Name: Pentylenetetrazole kaynaklı çıra fare modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-12T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 6 s
Description: Keşfedin pentylenetetrazole kaynaklı çıra fare modelini, epilepsi ve davranışsal değişiklikleri incelemek için 129 SV fareleri kullanarak. Bu yöntem nöropsikiyatrik gelişim bozukluklarının mekanizmalarını araştırmaya olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser kısmen JSP'ler KAKENHI grant numaraları 24700349, 24659093, 25293239, JP18H02536 ve 17 K 07086, MEXT KAKENHI grant numaraları AMED Grant numarası JP18ek0109311, 25110737 ve 23110525 ve SENSHIN Tıbbi Araştırma Vakfı ve Japonya ile desteklenmiştir Epilepsi Araştırma Vakfı.

Tüm deneysel prosedürler hayvan bakım ve kullanım Komitesi, Tokyo Metropolitan tıbbi Bilim Enstitüsü tarafından kabul edildi. Doğum sonrası 8 - 16-hafta-yaşlı fareler tavsiye edilir. Doğuştan herhangi bir yük deneme için kabul edilebilir olduğunu. BALB/c ve Swiss albino farelerin PTZ için daha hassas ise C57BL/6 fareler PTZ için daha dayanıklıdır. C57BL/6 Bu çalışmada kullanılmıştır. Güvenlik Açığı için PTZ da fareyi yaş üzerinde bağlıdır. Küçük fareler için karşılaştırıldığında, büyük fareler PTZ35' e daha ateşe dayanıklı değildir. Bu yöntem için kullanılan hayvan sayısı değişebilir, ancak en az 6-10 hayvan her koşul için gereklidir.
1. PTZ hazırlanması
<ol><li>2 mg/mL PTZ steril %0,9 (w/v) NaCl geçiyoruz. PTZ kullanım gününde hazırlamak.</li>
</ol>2. enjeksiyon PTZ
<ol><li>Saat 9:00 ve 12:00 (Öğle) arasındaki tüm deneyler yapmak.</li>
	<li>Hayvanın vücut ağırlığı ölçmek.</li>
	<li>Hayvan bir gözlem odası habituation için yerleştirin.</li>
	<li>Habituation dönemde (3 dk), hayvan ve önceden belirlenmiş enjeksiyon doz vücut ağırlığına göre enjeksiyon için PTZ çözüm hacmi hesaplamak. Not: 35 mg/kg PTZ kullanılır, örneğin, PTZ 0.875 mg 25 gr ağırlığında bir fare için gereklidir (35 mg / kg x 0.025 kg 0,875 = mg). Bu nedenle, 2 mg/mL PTZ çözüm 437.5 μL enjekte (0,875 mg/2 mg / mL = 0.4375 mL). PTZ enjeksiyon doz fare genotip ve zorlanma bağlıdır. Vahşi tipli C57BL/6 fareler için 30-35 mg PTZ/kg vücut ağırlığı bir doz ilk deneme için önerilir. PTZ duyarlılık fare kullanılan zorlanma36üzerinde,37bağlıdır. Enjeksiyon dozu deneme amaçlı göre değişir.</li>
	<li>PTZ intraperitoneally 27'lik iğne için hayvanın karın sol veya sağ çeyreğine bağlı 1 mL şırınga ile enjekte. Orta hat enjekte kaçının.<ol>
<li>Aynı konumda tekrarlanan enjeksiyon kaçının.</li>
	</ol>
</li>
	<li>PTZ Yönetim (Şekil 1A), sonra 30 dk için hayvan davranışlarını gözlemlemek ve sınıflandırmak ve aşağıda gösterildiği gibi anormal davranış puanı. Mümkünse, hayvanlar 24 h veya en az bir ek 6-10 h sonrası enjeksiyon için gözlem altında özellikle nöbet önem skor 3 ulaştığında veya yukarıda tut.<ol>
<li>Not herhangi bir hafif nöbetler veya 30-dak gözlem döneminin ötesinde hayvan davranış değişiklikleri. Bu gözlem süresi PTZ subconvulsive bir doz özellikle önemli ve tam etkisini epilepsi kronik sebepsiz yere ele geçirme vakaları nesil adresi olabilir uzun.</li>
		<li>Ayrıca, ölçü değişiklikleri olarak gözlenen her nöbet nöbet süresi nöbet süresi içinde ilgili nöbet önem. Ayrıca, ilk nöbet geçirdikten sonra PTZ enjeksiyon için gecikme süresi toplamak için başka bir önemli ölçüde olur. Nöbet sıklığını, süre ve gecikme süresi izleme herhangi bir sonrası nöbet Moleküler çalışmalar için önemlidir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>PTZ her geçen gün (Şekil 1A) enjekte. Enjeksiyonları deneme amaçta bağlıdır. Temsilcisi örnekler aşağıdaki gibidir:<ol>
