Name: Drosophila larva nöromüsküler kavşak sinaptik akımlardan Fokal Macropatch kayıtları (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-25T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 1 s
Description: Öğrenin, Drosophila larva nöromüsküler kavşaklarında fokal makropatch kayıtları ile görselleştirilmiş sinaptik butonlardan sinaptik aktiviteyi izleme yöntemini. Bu teknik, sinaptik protein mutasyonlarının iletim üzerindeki etkilerini araştırmak için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

NIH grant R01 MH 099557 tarafından desteklenen

1. imalat kayıt elektrotlar <ol><li><ol><li>kullanımı aşağıdaki cam elektrotlar çekerek protokolü için elektrot çektirme (Tablo malzemeleri görmek): <ol><li>Line 1: ısı 510 çek - hız 30 zaman 250; Line 2: 490 çekme - hız 30 ısı zaman 250. 
			Not: Zaman birimi birim başına 0.5 ms karşılık gelir; diğer birimleri görecelidir. Rampa test gerçekleştirildikten sonra ısı değerini her filaman için ayarlanmalıdır.</li>
		</ol></li> <li>Çekti elektrot iç çapı 7-10 µm ( şekil 1A) aralığında olması için mikroskop (35 x büyütme) kullanın. Kılcal damarlar toz birikimi önlemek için sıkıca kapalı kaplarda saklayın.</li>
	</ol></li> <li>Yangın parlatma <ol><li>yangın Lehçe kılcal damarlar (1-2 s için maksimum ısı değeri % 80-90) mikro-demirhane kullanarak (Tablo malzemeleri görmek). Cilalı elektrot son iç çapı 5 µm ( şekil 1A) 27 olduğundan emin olun.</li>
	</ol></li> <li>Bükme Not: iki virajlı elektrot yüksek büyütme objektif altında kas üstüne konumlandırmak için yapılır.
	<ol><li>Kullanımı şekil 1B adımında gösterilen aparatı. Elektrot manipülatör içinde düzeltmek ve ucu onu değil müessir filament üzerinde konumlandırmak</li>
		<li>Set ısı değeri en fazla 60-70 oranında ve mikro-forge pedal için 1-2 s tuşuna basın (filaman ısı Malzemeleri tablo bkz:). L şeklindeki bir iğne yavaşça (büyütülmüş şekil 1B) elektrot uç çekmek için kullanın. Viraj yaklaşık 90 o ( şekil 1 c) olun.</li>
		<li>Elektrot meşale ateşte forseps kullanarak el ile sık ve ikinci bend bir mesafe üzerinden ilk bend 7-10 mm ve bir açıyla yaklaşık 120 o ( şekil 1 c).</li>
	</ol></li></ol> <img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56493/56493fig1.jpg"> şekil 1. Micropipette imalat son adımlar. (A) elektrot ipuçları çekerek ve yangın parlatma sonra. (B.1) ipucu bükme Kur. (B.2) kutulu alanının sağ tarafta genişlemiş gösterilir. Böylece elektrot ucunu biraz tel üzerinde konumlandırılmış ve değil dokunaklı elektrot ve filament sabittir. (C.1) kayıt elektrot. (C.2) kutulu alanının sağ tarafta genişlemiş gösterilir. İlk bend yaklaşık 90 ° vardır ve ilk bend elektrot ucu arasındaki mesafe yaklaşık 1 mm. ölçek kadar çubuk = 3 mm. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56493/56493fig1large.jpg" target="_blank"> Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
 2. ek hazırlık adımları <ol><li>hazırla heamolymph gibi (HL3) çözüm (mM): 70 NaCl, 5 KCl, 20 MgCl 2, 10 NaHCO 3, 5 trehalose, 115 Sükroz, 5 HEPES ve 1 mM CaCl 2 7.3 için-pH ayarlama; 7.4. çözüm buzdolabında saklayın ve her hafta taze olun.</li>
	<li>Dışında onları bükmeye gerek yok pipets, aynı şekilde kayıt olarak cam stimülasyon pipets olun. 
	Not: Stimülasyon elektrotlar hazırlanması ayrıntılı 28 ve 27 olarak tanımlanır. Yangın parlatma 5-7 µm aralığında olmalıdır sonra son çapı.</li>
	<li>Bir elektrot tutucu bir stimülasyon pipet bağlı bir şırıngaya ekle.</li>
	<li>Üretim diseksiyon plakalar üzerinden küçük petri yemekler (35 x 10 mm) silikon kauçuk epoksi ile kaplı ( 28 içinde açıklandığı gibi Malzemeleri tablo görmek). 
	Not: Silikon kauçuk kullanmadan önce tamamen sertleşmiş olmalıdır.</li>
	<li>Gezgin bir üçüncü-biçim larva almak ve 27 , 28 , 29 , 30 ' açıklandığı gibi incelemek. 
	Not: boutons görselleştirmek için sinek zorlanma CD8-GFP kullanın (bkz. Tablo reçetesi) <ol><li>kullanma forseps, (bkz: Malzemeler tablo) almak 3 rd INSTAR larvaları bir şişe.</li>
		<li>İlk iğneyi posterior yerleştirerek larvalar, pin ve başka bir pin ağız kanca için anterior (Kapat).</li>
		<li>Ekleyin HL3 çözüm.</li>
		<li>(Bkz. Tablo reçetesi) bahar makas ta üst iğnesinden yukarıdan aşağıya doğru bir larva dorsal tarafta kullanarak bir kesim yapmak.</li>
		<li>Üstünde belgili tanımlık sol ve sağ taraflarındaki, larvalar 2 ek pimleri yerleştirerek larva fileto pin.</li>
		<li>Çıkarmak cesaret ve forseps kullanarak tracheas.</li>
		<li>Sadece bahar makas kullanarak ventral sinir kordonu dışında sinirler kesti.</li>
	</ol></li></ol> 3. Elektrik kayıtları EJC'ler <img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56493/56493fig2.jpg"> Şekil 2. Kayıt kurulum. Örnek NMJ silikon kaplı petri kabına (ok) dik bileşik mikroskop epifluorescence yetenekleri, yüksek büyütme objektif ve iki micromanipulators ile donatılmış hareketli sahne üzerinde konumlandırılmış sabitlenmiş. Mikroskop bir anti-titreşim tablo üzerinde konuşlu olduğunu. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56493/56493fig2large.jpg" target="_blank"> Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<ol><li>Kayıt <ol><li>yer petri kabına hazırlık mikroskop sahnede ( Şekil 2). Referans elektrot banyoda takın.</li>
		<li>Kayıt elektrot HL3 çözüm ile doldurun. 10 x amaç altında (bkz. Tablo reçetesi) elektrot banyo içine sokmak ve 6 ve 7 2, 3 veya 4 micromanipulator kullanarak karın segmentlerinin kaslar yerleştirin (bkz. Tablo reçetesi) () şekil 3 A.1 ve A.2).</li>
		<li>Geçiş yapma amacı için 60 x (Tablo malzemeleri görmek). Epi-floresan veya DIC optik kullanarak ilgi alan üzerinde odaklanın. Sinaptik bouton ( şekil 3 B.1-3) üstüne elektrot ucu yerleştirin.</li>
		<li>Elektrot kas üzerine hafifçe basın. Aşırı basınç NMJ zarar veya spontan sinirsel aktivite artışı teşvik. Elektrot ucu tıkanmış - Eğer o, bunu yerine dikkat edin</li>
		<li>Amplifikatör, A/D yönetim kurulu ve bilgisayar geçiş.</li>
		<li>Amplifikatör gerilim kelepçe konumunda seçin.</li>
		<li>Başlangıç Alım yazılım ve ' boşluk içermeyen ' modu.</li>
		<li>MEJCs bilgisayar ekranında görünümünü gözlemlemek.</li>
		<li>MEJCs genliği 0,2 - aralıkta olduğunu emin olun 0,7 na 
		Not: Daha küçük EJC'ler kayıt elektrot kusurları vardır veya bu doğru yerleştirilmiyor gösteriyor.</li>
	</ol></li></ol> <img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56493/56493fig3.jpg"> şekil 3. Görsel olarak sinaptik boutons. (A) A aydınlık alan görüntü, bir hemi-kesim 10 x büyütme (A.1) ve kas 6 ve 7 gösterilen genişlemiş kutulu alanının altında (A.2, ok işaretleri kayıt elektrot). Ölçek çubuğu = 50 µm. (B) sinaptik boutons genetik olarak kodlanmış nöronal marker (CD8-GFP) ile bir Drosophila satırda görüntülenir epi-floresan görüntüleme (B.1) veya DIC optik (B.2) kullanarak. Görüntüleri ile hedef ve filtre küp GFP görüntüleme için x 60 alınır (Tablo malzemeleri görmek). Synaptic boutons oklarla işaretlenmiş ve floresan ve DIC görüntülerin bir bindirme B.3 içinde gösterilir. Ölçek çubuğu 10 µm. = <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56493/56493fig3large.jpg" target="_blank"> Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<ol start="2"> <li>stimülasyon <ol><li>görsel bir denetim altında bir micromanipulator kullanarak yer stimülasyon elektrot karın kesimleri 2-4 innerve axon yakınındaki.</li>
		<li>Şırınga piston çekerek negatif basınç uygula bağlı elektrot sahibine böylece akson elektrot ( Şekil 2) içinde çekti.</li>
		<li>Uyarıcı açın. Vana yalıtım Üniteyi açar (bir sıfır akım ayarlamak ve sonra yavaşça, EJC'ler görününceye kadar (veya eşik değerine ulaşılana kadar) artırmak için Malzemeler tablo bkz:).</li>
		<li>Bir suprathreshold rejim stimülasyon geçerli stimülasyon ile artmış yaklaşık iki kez, EJC'ler gözlenmesi için eşik göre gerçekleştir. 
		Not: deneyim, böyle stimülasyon yoğunluğu aksiyon potansiyeli başarısızlıklar ve aksiyon potansiyeli ateş önlemek için en iyi yöntemdir. Örneğin, EJC'ler 0.2 stimülasyon mevcut görünür anne, 0,4 mevcut kullanmak deneme boyunca anne.</li>
	</ol></li> <li>Direnç mühür <ol><li>amplifikatör için elektrot direnç anahtarı çevirerek kayıt macropatch elektrot mühür dayanıklılığını ölçmek " test mühür " pozisyon. GΩ mühür direnç değeri içinde görüntülenir gözlemlemek " geçerli " penceresi.</li>
		<li>0.5 - 2 M aralığında dirençtir mühür emin olun Ω. Bu sınırların dışında değerler gösterir elektrot düzgün cilalı veya uygun şekilde konumlandırılmış.</li>
		<li>Mühür direnç kaydı boyunca izlemek, deney boyunca sabit kalır emin olmak istedim.</li>
	</ol></li></ol> 4. Analiz <ol><li>analiz kayıtları istihdam özelleştirilmiş yazılım analiz için (bkz. Tablo reçetesi). 
	Not: Bizim laboratuvar içi yazılım Quantan 31 EJC'ler ve focally kayıt mEJCs ( şekil 4) tespiti için özelleştirilmiş, kullanır. Bu yazılım bir Gauss dijital filtre içerir ve çok quantal olaylar ( şekil 4A) üst üste içinde quantal doruklarına algılama sağlar. Diğer yaklaşımlar 17 ' açıklanan.</li>
</ol> <img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56493/56493fig4.jpg"> şekil 4. Quantal analizi. , MEJCs (a) ve EJC'ler (B) Quantan yazılım tarafından. Olay alan yeşil işaretlenir ve tepeler tarafından kırmızı ok uçları işaretlenir. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56493/56493fig4large.jpg" target="_blank"> Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

