Name: Farklı bölge ve lamina gelişmekte olan ve yetişkin beyninin ortaya çıkarmak için sinaptik çinko Histochemistry kullanımı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-10-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 50 s
Description: Öğrenin sinaptik çinko histokimyasını kullanarak gelişmekte olan ve yetişkin ferret beyinlerinde farklı bölgeleri ve katmanları ayırt etme yöntemini. Bu teknik, nöroanatomi araştırmalarında beyin katmanlarının güvenilir şekilde tanımlanmasını sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser araştırma kaynakları (2G12RR03060-26A1); hibe Milli Merkezi tarafından desteklenmiştir Azınlık sağlık ve sağlık eşitsizliklerin (8G12MD007603-27) ulusal sağlık Enstitüleri üzerinden Ulusal Enstitüsü; Profesyonel personel Kongre-City University of New York (PSC-CUNY); ve öğretim araştırma hibe (FRG II) Amerikan Üniversitesi Şarja. Biz Vidyasagar Sriramoju bize bu yöntemlere tanıtmak için teşekkür ederim.

<ol><li>Nakashima, A., Dyck, R. H. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19026685">Zinc and cortical plasticity.</a> Brain Res. Rev. 59, 347-373 (2009).</li>
<li>Frederickson, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurobiology+of+zinc+and+zinc-containing+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Rev+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Neurobiology of zinc and zinc-containing neurons.</a> Int Rev Neurobiol. 31, 145-238 (1989).</li>
<li>Beaulieu, C., Dyck, R., Cynader, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enrichment+of+glutamate+in+zinc-containing+terminals+of+the+cat+visual+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22NeuroReport%22%5BJournal%5D)">Enrichment of glutamate in zinc-containing terminals of the cat visual cortex.</a> NeuroReport. 3 (10), 861-864 (1992).</li>
<li>Martinez-Guijarro, F. J., Soriano, E., Del Rio, J. A., Lopez-Garcia, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zinc-positive+boutons+in+the+cerebral+cortex+of+lizards+show+glutamate+immunoreactivity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurocytol%22%5BJournal%5D)">Zinc-positive boutons in the cerebral cortex of lizards show glutamate immunoreactivity.</a> J Neurocytol. 20 (10), 834-843 (1991).</li>
<li>Dyck, R., Beaulieu, C., Cynader, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histochemical+localization+of+synaptic+zinc+in+the+developing+cat+visual+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Histochemical localization of synaptic zinc in the developing cat visual cortex.</a> J Comp Neurol. 329 (1), 53-67 (1993).</li>
<li>Garrett, B., Geneser, F. A., Slomianka, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+of+acetylcholinesterase+and+zinc+in+the+visual+cortex+of+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Anat+Embryol.+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">Distribution of acetylcholinesterase and zinc in the visual cortex of the mouse.</a> Anat Embryol. (Berl). 184 (5), 461-468 (1991).</li>
<li>Garrett, B., Osterballe, R., Slomianka, L., Geneser, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytoarchitecture+and+staining+for+acetylcholinesterase+and+zinc+in+the+visual+cortex+of+the+Parma+wallaby+%28Macropus+parma%29%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Behav+Evol%22%5BJournal%5D)">Cytoarchitecture and staining for acetylcholinesterase and zinc in the visual cortex of the Parma wallaby (Macropus parma).</a> Brain Behav Evol. 43 (3), 162-172 (1994).</li>
<li>Dyck, R., Cynader, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+interdigitated+columnar+mosaic+of+cytochrome+oxidase%2C+zinc%2C+and+neurotransmitter-related+molecules+in+cat+and+monkey+visual+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">An interdigitated columnar mosaic of cytochrome oxidase, zinc, and neurotransmitter-related molecules in cat and monkey visual cortex.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. (90), 9066-9069 (1993).</li>
<li>Land, P. W., Akhtar, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experience-dependent+alteration+of+synaptic+zinc+in+rat+somatosensory+barrel+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Somatosens+Mot+Res%22%5BJournal%5D)">Experience-dependent alteration of synaptic zinc in rat somatosensory barrel cortex.</a> Somatosens Mot Res. 16 (2), 139-150 (1999).</li>
<li>Danscher, G. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/BF00543951">Exogenous selenium in the brain: a histochemical technique for light and electron microscopic localization of catalytic selenium bonds.</a> Histochemistry. 76, 281-293 (1982).</li>