<li>Hayvanlar, tamamen tutuşturulmuş bir kez bir hayvan nöbet puanı 5 (tonik-klonik nöbet) deneyimleri oluşturmak için enjeksiyon ek üç idareler içinde son. Bu durumda, nöbet puanı için üç ardışık idareleri artırmaz Eğer enjeksiyon dozu arttırmak. Her hayvan farklı sayı ve PTZ enjeksiyonları doz alabilirsiniz.</li>
		<li>Fix numarası ve PTZ enjeksiyon doz için PTZ Anti-epilepsi ilaçları ilişkin değerlendirmeler ve genetiği değiştirilmiş fare fenotip çalışmaları da dahil olmak üzere, güvenlik açığı değerlendirmek için her durumda. Bütün hayvanlar PTZ enjeksiyonları aynı sayıda vermek; Toplam 8-12 enjeksiyonları önerilir. Eğer bir hayvan ölürse, nöbet skor olarak 6 ile belirtilen.</li>
		<li>Enjeksiyon dozu yüksek nöbet korumak için gerekli belirlemek puan edinildi (4 veya 5) 10 veya daha fazla enjeksiyonları epileptik nöbetler oluşan histopatolojik değişiklikleri incelemek. Bu durumda, toplam enjeksiyon sayısı 25 dan 30'a mesafe. Nöbet puanı 5 ulaşırsa enjeksiyon dozu azalt. Nöbet puanı 3 veya daha düşük azalırsa, enjeksiyon dozu arttırmak.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. nöbet puanı
<ol><li>Hayvan davranışlarını gözlemlemek ve puanları kaydedin.<ol>
<li>Sınıflandırmak ve epileptik davranışlarını izler38,39 (Şekil 1B) puan: 0: normal bir davranış, hiçbir anormallik. 1: immobilizasyon, karnına yalan. 2: baş başını sallayarak, yüz, forelimb veya hindlimb myoklonus. 3: sürekli tüm vücut myoklonus, Miyklonik gerizekalı, kuyruk kaskatı kaldırdı. 4: yetiştirme, tonik nöbet, yan tarafında düşme. 5: tonik-klonik nöbet, sırtını, acele ve atlama vahşi düşme. 6: ölüm.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Racine puanı40, deneysel şartlarına bağlı olarak temel davranış ölçütünü değiştirin.</li>
</ol>4. sonrası nöbet Analizi
<ol><li>Immunohistopathological Analizi<ol>
<li>Perfüzyon fiksasyon<ol>
<li>Hazırlık<ol>
<li>%4 (w/v) paraformaldehyde (PFA) 0.1 M fosfat tampon (pH 7,4) geçiyoruz. Çözüm 1 M NaOH (yaklaşık 1 µL 50 mL PFA çözüm için 1 M NaOH) bir damla ilavesi ile yaklaşık 70 ° c ısı.</li>
				<li>Buz gibi 4 hazırlamak % PFA ve fosfat tamponlu tuz çözeltisi (PBS).</li>
				<li>Peristaltik pompa, bir tüp ve iğne ile ayarlayın. Yaklaşık 20 mL su tüpünden kalıntı temizlemek için çalıştırın. O zaman, açık sonuna tüp buz gibi PBS yer.</li>
			</ol>
</li>
			<li>Transcardial perfüzyon ve sabit beyin hazırlanması<ol>
<li>Fare ile % 50 isoflurane/50% Etanol küçük bir kavanoza derin anestezi.</li>
				<li>Fare onların ön ayakları ve hindlimbs iğneleyerek sırtüstü pozisyonda tutun.</li>
				<li>Karın ventral orta hat kesilmiş ve diyafram bulaşmasına neden.</li>
				<li>Diyafram kostal kenar boşluğu kesin. Sonra kaburga ve vücut yan her iki tarafında kesti. Xiphoid işlemi tarafından kilitleme forseps pinch ve göğüs kafesi çıkar. Bir iğne ile sabitleme veya forseps ile pinching tarafından xiphoid sürecinin yerini korumak. Kalp ortaya çıkarmak.</li>
				<li>İğne sol ventrikül yerleştirin ve makas kullanırken sağ atrium bir kesim yapmak. Bir iç duvarı delip geçebilir gibi iğne çok ileri kalp içine itmek için değil unutmayın.</li>
				<li>Buz gibi PBS sürekli bir akış (yaklaşık 15-20 mL/dk) kan yıkamak için iğne ile başlar.</li>
