Name: İmalat ve Fiber Griffithsin-modified iskele karakterizasyonu önlenmesi için cinsel enfeksiyonlar iletilen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-10-31T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 21 s
Description: Öğrenin Griffithsin ile yüzey modifiyeli PLGA elektrospun fiber üretimini ve karakterizasyonunu. Bu yöntem HIV-1 gibi cinsel yolla bulaşan viral enfeksiyonları önlemek için ilaç taşıma sistemleri geliştirmeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu araştırma fonu için mükemmellik için Yahudi miras Fonu için minnettarız. Dr. Stuart Williams II cömertçe electrospinning sisteminin kullanımı sağlamak için teşekkür ederiz. Biz de Dr. Kenneth Palmer bize Griffithsin ile verdiğiniz için teşekkür ederiz. Ayrıca Dr Nobuyuki Matoba ve laboratuarını GRFT ELISA içimizde iş eğitim için teşekkür ederiz.

1. hazırlanması ve Electrospun Fiber iskele imalatı dikkat: çözücüler ya da polimer çözümleri ile tüm iş-meli var olmak kılınmak kimyasal duman mahallede . Protokol başlamadan önce her reaktif malzeme güvenlik veri sayfasına bakın.
<ol><li>50: 50 Poli (laktik-co-glikolik asit) 720 mg 3 mL % 15 w/w PLGA polimer çözüm electrospin için tartmak (PLGA; 0,55-0,75 dL/g, 31-57 kDa) bir 10 mL mercek şişe içine. Çözüm hacmi geçerli çalışmalarda kullanılan tipik toplu iş boyutu dayanır. 
	Not: polimer çözülmeye kullanılan çözücü yoğunluğunu belirleyerek solvent belirli bir birime eklemek için polimer kitle hesaplanmalıdır. 1.59 g/mL çözelti Hexafluoro-2-propanol (HFIP) yoğunluğudur. Böylece, solvent, ağırlığı 3,0 mL HFIP gerekli bir birimde, 4.8 g (3,0 mL x 1.59 g / mL) uyarlanmıştır. Bir % 15 w/w kısmını HFIP için PLGA için 720 mg PLGA 3,0 mL HFIP (0.15 x 4800 mg = 720 mg) eklenmesi gerekir. Bir % w/w polimer/çözüm yerine % w/v, kullanmanın avantajı, bu nihai çözüm tanımlanmış ağırlığını sağlamasıdır. Tanımlanan bu ağırlık çözücü buharlaşma sırasında adım 1.3 durumunda daha doğru solvent değiştirme etkinleştirir.</li>
	<li>PLGA (adımından 1.1) içeren cam mercek şişe 3,0 mL HFIP eklemek serolojik cam pipet kullanarak. Plastik film ile şişe kapağı sonra ölçmek ve şişe kayıt Mass</li>
	<li>Gecede 37 ° C'de polimer tam çözünme sağlamak için polimer süspansiyon kuluçkaya. Herhangi bir çözücü buharlaşarak, şişe kitle, azalan ekleyerek HFIP şişe özgün kütlesiyle adım 1.2 ulaşıncaya kadar.</li>
	<li>Kuluçka sonra electrospinning aparatı ( Şekil 2 A) hazırlamak. Her boyuttaki bir mandrel kullanılabilir olmasına rağmen burada dönen bir 25 mm dış çap paslanmaz çelik mandrel toplayıcı kullanıldılar. 
	Not: Electrospinning çözüm aynı hacmi verilen fiber kalınlığı daha büyük bir mandrel çapı azalır.</li>
	<li>Polimer çözüm 3 mL şırınga Aspire edin.</li>
	<li>Bir künt 18'lik, ½ inç iğne ucu şırıngaya bağlanmak ve boş headspace iğne ucunu kaldırmak için aşırı çözüm (genellikle 0.25 mL) dağıtmak.</li>
	<li>Şırınga şırınga pompa yerleştirin ve araç akış hızı 2.0 mL/h. için ayarla 
	Not: Bu akış hızı daha önce bu formülasyon için polimer viskozite göre optimize edildi.</li>
	Şırınga iğne ve electrospin <li>bağlanmak güç kaynağı bir gerilim + 27 kullanarak polimer çözüm kV. İğne ve toplayıcı arasındaki mesafe yaklaşık 25 cm ( Şekil 2 B) ayarlamanız gerekir. 
	Dikkat: Bir çözücü buharı electrospinning işlemi oluşturur. Zararlı buharı . kaldırmak için bir duman başlık veya kapalı bir aparat ( Şekil 2) kullanın</li>
	<li>Tüm çözüm electrospun olduğunda, güç kaynağı açmak ve bir ek 30 tam solvent buharlaşır min için dönmeye mandrel izin.</li>
	<li>Dönüş dönen mandrel toplayıcı kapalı ve jilet mandrel elyaf kesmek için kullanın. Yavaşça mandrel elyaf soymak için bıçak kullanın.</li>
	<li>Electrospun PLGA fiber etiketli bir Petri kabına toplamak ve yer kalan solvent kaldırmak için bir desiccatorovernight.</li>
