li>Nikel paslanmaz çelik iğne 1.0 mm çapı ile yüksek gerilim elektrot kullanın. Ucu 0.05 mm eğrilik yarıçapı için eziyet.</li>
	<li>Wrap alüminyum folyo (2 mm genişliğinde) 1 cm kuvars tüp etrafında kuvars tüp başlığı. Paslanmaz çelik iğne nokta 1 cm alüminyum folyo diğer ucunu düzeltmek. Alçak gerilim elektrot alüminyum folyo yüzüğü kullanın.</li>
</ol> 2. Jetler edinimi bir AC sinyal sağlamak, bir güç kaynağı hizmet işlevi sinyal üreteci yüksek voltajlı güç amplifikatörü bağlanmak için <ol><li>. Yüksek gerilim elektrot için uygulanan gerilim dalga formu kaydetmek için yüksek voltajlı sonda dijital osiloskop bir ucunu ve diğer ucunu güç kaynağına bağlayın. Devre koruması için 2 k kullanın &#8486; direnç olarak koruyucu bir direnç. Devre Şekil 2 ' de gösterildiği gibi bağlayın. 
	Uyarı: yüksek gerilim hatları dokunmayın.</li>
	<li>Sürekli olarak helyum (birim kesir, % 99.999) kuvars tüp geçmek ve gaz akış oranı istikrarlı bir 1.4 standart litre başına dakika (SLM) adlı denetim. 
	Not: Bir filtre hücre kültürleri tedavi önce kullanmayın. Birim deneyde kullanılan helyum % 99.999 bir bölümüdür ve çoğu mikroorganizmalar bu koşullar altında yaşayamam.</li>
	<li>Gücü osiloskop, sinyal üreteci ve yüksek voltajlı güç amplifikatörü açın. 5 kHz frekans ayar düğmesi döndürün. Yavaş yavaş artırın 6 tepe tepe değeri için voltaj kV. 
	Not: Jet yeterince uzun (yaklaşık 3 cm) ne zaman iğnede uygulanan gerilim tepe tepe değeri ise yaklaşık 6 kV.</li>
</ol> 3. SH-SY5Y hücreleri hazırlanması <ol><li>RPMI 1640 bir 25 cm 2 şişeye Grow SH-SY5Y insan Nöroblastom türetilmiş hücre hattında orta % 15 fetal buzağı serum (FBS) ile desteklenmiştir. %37 5 CO 2 ve % 95 hava içeren bir oksijen kuluçka hücreleri korumak ° C.</li>
	<li>Ne zaman hücreleri % 85 izdiham ulaşmak, dikkatle kültür medya Aspire edin ve 1 mL % 0.25 tripsin + %0,1 EDTA hücrelere ekleme.</li>
	<li>Sonra 15 s kuluçka oda sıcaklığında dikkatle tripsin Aspire edin ve 2 mL RPMI % 15 içeren 1640 ekleyin nötralize etmek için FBS.</li>
	<li>Yavaşça yukarı ve aşağı, SH-SY5Y monolayer tamamen müstakil olana kuyunun, yıkama pipet.</li>
	<li>Hücreleri aracılığıyla hemasitometre saymak ve hücre konsantrasyonu 2 x 10 5 hücre/ml RPMI 1640 orta + 15 ekleyerek ayarlamak % FBS ve hücre süspansiyon için her şey bir 96-şey plaka, transfer 100 µL.</li>
	<li>Hücre kuluçka APPJ tedavi öncesi 12 h for ILIŞTIRIN hücrelere izin.</li>
</ol> 4. SH-SY5Y tedavisinde APPJ <ol><li>ayarlama kuvars meme arasındaki mesafe tüp ve nerede 96-şey plaka alınacaktır 3 cm. için platform sağlamak kiriş kültür orta yüzeyine dokunamaz. 
	Not: Mesafe kalenin altından ölçülen değildir. İlk kuvars tüp başlığı ve 96-şey plaka yerleştirmek için kullanılan platform arasında 3 cm ayarlanır.</li>
	<li>APPJ tedavi öncesi, her şey kontrol wells dışında kültür ortamında RPMI 1640 glikoz orta değiştirin.</li>
	<li>APPJ başlığı altında tabak yerleştirin ve jets dikey olarak her kuyuya çekim yapabilirsiniz sağlamak.</li>
	<li>Tedavi hücreler için 0 APPJ ile ayrı Wells s, 1 s, 2 s, 4 s, 8 s ve 12 s. 
	Not: APPJ helyum ( şekil 1) iyonize tarafından oluşturulur. Hücreleri glikoz yoksunluğu tarafından yaralı 4 tarafından kabul edilir s ve 8 s helyum akışı hücreleri helyum etkilerini ortadan kaldırmak için. Tüm tedaviler nüsha gerçekleştirilmelidir.</li>
</ol> 5. Canlılığı tahlil hücre Not: Bu adımda orta değiştirmeyin.
<ol><li>APPJ tedavi sonrası hücre kuluçka 1 h için hücreleri kuluçkaya.</li>
	<li>Her şey hücre sayım Kit-8 (CCK-8) çözüm eklemek 10 µL.</li>
	<li>4 h için 37 ° C'de hücreler kuluçkaya 
	Not: SH-SY5Y hücre kültürünü glikoz yoksunluğu koşulları 12 ' ye duyarlıdır. Hücre canlılığı özellikler çalışmaları için optimum hücre canlılığı durumdur 1s glikoz yoksunluğu sonra yaklaşık % 50 azalır. CCK-8 yok sitotoksisite hücrelere bulunmaktadır ve hücreleri glikoz yoksunluğu koşullarda başka bir 4 h için CCK-8 reaktif ile hücre canlılığı kontrol etmek için APPJ tedavi sonrasında inkübe. Çünkü uzun süreli glikoz yoksunluk SH-SY5Y hücrelerinin ağır hasar liderliğindeki 8 h glikoz yoksunluğu ve APPJ tedavi sonra APPJ koruyucu etkisi önemli ölçüde azaldı. Sonra 24 saat glikoz yoksunluğu 11 canlı hücreler kanıtı yok oldu.</li>
	<li>450 Absorbans ölçmek Mikroplaka okuyucu ile nm.</li>
</ol>