				<li>Kan vücuttan seçili olmadığında, tüp kabarcıklar ek olmadan %4 paraformaldehyde çözüm (yaklaşık 60 mL) taşıyın. O zaman, perfüzyon!</li>
				<li>Arka boyun ve omurga kesti ve baş cilt ve makas diseksiyon ile kafatası dorsal kısmı kapalı soyma.</li>
				<li>Göz yörüngeleri arasındaki premaxillary kemik kesme ve kafatası sırt kısmını tamamen kaldırmak.</li>
				<li>Arka taraftan beyin ve jugal kemik arasında bir boşluk oluşturmak ve trigeminal sinir ve optik hemisferlerine altında beyin kesti. Dikkatle beyin çıkarın ve % 4 içeren bir şişede yerleştirin PFA. 12-16 saat için 4 ° C'de beyin sonrası tamir et.</li>
			</ol>
</li>
		</ol>
</li>
		<li>Beyin dilim hazırlık<ol>
<li>Beyin cryoprotection için izin vermek için çözüm içine batar kadar sabit beyin % 20 sükroz/PBS için transfer.</li>
			<li>Gerekli dilim yönlendirme ve gerekli beyin parçası dayalı sabit beyin kesti.</li>
			<li>Cryomicrotome ayarlayın. Bıçak bulunduğu atayıp microtome sahne altında-20 ° c sıcaklıkta saklamanız</li>
			<li>Önceden kesilmiş beyin sahnesinde yerini ve % 20 sükroz/PBS ile beyin ceket. Sükroz/PBS çözüm yavaş yavaş beyin tamamen donmuş % 20 sükroz/PBS içinde gömülü olduğu kadar beyin sahne alanı'nda kapsayan dondurdu.</li>
			<li>Beyin (30 µm kalınlık) bıçak doku ile kaydırarak dilim. Dilimleri PBS aktarmak ve onları 4 ° C'de tutmak</li>
		</ol>
</li>
		<li>Floresan immünhistokimya<ol>
<li>Gerekli dilimleri %0,1 yıkama Triton X-100/PBS (PBST) 10 dk, 3 kat, oda sıcaklığında (RT) için.</li>
			<li>Onları PBST %2 keçi serum veya %5 Sığır serum albümin (BSA) için 1-2 h RT. ile kuluçka tarafından dilimleri engellemek</li>
			<li>Bir antikor çözüm 4 ° C'de 1-7 geceleme için birincil antikor PBST % 2 keçi serum veya %5 BSA ile uygun bir konsantrasyon ile dilimleri kuluçkaya</li>
			<li>Dilimleri 3 kez, RT. 10 dk içinde PBST yıkama</li>
			<li>Dilimleri ikincil antikor PBST içinde 1-2 h, RT, ışık korumalı için uygun konsantrasyonu ile ikincil antikor çözümde kuluçkaya.</li>
			<li>Dilimleri cam slaytlar üzerine monte ve montaj orta ve cam ile kaplayın.</li>
			<li>Floresans mikroskobu dilimlerle gözlemlemek.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>Üç-odası testi<ol>
<li>Hazırlık<ol>
<li>En az 2 2-6 aylık 129/Sv fareler "yabancı fare." olmak aynı cinsiyetten konu fareler olarak hazırlamak İçinde belgili tanımlık kafes analiz önce tüm fareler alıştırmak. Her eğitim oturumu için kafeste fareyi getirin ve fareyi 15 dakika bırakın.</li>
			<li>Konu fare ile her habituation aşama önce tüm cihazları ve her iki kafesler %70 etanol ile yüzey silerek temizleyin.</li>
			<li>3-odası aparatı iki yan odaları boş kafesleri yerleştirebilir ve odalar arasında kapılar açabilirsiniz.</li>
			<li>Konu fare alıştırmak için merkezi odasında bir konu fare yerleştirin ve serbestçe aparatı fare her iki kafesleri araştırmış, artı, kafes korkulu olabilir bir ek 5 dk. konu hayvan yapmak kadar taşımak fareyi sağlar 20 dk için kafes araştırmak ve bu analiz için kullanılmamalıdır. Bu tür hayvanlar kafes önlemek ve nadir kafes yakın olur.</li>
			<li>Hayvan merkezi odasına hamle sonra kapıları kapatır ve serbestçe hareket merkezi odasında 5 min için fare bildirir. Bu dönemde, 129/Sv fareler birini kafese alıştırmak için bir kafes içinde koymak.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Sociality Analizi<ol>