<ol><li>Jan, L. Y., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Properties+of+the+larval+neuromuscular+junction+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Properties of the larval neuromuscular junction in Drosophila melanogaster.</a> J Physiol. 262 (1), 189-214 (1976).</li>
<li>Katz, B., Miledi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+temperature+on+the+synaptic+delay+at+the+neuromuscular+junction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">The effect of temperature on the synaptic delay at the neuromuscular junction.</a> J Physiol. 181 (3), 656-670 (1965).</li>
<li>Macleod, G. T., Gan, J., Bennett, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vesicle-associated+proteins+and+quantal+release+at+single+active+zones+of+amphibian+%28Bufo+marinus%29+motor-nerve+terminals%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Vesicle-associated proteins and quantal release at single active zones of amphibian (Bufo marinus) motor-nerve terminals.</a> J Neurophysiol. 82 (3), 1133-1146 (1999).</li>
<li>Macleod, G. T., Farnell, L., Gibson, W. G., Bennett, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantal+secretion+and+nerve-terminal+cable+properties+at+neuromuscular+junctions+in+an+amphibian+%28Bufo+marinus%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Quantal secretion and nerve-terminal cable properties at neuromuscular junctions in an amphibian (Bufo marinus).</a> J Neurophysiol. 81 (3), 1135-1146 (1999).</li>
<li>Zefirov, A., Benish, T., Fatkullin, N., Cheranov, S., Khazipov, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Localization+of+active+zones%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Localization of active zones.</a> Nature. 376 (6539), 393-394 (1995).</li>
<li>Macleod, G. T., Lavidis, N. A., Bennett, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+dependence+of+quantal+secretion+from+visualized+sympathetic+nerve+varicosities+on+the+mouse+vas+deferens%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Calcium dependence of quantal secretion from visualized sympathetic nerve varicosities on the mouse vas deferens.</a> J Physiol. 480 (Pt 1), 61-70 (1994).</li>
<li>Samigullin, D., Bill, C. A., Coleman, W. L., Bykhovskaia, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+transmitter+release+by+synapsin+II+in+mouse+motor+terminals%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Regulation of transmitter release by synapsin II in mouse motor terminals.</a> J Physiol. 561 (Pt 1), 149-158 (2004).</li>
<li>Coleman, W. L., Bykhovskaia, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rab3a-mediated+vesicle+recruitment+regulates+short-term+plasticity+at+the+mouse+diaphragm+synapse%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Rab3a-mediated vesicle recruitment regulates short-term plasticity at the mouse diaphragm synapse.</a> Mol Cell Neurosci. 41 (2), 286-296 (2009).</li>
<li>Atwood, H. L., Parnas, H., Parnas, I., Wojtowicz, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantal+currents+evoked+by+graded+intracellular+depolarization+of+crayfish+motor+axon+terminals%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Quantal currents evoked by graded intracellular depolarization of crayfish motor axon terminals.</a> J Physiol. 383, 587-599 (1987).</li>
<li>Parnas, H., Dudel, J., Parnas, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurotransmitter+release+and+its+facilitation+in+crayfish.+I.+Saturation+kinetics+of+release%2C+and+of+entry+and+removal+of+calcium%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Arch%22%5BJournal%5D)">Neurotransmitter release and its facilitation in crayfish. I. Saturation kinetics of release, and of entry and removal of calcium.</a> Pflugers Arch. 393 (1), 1-14 (1982).</li>
<li>Wojtowicz, J. M., Marin, L., Atwood, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity-induced+changes+in+synaptic+release+sites+at+the+crayfish+neuromuscular+junction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Activity-induced changes in synaptic release sites at the crayfish neuromuscular junction.</a> J Neurosci. 14 (6), 3688-3703 (1994).</li>
<li>Zucker, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crayfish+neuromuscular+facilitation+activated+by+constant+presynaptic+action+potentials+and+depolarizing+pulses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Crayfish neuromuscular facilitation activated by constant presynaptic action potentials and depolarizing pulses.</a> J Physiol. 241 (1), 69-89 (1974).</li>
<li>Zucker, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+the+statistics+of+transmitter+release+during+facilitation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Changes in the statistics of transmitter release during facilitation.</a> J Physiol. 229 (3), 787-810 (1973).</li>
<li>Worden, M. K., Bykhovskaia, M., Hackett, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Facilitation+at+the+lobster+neuromuscular+junction%3A+a+stimulus-dependent+mobilization+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Facilitation at the lobster neuromuscular junction: a stimulus-dependent mobilization model.</a> J Neurophysiol. 78 (1), 417-428 (1997).</li>
<li>Bykhovskaia, M., Hackett, J. T., Worden, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Asynchrony+of+quantal+events+in+evoked+multiquantal+responses+indicates+presynaptic+quantal+interaction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Asynchrony of quantal events in evoked multiquantal responses indicates presynaptic quantal interaction.</a> J Neurophysiol. 81 (5), 2234-2242 (1999).</li>
<li>Bykhovskaia, M., Polagaeva, E., Hackett, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechnisms+underlying+different+facilitation+forms+at+the+lobster+neuromuscular+synapse%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Mechnisms underlying different facilitation forms at the lobster neuromuscular synapse.</a> Brain Res. 1019 (1-2), 10-21 (2004).</li>
<li>Cooper, R. L., Stewart, B. A., Wojtowicz, J. M., Wang, S., Atwood, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantal+measurement+and+analysis+methods+compared+for+crayfish+and+Drosophila+neuromuscular+junctions%2C+and+rat+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Quantal measurement and analysis methods compared for crayfish and Drosophila neuromuscular junctions, and rat hippocampus.</a> J Neurosci Methods. 61 (1-2), 67-78 (1995).</li>