</ol> 2. Yüzey-değişiklik lifleri ile GRFT <ol><li>hazırla çözümleri fosfat tamponlu tuz çözeltisi (PBS) ve 2-(N-morpholino), ethanesulfonic asit (MES arabellek). PBS 8 g NaCl, 0.2 g KCl, 1.44 g Na 2 HPO 4 ve 0,24 g KH 2 PO 4 ' te ultrasaf su 1 litre çözülerek hazırlayın. Benzer şekilde, 19.52 g MES (serbest asit, MW 195.2) dağıtılması ve 29.22 g NaCl MES arabellek hazırlamak için 1 L ultrasaf su, içinde. Her çözüm son pH 7.2-7.5 ve 5.0-6.0, arasında sırasıyla, pH metre kullanarak sağlamak.</li>
	<li>NHS (5 mM) ve EDC (2 mM) bireysel çalışma çözümleri hazırlayın.
	<ol><li>EDC ve NHS dondurucudan kaldırmak ve tartma önce oda sıcaklığına equilibrate etmelerine izin.</li>
		<li>EDC 4 mg 1.5 mL microcentrifuge tüp içine tartmak.</li>
		<li>NHS 6 mg başka bir microcentrifuge tüp içine tartmak.</li>
		Her tüpün arabelleğe <li>ekleyin 1 mL MES. Girdap şiddetle reaktifleri emin olmak için her iki tüpler tam çözünmüş.</li>
	</ol></li> <li>70 mg 50 mL konik santrifüj tüpüne ağırlığında tarafından hydroxylamine çözeltisi hazırlamak.</li>
	<li>20 mL PBS hydroxylamine ve çözülmeye girdap ekleyin.</li>
	<li>PLGA fiber uygun bir miktar dışarı kitle içine 15 mL konik santrifüj tüpü. Genellikle, fiber 75 mg her reaksiyon toplu işlem için kullanılır.</li>
	<li>15 mL tüp MES arabellek 8 mL ekleyin.</li>
	<li>Ekleyin 1 mL her tüp daha önceden hazırlanmış EDC ve NHS çözümleri. Çözüm son hacmi 10 mL olmalıdır. EDC ve NHS son konsantrasyonları 0.4 mg/mL ve 0.6 mg/mL, sırasıyla olmalıdır.</li>
	<li>Yakın ve plastik film ve çözüm 15 dakika oda sıcaklığında ( şekil 3 B) yavaşça ters için izin vermek için bir rotator üzerinde yer ile 15 mL tüp mühür. Bu adımı GRFT protein ( şekil 3 A) ile kovalent değişiklik için izin vermek için polimer karboksil grupları etkinleştirir.</li>
	<li>Harekete geçirmek sonra dikkatli bir şekilde gidermek tepki tüp β-mercaptoethanol 14 µL ekleyerek. Tüp birkaç kez tam karıştırma sağlamak için ters çevir'i. 
	Dikkat: β-mercaptoethanol çok zehirli ve yalnızca bir kimyasal duman mahallede kullanılmalıdır.</li>
	<li>Süpernatant atmak ve PLGA fiber iki kez, 10 mL ile kalan herhangi bir β-mercaptoethanol kaldırmak için PBS, durulama.</li>
	<li>Sonra durulama, GRFT hisse senedi çözüm uygun bir miktarda tüp ekleyin. Örneğin, 5 nmol GRFT/mg fiber GRFT mg fiber başına (Stoktan 10 mg/mL) hisse senedi çözüm 6,35 µL gerektirecektir. Böylece bir 75 mg lif örneği 10 mg/mL GRFT hisse senedi çözüm 476.25 µL gerektirecektir. 
	Not: GRFT lifleri 0,05, 0.5 ve 5 nmol GRFT mg fiber başına teorik yükleri ile fabrikasyon.</li>
	<li>Son hacim 8 mL için getirmek için yeterli PBS eklemek kapatın ve ayrıntılı karıştırma sağlamak için tüp ters.</li>
	<li>Plastik film ile tüp mühür ve bir rotor üzerinde tekrar, burası 2 h. süre</li>
	<li>Sonra 2 s kuluçka, 2 mL hydroxylamine çözeltisi 15 mL santrifüj tüpüne ekleyerek tepki gidermek. Üreticinin yönergelerini hydroxylamine son konsantrasyonu su verme reaksiyon sırasında 0.7 mg/mL olmalıdır.</li>
	<li>Çözüm karıştırın ve süpernatant atın. Yüzey-modified PLGA fiber herhangi bir çekimsiz GRFT kaldırmak için iki kez 10 mL ultrasaf su ile durulama.</li>
	Lif tamamen kuru olana <li>fiber bir Petri kabına ve yer bir desiccator içine aktarın. Depolama için 4 ° C Petri kabına aktarın.</li>
</ol> 3. SEM GRFT yüzey karakterizasyonu-modified lifleri <ol><li>yer bir SEM üzerinde çift taraflı karbon bandın bir şerit numune Dağı. Numune mount dibinde kalıcı bir kalem kullanarak örnek tanıtıcı bilgiler ile etiketleyin.</li>
	<li>Üç örnek bir yüzey-modified fiber keser ve onları ayrı örnek bağlar yerleştirir. Her örnek kalınlığı yaklaşık 0.5 mm olan.</li>
	<li>Sputter bir altın plaka elektron kaynaklı partikül ifade kullanarak örnekleri kat. Kat 90 için şaplatın s, 2.4 kV. 