<li>Hemen konu fare habituation süre sonra bu analizlerini.</li>
			<li>129/Sv fare içeren kafes yerleştirin, "yabancı 1 kafeste", yan odaları biri olarak adlandırdığı ve "nesne kafeste", diğer yan odası olarak adlandırılan boş kafese koyun.</li>
			<li>Kapıyı aç ve konu fare davranışınızı izleyebilir.</li>
			<li>Konu fare özgürce 10 dakikadır hareket ve aşağıdaki davranış parametreleri kaydetmek izin verir. Konu fare fare yabancı 1 kafes kaçınarak ve odaları biri köşesinde kalan gösterildiği gibi fare yabancı 1 kafeste Eğer korkuyorsa, hayvan analiz için kullanılmamalıdır. a) zaman her odası, yabancı 1 odası, nesne odası ve merkezi odası içinde geçirdi. b) zaman her kafes, yabancı 1 kafes ve nesne kafes soruşturma geçirdi. (Fare fare algılaması eğer belgili tanımlık kafes soruşturma veya toughing fare veya kafes sınıflandırılır) c) (isteğe bağlı) her odasına giriş sayısı d) toplam mesafe (isteğe bağlı) seyahat</li>
			<li>Merkezi odanın içine fare hareket sonra kapıları kapatın.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Sosyal yenilik Analizi<ol>
<li>Hemen sociality analizden sonra bu analizlerini.</li>
			<li>Her iki kafesler %70 etanol ile silin.</li>
			<li>"Yabancı 2 kafes" ve odaların birinde yer yabancı 2 kafes olarak adlandırdığı kafesleri, başka bir 129/Sv fare yerleştirin. Yabancı 1 fare "yabancı 1 kafes" olarak adlandırılan diğer kafesin içine yerleştirin ve yabancı 1 kafes diğer odasında yerleştirin.</li>
			<li>Kapıyı aç ve konu fare davranışınızı izleyebilir.</li>
			<li>Konu fare özgürce 10 dakikadır taşımak izin ve sociality analiz için açıklanan aynı davranış parametrelerini ölçmek. Not: Yabancı 1 ve yabancı 2 fare rasgele seçilmelidir. Yabancı 1 Oda ve nesne odası yanı sıra yabancı 1 odası ve yabancı 2 odası rastgele tespit edilmelidir.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>Bağlamsal korku ayrımcılık<ol>
<li>Merkezi Klima<ol>
<li>Her Klima duruşmadan önce deneysel cihazları % 70 etanol ile yüzey silerek temizleyin.</li>
			<li>Klima cihazları belirli koşullara sahip bir fare yerleştirin (aparatı şekli, duvar rengi, kat malzeme, koku, aydınlatma ve arka plan gürültü ses önceden saptanır). Örneğin, burada kullanılan klima cihazları bir kare aparatı ile şeffaf Pleksiglas duvarlar, bir metal ızgara zemin, bir etanol koku, 100 lux parlaklık ve 65 dB arka plan beyaz gürültü oldu.</li>
			<li>Ayak-şok 0.1-mA elektrik şokları 2 için takma ad-rasgele zamanlaması ile tarafından fare durumu s x 3 kez 5 dk boyunca.</li>
			<li>Fare Klima sonra eve kafes dönmek.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Bellek değerlendirmesi<ol>
<li>Her değerlendirme önce deneysel cihazları % 70 etanol ile yüzey silerek temizleyin.</li>
			<li>Ertesi gün aşağıdaki Klima, fare şok koşulu olarak aynı Aparat içine koyun ve 5 dk boyunca donma süre ölçebilir.</li>
			<li>Daha sonra aynı gün içinde bir roman aparatı fareyi getirin ve bir dakika 5 değerlendirme sırasında donma süre ölçebilir. Bir üçgen aparatı beyaz Pleksiglas duvarlar, plaka kat, hiçbir koku, 30 lux parlaklık ve 70 dB Beyaz gürültü ile burada kullanılmıştır.</li>
			<li>Dondurma zaman aynı koşul ve Roman durumu arasında karşılaştırmak. Fareler bir normal bellek yeteneği ile roman durumda aynı durumda daha fazla buz tutar. Donma olduğunu hayvan fazla 2 için tanımlanmış hareketsizlik s.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
</ol>