<ol><li>Yang, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+mitochondrial+electron+transfer+for+the+treatment+of+neurodegenerative+diseases+and+cancers%3A+Methylene+blue+connects+the+dots%5BTitle%5D)+AND+%22Prog.+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Alternative mitochondrial electron transfer for the treatment of neurodegenerative diseases and cancers: Methylene blue connects the dots.</a> Prog. Neurobiol. , (2015).</li>
<li>Bhat, A. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidative+stress%2C+mitochondrial+dysfunction+and+neurodegenerative+diseases%3B+a+mechanistic+insight%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed.+Pharmacother%22%5BJournal%5D)">Oxidative stress, mitochondrial dysfunction and neurodegenerative diseases; a mechanistic insight.</a> Biomed. Pharmacother. 74, 101-110 (2015).</li>
<li>Bullon, P., Newman, H. N., Battino, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obesity%2C+diabetes+mellitus%2C+atherosclerosis+and+chronic+periodontitis%3A+a+shared+pathology+via+oxidative+stress+and+mitochondrial+dysfunction%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Periodontol.+2000%22%5BJournal%5D)">Obesity, diabetes mellitus, atherosclerosis and chronic periodontitis: a shared pathology via oxidative stress and mitochondrial dysfunction?</a> Periodontol. 2000. 64 (1), 139-153 (2014).</li>
<li>Sutherland, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotection+for+ischaemic+stroke%3A+translation+from+the+bench+to+the+bedside%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Stroke%22%5BJournal%5D)">Neuroprotection for ischaemic stroke: translation from the bench to the bedside.</a> International Journal of Stroke. 7 (5), 407-418 (2012).</li>
<li>Yan, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+of+using+Cold+Atmospheric+Plasma+Stimulated+Media+for+Cancer+Treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Principles of using Cold Atmospheric Plasma Stimulated Media for Cancer Treatment.</a> Scientific Reports. 5 (5), 18339(2015).</li>
<li>Lu, X., Laroussi, M., Puech, V. <a target="_blank" href="http://iopscience.iop.org/article/10.1088/0963-0252/21/3/034005/meta">On atmospheric-pressure non-equilibrium plasma jets and plasma bullets.</a> Plasma Sources Science & Technology. 21 (3), 034005(2012).</li>
<li>Lu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0370157316300187">Reactive species in non-equilibrium atmospheric-pressure plasmas: Generation, transport, and biological effects.</a> Phys. Rep. 630, 1-84 (2016).</li>
<li>Lu, X., Naidis, G. V., Laroussi, M., Ostrikov, K. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0370157314000441">Guided ionization waves: Theory and experiments.</a> Phys. Rep. 540 (3), 123-166 (2014).</li>
<li>Di, M. S., Reed, T. T., Venditti, P., Victor, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+ROS+and+RNS+Sources+in+Physiological+and+Pathological+Conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Oxid.+Med.+Cell+Longev%22%5BJournal%5D)">Role of ROS and RNS Sources in Physiological and Pathological Conditions.</a> Oxid. Med. Cell Longev. 2016 (22), 1245049(2016).</li>
<li>Contestabile, A., Ciani, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+nitric+oxide+in+the+regulation+of+neuronal+proliferation%2C+survival+and+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochemistry+International%22%5BJournal%5D)">Role of nitric oxide in the regulation of neuronal proliferation, survival and differentiation.</a> Neurochemistry International. 45 (6), 903-914 (2004).</li>
<li>Yan, X., et al. <a target="_blank" href="http://iopscience.iop.org/article/10.1088/1361-6463/aa5603">Protective effect of atmospheric pressure plasma on oxidative stress-induced neuronal injuries: an in vitro study.</a> J. Phys. D: Appl. Phys. 50 (9), 095401(2017).</li>
<li>Xie, H. R., Hu, L. S., Li, G. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SH-SY5Y+human+neuroblastoma+cell+line%3A+in+vitro+cell+model+of+dopaminergic+neurons+in+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Chin.+Med.+J%22%5BJournal%5D)">SH-SY5Y human neuroblastoma cell line: in vitro cell model of dopaminergic neurons in Parkinson's disease.</a> Chin. Med. J. 123 (8), 1086-1092 (2010).</li>
<li>Tsutsui, C., et al. <a target="_blank" href="http://iopscience.iop.org/article/10.7567/JJAP.53.060309/pdf">Treatment of cardiac disease by inhalation of atmospheric pressure plasma.</a> Japanese Journal of Applied Physics. 53 (6), 060309(2014).</li>
<li>Graves, D. B. <a target="_blank" href="http://aip.scitation.org/doi/abs/10.1063/1.4892534">Low temperature plasma biomedicine: A tutorial review.</a> Physics of Plasmas. 21 (8), 104-117 (2014).</li>
</ol>