<li>Danscher, G., Howell, G., Perez-Clausell, J., Hertel, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dithizone%2C+Timm%27s+sulphide+silver+and+the+selenium+methods+demonstrate+a+chelatable+pool+of+zinc+in+CNS%3A+a+proton+activation+%28PIXE%29+analysis+of+carbon+tetrachloride+extracts+from+rat+brains+and+spinal+cords+intravitall+treated+with+dithizone%5BTitle%5D)+AND+%22Histochemistry%22%5BJournal%5D)">The dithizone, Timm's sulphide silver and the selenium methods demonstrate a chelatable pool of zinc in CNS: a proton activation (PIXE) analysis of carbon tetrachloride extracts from rat brains and spinal cords intravitall treated with dithizone.</a> Histochemistry. 83, 419-422 (1985).</li>
<li>Gallyas, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Silver+staining+of+myelin+by+means+of+physical+development%5BTitle%5D)+AND+%22Neurol+Res%22%5BJournal%5D)">Silver staining of myelin by means of physical development.</a> Neurol Res. 1 (2), 203-209 (1979).</li>
<li>Wong-Riley, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+the+visual+system+of+monocularly+sutured+or+enucleated+cats+demonstrable+with+cytochrome+oxidase+histochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Changes in the visual system of monocularly sutured or enucleated cats demonstrable with cytochrome oxidase histochemistry.</a> Brain Res. 171 (1), 11-28 (1979).</li>
<li>Miró-Bernié, N., Ichinohe, N., Perez-Clausell, J., Rockland, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zinc-rich+transient+vertical+modules+in+the+rat+retrosplenial+cortex+during+postnatal+development%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Zinc-rich transient vertical modules in the rat retrosplenial cortex during postnatal development.</a> J Neurosci. 138 (2), 523-535 (2006).</li>
<li>Ichinohe, N., Rockland, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+of+synaptic+zinc+in+the+macaque+monkey+amygdala%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Distribution of synaptic zinc in the macaque monkey amygdala.</a> J Comp Neurol. 489 (2), 135-147 (2005).</li>
<li>Innocenti, G. M., Manger, P. R., Masiello, I., Colin, I., Tettoni, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Architecture+and+callosal+connections+of+visual+areas+17%2C+18%2C+19+and+21+in+the+ferret+%28Mustela+putorius%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cereb+Cortex%22%5BJournal%5D)">Architecture and callosal connections of visual areas 17, 18, 19 and 21 in the ferret (Mustela putorius).</a> Cereb Cortex. 12 (4), 411-422 (2002).</li>
<li>Khalil, R., Levitt, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zinc+histochemistry+reveals+circuit+refinement+and+distinguishes+visual+areas+in+the+developing+ferret+cerebral+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Struct+Funct%22%5BJournal%5D)">Zinc histochemistry reveals circuit refinement and distinguishes visual areas in the developing ferret cerebral cortex.</a> Brain Struct Funct. 218, 1293-1306 (2013).</li>
<li>Manger, P. R., Masiello, I., Innocenti, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Areal+organization+of+the+posterior+parietal+cortex+of+the+ferret+%28Mustela+putorius%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cereb+Cortex%22%5BJournal%5D)">Areal organization of the posterior parietal cortex of the ferret (Mustela putorius).</a> Cereb Cortex. 12, 1280-1297 (2002).</li>
<li>Wong, P., Kaas, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Architectonic+subdivisions+of+neocortex+in+the+gray+squirrel+%28Sciurus+carolinensis.%29%5BTitle%5D)+AND+%22The+anatomical+record%22%5BJournal%5D)">Architectonic subdivisions of neocortex in the gray squirrel (Sciurus carolinensis.).</a> The anatomical record. 291, 1301-1333 (2008).</li>
<li>Land, P. W., Shamalla-Hannah, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experience-dependent+plasticity+of+zinc-containing+cortical+circuits+during+a+critical+period+of+postnatal+development%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Experience-dependent plasticity of zinc-containing cortical circuits during a critical period of postnatal development.</a> J Comp Neurol. 447 (1), 43-56 (2002).</li>
<li>Czupryn, A., Skangiel-Kramska, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distribution+of+synaptic+zinc+in+the+developing+mouse+somatosensory+barrel+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Distribution of synaptic zinc in the developing mouse somatosensory barrel cortex.</a> J Comp Neurol. 386, 652-660 (1997).</li>
<li>Timm, F. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/BF00665092">Zur Histochemie der Schwermetalle. Das Sulfid-Silber-Verfahren.</a> Dtsch Z ges gerichtl Med. 46, 706-711 (1958).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Çalışmada sayede sinaptik çinko yerelleştirme tespit olabilir ve beyinde görüntülendi Danscher (1982) yöntemi10, değiştirilmiş bir sürümü dayalı bir histochemical tekniği istihdam. Bu yöntem aslında hayvan (15 mg/kg) çinko şelatör sodyum selenit (Na2SeO3) ile enjekte edilerek çalışır. Enjeksiyon, selenit beyne yayılıyor ve çinko içeren nöronlar presynaptic veziküller için yerelleştirilmiş ücretsiz çinko bağlar. Çinko iyonları sinaptik veziküller Çökelti içindeki moleküller il...