	Not: Sputter kat zaman gerilim ve amperaj dahil olmak üzere donanım parametreleri bağlı olarak değişebilir.</li>
	<li>Örnekleri resim 8 kV 1000 5'e kadar bir büyütme ile 000 X.</li>
</ol> 4. GRFT ayıklama yüzey-modified liflerinden <ol><li>kitle dışarı nüsha 1.5 mL microcentrifuge tüpler içine lif 2 mg.</li>
	<li>Tüp, sonra girdap 1 mL Dimetil sülfoksit (DMSO) ekleyin ve lif tamamen erimesi için oda sıcaklığında 1 dk. için kuluçkaya.</li>
	<li>Kuluçka sonra 10 µL aliquot, seyreltik Tris-EDTA (TE) arabellek 4.2, en az 100-fold adımda DMSO lifli çözümden (pH = 8.0).</li>
	<li>Karakterizasyonu ELISA ile yükleme kadar örnekleri-20 ° C'de depolayın.</li>
</ol> 5. GRFT desorpsiyon liflerinden ölçme <ol><li>GRFT serbest miktarını değerlendirmek veya fiber desorbed 5-10 mg lif yüzeyi değiştirilme tarihi ve yeri bir microcentrifuge tüp tartmak için. Fiber kitle her tüpte kaydetmek.</li>
	<li>1 mL fizyolojik ortamı taklit eden uygun bir çözüm ekleyin (örneğin, PBS, TE arabellek, benzetimli vajinal sıvı (SVF), vb) her bir örneği için.</li>
	<li>Örnekleri üzerinde dönen bir shaker 200 devirde, 37 1 h için kuluçkaya ° C.</li>
	Kuluçka, küme için şişe ve aliquot GRFT desorbed içeren TE arabellek Kaldır yaklaşık 1 mL tüpler sonra <li>. -20 ° c protein miktar kadar mağaza.</li>
	<li>, Örnek için yeni bir microcentrifuge tüp transfer fiber microcentrifuge tüp içinde 1 mL taze tampon çözeltisi ekleyin ve sonraki zaman noktasına kadar kuluçkaya.</li>
	<li>Yayın ölçmek için kullanılan tipik süresi noktalar şunlardır: 1, 2, 4, 6, 8, 24, 48, ihmal edilebilir desorpsiyon sonra 4 h bu çalışmalarda gözlenen 72 s ve 1 wk.</li>
</ol> 6. Miktar GRFT ayıklama ve desorpsiyon ELISA ile <ol><li>kat bir 96-Peki ELISA plaka ile ha 0.1 mL (10 µg/mL) iyi daha önce 51 açıklandığı gibi. Plastik film ile plaka mühür ve bir gecede kuluçkaya 4 ° C'de ( şekil 4).</li>
	<li>Kaplama arabellek kaldırın ve 0.3 mL arabelleğe her şey (% 2-3 sığır serum albumin (BSA) PBS içinde % 0.05 polysorbate 20 ile) engelleme ekleyin. Oda sıcaklığında en az 2 h plaka kuluçkaya.</li>
	<li>3 kez ile 1 x PBS % 0,1 polysorbate 20 (PBS-P) ile plaka kuluçka sonra durulayın. Durulama sonra örnek, standart veya PBS 0.1 mL negatif kontrol ilgili kuyu dağıtmak. Oda sıcaklığında 1 h için tekrar plaka kuluçkaya.</li>
	<li>Plaka PBS-s. 3 kez tekrar durulama Durulama sonra birincil antikor (keçi anti-GRFT anti-serum) her kuyuya 0.1 mL ekleyin ve oda sıcaklığında en az 1 h için kuluçkaya. Tipik olarak, birincil antikor çözüm tarafından PBS 1:10,000 sulandırılmış.</li>
	Sonra birincil antikor durulama örnekleriyle plakalar tekrar 3 kez PBS-s. ile kuluçka <li> İkincil antikor 0.1 mL ekleyin (horseradish peroksidaz (HRP)-konjüge tavşan Anti-keçi IgG) her şey ve oda sıcaklığında 1 h için kuluçkaya. İkincil antikor çözüm tarafından PBS 1:10,000 sulandırılmış.</li>
	<li>Plaka 3 kez yıkayın. 0.1 mL TMB 2-peroksidaz substrat her şey için ekleyin. Monitör renk geliştirme (yaklaşık 2 dk), sonra 0.1 mL H 2 Yani ekleyin tepki gidermek için 4 (1 N). 450 plaka okumak plaka okuyucu üzerinde nm.</li>
	<li>Arka plan OD değerleri (kuyu) sadece PBS almak ortalama ve bu deneysel gruptan çıkarın.</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Onların gözenekli yapıları ve geniş yüzey alanları nedeniyle, EFs sağlık, hangi birini tedavi teslim araç olarak hizmet içeren çeşitli uygulamalar bulduk. Destekte ve kimyasal ligandlar lif yüzeyine hücre özel hedefleme52 veya biosensing53için Birleşik iken EFs içinde uyuşturucu ve diğer active aracıları tunable teslimat için dahil edilebilir. Burada GRFT imalatı yüzey-PLGA EFs, HIV enfeksiyonu önlemek için bir teslimat iskele anlatılan biçimde değiştirilmiş. GRFT-EFs taraf...

