September 4th, 2017
Bu iletişim kuralı bir fare modeli hastalığında serebral derin malformasyon indüksiyon gösterir ve kullanır kontrast mikro bilgisayarlı tomografi lezyon yük ölçmek için geliştirilmiş. Bu yöntem moleküler temelini ve serebral derin malformasyon için potansiyel tedaviler ve diğer serebrovasküler hastalıklar çalışmaya kurulan fare modelleri değerini artırır.
Bu prosedürün genel amacı, yenidoğan farelerde serebral kavernöz malformasyonları indüklemek ve mikro-BT kullanarak hastalık yükünü ölçmektir. Bu yöntem, serebral kavernöz malformasyonlar gibi serebral vasküler hastalık alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin en önemli avantajı, neonatal fare modellerinde serebral kavernöz malformasyon hastalık yükünün mevcut yöntemlere kıyasla doğru ve verimli bir şekilde belirlenebilmesidir.
Serebral kavernöz malformasyonun indüksiyonu ve mikro-BT analiz adımlarının öğrenilmesi zor olduğundan, bu yöntemin görsel gösterimi kritik öneme sahiptir, çünkü deneyim ve sofistike yazılım kullanımı gerektirir. 4-HT'yi% 100 etanol içinde mililitre başına 10 miligram konsantrasyona çözerek başlayın. 30 mikrolitre alaquads hazırlayın ve eksi 80 santigrat derecede saklayın.
Kullanım gününde, alaquad'ı mısır yağında 4-HT'de mililitre başına 0.5 miligrama kadar seyreltin. Daha sonra, deneysel CCM lezyonlarını indüklemek için P1 yenidoğan yavrularına 50 mikrolitre 4-HT'yi introgastrik olarak enjekte etmek için bir insülin şırıngası kullanın. 29 gauge iğne ile donatılmış 10 mililitrelik bir şırıngayı üç mililitre %2 paraformaldehit ve PBS ile doldurarak numune hazırlamaya başlayın.
Daha sonra, iğneyi fare kalbinin ventrikülüne sokarak ve tam miktarda paraformaldehit enjekte ederek ötenize P8 yavrusu üzerinde intrakardiyak profüzyon gerçekleştirin. Kafayı ayırmak için makas kullandıktan sonra, cildi kafadan çıkarın ve tüm beyni% 4 paraformaldehit ve PBS'ye ayırmak için forseps kullanarak kafatasını soyun. Beyinleri gece boyunca 4-HT santigrat derecede sabitleyin.
Ertesi gün, forseps kullanarak arka beyinleri ayırın ve PBS solüsyonu ile durulayın. Daha sonra arka beyinleri Lugol'un iyot çözeltisinde 48 saat boyunca inkübe edin. Kuluçkadan sonra, fazla Lugol'un iyot çözeltisini çıkarmak için arka beyinleri kısa bir süre havayla kurutun.
Daha sonra Lugol'un iyot lekeli arka beyinlerini 0.65 mikrolitrelik mikrosantrifüj tüplerine koyun ve doku büzülmesini önlemek için plastik parafin film ile tamamen kapatın. Mikrosantrifüj tüplerini, tarama sırasında hareket etmelerini önlemek için süngerli beş mililitrelik plastik tüplere yerleştirin. Arka beyin içeren tüpü mikro-CT sistemindeki bir alüminyum tutucuya dikey olarak monte edin.
Tarama parametrelerini ayarlayın. Tomografik veri kümelerini elde etmek için 540 projeksiyon ve 50 kilovolt ve 10 Watt kaynak koşullarıyla iki saniyelik bir pozlama süresi kullanın. Taramadan elde edilen radyo grafikleri, mikro-CT sistemi tarafından sağlanan donanım tabanlı projeksiyon yeniden yapılandırma yazılımı tarafından otomatik olarak yeniden oluşturulur ve 16 bitlik eksenel dilimlerden oluşan bir görüntü serisi üretilir.
Lugol iyot kontrastlı mikro-BT, CCM lezyonlarını yeterince tespit etti. Taranan X-ışını görüntüleri, fare beyninin 3 boyutlu görüntülerini üretmek için yeniden yapılandırıldı, bu da beyin parankimindeki tüm lezyonların farklı derinliklerde ve yönelimlerde görüntülenmesine ve yapının beyindeki lezyonların 3 boyutlu konumunda değerlendirilmesine izin verdi. Bu tablo, etiketli bireysel lezyonların kantitatif çıktısının bir örneğini göstermektedir.
Geliştirilmesinden sonra, bu teknik, vasküler hastalık alanındaki araştırmacıların, fare modellerinde serebral kavernöz malformasyonlar için mekanizma ve terapötik seçenekleri keşfetmelerinin yolunu açtı. Bu videoyu izledikten sonra, fare modellerinde CCM lezyonunun nasıl indükleneceğini ve mikro-BT tekniği ile CCM lezyon yükünün nasıl elde edileceğini ve analiz edileceğini iyi anlamış olmalısınız.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Bu protokol, neonatal farelerde serebral kavernöz malformasyon hastalığının indüksiyonunu gösterir ve lezyon yükünü ölçmek için mikro-BT kullanır. Bu yöntem, serebral kavernöz malformasyon ve diğer serebrovasküler hastalıklar için moleküler temeli ve potansiyel tedavileri anlamayı geliştirir.
Quantitative micro-CT imaging of cerebral cavernous malformations (CCMs) in genetically engineered mouse models enables precise assessment of lesion burden, supporting mechanistic de-risking and target validation in cerebrovascular disease research. This approach enhances predictive confidence for early-stage therapeutic hypothesis testing and informs portfolio triage by providing robust, reproducible lesion quantification. Integration of high-resolution imaging with genetic disease models positions this workflow as a critical inflection point for translational continuity in vascular biology pipelines.
This method bridges early discovery and preclinical research by enabling hypothesis-driven genetic manipulation and quantitative phenotyping in mouse models, supporting lead identification and translational biomarker alignment.