<li>Stewart, B. A., Atwood, H. L., Renger, J. J., Wang, J., Wu, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+stability+of+Drosophila+larval+neuromuscular+preparations+in+haemolymph-like+physiological+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Physiol+A%22%5BJournal%5D)">Improved stability of Drosophila larval neuromuscular preparations in haemolymph-like physiological solutions.</a> J Comp Physiol A. 175 (2), 179-191 (1994).</li>
<li>Pawlu, C., DiAntonio, A., Heckmann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postfusional+control+of+quantal+current+shape%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Postfusional control of quantal current shape.</a> Neuron. 42 (4), 607-618 (2004).</li>
<li>Akbergenova, Y., Bykhovskaia, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synapsin+maintains+the+reserve+vesicle+pool+and+spatial+segregation+of+the+recycling+pool+in+Drosophila+presynaptic+boutons%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Synapsin maintains the reserve vesicle pool and spatial segregation of the recycling pool in Drosophila presynaptic boutons.</a> Brain Res. 1178, 52-64 (2007).</li>
<li>Akbergenova, Y., Bykhovskaia, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+the+endosomal+endocytic+pathway+increases+quantal+size%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Enhancement of the endosomal endocytic pathway increases quantal size.</a> Mol Cell Neurosci. 40 (2), 199-206 (2009).</li>
<li>Vasin, A., Volfson, D., Littleton, J. T., Bykhovskaia, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+the+Complexin+Accessory+Helix+with+Synaptobrevin+Regulates+Spontaneous+Fusion%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Interaction of the Complexin Accessory Helix with Synaptobrevin Regulates Spontaneous Fusion.</a> Biophys J. 111 (9), 1954-1964 (2016).</li>
<li>Wong, K., Karunanithi, S., Atwood, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantal+unit+populations+at+the+Drosophila+larval+neuromuscular+junction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Quantal unit populations at the Drosophila larval neuromuscular junction.</a> J Neurophysiol. 82 (3), 1497-1511 (1999).</li>
<li>Dudel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+reduced+calcium+on+quantal+unit+current+and+release+at+the+crayfish+neuromuscular+junction%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Arch%22%5BJournal%5D)">The effect of reduced calcium on quantal unit current and release at the crayfish neuromuscular junction.</a> Pflugers Arch. 391 (1), 35-40 (1981).</li>
<li>Dudel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+Ca2%2B+inflow+to+quantal%2C+phasic+transmitter+release+from+nerve+terminals+of+frog+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Arch%22%5BJournal%5D)">Contribution of Ca2+ inflow to quantal, phasic transmitter release from nerve terminals of frog muscle.</a> Pflugers Arch. 422 (2), 129-142 (1992).</li>
<li>Marrero, H. G., Lemos, J. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMarrero%2C+HG+%22Loose-Patch-Clamp+method%22">Loose-Patch-Clamp method</a>. , 2 ed, Humana Press. (2007).</li>
<li>Wu, W. H., Cooper, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiological+recordings+of+high+and+low+output+NMJs+on+the+crayfish+leg+extensor+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Physiological recordings of high and low output NMJs on the crayfish leg extensor muscle.</a> J Vis Exp. (45), (2010).</li>
<li>Verstreken, P., Ohyama, T., Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FM+1-43+labeling+of+synaptic+vesicle+pools+at+the+Drosophila+neuromuscular+junction%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">FM 1-43 labeling of synaptic vesicle pools at the Drosophila neuromuscular junction.</a> Methods Mol Biol. 440, 349-369 (2008).</li>
<li>Brent, J. R., Werner, K. M., McCabe, B. D. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19229190">Drosophila larval NMJ dissection.</a> J Vis Exp. (24), (2009).</li>
<li>Imlach, W., McCabe, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+methods+for+recording+synaptic+potentials+from+the+NMJ+of+Drosophila+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological methods for recording synaptic potentials from the NMJ of Drosophila larvae.</a> J Vis Exp. (24), (2009).</li>
<li>Bykhovskaia, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Making+quantal+analysis+more+convenient%2C+fast%2C+and+accurate%3A+user-friendly+software+QUANTAN%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Making quantal analysis more convenient, fast, and accurate: user-friendly software QUANTAN.</a> J Neurosci Methods. 168 (2), 500-513 (2008).</li>
<li>Huntwork, S., Littleton, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+complexin+fusion+clamp+regulates+spontaneous+neurotransmitter+release+and+synaptic+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A complexin fusion clamp regulates spontaneous neurotransmitter release and synaptic growth.</a> Nat Neurosci. 10 (10), 1235-1237 (2007).</li>
<li>Zhong, Y., Wu, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+synaptic+plasticity+in+Drosophila+memory+mutants+with+a+defective+cyclic+AMP+cascade%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Altered synaptic plasticity in Drosophila memory mutants with a defective cyclic AMP cascade.</a> Science. 251 (4990), 198-201 (1991).</li>
<li>Delgado, R., Maureira, C., Oliva, C., Kidokoro, Y., Labarca, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Size+of+vesicle+pools%2C+rates+of+mobilization%2C+and+recycling+at+neuromuscular+synapses+of+a+Drosophila+mutant%2C+shibire%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Size of vesicle pools, rates of mobilization, and recycling at neuromuscular synapses of a Drosophila mutant, shibire.</a> Neuron. 28 (3), 941-953 (2000).</li>
<li>Melom, J. E., Akbergenova, Y., Gavornik, J. P., Littleton, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+and+evoked+release+are+independently+regulated+at+individual+active+zones%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Spontaneous and evoked release are independently regulated at individual active zones.</a> J Neurosci. 33 (44), 17253-17263 (2013).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Drosophila sinaptik iletimi çalışmaya bir avantajlı model organizma temsil eder. Sinaptik potansiyelleri, kayıtları iki elektrot gerilimi kelepçe33,34ve Fokal macropatch ile sinaptik akıntılarının hücre içi kayıtları da dahil olmak üzere larva NMJ, birkaç kayıt yapılandırma kullanılmıştır Burada açıklanan sinaptik akıntılarının kayıtları. İkinci tekniği görüntülenmeyecektir boutons kesin miktar sinaptik iletimi sağlar.
Açıklan...