Yazarlar hiçbir çıkar çatışmaları bildirin.

Burada, epilepsi farmakolojik bir hayvan modeli kurulması için yaygın olarak erişilebilir bir protokol mevcut. Kimyasal çıra PTZ-aracılı uzun bir geçmişi vardır ve epilepsi41histopatoloji ve hücresel patoloji incelenmesi için genel kabul görmüş bir modeldir. Epilepsi kimyasal çıra modelinin daha önce Suzdak ve Jansen, 199542tarafından gözden geçirilmiş. PTZ, özellikle ile farmakolojik nöbet indüksiyon şiddetli nöbetler çağrıştıran bir kolay ve basit bir yöntemdir. Enjeksiyo...

Epilepsi tarafından tekrarlayan nöbetleri ile karakterize ve insanların yaklaşık % 1'i etkileyen kronik nörolojik bir hastalıktır. Epileptogenesis ve el koyma nesil Epilepsi hastalarında temel mekanizmaları tam olarak klinik çalışmalarda açıklık olamaz. Bu nedenle, uygun bir hayvan modeli epilepsi1çalışması için gereklidir.
Hayvan modelleriyle epilepsi epilepsi fizyolojisi araştırmak ve anti-epileptik ilaçlar2,3tanımlamak için kullanılmıştır. Bu modeller arasında farmakolojik nöbet indüksiyon epilepsi4patoloji incelenmesi için hayvan bir model oluşturmak için kullanılan yaygın bir yöntemdir. Bu ucuz ve basit bir yöntemdir. Elektrot-aracılı, çıra da yaygın olarak kullanılan bir yöntem ama bu yordamı daha yüksek maliyetlerdir ve Yöntem tekrarlayan nöbetlere5ikna etmek için cerrahi ve elektrik becerileri gerektirir.
Zamanlama ve ele geçirme vakalarının sayısı kolaylıkla kontrol farmakolojik indüksiyon de avantajlı çünkü. Spontan nöbetler sergi genetik fare modelleri de epilepsi çalışmada kullanılır. Ancak, ne zaman ve ne sıklıkta bu genetik modellerinde nöbetler ortaya tahmin etmek imkansız6olabilir. Bir izleme sistemi genetiği değiştirilmiş fare6epileptik davranışlarını gözlemlemek için gereklidir.
Kainic asit, pilokarpin ve pentylenetetrazole (PTZ) nöbet indükleyici ilaç7yaygın olarak kullanılmaktadır. Glutamat reseptörlerinin için bir agonist kainic asittir ve kolinerjik reseptörler pilokarpin etkinleştirir. PTZ olduğunu bir gamma aminobütirik asit (GABA)-reseptör antagonisti8. PTZ inhibitör sinapslarda, işlev artmış nöronal aktivite için önde gelen bastırır. Bu yönetmelik jeneralize nöbetler hayvanlar9' neden olur. Kainic asit ve pilokarpin tek bir enjeksiyon akut nöbetler, özellikle durum epileptikus (SE)10,11 tetikleyebilir ve kainic asit veya pilokarpin-aracılı SE kronik ve tekrarlayan spontan nöbetler12 teşvik , 13. electroencephalographic (EEG) kayıtları ve davranış analizi belirtilen tekrarlayan spontan nöbetler bir ay sonra bir tek enjeksiyon12,13gözlenir. PTZ kasılan bir doz tek bir enjeksiyon da akut kriz neden olmaktadır. Ancak, kronik spontan nöbetler PTZ tek bir enjeksiyon sonra teşvik etmek zordur. PTZ kronik İdaresi tekrarlayan nöbetleri14ikna etmek için gereklidir. Her iki yöntemde, tekrarlayan nöbetlere nesil bir patoloji daha insan epilepsi için benzer akut nöbetleri üretimi ikna etmek yapabiliyor. PTZ, söz konusu olduğunda her enjeksiyon nöbet uyandıran ve kademeli bir şekilde her enjeksiyon ile nöbet önem daha şiddetli olur. Son olarak, tek bir düşük doz PTZ enjeksiyon şiddetli tonik-klonik nöbet neden olmaktadır. Bu aşamada, her enjeksiyon şiddetli nöbetler çağrıştırır. Buna ek olarak, nöbet gecikme süresi ve süresi de enjeksiyonları boyunca değiştirir. Gecikme süresi tonik nöbet için sık sık15çıra ikinci aşamasında daha kısa olur. Ayrıca, nöbet tırmandığı bir uzun süreli nöbet süresi16tarafından eşlik ediyor. Nöbet önem düzenleyen moleküler mekanizması araştıran, gecikme süresi ve süre, anti-epileptik ilaçların17,18,19eleme için kullanışlıdır.
Nöbetler sık PTZ tek sistemik yönetimi tarafından indüklenir ve 30 dk4,5içinde kurtarma çok hızlıdır. Böylece, ele geçirmelerin sayısı PTZ-çıra modelinde daha fazla kontrol edilebilir. Ancak, EEG izleme Genelleştirilmiş sivri PTZ-aracılı nöbet20sonra 12 saat kadar görülebilir belirtti. Bu nedenle, hayvanlar tercihen müşahede çıra mekanizmaları altında 24 saat sonra daha kesin çözümleme için Miyklonik veya tonik nöbet21 kalmalıdır.
Önce veya sonra PTZ enjeksiyon yönetim ethosuximide, valproat, phenobarbital, vigabatrin ve retigabine3gibi anti-epileptik ilaçların tırmandığı nöbet önem derecesi3,22azaltır, 23. Benzer şekilde, nakavt fareler eksikliği genler FGF-222625 ve neuritin, nöbet alevlenmesi, matriks metalloproteinaz-924gibi içinde ilgili birden çok PTZ enjeksiyonları sonra indirimli nöbet önem sergilemek gösterilmiştir. Epileptik nöbetler sonra bu yöntem ile mümkün Ayrıca, histopatolojik değişiklikler gözlemleyerek. Temporal lob epilepsi olan hastalarda tipik histolojik değişiklikler vardır yosunlu fiber çimlenme27,28, anormal granül nöron geçiş29, astrogliosis30, nöronal hücre gibi beyin Ölüm hipokampus31,32ve hipokampal skleroz33. Benzer değişiklikler epileptik modeli hayvanlarda gözlenir. Mevcut yöntemler arasında kimyasal çıra PTZ-aracılı bir hayvan modeli epilepsi üretmek için bir iyi, tekrarlanabilir ve ucuz yöntemdir. Pilokarpin-aracılı SE modelinde, nöbet kontrolü zordur ve birçok fareler ölmek ya da SE34geliştirmek başarısız. Buna ek olarak, mortalite ve nöbet önem PTZ modelinde daha fazla kontrol edilebilir. Ayrıca, PTZ kainic asit ucuzdur ve becerileri fare beyin cerrahisinde ilaç idaresi için gerekli değildir.