EFs kullanımı bir topikal teslim platformu olarak önemli ölçüde cinsel yolla bulaşan hastalıklar azaltmak potansiyeline sahiptir. Şu anda içinde bildirilen 2015 yalnız1,22 milyon yeni vaka ile HIV ile yaşayan 36 milyondan fazla kişi vardır. Ayrıca, herpes simpleks virüsü 2 (HSV-2) enfeksiyon etkiler yüz milyonlarca insanın dünya çapında yazın ve HIV edinme geliştirmek için 2-5 kat3tarafından gösterilmiştir. HSV-2 enfeksiyon ve HIV edinme arasındaki bu ilişki nedeniyle, birden çok cinsel yolla bulaşan hastalıklar karşı eş zamanlı koruma sağlamak yeni active aracıları gelişmekte olan faiz önemli vardır. Ayrıca, bu antiviral ajanlar teslimini geliştirmek için yeni araçların gelişimi daha fazla koruyucu ve tedavi edici etki gücü arttırmak için potansiyel sunmaktadır. Bu hedefe doğru EFs HIV-1 ve HSV-2 enfeksiyonları yaygınlığını azaltmak için yeni bir dağıtım platformu araştırdık.
Son iki yılda, EFs yoğun ilaç dağıtım ve doku Mühendisliği4alanlarında kullanılmaktadır. Çoğu zaman, Biyouyumlu polimerler kolayca tedavi edici uygulamalara çevirmek için seçilir. Seçili polimer polimer EFs imal etmek, organik bir çözücü veya sulu çözüm, polimer hydrophobicity5derecesine bağlı olarak feshedilmiştir. Etkin faiz ajanların sonra çözelti veya sulu çözüm electrospinning işlemi önce eklenir. Polimer çözüm bir şırınga emişli ve yavaş yavaş bir elektrik akımı iken tabi atılır. Bu işlem genellikle polimer lifleri levha veya silindirik macrostructures (şekil 1) ve mikro-nano ölçekli6arasında değişen elyaf çapları ile sonuçlanır. En terapötik uygulamalarda etkin ajanlar içinde lifleri electrospinning işlemi sırasında dahil edilmiştir ve fiber Difüzyon ve sonraki lif dejenerasyonu ile serbest bırakılır. Bozulma ya da yayın oranını polimerlerin farklı türleri kullanarak değişmiş olabilir veya benzersiz kimyasal ve fiziksel özellikleri7imparting ve teşvik encapsulation hemen hemen herhangi bir istenen yayın profili kurmak için polimer karışımları bileşik. Bu nedenle, EFs küçük molekül ilaç ve biyolojik ajanlar proteinler, peptidler, oligonucleotides ve büyüme faktörleri6,8,9dahil olmak üzere teslim için yararlı kanıtlanmış.
Şti önleme alanında, EFs son zamanlarda dahil ve sürekli - veya indüklenebilir-serbest bırakmak-in antiviral ajanlar10,11,12,13,14 sağlamak için kullanılmıştır ,15,16,17,18,19. Bir ilk çalışmalar, pH-duyarlı lifler içinde kadın üreme sistemi (FRT), çevresel değişiklikler active aracıları serbest bırakmak için bir isteğe bağlı yöntemi HIV-111karşı koruma olarak geliştirilmiştir. Beri diğer çalışmaları polimer karışımları polietilen oksit (PEO) ve poli-L-laktik asit (PLLA), antiviral ve doğum kontrol maddeleri, HIV-1 önleme ve doğum kontrolü içinde in vitro için ayarlanabilir sürümü değerlendirmek için oluşan araştırdık 12. ek çalışmalar aşağıdakileri sağlamak için EFs fizibilite göstermiştir: uzun süreli yayın küçük molekül antiviral14, güçlü ve esnek mekanik özellikleri20, 3-b teslim mimarileri21 , sperm penetrasyon12ve diğer dağıtım teknolojileri13ile birleştirebilme inhibisyonu. Son olarak, daha önceki çalışma sürekli teslimat ortak co-infective virüs, HSV-2 ve HIV-114karşı antiviral ajanlar için polimerik lifler değerlendirildi. Bu çalışmada, polimer lifleri ilâ 1 ay için onların yapısını koruyarak ve viral giriş fiziksel bir engel sağlayarak tamamlayıcı faaliyet antiviral teslimat için sağlanan. Bu sonuçlar, EFs hem fiziksel hem de kimyasal olarak virüs enfeksiyonu engellemek için kullanılan görülmüştür.