Drosophila sinaptik iletimi denetleme moleküler mekanizmaları incelemek için mükemmel model bir sistemdir. Drosophila nöromüsküler sistemde glutamatergic ve bu nedenle Drosophila nöromüsküler kavşak (NMJ) glutamatergic yayın korunmuş özelliklerini incelemek için kullanılabilir. Jan Jan'ın çalışma ve1beri üçüncü INSTAR larva geniş eksitatör kavşak potansiyeller (EJPs) veya akımları (EJC'ler) izleyerek uyarılmış ve spontan sinaptik iletimi çalışma için kullanılmıştır. EJPs yaygın olarak intracellularly bir keskin cam mikro elektrot ile kaydedilir ve onlar sinapslarda belirli kas lif yapım tüm boutons de dahil olmak üzere tüm NMJ etkinliğini yansıtır.
Buna ek olarak, sınırlı sayıda sürüm site etkinliğini focally nöronal terminalleri veya sinaptik varicosities yakınındaki bir micropipette ipucu konumlandırma tarafından kaydedilir. Bu teknik aslında Katz ve Miledi2tarafından istihdam edildi ve başarıyla kurbağa3,4,5, fare6 dahil olmak üzere birkaç NMJ hazırlıklar istihdam Fokal hücre dışı kayıtları , 7 , 8, kabuklu9,10,11,12,13,14,15,16ve Drosophila17,18,19,20,21,22,23. Bu yaklaşım daha fazla elektrotlar24,25recoding macropatch en iyi duruma getirilmiş Dudel tarafından geliştirilmiştir. Dudel'ın uygulamasında bu teknik yakından gevşek-yama-kelepçe yöntemi26eşleştirdi.
Drosophila larva NMJ sinaptik boutons açıkça tanımladığı ve genetik olarak kodlanmış nöronal floresan Etiketler ( Tablo malzemelerigörmek) transgenik çizgilerle kolayca kullanılabilir. Bu avantajları bize EJC'ler ve seçili sinaptik bouton20,21,22mEJCs kaydetmek etkin. Burada, bu teknik ayrıntılı olarak açıklanmaktadır.