Hiçbir çıkar çatışmaları bu kağıt ile ilgili olarak ilan edildi.

SH-SY5Y hücreleri bir insan Nöroblastom türetilmiş hücre satır ve bir uygun hücre modeli olarak nörotoksisite veya neuroprotection12 vitro araştırmalar yaygın olarak kullanılır. SH-SY5Y hücre kültürünü glikoz yoksunluğu koşulları için hassas. Hücre canlılığı özellikler optimum hücre canlılığı şartı çalışmaları için 1 h glikoz yoksunluğu sonra yaklaşık % 50 azalmıştır. Ayrıca, CCK-8 reaktif yok sitotoksisite hücrelere sahiptir ve hücreleri inkübe CCK-8 reaktif glikoz yoksunluğu koşullarda ...

Yetişkin beyin neredeyse sadece glikoz enerji metabolizması normal fizyolojik koşullar altında için bir substrat kullanır. İnsan beyninin vücut ağırlığı sadece % 2'si kabul ettiğiniz anlamına gelir ama toplam glikoz vücut1içinde yaklaşık % 25'i kullanır. İyi belgelenmiş bu glikoz metabolizması bozukluğu önemli patolojik değişiklikler iskemik inme ve Alzheimer hastalığı (Ah), Huntington hastalığı (HD) ve Parkinson hastalığı (PD) de dahil olmak üzere çeşitli nörodejeneratif hastalıklar sırasında biridir 2,3. Glikoz ve bozulmuş glikoz alımı veya oksidatif fosforilasyon eksikliği doğrudan etkisi ATP üretimi ve daha fazla bu Bakımı hücre canlılığı düşündüren nöronal disfonksiyon riskini artırabilir sinir hücre ölümü teşvik veya glikoz yoksunluk bu hastalıkların tedavisi için makul bir yaklaşım olabilir sonra hücre yaralanma geciktirmek. Nöroprotektif etkileri odaklanarak anti-enflamatuar ajanlar, iyon kanal modülatörler, serbest radikal leş yiyiciler, Nörotrofik faktörler, glikoz modülasyon yoluyla incelenmesi vb ilgi olmuştur. Ancak, çeviri tezgah klinik pratikte bu nöroprotektif yaklaşımlar başarılı4olmamıştır.
Atmosferik basınç plazma jetlerin (APPJs) yeni bir teknolojiyle son yıllarda birden fazla disiplinlerden gelen pek çok araştırmacı dikkatini çeken atmosferik düşük sıcaklık gaz deşarj vardır. APPJs yıllardır kanser hücre tedavisi, bakteriyel inactivation, kan pıhtılaşması, yara iyileşmesi, oral ilaç, vb5,6, birden çok türünün kendi emisyon nedeniyle gibi çeşitli Biyomedikal uygulamalarda kullanılan Reaktif nitrojen tür (RNS) ve Reaktif oksijen türlerine (ROS) (Resim 1)7. Önceki plazma biyo-Tıp uygulamaları başlıca oksidatif ve/veya nitrative stres bakteriler, hücre ve dokulara8üzerinde duruldu. Ancak, birçok fizyolojik ve patofizyolojik süreçlerin9ile ilgili önemli hücre içi sinyal molekülleri RNS ve ROS olduğundan APPJ da "iki ucu keskin kılıç" olacaktır. Nitröz oksit (NO) biyolojik süreçlerin