Akort yayın özellikleri microbicide teslimat için bir çekici teslim platform polimer EFs yaparken, EFs diğer uygulamalarda yüzey-modified iskele7olarak hizmet etmek için geliştirilmiştir. EFs kez hücresel yenilenme22artırmak ve doku Mühendisliği23,24onların programını geliştirmek için iskele görevi gören hücre dışı Matriks (ECM), Morfoloji taklit etmek için kullanılmaktadır. Poli-ε-caprolactone (PCL) gibi polimerler oluşur lifleri ve PLLA-si olmak be yüzey-büyüme faktörleri ve proteinler ile modifiye electrospinning sonra artan hücre adezyon ve nükleer silahların yayılmasına karşı25 dahil ECM benzeri özellikleri vermek için , 26. Ayrıca, antimikrobiyal yüzey-modified EFs özel Patojen bakteriler27,28gelişimini önlemek için değerlendirilir. Bu çok yönlülük ve biyolojik etkileri ikna yeteneği nedeniyle EF teknoloji alanları çok mekanik işlevsellik sağlamak için çeşitli genişletmeye devam ediyor. Henüz, rağmen onların yardımcı programında uygulamaları bir çeşitlilik, yüzey-modified lifleri yakın zamanda microbicide alan29araştırılmalıdır.
Paralel olarak önlemek ve cinsel yolla bulaşan hastalıklar tedavi için yeni iletim teknolojileri geliştirilmesi, roman biyolojik tedavi geliştirilmiştir. En umut verici microbicide adaylar biridir yapışkanlı antiviral lektin, GRFT30. Aslında bir tür red algae türetilmiş, GRFT HIV, HSV-2, SARS, güçlü bir inhibitörü olarak faaliyet göstermiş olduğu hem de Hepatit C virüs31,32,33,34, 35 , 36. aslında, biyolojik tabanlı inhibitörleri arasında GRFT en güçlü Anti-HIV etkinlik, HIV-1 hemen ihracı kişi30, istikrar ve etkinlik vajinal kültür ortamından huzurunda koruyarak vardır En çok 10 gün37için mikroplar. Daha yakın zamanlarda, % 0,1 GRFT jel fareler intravaginal HSV-2 challenge, HSV-2 ve HIV-132 karşı koruma ilk satırı için umut verici bir aday yapmak karşı korumak için gösterildi, 38. HIV için özel olarak, fiziksel olarak giriş38,39,40,41 önlemek için viral zarf yüzeylerde gp120 veya terminal mannoz N bağlı glycan artıkları bağlayarak GRFT enfeksiyon engeller ,42. Bu inhibisyon 3 ng/mL43yaklaşan IC50s ile son derece güçlü. HIV enfeksiyonu inhibe yanı sıra, çalışmalar da GRFT virüs32hücre hücre yayılmasını engelleyerek HSV-2 enfeksiyona karşı korur göstermiştir. Her durumda, denatürasyon karşı yüksek direnç gösteren sırasında viral parçacıkların, yapıştırıcı olmak GRFT gösterilmiştir. Son, GRFT uygun ve büyük olasılıkla EFs ile birlikte yönetmek yararlı hale Tenofovir (TFV) ve diğer antiviral44, kombinasyonları ile sinerjik faaliyet göstermiştir. GRFT güçlü özelliklerini içinde teslim EF teknoloji ile geliştirilmiş bir mükemmel biyolojik tabanlı antiviral aday olun.
Bu bilgi GRFT ya da doğuştan gelen antiviral özellikleri kullanmak, bir polimer fiber iskele, virüs giriş inhibisyon29ilk katmanı sağlamak için bu özellikleri entegre dizayn edilmiştir. Bulgu Inspiration cervicovaginal mukus mucoadhesive müsin etkileşimler yoluyla öncelikle virüs ulaşım engel şekilde, biz bu EFs bir iskele kullanarak ve kovalent GRFT, yüksek yoğunluğu ile yüzey değiştirme onaylanmadığına karar yüzey Birleşik GRFT debilitate ve onun giriş noktası45,46,47virüs devre dışı bırakabilirsiniz. Burada EFs bir protein bazlı, viral yapıştırıcı ihracı bariyer platformu sağlamak için sabit bir iskele geliştirilmiştir. Biz GRFT güçlü antiviral özellikleri "tuzak" roman bir virüs oluşturmak için Biyouyumlu, değiştirilebilir ve dayanıklı polimer platform ile birleştirmek aranan
Bu hedeflere ulaşmak için electrospun PLGA oluşan lifler vardı ve EDC NHS kimya GRFT EF yüzeyle daha sonra değiştirmek için kullanılmıştır. PLGA electrospinning48Biyouyumluluk ve maliyet-etkililik ile birlikte, geniş kullanımı nedeniyle bir modeli polimer olarak görev yaptı. Ayrıca, yüzey modifikasyonu EFs büyük yüzey alanı kullanan ve lif yardımcı programı49en üst düzeye çıkarmak için kapsülleme ile kombine edilebilir yararlı bir alternatif sağlar. Nerede GRFT yalnızca bir bölümünü mevcuttur (ve yalnızca geçici FRT mevcut) geleneksel saklama yöntemlerinden farklı olarak, yüzey modifikasyonu GRFT maksimum bioactivity tedavi süresi sırasında korumak izin verebilir. Ayrıca, geleneksel electrospinning yöntemlerle proteinler gibi hidrofilik bileşikler birleşmesiyle daha düşük kapsülleme verimliliği ve protein etkinlik50kaybı neden olabilir. Bu nedenle, GRFT yüzey-modified lifleri Şti bulaşmasına karşı koruma geliştirmek için tek başına veya electrospinning birlikte kullanılabilir umut verici bir alternatif Teslimat yöntemi sunabilir.