<table><tbody><tr><td>Pentiletetrazol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6500</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum klorür</td><td>MANAC</td><td>7647-14-5</td><td></td></tr><tr><td>Fare</td><td>CLEA Japonya</td><td></td><td>C57Bl / 6NJcl, doğum sonrası 8 hafta, erkek</td></tr><tr><td>Şırınga (1mL)</td> <td>Terumo</td><td>SS-01T</td><td></td></tr><tr><td>İğne (27G x 3/4 ") (0.40 x 19 mm)</td> <td>Terumo</td><td>NN-2719S</td><td></td></tr><tr><td>Tartı</td><td>Mettler</td><td>PE2000</td><td>Bu ürün, üretimi durdurulan bir üründür. A& FXi-2000-JA ile neredeyse FX-12i'ye eşdeğer D şirketi.</td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum hidroksit</td><td>nacalai tesque</td><td>31511-05</td><td></td></tr><tr><td>Peristatik pompa</td><td>ATTO</td><td>SJ1211</td><td></td></tr><tr><td>Sükroz</td><td>nacalai tesque</td><td>30404-45</td><td></td></tr><tr><td>Mikrotom</td><td>Yamato</td><td>REM-700</td><td>Bu ürün üretimi durdurulan bir üründür. REM-710'a neredeyse eşdeğer</td></tr><tr><td>Mikrotom bıçağı</td><td>Tüy</td><td>S35</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X-100</td><td></td></tr><tr><td>anti-sinaptoporin antikoru</td><td>Sinaptik sistemler</td><td>102 002</td><td></td></tr><tr><td>anti-ZnT3 antikoru</td><td>Sinaptik sistemler</td><td>197 002</td><td></td></tr><tr><td>anti-doublecortin</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-8066</td><td>Bu ürün, üretimi durdurulan bir üründür. Eşdeğer ürünü (sc-271390) test etmedik.</td></tr><tr><td>Bağlamsal korku ayrımcılığı test cihazı</td><td>O'hara</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Üç odacıklı test cihazı</td><td>Muromachi</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