geniş bir kontrol eder ve insan vücudunda, özellikle merkezi sinir sistemi (MSS) ikili bir rol oynar. NO seviyesinin düşük her iki vitro nöroprotektif faaliyetlerini göstermiştir ve vivo içinde birden çok sinyal yolları10üzerinden. Önceki çalışmamızda ilk helyum rapor APPJ kaynaklı hiçbir üretim APPJ nöroprotektif etkisi oksidatif stres kaynaklı yaralanmaları11karşı söz konusu. Ancak, diğer yaralanma APPJs etkileri bildirilmiştir değil. Bu nedenle, mevcut çalışmada helyum APPJ nöroprotektif uygulamalara ilişkin bir vitro tedavi protokolü üzerinde SH-SY5Y hücreleri glikoz yoksunluğu kaynaklı yaralanma sağlamaktır. Önceki çalışmalarda farklı, bizim protokol düşük doz plazma tedavi APPJ tedavi potansiyel bir roman "hiçbir donör ilaç olarak kullanılabileceğini gösteren aşırı plazma kaynaklı yaralanmalarının sonuçları olmadan nöroprotektif uygulamaları için kullanılan "gelecekteki araştırma ve klinik çeviri için bile. Bu iletişim kuralı da diğer hücre tipleri farklı bozukluğu olan bir cytoprotective uygulaması olarak kullanılacak önerildi ama APPJ tedavi koşulları yeniden ayarlanmış olmalıdır ve tedavi dozu nispeten düşük olması gerekir.

<table><tbody><tr><td>SH-SY5Y hücre hattı</td><td>Çin Tip Kültür Toplama Merkezi</td><td>3111C0001CCC000026</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 orta</td><td>Thermo Scientific</td><td>21875091</td><td>4 ° C'de saklanır; C</td></tr><tr><td>RPMI 1640 orta glikoz içermez</td><td>Thermo Scientific</td><td>11879020</td><td>4 ° C'de saklanır; C</td></tr><tr><td>fetal buzağı serumu</td><td>Thermo Scientific</td><td>16000044</td><td>-20 ° C'de saklanır; C</td></tr><tr><td>tripsin-EDTA çözeltisi</td><td>Solarbio</td><td>T1300</td><td>4 ° C'de saklanır; C</td></tr><tr><td>96 kuyu plakası</td><td>corning</td><td>3599</td><td></td></tr><tr><td>Hücre Sayma Kiti-8 (CCK-8)</td><td>Dojindo Laboratuvarları</td><td>CK04</td><td>4 ° C'de saklanır; C</td></tr><tr><td>mikroplaka okuyucu</td><td>Tecan</td><td>M200 Pro</td>, <td>450 nm Yüksek voltajda absorbansı ölçmek için</td></tr><tr><td>Güç Amplifikatörü Trek</td><td>PD06087</td><td></td><td>gücü yükseltmek için</td></tr><tr><td>Fonksiyon Sinyal Üreteci</td><td>MaZe Elektronik Bilimi ve Belirli</td><td>sinyali sağlamak için</td><td>teknoloji AT30120</td></tr><tr><td>Yüksek & Sinyali</td><td>görüntülemek için yüksek voltajlı</td>Dijital Osiloskop Tektronix DPO4104B algılamak için Voltaj Probu <td>Tektronix</td><td>P6015A</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