<table><tbody><tr><td>Poli (Laktid-ko-Glikolid) (PLGA) 50: 50</td><td>Lactel</td><td>B6013-2P</td><td></td></tr><tr><td>1,1,1,3,3,3-Heksafloro-2-propanol (HFIP)</td> <td>Thermo Scientific&nbsp;</td><td></td><td></td>147541000</tr><tr><td>Künt Dağıtım İğnesi 18g X 1/2</td><td>Brico Tıbbi Malzemeler</td><td>BN1815</td><td></td></tr><tr><td>BD 3mL Şırınga Luer-lok ucu</td><td>VWR</td><td>309657</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm (plastik film)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>P7793</td><td></td></tr><tr><td>2- (N-Morfolino) etansülfonik asit (MES Tamponu)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>M3671 ve nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Klorür</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S7653</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum Klorür</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P9333</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum fosfat dibazik</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S7907</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum fosfat monobazik</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P0662</td><td></td></tr><tr><td>Hidroksisüksinimit (NHS)</td> <td>Thermo Scientific&nbsp;</td><td>24500</td><td></td></tr><tr><td>1-etil-3- (3-dimetilaminopropil) karbodiimid hidroklorür (EDC)</td> <td>Thermo Scientific&nbsp;</td><td>22980</td><td></td></tr><tr><td>2-Merkaptoetanol</td><td>Fisher</td><td>BP176</td><td></td></tr><tr><td>Griffithsin (GRFT)</td> <td>Kentucky Bioprocessing</td><td>NA</td><td>özel yapım, ürün numarası yok</td></tr><tr><td>Dimetil Sülfoksit</td><td>Milipore</td><td>317275</td><td></td></tr><tr><td>Polietilen glikol sorbitan monolaurat (Polisorbat, Tween 20)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>P9416 ve nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Tris EDTA Tampon</td><td>Sigma Aldrich</td><td>93283</td><td></td></tr><tr><td>Düz Tabanlı İmmüno Nonsteril 96 Kuyulu Plakalar</td><td>Thermo Scientific&nbsp;</td><td>3355</td><td></td></tr><tr><td>İnfluenza Hemaglutinin (HA)</td> <td>Kentucky Bioprocessing</td><td>NA</td><td>özel yapım, ürün numarası yok</td></tr><tr><td>Keçi Anti-GRFT (Birincil Antikor)</td> <td>Kentucky Bioprocessing</td><td>NA</td><td>özel yapım, ürün numarası yok</td></tr><tr><td>Tavşan anti-keçi IgG-HRP (İkincil Antikor)</td> <td>Santa Cruz</td><td>2056</td><td></td></tr><tr><td>Sure Blue TMB Microwell Peroksidaz Substrat</td><td>KPL</td><td>52-00-00</td><td></td></tr></tbody></table>