pentylenetetrazole kaynaklı çıra fare modeli

Pentylenetetrazole-Induced Kindling Mouse Model

Pentylenetetrazole (PTZ) GABA-A reseptör antagonisti var. Subconvulsive bir doz sıralı enjeksiyon kimyasal kindling, bir epilepsi modeli geliştirilmesi için kullanılan, ancak PTZ mayi bir iğne içine bir hayvan, yüksek doz, akut, şiddetli bir nöbet neden olmaktadır. PTZ tek bir düşük doz enjeksiyon kasılma nöbetlerinden olmadan hafif nöbet neden olmaktadır. Ancak, PTZ tekrarlayan düşük doz enjeksiyonlari eşik kasılan nöbet uyandırmak için azaltın. Son olarak, sürekli düşük doz yönetimi PTZ şiddetli tonik-klonik nöbet neden olmaktadır. Bu yöntem basit ve yerde tekrarlayan nöbetlere içerir kronik bir hastalık olarak tanımlanır epilepsi Patofizyoloji araştırmak için geçerli değildir. Bu kimyasal kindling Protokolü hayvanlarda tekrarlayan nöbetlere neden olur. Bu yöntemle, güvenlik açığı PTZ-aracılı nöbetler veya tırmandığı epileptik nöbetlerin derecesini tahmin edilmiştir. Bu avantajları anti-epileptik ilaçlar ve epilepsi ile ilgili genleri süzmek için bu yöntemin kullanılması yol açmıştır. Buna ek olarak, bu yöntem epileptik hastaların beyinlerinde gözlenen histolojik değişiklikler da kimyasal tutuşturulmuş hayvanların beyinlerinde görünür çünkü nöronal hasar sonra epileptik nöbetler araştırmak için kullanılmıştır. Böylece, bu protokole uygun epilepsi hayvan modelleri üretmek için yararlıdır.

PTZ tekrarlanan enjeksiyon nöbet şiddetinde artışa neden olmaktadır. Altı C57BL/6 fareler PTZ ile tedavi edildi ve başka bir 6 fareler bir kontrol grubu olarak serum ile tedavi edildi. PTZ verilendozun 35 mg/kg ve 10 enjeksiyonu uygulandı. Hiçbir nöbetler veya anormal davranışlar serum enjeksiyonları (Şekil 2) tarafından uyarılmış, ancak nöbet puanı PTZ enjeksiyonları ile yavaş yavaş arttı. Bonferroni testi ile takip ANOVA PTZ tedavi grubu ve serum fizyolojik...

Bu iletişim kuralı ile pentylenetetrazole kimyasal çıra yöntemi açıklar ve epilepsi bir fare modeli sağlar. Bu iletişim kuralı, farelerde epileptik nöbetler sonra nöbet indüksiyon ve Escherichia türleri için güvenlik açığı araştırmak için de kullanılabilir.

Pentylenetetrazole kaynaklı çıra fare modeli

Pentylenetetrazole (PTZ) is a GABA-A receptor antagonist. An intraperitoneal injection of PTZ into an animal induces an acute, severe seizure at a high ...

Bu yöntem epilepsinin derin analizine yardımcı olabilir. Nöbet, beyinde nöropsikiyatrik gelişimsel bozukluklarda rol oynayabilecek histolojik değişikliklere neden olacaktır. Bu tekniğin ana avantajı, kendi kendine konuşan PTZ dozunun, kontrol edilebilir nöbetleri diğer mevcut yöntemlerden daha iyi indükleyebilmesidir.Mililitre PTZ'de 2 miligram PTZ'yi steril yüzde 0.9 sodyum klorür içinde çözerek enjeksiyonu hazırlamaya başlayın. Hayvanı tartın, ardından 3 dakikalık bir alışma süresi boyunca bir gözlem odasına koyun. Daha sonra, PTZ'yi 27 gauge iğneye bağlı 1 mililitrelik bir şırınga ile interperitoneal olarak hayvanın karnının sol veya sağ çeyreğine enjekte edin.Son olarak, PTZ enjeksiyonundan sonra hayvanı anormal davranış açısından gözlemleyin. Yabancı fare olmak için denek farelerle aynı cinsiyetten olan en az iki ila altı aylık 129 SV fare edinin. Her yabancı fare ayrı tutulmalıdır.Her eğitim seansı için, fareyi 15 dakika boyunca alışması için kafeste bırakın. Yüzeyi %70 etanol ile silerek her iki kafesteki tüm aparatı temizleyiniz. Ardından, boş kafesleri üç odacıklı aparatın iki yan bölmesine yerleştirin ve bölmeler arasındaki kapıları açın.Denek fareyi alıştırmak için, dene

pentylenetetrazole-induced-kindling-mouse-model

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu video, epilepsi ile ilişkili gen mutasyonlarına sahip transgenik bir farede, kontrollü bir odada vücut ısısını kademeli olarak artırarak ısıya bağlı nöbetleri indükleme prosedürünü göstermektedir. Bu protokol, epilepsi için nöbet mekanizmalarını ve potansiyel tedavileri incelemek için kullanılır.