Histolojik lekeleri architectonic şekil farklılıkları ortaya tarafından çeşitli türler kortikal alanlarda tanımlaması yardım geleneksel olarak kullanılmıştır. Onlar yetişkin beyninin benzer alan sınırları ortaya gibi gibi histochemical teknikleri kombine kullanımı Nisl madde, sitokrom oksidaz (CO) reaktivite veya miyelin verimli kanıtlayabilirim. Ancak, bu histochemical lekeler her zaman yeterince kortikal alanlarda ve immatür beyinde katmanlar arasında net sınırlar ortaya çıkarmak değil.
Merkezi sinir sistemi çinko DNA yapısı, çok sayıda düzenleyici fonksiyonları katılan ve varlığını sinaptik veziküller ile Nöromodülatör olarak davranan bir enzim kofaktör olarak hareket sabitleme dahil çeşitli kritik işlevlere sahiptir. 1. sinaptik çinko gibi protein bağlı çinko görüntülenmeyecektir2olamaz, ancak bu histolojik yöntemlerle görüntülenmeyecektir benzersizdir. Bu özellik sinaptik çinko desen farklı kortikal bölgelerde ortaya çıkarmak için istismar ve sinaptik çinko histochemistry çalışmalar bir dizi olarak kullanılmıştır. Bir alt glutamatergic nöronların serebral korteks içinde onların akson terminalleri3,4presynaptic veziküller içinde çinko içerir. Histochemical çalışmalar sinaptik çinko serebral korteks5,6,7heterojen bir dağıtım indirdik. Farklı bir alan ve laminer dağıtım farklı kortikal bölgelerde (örneğin, karşı somatosensor korteks görsel) veya katmanları histochemically reaktif çinko gibi görünüyor (örneğin, supragranular çinko düzeyleri ve Primer görsel korteks katmanların infragranular önemli ölçüde thalamocortical giriş katmanında IV nispeten düşük sinaptik çinko düzeyleri daha yüksek)5,8,9. Alansal ve laminer kimlik kolaylaştırır gibi korteks gözlenen sinaptik çinko boyama içinde heterojenite özellikle avantajlıdır.
Burada ayrıntılı bir açıklama Danscher'ın 1982 yöntemi10değiştirilmiş bir sürümü bir sinaptik çinko histochemical yordam mevcut. Bu yöntem intraperitoneally enjekte selenit (IP) hayvana şelat bir ajan olarak kullanır. Selenit glutamatergic sinapslar kümesini veziküller içinde beyinde bulunan ücretsiz çinko havuzlu tepki beyin gitmektedir. Bu reaksiyon daha sonra gümüş geliştirme2,10,11tarafından geliştirilmiş bir çökelti verir.
Bu yordamı sinaptik çinko boyama Laminer ve alansal desenler ortaya koymaktadır; densitometric analiz bu desenler duyusal, çevre, farmakolojik veya genetik manipülasyon gibi diğer müdahaleler etkilerini incelemek için yetişkin ve olgunlaşmamış beyinde hem nitelik hem de nicelik değerlendirmek için kullanılabilir. Ayrıca, bir de diğer modeli sistemlerinde olası gelişimsel değişiklikleri diğer kortikal veya subcortical yapılarda sinaptik çinko dağılımında değerlendirmek isteyebilirsiniz. Bu yöntemde densitometric çözümlemesi sağlayan nicel bilgi zaman içinde aşağıdaki beyin gelişimi için yararlı olabilir. Bu iletişim kuralı Laminer ve alansal sınırlarını ortaya çıkarmak için bir arkadaşı diğer immün ve histochemical işaretleri sağlar.