İmalat ve fiber griffithsin-modified iskele karakterizasyonu önlenmesi için cinsel enfeksiyonlar iletilen

Fabrication and Characterization of Griffithsin-modified Fiber Scaffolds for Prevention of Sexually Transmitted Infections

Electrospun lifleri (EFs) çeşitli terapötik uygulamalarda yaygın olarak kullanmış; önlemek ve cinsel tedavi için bir teknoloji bulaşan enfeksiyonların (CYBE) gibi Ancak, onlar sadece son zamanlarda uygulanmış. Ayrıca, birçok EF teknolojileri kullanan biofunctionality vermek için yüzeye göre etkin aracı Kapsüllenen odak. Burada imal ve yüzey-poly(lactic-co-glycolic) asit (PLGA) electrospun lifleri, güçlü antiviral lektin Griffithsin (GRFT) ile değiştirmek için bir yöntem açıklanmaktadır. PLGA yaygın ilaç dağıtım onun üstün kimyasal ve Biyouyumlu özellikleri nedeniyle içinde kullanılan FDA onaylı bir polimerdir. GRFT, güçlü, doğal ve insan immün yetmezlik virüsü tip 1 (HIV-1) dahil olmak üzere çok sayıda virüslere karşı geniş faaliyet sahip güvenli lektin var. Birleştirildiğinde, GRFT-modified lifleri HIV-1 vitrogüçlü inactivation gösterdi. Bu el yazması imal ve GRFT-modified EFs karakterize yöntemleri açıklar. PLGA electrospun fiber iskele oluşturmak için ilkidir. Lifleri GRFT 1'i kullanarak daha sonra yüzey modifiye-etil - 3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (EDC) ve N-hydroxysuccinimide (NHS) Kimya. Elektron mikroskobu (SEM) tarama boyutu ve yüzey-modified formülasyonları morfolojisi değerlendirmek için kullanıldı. Ayrıca, bir gp120 veya hemagglutinin (HA)-tabanlı ELISA için Birleşik GRFT yanı sıra GRFT desorpsiyon fiber yüzeyinden miktarını ölçmek için kullanılan. Bu iletişim kuralı yüzey-modified farklı proteinler çeşitli ile lifleri imal etmek daha yaygın olarak uygulanabilir.

Lif morfolojisi EFs yüzeyi değiştirilen virüslere karşı koruma sağlama yeteneği üzerinde önemli bir etkisi vardır. Her ne kadar electrospinning uygun ve kolay anlaşılan bir işlemdir, polimer olmayan optimize formülasyonları düzensiz lif morfolojisi (şekil 5B-C) neden olabilir. Boncuklu veya amorf mat gibi türleri Morfoloji oluşumuna neden electrospinning koşullarında değişiklikler genellikle solvent-polimer uyumsuzluk, düşük polimer viskozite...

Bu el yazması imal ve insan immün yetmezlik virüsü tip 1 bulaşmasına karşı güçlü yapıştırıcı ve antiviral faaliyet göstermek Griffithsin-modified Poli (laktik-co-glikolik asit) electrospun lifler karakterize için yordamı açıklar vitro. Sentez için kullanılan bir yöntem yüzey-değiştirmek ve elde edilen morfolojisi, konjugasyon, karakterize ve Griffithsin desorpsiyon yüzey-modified liflerinden açıklanmıştır.

İmalat ve Fiber Griffithsin-modified iskele karakterizasyonu önlenmesi için cinsel enfeksiyonlar iletilen

Electrospun fibers (EFs) have been widely used in a variety of therapeutic applications; however, they have only recently been applied as a technology to ...

Bu prosedürün genel amacı, değişen miktarlarda antiviral protein Griffithsin ile polilaktik asit, ko-glikolik asit, elektrospun lifleri imal etmek ve yüzey modifiye etmektir. Bu yöntem, HIV-1 gibi cinsel yolla bulaşan viral enfeksiyonları önleyebilecek yeni dağıtım araçlarının nasıl formüle edileceği ve karakterize edileceği gibi ilaç dağıtım alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Tekniğin ana avantajı, Griffithsin'in antiviral aktivitesinin, polimerik-elektroeğrilmiş liflerin, lif yüzeyinde yüksek oranda lokalize Griffithsin'e sabit bir iskele olarak kullanılmasıyla maksimize edilmesidir.Bu tekniğin etkileri, Griffithsin'in çeşitli enfeksiyon türlerine karşı güçlü profilaktik ve terapötik potansiyeli nedeniyle diğer viral ve bakteri enfeksiyonlarının tedavisine kadar uzanır. Bu yöntem HIV-1 enfeksiyonunun önlenmesi konusunda fikir verebilse de, Griffithsin'in etki gösterdiği diğer viral veya bakteriyel enfeksiyonlar gibi diğer sistemlere de uygulanabilir. Bu işleme başlamak için, 720 miligram 50/50 PLGA'yı 10 mililitrelik bir parıldama aşağılığına tartın.Serolojik bir cam pipet kullanarak 3.0 mililitre HFIP ekleyin. Aşağılığı plastik filmle örtün. Ardından, a

fabrication-characterization-griffithsin-modified-fiber-scaffolds-for

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Polimerlerin doku mühendisliği ve hücre kültürü için elektrospinning süreci, bu makalede ele alınmaktadır. Özellikle multi-polimer elektrospinning photopatterning ve ek işleme yetenekleri ile photoreactive macromers elektrospinning açıklanmıştır.

Doku Mühendisliği ve Hücre Kültürü için Lifli Polimer Yapı iskeleleri elektrospinning

Elektrospinning iskelelerinin doku mühendisliği uygulamaları için post prodüksiyon işlenebilir. Burada kısırlık (aseptik üretim veya sterilizasyon post prodüksiyon) ulaşmak için ve uygun biyomekanik özellikleri elde etmek için, daha kalın iskeleleri (çoklu katman ısı kullanarak veya buhar tavlama ile) yapmak için, karmaşık iskeleleri (ardışık eğirme) eğirme yöntemleri açıklanmaktadır.