bir atmosferik basınç plazma jet yeni uygulama sh-sy5y hücrelerin glikoz yoksunluğu kaynaklı yaralanma karşı bir nöro-koruyucu ajan olarak

New Application of an Atmospheric Pressure Plasma Jet as a Neuro-protective Agent Against Glucose Deprivation-induced Injury of SH-SY5Y Cells

Kendi emisyon reaktif nitrojen türler (RNS) ve Reaktif oksijen türlerine (ROS) birden çok türde içerdiğinden atmosferik basınç plazma jet (APPJ) son yıllarda birden fazla disiplinlerden gelen pek çok araştırmacı dikkatini çekti. Bizim önceki çalışma oksidatif stres kaynaklı yaralanmalara karşı APPJ cytoprotective etkisini göstermiştir. Bu da çalışmanın amacı SH-SY5Y hücreleri glikoz yoksunluğu kaynaklı yaralanma helyum APPJs nöroprotektif uygulamalara ilişkin detaylı vitro tedavi protokolü sağlamaktır. SH-SY5Y insan Nöroblastom türetilmiş hücre kültürünü RPMI 1640 orta % 15 fetal buzağı serum ile birlikte devam edildi. Kültür orta sonra glikoz APPJ tedavi öncesi olmadan RPMI 1640 için değiştirildi. Bir hücre kuluçka 1 h kuluçka sonra hücre sayım Kit 8'i kullanarak hücre canlılık kararlıydı. Sonuçları gösterdi ki, glikoz yoksunluğu grubuna göre hücre APPJ ile tedavi önemli ölçüde artmış hücre canlılığı doz bağımlı bir şekilde s/iyi bir optimal doz gözlenen 8 ile sergiledi. Bu arada, helyum akışı glikoz yoksunluğu indüklenen hücre bozukluğu üzerinde bir etkisi vardı. Sonuçlarımız APPJ glikoz yoksunluğu için ilgili merkezi sinir sistemi hastalıkları için bir tedavi yöntemi olarak potansiyel olarak kullanılabileceğini göstermiştir. Bu iletişim kuralı da bir cytoprotective uygulaması olarak farklı Engelli, diğer hücreler için kullanılabilir ama hücre kültürü ve APPJ tedavi koşulları ayarlamalara gidilmesi ve tedavi dozu nispeten düşük olması gerekir.

Veri en az üç bağımsız deneyler ortalama ± SD ifade edilir. Grup sonuçları için varyansı ANOVA kullanarak analiz edildi. Tüm analizleri p ve istatistiksel analiz yazılımı prizma kullanarak gerçekleştirilen &lt; 0,05 istatistiksel anlamlılık için eşik yapıldı.
Hücre canlılığı CCK-8 kuluçka 4 h sonra ölçüldü. Şekil 3' te gösterildiği gibi glikoz yoksunluğu 44.1 ± kontrol grubuna kıyasla % 2.6 hücrelere SH-SY5Y canlılığı azaltılmış (normalde % 15 içeren RPMI 1640 ort...

Düşük doz atmosferik basınç plazma glikoz yoksunluğu kaynaklı SH-SY5Y yaralanmalar tedavisine nöroprotektif uygulanması için bir iletişim kuralı.

Bir atmosferik basınç plazma Jet yeni uygulama SH-SY5Y hücrelerin glikoz yoksunluğu kaynaklı yaralanma karşı bir nöro-koruyucu ajan olarak

The atmospheric pressure plasma jet (APPJ) has attracted the attention of many researchers from multiple disciplines in recent years because its emissions ...