<table><tbody><tr><td>Ötesol (Ötenazi çözeltisi)</td><td>Henry Schein</td><td>710101</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum selenit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>214485</td><td></td></tr><tr><td>Ketamin (Ketaved)</td><td>Henry Schein</td><td>48858</td><td>100 mg / ml enjektabl</td></tr><tr><td>Ksilazin (Anased)</td><td>Henry Schein</td><td>33198</td><td>100 mg / ml enjektabl</td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F8775</td><td>Seyreltik %4</td></tr> <tr><td>sakız arap</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G9752-500G</td><td></td></tr><tr><td>Sitrik asit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C1909</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum sitrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>W302600</td><td></td></tr><tr><td>Hidrokinon</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H9003</td><td></td></tr><tr><td>Gümüş laktat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>85210</td><td></td></tr><tr><td>Balık jelatini</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7765</td><td></td></tr><tr><td>Sitokrom c</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C2506</td> <td>(Tip III, at kalbinden)</td></tr> <tr><td>Catalse</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C10</td><td></td></tr><tr><td>Sükroz</td><td>Domino</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Ksilen Fisher Scientific</td><td>X5P-1GAL</td><td></td></tr><tr><td>Permount Fisher</td><td>Scientific</td><td>SP15-500</td><td></td></tr>% <tr><td>100 Etanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>A406-20</td><td>Slayt montajından önce dehidrasyon için kullanılır</td></tr><tr><td>Lameller</td><td>Beyin Araştırma Laboratuvarları</td> <td># 3660-1</td><td></td></tr><tr><td>Buzlu alt yataksız slaytlar</td><td>Beyin Araştırma Laboratuvarları</td> <td># 3875-FR</td><td></td></tr><tr><td>Mikrotom</td><td>Amerikan Optik Şirketi</td><td>860</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Olympus</td><td>BX-60</td><td></td></tr><tr><td>Photoshop</td><td>Adobe Sistemlerini Kabul Edin, San Jose, CA</td><td></td><td>Görüntüleri birleştirmek için</td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>Free yazılımı şu adresten indirilebilir: http://rsb.info.nih.gov/ij/</td><td></td> <td>Densometrik ölçümler için</td></tr><tr><td>Plastik tepsi</td><td>Slaytları geliştirici çözeltisine daldırmak için</td><td>herhangi bir standart plastik tepsi kullanılabilir</td><td></td></tr><tr><td>Sıcak plaka</td><td>Herhangi bir standart ocak gözü kullanılabilir</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

farklı bölge ve lamina gelişmekte olan ve yetişkin beyninin ortaya çıkarmak için sinaptik çinko histochemistry kullanımı

Use of Synaptic Zinc Histochemistry to Reveal Different Regions and Laminae in the Developing and Adult Brain

Anatomik ve fonksiyonel beyin organizasyon ve geliştirme karakterizasyonu farklı sinir devreleri ve olgunlaşmamış ve yetişkin beyin bölgelerinde doğru tanımlaması gerekir. Burada biz boyama desenleri farklı katmanları ve beyin bölgeleri arasında farklılıklar gösteren bir çinko histochemical boyama açıklayınız. Diğerleri bu yordam sadece çinko içeren nöronlar ve beyin devrelerinde ortaya çıkarmak için aynı zamanda başarılı bir şekilde gelişmekte olan ve yetişkin beyninin çeşitli türlerin alansal ve laminer sınırları betimlemek için kullanılan. Burada biz bu yordamı gelişmekte olan görüntüleri ile boyama göstermek ve yetişkin yaban gelinciği beyin. Biz alanları ve Katmanlar anatomik bir işareti olarak hizmet veren bir çinko boyama desen açığa vurmak ve güvenilir bir şekilde gelişmekte olan ve yetişkin görsel korteksin görsel kortikal alanlarda ayırt etmek için kullanılabilir. Ana amacı, bu protokol katmanları ve nerede bunu yapmak için diğer yöntemleri başarısız gelişmekte olan ve yetişkin beyin bölgelerinde doğru tanımlaması sağlar histochemical bir yöntem sunmaktır. İkincil olarak, densitometric görüntü analizi ile birlikte, bu yöntem bir geliştirme boyunca olası değişiklikler ortaya çıkarmak için sinaptik çinko dağılımını değerlendirmek izin verir. Bu iletişim kuralı reaktifler, araçları ve gittikçe donmuş beyin bölümleri leke için gereken adımları ayrıntılı olarak anlatılmaktadır. Her ne kadar bu iletişim kuralı gelincik beyin dokusu kullanılarak açıklanmıştır, kolayca kemirgenler, kedi ya da maymunlar de diğer beyin bölgeleri olduğu gibi kullanmak için adapte edilebilir.