<table><tbody><tr><td>Sutter P-97</td><td>Sutter aleti</td><td>P-97</td><td>Mikroelektrot çektirme</td></tr><tr><td>Narishige MF-830</td><td>Narishige</td><td>MF-830</td><td>Microforge</td></tr><tr><td>WPI MF200</td><td>WPI</td><td>MF200</td><td>Microforge</td></tr><tr><td>Cam kılcal damarlar</td><td>WPI</td><td>B150-86-10</td><td>Cam kılcal damarlar</td></tr><tr><td>Microtorch 1WG61</td><td>Grainer</td><td>1WG61</td><td>Microtorch</td></tr><tr><td>Sylgard 184 Silikon Elastomer Kiti</td><td>Dow Corning</td><td>SYLGARD 184</td><td>Diseksiyon plakalarının hazırlanması için silikon</td></tr><tr><td>Diseksiyon pimleri</td><td>Amazon</td><td>B00J5PMPJA</td><td>Larva konumlandırma pimleri için pimler</td></tr><tr><td>Cımbız</td><td>WPIINC</td><td>500342</td><td>Pimleri yerleştirmek, bağırsakları ve trakeaları çıkarmak için cımbız.</td></tr><tr><td>Makas</td><td>WPIINC</td><td>501778</td><td>Larva ve sinirlerin kütiküllerini kesmek için makas.</td></tr><tr><td>Olympus BX61WI</td><td>Olympus</td><td>BX61WI</td><td>Dik mikroskop</td></tr><tr><td>Olympus Lumplan FL N 60x</td><td>Olympus</td><td>UPLFLN 60X</td><td>Mikroskop objektifi 60X</td></tr><tr><td>Olympus UPlan FL N 10x</td><td>Olympus</td><td>Uplanfl N 10X</td><td>Mikroskop objektifi 10X</td></tr><tr><td>Narishige Mikromanipülatör</td><td>Narishige</td><td>MHW-3</td><td>Üç eksenli Su Hidrolik Mikromanipülatörü</td></tr><tr><td>npi Electronic GmbH ELC-03XS</td><td>npi Electronic GmbH</td><td>ELC-03XS</td><td>Elektrofizyolojik amplifikatör</td></tr><tr><td>A.M.P.I Master 8</td><td>A.M.P.I.</td><td>Master 8</td><td>Elektrik stimülatörü</td></tr><tr><td>A.M.P.I Iso-Flex</td><td>A.M.P.I.</td><td>Iso-Flex</td><td>Uyaran izolatörü</td></tr><tr><td>TMC titreşim önleyici tablo</td><td>TMC</td><td>63-9090</td><td>Titreşim önleyici masa</td></tr><tr><td>TMC Faraday kafesi</td><td>TMC</td><td>81-333-90</td><td>Faraday kafesi</td></tr><tr><td>Digidata 1322A</td><td>Axon Instruments</td><td>Digidata 1322A</td><td>Digidata</td></tr><tr><td>Bilgisayar</td><td>Dell</td><td>Dell Dimension 5150</td><td>Win XP OS Elektrot</td></tr><tr><td>tutuculu</td><td>bilgisayar</td><td>MEH3SW</td><td>Elektrot tutucu</td></tr><tr><td>Optik filtre</td><td>Omega optik</td><td>XF 115-2</td><td>Yeşil Floresan Protein (GFP) tespiti için filtre küpü</td></tr><tr><td>pCLAMP 8</td><td>Axon Instruments</td><td>8.0.0.81</td><td>Sinyal kaydı için yazılım</td></tr><tr><td>Quantan</td><td>Şirket içi</td> <td>yazılım-Sinyal</td> <td>işleme yazılımı</td></tr><tr><td>Canton-S (Wildtype)</td><td>Bloomington Stock Center</td><td>64349</td><td>Kontrol sinek hattı</td></tr><tr><td>cpx SH1</td><td>J.T. Littleton-Complexin'in Cömert Hediyesi</td><td></td> <td>Artan spontan ekzositoz ile nakavt sinek hattı</td></tr><tr><td>CD8-GFP</td><td>Bloomington Stok Merkezi</td><td>5137</td><td>Nöronal floresan (GFP) Etiketli sinek hattı</td></tr></tbody></table>