Bu tedavi yönteminin genel amacı, SH-SY5Y hücrelerinde glukoz yoksunluğuna bağlı hasar üzerinde helyum atmosferik basınçlı plazma jetlerinin nöro-koruyucu uygulamaları için ayrıntılı bir in vitro tedavi protokolü sağlamaktır. Bu yöntem, plazma tıbbı gibi plazma uygulama alanındaki temel sorulara yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, tutarlı tedaviler için önceki yöntemlere kıyasla nispeten düşük bir plazma tedavisi gibi davranmasıdır.Ve her birimiz aşırı plazma kaynaklı yaralanmaları önleyebiliriz. Bu tekniğin etkileri iskemik beyin vakalarının tedavisine kadar uzanır, çünkü yetersiz glikoz temini bu hastalığın ortak bir özelliğidir. Bu yöntem, plazmanın yeni tıbbi uygulamaları hakkında bilgi sağlayabilse de, kardiyovasküler sistem gibi diğer sistemlerde de kullanılabilir.Genel olarak, bu yönteme yeni olan kişiler, tedavi parametrelerinin farklı plazma cihazları için yeniden ayarlanması gerektiğinden mücadele edebilir. İlk olarak, bir AC sinyali sağlamak için güç kaynağı görevi gören bir işlev sinyali üretecine yüksek voltajlı bir güç amplifikatörü bağlayın. Uygulanan voltajın dalga biçimlerini yüksek voltajlı bir elektroda kaydetmek için, yüksek voltaj probunun bir ucunu dijital bir osiloskopa bağlayın ve diğer ucunu güç kaynağına bağlayın.Helyumu sürekli olarak atmosferik basınçlı plazma jet cihazının kuvars tüpünün üzerinden geçirin ve gaz akış hızını dakikada sabit bir 1,4 standart litrede kontrol edin. Ardından, osiloskopu, sinyal üretecini ve yüksek voltajlı güç amplifikatörünü açın. Frekans ayar düğmesini beş kilohertz'e çevirin.Ardından voltajı kademeli olarak altı kilovoltluk bir tepeden tepeye değere yükseltin. SH-SY5Y insan nöroblastomundan türetilmiş bir hücre hattını büyüttükten sonra, hücreler %85 birleşmeye ulaştığında hücre ortamını dikkatlice aspire edin. Hücrelere %0.1 EDTA içeren bir mililitre %0.25 tripsin ekleyin.Oda sıcaklığında 15 saniye inkübe ettikten sonra, tripsini dikkatlice aspire edin ve nötralize etmek için% 15 FBS içeren iki mililitre RPMI 1640 ekleyin. SH-SY5Y tek tabakası tamamen ayrılana kadar her bir kuyucuğun altını yıkayarak nazikçe yukarı ve aşağı pipetleyin. Bunu takiben, hücreleri bir hemositometre ile sayın ve% 15 FBS içeren RPMI 1640 ortamı ekleyerek hücre konsantrasyonunu ayarlayın.Daha sonra yüz mikrolitre hücre süspansiyonunu 96 oyuklu bir plakanın her bir oyuğuna aktarın. Işının kültür ortamı yüzeyine temas edebilmesini sağlamak için kuvars tüpün nozulu ile 96 oyuklu plakanın yerleştirileceği platform arasındaki mesafeyi üç santimetreye ayarlayın. Tedaviden önce, her bir oyuktaki kültür ortamını glikoz ortamı olmadan RPMI 1640'a değiştirin.Şimdi, plakayı atmosferik basınçlı plazma jet nozulunun altına yerleştirin. Ardından, hücreleri sıfır, bir, iki, dört, sekiz ve 12 saniye boyunca ayrı oyuklarda tedavi edin. Tedaviden sonra, hücreleri 37 santigrat derecede bir hücre inkübatöründe bir saat inkübe edin.İnkübasyondan sonra, her bir oyuğa on mikrolitre hücre sayma kiti sekiz çözelti ekleyin. Daha sonra hücreleri dört saat boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin. Son olarak, bir mikroplaka okuyucu ile 450 nanometrede absorbansı ölçün.Glikoz yoksunluğu, SH-SY5Y hücrelerinin canlılığını, kontrol grubununkine kıyasla yüzde 44.1 artı veya eksi yüzde 2.6'ya düşürdü. Atmosferik basınçlı plazma jet tedavisi, kuyu başına sekiz saniyelik optimal bir dozda doza bağlı bir şekilde hücre canlılığını önemli ölçüde arttırdı. Ve hücre canlılığı 62.27'ye ulaştı, artı veya eksi% 3.1 Gaz akışının, glikoz yoksunluğunun neden olduğu hücre bozukluğu üzerinde hiçbir etkisi yoktu.Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik düzgün bir şekilde uygulanırsa 30 saat içinde yapılabilir. Bu prosedürü denerken, kullanmadan önce tüm malzeme güvenlik bilgi formlarına başvurmayı unutmamak önemlidir. Geliştirildikten sonra, bu teknoloji, plazma tıbbı alanındaki araştırmacıların diğer beyin yaralanmaları üzerinde yeni uygulamalar keşfetmeleri ve daha yeni yaralanma modelleri oluşturmaları için bir yol açıyor.Bu videoyu izledikten sonra, yeni pratik uygulamalar için atmosferik basınçlı plazma jetinin nasıl kullanılacağını iyi anlamış olmalısınız. Yüksek voltajlı bir güç amplifikatörü ile çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve bu işlemi gerçekleştirirken her zaman yüksek voltaj hatlarına dokunmamak gibi önlemlerin alınması gerektiğini unutmayın.