Sinaptik çinko için beyin bölümleri leke için bu iletişim kurallarını katılan büyük adımlar akış çizelgesi şekil 1' deki sunulur. Protokol üç döneme ayrılabilir: 1) perfüzyon ve doku koleksiyonu, 2) doku hazırlık ve boyama ve 3) çinko histochemistry. Kısaca, Protokolü'nün ilk aşamasında, hayvan anestezi ve IP sodyum selenit uygun dozu ile enjekte edilir. Bir yeterli süre sonra (ideal olarak 60-90 dk), hayvan daha sonra % 0,9 NaCl çözüm %4 paraformaldehyde çöz...

Biz desenleri farklı beyin bölgelerindeki boyama karakteristik Laminer ve alansal çinko ortaya çıkarır bir histochemical açıklayınız. Çinko boyama desen birlikte diğer anatomik işaretleri ile güvenilir bir şekilde katmanları ve gelişmekte olan ve yetişkin beyin bölgeleri ayırmak için kullanılan.

Farklı bölge ve lamina gelişmekte olan ve yetişkin beyninin ortaya çıkarmak için sinaptik çinko Histochemistry kullanımı

Characterization of anatomical and functional brain organization and development requires accurate identification of distinct neural circuits and regions ...

Bu yöntemin genel amacı, gelişmekte olan ve yetişkin beynindeki farklı bölgeleri ve katmanları ayırt etmede sinaptik Çinko boyama modellerinin kullanımını göstermek için gelincik donmuş beyin bölümleri üzerinde histokimyasal boyama yapmaktır. Bu yöntem, farklı beyin bölgeleri ve katmanları arasındaki sinaptik Çinko boyama modelindeki kalitatif ve kantitatif farklılıklar gibi temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Başlıca avantajı, bu tekniğin basit ve güvenilir olması, gelişmekte olan ve yetişkin beynindeki farklı bölgeleri ve katmanları benzersiz boyama modellerine dayalı olarak tanımlamaya izin vermesidir.Bu yöntem, vahşi görsel korteksteki alanları ve katmanları ayırmada içgörü sağlamak için kullanılmış olsa da, kemirgenlerin, kedilerin veya primatların farklı beyin bölgelerindeki katmanları ayırt etmek için de kullanılabilir. Geliştiricinin solüsyonundan 200 mililitre hazırlamak için, 120 mililitre sıcak suya yavaş yavaş 40 gram arap zamkı ekleyin ve tamamen çözünmesi için bir cam çubukla karıştırmaya devam edin. Daha sonra birkaç dakika soğumaya bırakın, ardından bir huni içinde altı ila sekiz kat gazlı bezden süzün.Daha sonra 20 mililitre damıtılmış suya 5.04 gram sitrik asit ve 4.7 gram sodyum sitrat ekleyin ve sitrat tamponu yapmak için çözün. Daha sonra 30 mililitre ısıtılmış damıtılmış suya 1.7 gram hidrokinon ekleyin. Gümüş laktat çözeltisi yapmak için 30 mililitre suya 0.22 gram gümüş laktat ekleyin.Aşağıdaki sırayla, geliştiricinin çözeltisini hazırlamak ve karanlıkta tutmak için arap zamkı, sitrat tamponu, hidrokinon ve son olarak gümüş laktat çözeltilerini karıştırın. Bu prosedüre başlamak için, vücut ağırlığının kilogramı başına 15 miligramlık bir doz sodyum selenit çözeltisi, bir Çinko şelatörü, anestezi uygulanmış gelincik içine intraperitoneal olarak enjekte edin. Daha sonra sodyum selenit çözeltisinin beyne ulaşması için 60 ila 90 dakika bekleyin.Daha sonra, hayvanı ötenazi yapmak için intraperitoneal olarak kilogram başına 100 miligram fenobarbital doz aşımı enjekte edin ve ötesolün çalışması için birkaç dakika bekleyin. Ötenazi gelincik üzerinde önce bir dakika boyunca normal salin solüsyonu ile ve daha sonra 20 dakika boyunca% 4 paraformaldehit ile transkardiyal perfüzyon gerçekleştirin. Daha sonra toplam fiksasyon prosedürünü bir saat içinde tamamlamak için sükroz içeren bir fiksatif kullanın.Kafatasını ortaya çıkarmak için burundan boyuna kadar orta hat kesisi yapmak için bir neşter kullanın. Beyni hassas bir şekilde çıkarın ve ardından yarım küreleri ayırmak için bir neşter bıçağı kullanın. Daha sonra arka kısmı beynin geri kalanından kesin ve ayırın ve iki ila dört saat boyunca düzeltin.Dokuyu 0.1 molar fosfat tamponunda %30 sükroz solüsyonu içinde tutarak beynin batmasına izin verin. Beyin battıktan sonra, görsel korteksten yarı teğetsel 40 mikrometre kalınlığında kesitler yapmak için dondurucu bir kayan mikrotom kullanın. Tüm beyin bölümlerini