drosophila larva nöromüsküler kavşak sinaptik akımlardan fokal macropatch kayıtları

Focal Macropatch Recordings of Synaptic Currents from the Drosophila Larval Neuromuscular Junction

Drosophila nöromüsküler kavşak (NMJ) glutamatergic sinaptik iletimi çalışmaya bir mükemmel model sistemidir. Biz odak macropatch kayıtları görüntülenmeyecektir boutons Drosophila larva NMJ, sinaptik akımlardan tekniğini tanımlamak. Bu teknik MİKROPİPETLER yanı sıra bileşik yüksek büyütme, uzun mesafe su daldırma amacı, farklı girişim kontrast (DIC) optik ve bir floresan mikroskop kayıt özelleştirilmiş imalat gerektirir Eki. Kayıt elektrot DIC optik, epi-floresan veya her ikisi ile görüntülenir seçilen bir sinaptik bouton üst kısmında konumlandırılmış. Bu teknik avantajı bu sınırlı sayıda site açıklaması sinaptik etkinliğini izlemeye olanak sağlamasıdır. Kayıt elektrot birkaç mikron çapında ve elektrot RIM dışında konumlandırılmış yayın siteleri kayıtlı akımları önemli ölçüde etkilemez. Kaydedilen sinaptik akımlar hızlı Kinetik var ve kolayca çözülebilir. Bu avantajlar özellikle mutasyona uğramış sinek hatları ile gelişmiş kendiliğinden ya da zaman uyumsuz sinirsel aktivite çalışmaları için önemlidir.

Odak macropatch kayıtları seçili sinaptik boutons (şekil 5) üzerinden izleme sinirsel aktivite etkinleştirin. Elektrot bir sinaptik bouton üst kısmında (şekil 5A, 1 sitesi) getirildiğinde kaydedilen mEJCs (şekil 5C, 1 sitesi) gürültü seviyesini önemli ölçüde aşan bir genlikleri var ve aşamaları (alt milisaniyelik mesafeden) yükselen keskin. Ne zaman kayıt elektrot uzak sinaptik bouton tarafından birk...

Sinaptik akımları, Drosophila Üçüncü INSTAR larva nöromüsküler kavşak görüntülenmeyecektir sinaptik boutons üzerinden focally kaydedilebilir. Bu teknik, tek bir sinaptik bouton etkinliğini izleme sağlar.

Drosophila larva nöromüsküler kavşak sinaptik akımlardan Fokal Macropatch kayıtları

Drosophila neuromuscular junction (NMJ) is an excellent model system to study glutamatergic synaptic transmission. We describe the technique of focal ...