new-application-an-atmospheric-pressure-plasma-jet-as-neuro

Research

JoVE Journal

Engineering

Mühendislik

Bir roman dürtüsel hücre basınçlandırma deneme patlama-indüklenen travmatik beyin hasarının hücresel / moleküler mekanizmalarının araştırılması için bir Kolsky çubuğu aygıtı kullanılarak geliştirilmiştir.

Travmatik Beyin Hasarı Eğitim için Nöronal Hücre Dürtüsel Basınçlandırma

Gözdeki optik sinir kafasına lazer kaynaklı hasara maruz kalan bir fareyi ele alalım.Hasar, endotel hücre hasarına ve siniri besleyen kan damarlarında kan pıhtısı oluşumuna neden olarak kan akışını azaltır ve iskemiye neden olur.İskemi, optik sinir başındaki retinal ganglion hücre aksonlarını oksijenden mahrum eder.RGC hücre gövdelerinde, bu bozulma mitokondriyal fonksiyonu bozar ve reaktif oksijen türlerinin üretimini arttırır.Ortaya çıkan oksidatif stres, apoptotik sinyal yollarını aktive...

 Anterior İskemik Optik Nöropatide Nöroprotektif Bir Strateji Olarak Hiperbarik Oksijen Tedavisi

Bu video, soğuk atmosferik plazma kullanarak nöral kök hücrelerde farklılaşmayı tetiklemek için bir yöntem sunmaktadır. Bu, sinir hücrelerini projeksiyonlar üretmeleri için uyarmak için UV radyasyonu ve reaktif moleküller üretir, bu da nöronal hücre farklılaşmasını gösterir.

Soğuk Atmosferik Plazma Tedavisi Kullanılarak Sinir Kök Hücre Farklılaşmasının Uyarılması

Kaynak: Yan, X., et. al., SH-SY5Y Hücrelerinin Glikoz Yoksunluğuna Bağlı Hasara Karşı Nöro-Koruyucu Ajan Olarak Atmosferik Basınçlı Plazma Jetinin Yeni Uygulaması. J. Vis. Uzm. (2017)Video, oksidatif stresi modüle ederek ve hücre canlılığını artırarak glikozdan yoksun nöroblastom hücrelerinde düşük doz atmosferik basınçlı plazma tedavisinin nöroprotektif aktivitesini göstermektedir.

Glukozdan Yoksun Nöroblastom Hücrelerinde Atmosferik Basınç Plazma Tedavisinin Değerlendirilmesi 

İskemik inme astrocytes etkilenen beyin bölgesi için belirli katkısını oksijen glikoz yetmezliği (OGD) maruz bir karmaşık olay çalışmaya zor olduğu. Bu makalede izole astrocytes elde etmek ve onların reaktivite ve nükleer silahların yayılmasına karşı OGD koşullar altında çalışma için bir metodoloji tanıtılmaktadır.