toplamak için bir boya fırçası kullanın ve bunları fosfat tamponlu tuzlu su ile doldurulmuş bir takım kutusuna yerleştirin.Ardından, yumurta beyazı kaplı slaytlara bir veya iki dizi beyin bölümünü hızlı bir şekilde monte edin. Slaytları kuruması için gece boyunca oda sıcaklığında tutun. Slaytlar kuruduktan sonra 15 dakika boyunca mutlak alkole batırın.Ardından slaytların oda sıcaklığında tamamen kuruması için bir saat bekleyin. Bölümleri 10 saniye boyunca hızlı bir şekilde %1 jelatin çözeltisine batırın, ardından dikkatlice süzün. Bölümleri gece boyunca kuruması için oda sıcaklığında tutun.Slaytları yan yana yerleştirmek için plastik bir tepsi kullanın. Daha sonra gelişen çözeltinin üzerine dökün ve slaytların tamamen içine batırıldığından emin olun. Reaksiyonun gelişmesi için bölümleri her 30 dakikada bir kontrol etmeyi unutmayın.Slaytlar uygun şekilde lekelenmişse, sürgüye monte edilen bölümleri tepsiden çıkarın ve slaytları bir sürgülü rafta tutun. Jelatin kaplamayı ve dış gümüş tortusunu yıkamak için sürgülü rafın içindeki slaytları 10 dakika ılık akan su altında yıkamak için büyük bir cam boyama kabı kullanın. Slaytları oda sıcaklığında kuruttuktan sonra, %100 etanol içinde beş dakika kurutun ve ksilen içinde beş dakika berraklaştırın.Son olarak, sürgünün üzerine montaj ortamı içeren bir kapak fişi yerleştirin. Bölümleri incelemek ve ilgi alanlarının fotoğraflarını çekmek için parlak alan mikroskobu kullanın. Yaklaşık 450 mikrometre genişliğindeki kortikal sütunları rastgele seçmek için ilgilenilen bölgelerin fotomikrograflarından Çinko lekeli bölümleri seçin.Her ilgi alanında, birkaç farklı beyin bölümünden uygun sayıda örnek sütun seçin. Ardından sütun görüntülerini bir görüntü işleme yazılımına aktarın. Yazılımda, tüm kortikal sütunu kapsayacak şekilde dikdörtgen kesit aracını kullanın.Ardından, görüntüyü tersine çevirmek için ters çevirme aracını kullanın. Ardından, görüntülerden optik yoğunluk profilleri oluşturmak için çizgi boyunca piksel yoğunluklarının iki boyutlu bir grafiğini oluşturmak için çizim profili aracını kullanın. Son olarak, çizim profili grafiğini dikey bir profile dönüştürmek için çizim profili seçeneklerini kullanın.Ardından arsa profiline bir kez daha tıklayın. Juvenil gelincik beyninin yarı teğetsel Çinko lekeli bölümlerinin fotomikrografları, aşırı lekeli ve az lekeli dokuların karakterizasyonunu göstermektedir. Aşırı lekelenmiş doku, yetersiz laminer varyasyon ve yoğun lekeli beyaz cevher ile çok koyu kahverengi renk geliştirir.Buna karşılık, az lekelenmiş dokular, minimal lekeli beyaz madde ile açık kahverengi renk geliştirir. Yarı teğetsel kesitlerin fotomikrografları, yetişkin bir gelinciğin görsel kortikal bölgelerinde sitokrom oksidaz boyamasında sinaptik Çinko gösterir. Sinaptik Çinko boyama yoğunluğu, 17 ve 18 numaralı alanların supragranüler ve infragranüler katmanlarında yüksektir, dördüncü katman ise hafifçe lekelenir.Tersine, 17 ve 18 arasındaki dördüncü katman, sitokrom oksidaz reaktivitesi için boyandığında yoğun bir şekilde boyanır. Sütunlu fotomikrograflar, sinaptik Çinko'nun tüm kortikal tabakalardaki laminer dağılımını tamamlayıcı normalleştirilmiş optik yoğunluk değerleri ile gösterir. Kortikal derinliğe göre sinaptik Çinko boyamadaki değişiklikleri yansıtmak için, her görsel kortikal alanda normalleştirilmiş optik yoğunluk değerleri grafikleri oluşturuldu.Parsel profillerinde bulunan oluk, 17 ve 18 numaralı alanların dördüncü katmanında düşük sinaptik Çinko lekelenmesi göstermektedir. Bu prosedür, zaman içinde belirli beyin bölgelerinde herhangi bir gelişimsel değişiklik ve lekelenme yoğunluğu olup olmadığını açıklamaya yardımcı olabilir. Bu teknik, nöroanatomi araştırmacılarının duyusal, çevresel, farmakolojik veya genetik manipülasyonların yetişkinlerde ve olgunlaşmamış beyinde sinaptik Çinko boyamanın dağılımını bir dizi türde nasıl etkileyebileceğini araştırmak için yararlı olduğunu kanıtladı.İzlediğiniz için teşekkürler. Deneylerinizde iyi şanslar.