Bu tekniğin genel amacı, drosophila larva nöromüsküler kavşağındaki görselleştirilmiş sinaptik butonların sinaptik aktivitesini izlemektir. Genetik manipülasyonlara kolayca değiştirilebilen mükemmel bir model sistemi. Bu teknik, biliminizdeki temel soruları ele alabilir.Sinaptik proteinlerin mutasyonlarının sinaptik iletimi nasıl düzenlediği gibi. Bu tekniğin temel avantajı, sınırlı sayıda serbest bırakma bölgesinin aktivitesinin, hızlı kinetik akımlarının izlenebilmesi ve kaydedilebilmesi ve kolayca çözülebilmesidir. Deneye başlamak için:mikroelektrot çekicisini hazırlayın.Çekilen elektrotun iç çapının yedi ila on mikrometre aralığında olduğundan emin olmak için 35X büyütmede bir mikroskop kullanın. Toz birikmesini önlemek için kılcal damarları sıkıca kapalı kaplarda saklayın. Ardından, bir mikro dövme kullanarak cilalı kılcal damarları ateşleyin.Cilalı elektrotun son iç çapının beş mikrometre olduğundan emin olun. Ardından, bükmeye geçin. Elektrodu manipülatöre sabitleyin ve ucu filamanın üzerine dokunmayacak şekilde yerleştirin.Isı değerini maksimumun %60-70'ine ayarlayın ve filamenti ısıtmak için mikro dövmenin pedalına bir ila iki saniye basın. Elektrotun ucunu nazikçe aşağı çekmek için L şeklinde bir iğne kullanın ve bükümü yaklaşık 90 derece yapın. Elektrodu elinizle torcun alevi üzerinde tutun ve ikinci bükümü ilk virajdan yedi ila on milimetre uzakta ve yaklaşık 120 derecelik bir açıyla yapın.Hemolenf benzeri veya HL3 çözeltisi hazırlayın. Çözeltiyi refigeratörde tutun ve her hafta taze hale getirin. Stimülasyon pipetlerini, cam pipetleri bükmeden kayıt yapıyormuş gibi hazırlayın.Ardından, bir şırıngaya bağlı bir mikroelektrot tutucusuna bir stimülasyon pipeti yerleştirin. Silikon kauçuk epoksi ile kaplanmış küçük Petri kaplarından üretilen diseksiyon plakaları. Daha sonra, forseps kullanarak bir şişeden dolaşan üçüncü bir instar larvası seçin.Larvaları, ilk pimi arkaya ve başka bir pimi ağız kancalarına yakın bir yere yerleştirerek sabitleyin. HL3 çözeltisi ekleyin. Larvaların sırt tarafında, yaylı makas kullanarak üst pimden alt pime doğru bir kesim yapın.Larvaların sol ve sağ taraflarına iki ek pim yerleştirerek larva filetosunu sabitleyin. Forseps kullanarak bağırsakları ve trakeayı çıkarın. Yaylı makas kullanarak ventral sinir kordonunun hemen dışındaki sinirleri kesin.Preparatla birlikte petri kabını mikroskop tablasına yerleştirin. Referans elektrodunu banyoya yerleştirin. Kayıt elektrodunu HL3 solüsyonu ile doldurun.10X objektifinin altında, elektrodu banyoya daldırın ve mikro manipülatörü kullanarak iki, üç veya dört karın kaslarının altı ve yedisinin üzerine yerleştirin. Ardından, hedefi 60X'e getirin ve epi-floresan veya DIC optiklerini kullanarak ilgilenilen alana odaklanın. Elektrotun ucunu sinaptik butonun üzerine yerleştirin, ardından elektrodu kasın üzerine çok nazikçe bastırın, çünkü aşırı basınç NMJ'ye zarar verebilir veya spontan sinaptik aktivitede bir artışa neden olabilir.Ardından, amplifikatörü, AD kartını ve bilgisayarı açın. Ardından, amplifikatör üzerinde voltaj kelepçesi modunu seçin. Alım yazılımını başlatın ve boşluksuz modu seçin ve bilgisayar ekranında MEJC'lerin görünümünü gözlemleyin.MEJC'lerin genliğinin 0,2 ila 0,7 nanoamper aralığında olduğundan emin olun. Görsel bir kontrol altında bir mikro manipülatör kullanarak, stimülasyon elektrodunu aksonun yakınına yerleştirin ve abdominal segmentleri iki ila dört arasında innerve edin. Elektrot tutucusuna bağlı şırınganın pistonunu çekerek negatif basınç uygulayın, böylece akson elektrotun içine çekilir.Ardından, stimülatörü açın. Sıfır akımı ayarlamak için izolasyon ünitesindeki düğmeyi çevirin ve ardından EJC'ler görünene veya eşiğe ulaşılana kadar yavaşça artırın. Stimülasyonu bir süper eşik rejiminde gerçekleştirin.Stimülasyon akımı ile EJC'lerin gözlemlenmesi için eşik değere kıyasla yaklaşık iki kat artar. Test konumunu sızdırmaz hale getirmek için amplifikatörün elektrot direnç anahtarını çevirerek kayıt yapan makro yama elektrodunun sızdırmazlık direncini ölçün. Geçerli pencerede görüntülenecek olan giga ohm cinsinden sızdırmazlık direncinin değerini gözlemleyin.Odak makro yama kayıtları, seçilen sinaptik boutonlardan sinaptik aktivitenin izlenmesini sağlar. Elektrot bir sinaptik butonun üzerine yerleştirildiğinde, kaydedilen MEJC'ler, gürültü seviyesini önemli ölçüde aşan genliklere ve milisaniyenin altında bir aralıkta keskin yükselen fazlara sahiptir. Kayıt elektrodu sinaptik bouton'dan birkaç mikron uzağa hareket ettirildiğinde, kaydedici MEJC'lerin genlikleri neredeyse gürültü seviyesine düşer.Kaydedilen EJC'ler gürültüden zar zor ayırt edilebilir ve uzun süreli yükselme fazlarına sahiptirler. Odak kayıtları, karmaşık ve gnome mutantındaki MEJC'lerin doğru bir şekilde tespit edilmesini sağlar. Bu mutanttan elde edilen hücreler arası kayıtlar, örtüşen ve güvenilir bir şekilde tespit edilemeyen olayları serbest bırakır.Elektro çipin açılarının ayarlanması, elektrotun konumlandırılması için kritik öneme sahiptir. Bu prosedürü takiben, bireysel aktif bölgelerin aktivitesinin entegrasyonu gibi ek soruları yanıtlamak için bireysel serbest bırakma olaylarının görüntülemesini kontrol etmek gibi diğer yöntemler gerçekleştirilebilir.

focal-macropatch-recordings-synaptic-currents-from-drosophila-larval

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Burada Drosophila larva nöromüsküler kavşakta sinaptik iletim ölçmek için elektrofizyolojik yöntemler açıklanmaktadır. Uyarılmış serbest motor nöron aksonları uyararak yapay olarak başlatılan ve iletim yoluyla NMJ kas uyarılmış postsinaptik tepki ölçülebilir.