Doku Mühendisliği için elektrospinning Liflerin Postprodüksiyon İşleme

Örümcek ipek ve üstün mekanik özellikleri ve biyokimyasal rağmen, bu malzeme geleneksel yollarla, büyük miktarlarda hasat edilemez. Burada nesil Biyomalzeme olarak örümcek ipeği üretimi ve kullanımı eğitimi araştırmacılar için önemli bir süreç olan yapay örümcek ipeği lifleri, spin etkili bir strateji tanımlamak.

Bir Laboratuvar Ölçekli Sentetik Örümcek İpek Üretimi

Biyo-uyumlu pH duyarlı sol-jel nanosensors poli (laktik-ko-glikolik asit) (PLGA) electrospun iskeleleri katılabilecektir. Üretilen kendi-rapor iskeleleri iskelesi üzerinde hücrelerin kültürlenmesi iken microenvironmental durumların in situ izlenmesi için de kullanılabilir. 3D hücresel yapı deneyi bozmadan gerçek zamanlı olarak izlenebilir edildiğinden bu durum yararlıdır.

3-Boyutlu Hücre Kültürü için Self-raporlama iskeleleri

Bu protokol, nöronları yönlendirmek için doku mühendisliği iskeleleri geliştirmek için elektrospinning ve mikroküreleri birleştirir. Sinir büyüme faktörü PLGA mikroküreleri içinde kapsüllendi ve Hyaluronik Asit (HA) fibröz iskelelere elektrospre edildi.  Protein biyoaktivitesi, iskelelerin birincil civciv Dorsal Kök Gangliyonları ile tohumlanması ve 4-6 gün boyunca kültürlenmesi ile test edildi.

Lifli iskelelerinin içine Microspheres ibra Elektroeğirme Büyüme Faktörü

Burada, biz liflerin Basamaklandırılmış organizasyonu ile electrospun nanolif iskeleleri imal ve hücre morfolojisi / yönünü düzenleyen kendi uygulamalarını keşfetmek için bir protokol mevcut. Nanolif iskelelerinin fiziksel ve kimyasal özellikleri açısından Degrade'ler biyomedikal alanındaki uygulamalar geniş bir yelpazede sunuyoruz.

Fiber Teşkilatı geçişleri ile electrospun Nanolif iskeleleri

Doku mühendisliği için iskeleler, hücresel nişin karmaşık biyokimyasal ve biyofiziksel mikro çevresini özetlemelidir. Burada, sürekli biyokimyasal salınımlı kompozit, çok bileşenli polimerik iskeleler oluşturmak için bir platform olarak arayüzey polielektrolit kompleksleştirme liflerinin kullanımını gösteriyoruz.

Biyomoleküllerin Geçici olarak Kontrollü Release için Yüzey Polielektrolit Elyaf Kompozit Yapı iskeleleri

Bir protokol mikrosıvısal iplik ve rejenere ipek fibroin Monofilament Mikroyapı karakterizasyonu için sunulmaktadır.

Mikrosıvısal kuru-iplik ve rejenere ipek Fibroin lifleri karakterizasyonu

Burada, CAR-T hücre tedavisi için T hücreleri de dahil olmak üzere T hücrelerinin genetik mühendisliğinde kullanılmak üzere verimli viral gen transferine aracılık eden kuru makrogözenekli aljinat iskeleleri oluşturmak için bir protokol bulunmaktadır. İskelelerin aktive olmuş primer T hücrelerini %&gt;85 transdüksiyonla transdüksiyon yaptığı gösterilmiştir.

T Hücrelerinin Viral Transdüksiyonu için Kuru Makrogözenekli Aljinat İskelelerinin İmalatı ve Kullanımı

Plastik membranlı doku kültürü ekleri, hücre katmanları ve bariyer doku modelleri oluşturmak için geçirgen destekler olarak hücre kültürü laboratuvarlarında altın standarttır. Burada, plastik zarı, rekombinant işlevselleştirilmiş bir örümcek ipeği proteininden yapılmış biyolojik olarak daha ilgili bir zarla değiştirmek için basit bir yöntem sunuyoruz.

Özel Yapım Doku Kültürü Eklerinde Rekombinant İşlevselleştirilmiş Örümcek İpeğinden Yapılmış Nanofibriler Bazal Membran Taklidi

Öğrenin Griffithsin ile yüzey modifiyeli PLGA elektrospun fiber üretimini ve karakterizasyonunu. Bu yöntem HIV-1 gibi cinsel yolla bulaşan viral enfeksiyonları önlemek için ilaç taşıma sistemleri geliştirmeye yardımcı olur.

İmalat ve Fiber Griffithsin-modified iskele karakterizasyonu önlenmesi için cinsel enfeksiyonlar iletilen

Daha fazla video keşfet