use-synaptic-zinc-histochemistry-to-reveal-different-regions-laminae

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Kayıt kalsiyum aktivitesi için gösterge kalsiyum boyalar ile subventrikuler alanin (SVZ) hücreleri yüklemek için bir yöntem tarif edilmektedir. Postnatal SVZ nöral progenitör hücreler ve nöroblast gibi sıkıca paketlenmiş hücreleri içerir. Aksine banyo yükleme kullanmaktan daha biz daha iyi boya difüzyon sağlayan doku içinde basınç boya enjekte.

Kalsiyum Görüntüleme için akut subventricular dilimi Dilimleri hazırlanması

Kaynak: McLeod, F.,  et al. Hipokampal Kemirgen Beyin Dilimlerinde Sinaps Yoğunluğunun Değerlendirilmesi. J. Vis. Uzm. (2017). Bu video, konfokal immünofloresan analizi kullanarak hipokampal beyin dilimlerinde sinaptik belirteçleri görselleştirmek için bir yöntemi göstermektedir. Dilimler, presinaptik ve postsinaptik belirteçleri hedef alan primer antikorlarla immün boyanır, ardından florofor konjuge sekonder antikorlar gelir. Etiketli belirteçler daha sonra sinaptik mimariyi kolokalizasyonları...

İmmünofloresan Kullanılarak Fare Hipokampal Dilimlerinde Sinapsların Mikroskobik Analizi

Zebra balığı embriyolarının Mauthner nöronlar ve diğer reticulospinal hücrelerden yama kelepçe kayıt yoluyla elektriksel aktivitesini kaydetmek ve izlemek için sağlam bir beyin-omurilik hazırlık geliştirdik. Böylece, gelişmekte olan embriyo anahtar nöronlardan eksitatör ve inhibitör sinaptik akımları, voltaj-kapılı kanal aktivitesini ve aksiyon potansiyelleri kayıt edebiliyoruz.