Drosophila Larva NMJ Synaptic Potansiyeller kayıt için Elektrofizyolojik Yöntemler

Erişilebilir sinaps elektrofizyoloji Uygulama sinaptik mutantlar analiz yararlı sinaptik aktivite ölçülebilir bir ölçü, sağlar. Bu makale, nöromüsküler kavşaklar (NMJ) ortaya çıkarmak için kullanılan bir diseksiyon yöntemi...

C. Elegans Nöromüsküler Kavşağı Diseksiyon ve kayıt

Elektrofizyolojik Kayıt Drosophila Embriyo

Larvaların zebrafish spinal motor nöron ve hedef iskelet kası aynı anda yama kelepçe kayıt izin vermek için ilk omurgalı model sistemi temsil eder. Bu video segmental CaP motor nöron ve hedef kas hücrelerinin yanı sıra, her bir hücre tipi kayıt için metodolojiler tanımlamak için kullanılır mikroskobik yöntemler göstermektedir.

Motor-nöron Paired Patch Kelepçe Kayıtlar ve Zebra balığı Hedef İskelet Kası

Aktif Bölgeleri Diseksiyon ve Görüntüleme Drosophila Nöromüsküler Junction

In situ yama kelepçe kayıtları bozulmamış devresi nöronların elektrofizyolojik karakterizasyon için kullanılır. MSS küçük ve sağlam bir kılıf ile çevrili olduğundan Drosophila genetik model yama klemp ise zordur. Bu makale sonraki yama klemp kayıtları için kılıf ve temiz nöronlar kaldırmak için prosedürü açıklar.

Hazırlanması<em&gt; Drosophila</emIçin&gt; Orta Nöronlar<em&gt; In situ</em&gt; Patch Sıkma

Drosophila nöromüsküler kavşağı (NMJ), sinapsların morfolojisini ve işlevini incelemek için bir model olarak kullanılır. Bu video, araştırmacıların NMJ'yi karakterize etmek için ölçtüğü önemli özellikleri açıklamaktadır. Örnek protokol, nicelemeyi otomatik olarak gerçekleştirebilen bir yazılımı gösterir.

Drosophila Nöromüsküler Kavşak (NMJ) Miktar Tayini: Sinaptik Morfoloji ve Fonksiyonu Değerlendirmek İçin Bir Yöntem

Bu video, Drosophila larvasının nöromüsküler kavşağındaki sinaptik bir bouton'dan sinaptik akımları kaydetme tekniğini göstermektedir. Bu teknik, gelişmiş spontan veya asenkron sinaptik aktiviteye sahip mutant sinek hatlarının incelenmesi için önemli olan tek bir sinaptik bouton aktivitesinin izlenmesini sağlar.

Drosophila Larva Nöromüsküler Kavşakta Sinaptik Akımların Kaydedilmesi

Zebra balığı embriyolarının Mauthner nöronlar ve diğer reticulospinal hücrelerden yama kelepçe kayıt yoluyla elektriksel aktivitesini kaydetmek ve izlemek için sağlam bir beyin-omurilik hazırlık geliştirdik. Böylece, gelişmekte olan embriyo anahtar nöronlardan eksitatör ve inhibitör sinaptik akımları, voltaj-kapılı kanal aktivitesini ve aksiyon potansiyelleri kayıt edebiliyoruz.

Embriyonik Zebra balığı Mauthner Hücreler Patch Kelepçe Kayıtlar

Presinaptik salım yüz zarında Ca2+ akımlarının kaydedilmesi, Ca2+ girişinin ve nörotransmitter salınımının kesin olarak anlaşılmasının anahtarıdır. Fonksiyonel izole retikülospinal aksonlar veren lamprey omuriliğinin akut bir ayrışmasını sunuyoruz ve bu da bireysel presinaptik terminallerin serbest bırakma yüz zarından doğrudan kayda izin veriyor.

Lamprey Reticulospinal Aksonlar Akut Ayrılma Bireysel Fonksiyonel Presinaptik Terminalleri Yayın Yüz Membranından Kayıt Enable

Zebra balığı larva nöromüsküler kavşağı, sinaptik fizyolojiyi incelemek için çekici bir modeldir. Elektrofizyoloji ve optik görüntüleme dahil olmak üzere birçok deneysel tekniğe uygundur. Burada, dik bir epifloresan mikroskobu altında pHluorin bazlı bir prob kullanarak sinaptik iletimi görüntülemek için bir protokol açıklıyoruz.

Diseke Larva Zebra Balığının Nöromüsküler Kavşağında Sinaptik Vezikül Geri Dönüşümünün Canlı Görüntülenmesi

Öğrenin, Drosophila larva nöromüsküler kavşaklarında fokal makropatch kayıtları ile görselleştirilmiş sinaptik butonlardan sinaptik aktiviteyi izleme yöntemini. Bu teknik, sinaptik protein mutasyonlarının iletim üzerindeki etkilerini araştırmak için kullanılır.

Drosophila larva nöromüsküler kavşak sinaptik akımlardan Fokal Macropatch kayıtları

Daha fazla video keşfet