Astrocyte reaktivite ve nükleer silahların yayılmasına karşı Vitro iskemik benzeri koşullar altında izleme

Asitik sonrası kondisyonlama serebral işemiye karşı korur. Burada, APC'yi yürütmek için iki model sunuyoruz. Bu in vitro olarak oksijen glikoz yoksunluğu sonra asidik tampon Kortikostriatal dilimleri aktarılarak ve in vivo olarak orta serebral arter oklüzyonundan sonra% 20 CO2 solunması ile sırasıyla gerçekleştirilir.

Serebral İskemiye Karşı Asitik Sonrası Sonrasyonun Sinir Korumasını Çalıştırmak için Deney Modelleri

Bu kağıt birincil patlama travmatik beyin hasarı roman modeli açıklar. Sıkıştırılmış hava tahrikli şok tüpü vitro fare hipokampal dilim kültürler için tek bir şok dalgası ortaya çıkarmak için kullanılır. Bu tekrarlanabilir beyin doku hasarı ile yüksek üretilen iş üreten bir basit ve hızlı bir protokoldür.

Patlama travmatik beyin hasarı roman Vitro modeli

Bu iletişim kuralı bir soğuk atmosferik plazma tedavisinin ayrıntılı deneysel adımlar sinir kök hücreleri ve farklılaşma Geliştirme için ayirt algılama sunmayı amaçlamaktadır.

Sinir kök hücre farklılaşması bir tek adımlı soğuk atmosferik plazma tedavi Vitro tarafından

Iskemik inme sonrası yaygın karotis arter (fare) veya eksternal karotis arter (sıçan) yoluyla, enjekte çözeltileri veya süspansiyonlar için uyarlanabilir nöral kök hücreleri teslim etmek için bir yöntem bildirilmiştir. Enjekte edilen hücreler beyin parankim boyunca geniş bir şekilde dağıtılır ve doğumdan sonra 30 d'ye kadar tespit edilebilir.

Nöral Kök Hücrelerin Sıçan ve Fare Beynine İntra-Arteriyel Teslimatı: Serebral İskemiye Uygulama

Bu çalışma, 3D beyin tümörü modellerinde, yani in vitro kültürde, in ovo modelinde ve in vivo murin modelinde uygulama için esnek interdigitated elektrotların geliştirilmesini açıklamaktadır. Önerilen yöntem, darbeli elektrik alanlarının farklı karmaşıklık seviyelerindeki tümörler üzerindeki etkilerini değerlendirmek için kullanılabilir.

Glioblastoma'nın Darbeli Elektrik Alan Terapisi için Esnek Organik Elektronik Cihazlar

Adipoz kaynaklı mezenkimal stromal hücreler (AdMSC'ler), inflamasyonla ilişkili hastalıkların tedavisinde yararlı olan güçlü immünomodülatör özelliklere sahiptir. Murin AdMSC'lerin ve primer karışık gliaların nasıl izole edileceğini ve kültürleneceğini, AdMSC'lerin anti-inflamatuar genleri ve büyüme faktörlerini yukarı regüle etmek için nasıl uyarılacağını, AdMSC'lerin göçünün nasıl değerlendirileceğini ve AdMSC'lerin primer karışık prion ile enfekte glia ile nasıl ko-kültür yapılacağını...

Prion Kaynaklı Enflamasyonu Azaltmak için Primer Karışık Glia ile Ko-Kültürlenmiş Adipoz Kaynaklı Mezenkimal Stromal Hücreler

Keşfedin atmosferik basınç plazma jeti ile SH-SY5Y hücrelerinde glikoz yoksunluğu kaynaklı hasara karşı nöro-koruyucu tedavi protokolü. Bu düşük doz yöntem, iskemik beyin tedavileri için umut vadediyor.

Bir atmosferik basınç plazma Jet yeni uygulama SH-SY5Y hücrelerin glikoz yoksunluğu kaynaklı yaralanma karşı bir nöro-koruyucu ajan olarak (Video) | JoVE Journal

Bir atmosferik basınç plazma Jet yeni uygulama SH-SY5Y hücrelerin glikoz yoksunluğu kaynaklı yaralanma karşı bir nöro-koruyucu ajan olarak

Daha fazla video keşfet