Embriyonik Zebra balığı Mauthner Hücreler Patch Kelepçe Kayıtlar

Burada organotipik dilim kültür tekniği kullanılarak hipokampal doğum sonrası nöron incelemek için bir teknik tarif. Bu yöntem, yetişkin nöron in vitro müdahale edilebilmesini sağlar ve kültürlenmiş hipokampus farmakolojik maddelerin doğrudan uygulama için izin verir.

POSTNATAL nöron Çalışmaları için organotipik Dilim Kültürler

Bu protokol, biocytin doldurma ve sonraki immünohistokimyasal Postprocess kullanılarak elektrofizyolojik kayıtları sırasında yamalı nöronların morfolojik geri kazanılması için bir yöntem sunulur. Biz, lekeli ve kaplandı kalınlığında biocytin dolu bölümler, daha sonra ikinci bir birincil antikor gün ya da ay ile tekrar boyanmış edilebileceğini göstermektedir.

Nörokimyasal markerleri Biocytin dolu ve İşlenmiş Bölümler immün

Doğru bir şekilde belirlenmesi ve Hipokampal dilimleri ayirt kullanarak sinapslarda analiz için bir protokol bu makalesinde ana hatlarıyla.

Hipokampal kemirgen beyin dilimleri dansitesi Synapse değerlendirilmesi

Burada özetlenen protokolünü ayirt analizi, biocytin kurtarma ve hücre içi elektrofizyolojik kayıtlar in vitro nöron izin takip hipokampal CA2 interneurons yüksek kaliteli rekonstrüksiyonlar açıklar karakterizasyonu ve belirlenmesi için sonuçta iyi nöronal anatomisi.

Biocytin kurtarma ve dolgulu hipokampal CA2 Interneurons 3D rekonstrüksiyonu

Transmisyon elektron mikroskobu ve rahimde iletim sinir sisteminin iyi ultrastructure morfolojik değişiklikler geliştirme sırasında çalışmak için güçlü bir yaklaşımdır. Bu kombine yöntem değişiklikleri içine derin anlayışlar nöroplastisite ile ilgili topografik ifadelerinin temel yapısal detayları verir.

Sonra Ultrastructural nöroplastisite parametrelerinde Utero iletim gelişmekte olan fare beyin ve omurilik değerlendirilmesi

Biz sinir terminallerinde sinaptik vezikül dağılımı morfometrik analizi için yüksek çözünürlüklü elektron MİKROGRAFİ elde etmek için yenidoğan sıçan beyin dokusu işleme prosedürleri açıklanmaktadır. Bu yöntemlerle elde edilen mikrografikler, diğer hücresel bileşenlerin bir dizi morfolojisi ve boyutsal yapısal ilişkilerini incelemek için de kullanılabilir.

Sinir terminallerinde sinaptik vezikül dağıtımının Ultrastrik morfometrik analizi için yenidoğan Rat beyin dokusunun hazırlanması

Kriyo-kesit diseksiyonu, derin nicel proteom analizi için murine beynindeki en büyük nörojenik nişin taze ve donmuş hazırlanmasını sağlar. Yöntem kesin, verimlidir ve minimum doku pertürbasyonuna neden olur. Bu nedenle, bu nişin moleküler mikroçevriminin yanı sıra diğer organların, bölgelerin ve türlerin incelenmesi için idealdir.

Doğru ve Derin Nicel Proteom Analizi için Yetişkin Subependymal Bölgesinin Kriyo-kesit Diseksiyonu

Sunulan protokol, esas olarak sinaps sayısı ve dendritik omurga morfolojisine odaklanarak, fare namlu korteksindeki sirkadiyen değişiklikleri ölçmek için transmisyon elektron mikroskobunun (TEM) kullanımını açıklar.

Fare Namlu Koreksinde Sirkadiyen Sinaptik Plastisitenin Analizi için Görselleştirme Tekniği Olarak Transmisyon Elektron Mikroskobu

Öğrenin sinaptik çinko histokimyasını kullanarak gelişmekte olan ve yetişkin ferret beyinlerinde farklı bölgeleri ve katmanları ayırt etme yöntemini. Bu teknik, nöroanatomi araştırmalarında beyin katmanlarının güvenilir şekilde tanımlanmasını sağlar.

Farklı bölge ve lamina gelişmekte olan ve yetişkin beyninin ortaya çıkarmak için sinaptik çinko Histochemistry kullanımı

Daha fazla video keşfet