Transgenik Bir Fare Modelinde Isıya Bağlı Nöbetlerin Tetiklenmesi ve İzlenmesi

Bu video, bir GABA-A reseptör antagonisti olan pentilentetrazol (PTZ) enjeksiyonları kullanılarak farelerde epilepsiyi indükleme sürecini göstermektedir. PTZ'nin tekrarlanan intraperitoneal uygulaması, klorür iyonu akışını inhibe ederek, inhibitör nörotransmisyonu bozarak ve nöbetleri tetikleyen nöronlarda hipereksitabiliteye yol açarak nöbet eşiğini aşamalı olarak düşürür. Bu süreç, kronik epilepsiyi taklit eden tutuşma ve spontan nöbetlerin gelişmesine neden olur.

Farelerde Pentilentetrazol ile İndüklenen Epileptik Nöbet Modelinin Kurulması

Kaynak: Shandra, O. et al., Tekrarlayan Yaygın Travmatik Beyin Hasarının Fare Modelinde Travma Sonrası Epilepsinin İndüklenmesi.  J. Vis. Uzm.

Ağırlık Düşüşü Travmatik Yaralanma Yoluyla Bir Fare Modelinde Travma Sonrası Nöbetleri İndükleme Tekniği

Bu makale, akupunktur, epilepsi modelleri ve kemirgenlerde uyku analizinin performansını göstermektedir. Akupunktur prosedürü ve akupunktur noktalarının tanımlanması anlatılmaktadır. Epilepsiyi indüklemek için pilokarpin veya pentilentetrazol (PTZ) kullanılır. Uyku analizi için elektrokortikogram (ECoG), elektromiyogram (EMG), beyin sıcaklığı ve lokomotor aktivite kayıtları kullanılır.

Akupunktur ile Sıçan ve Farelerde Epileptiform Electrocorticograms (ECoGs) Manipülasyon ve Uyku

Bu sistematik protokol tekrarlayan hafif travmatik beyin hasarı sonrası travma sonrası epilepsi yeni bir hayvan modeli açıklar. İlk bölüm değiştirilmiş bir kilo damla modeli kullanarak travmatik beyin hasarı indüksiyon için adımlar ayrıntıları. İkinci bölümde tek ve çok kanallı elektroensefalografik veri toplama sistemleri için cerrahi yaklaşım hakkında talimatlar verilmektedir.

Tekrarlayan Diffüz Travmatik Beyin Hasarının Fare Modelinde Travma Sonrası Epilepsi Nin İndüklemesi

Bu yazıda, transgenik VGAT-Cre farelerinin elektriksel çıralarına dayanan temporal lob epilepsi modeli oluşturma yöntemleri açıklanmaktadır. Kindled VGAT-Cre fareleri, epilepsiye neyin neden olduğunu belirlemede ve yeni tedavileri taramada yararlı olabilir.

Temporal lob epilepsisi için bir model oluşturmak üzere elektriksel olarak çırılan VGAT-Cre fareleri için elektrotların hazırlanması ve implantasyonu

Amigdala, bu yapıdan kaynaklanan ve yayılan temporal lob epilepsisinde önemli bir rol oynar. Bu makale, hem kayıt hem de uyarıcı işlevlere sahip derin beyin elektrotlarının üretiminin ayrıntılı bir açıklamasını sunmaktadır. Amigdala kaynaklı medial temporal lob epilepsisinin bir modelini sunar.

Amigdala'nın Elektriksel Çırası ile Temporal Lob Epilepsi Fare Modeli Oluşturmak için Bipolar Elektrot Kullanma

Protokol, farelerde pentilentetrazol kaynaklı nöbetlerle ilişkili davranışları analiz etmek ve görselleştirmek için yenilikçi bir yöntem sunar. Bu yaklaşım, geleneksel Racine'in puanlarının ötesine geçerek, ictal davranışların çeşitliliği ve zamansal dinamikleri hakkında daha kapsamlı bir değerlendirme sağlar.

Pentilentetrazol ile İndüklenen Nöbetlerin Davranışsal Karakterizasyonu: Racine Ölçeğinin Ötesine Geçmek

Manyetik rezonans görüntüleme (MRG), genetiği değiştirilmiş farelerde fenotip incelenmesi için giderek daha popüler bir araç haline gelmiştir. Bu makale, çoklu-fare MRI kullanarak genetiği değiştirilmiş farelerde yüksek verimli fenotipleme ulaşmak için gerekli yöntemleri göstermektedir.

Çoklu-fare nöroanatomik Manyetik Rezonans Görüntüleme

AD patolojik özelliklerinden biri Amiloid β proteini pozitif nöritik plakların oluşumu. Immünohistokimyasal algılama thioflavin G boyama yöntemi kullanılarak ABC ve DAB yöntem ve floresan tespiti: Bu protokolde, transgenik AD modeli fareler nöritik plaklar tespit etmek için iki yöntem açıklanmaktadır.

Nöritik plaklar Alzheimer Hastalığı Fare Modeli Algılama

Keşfedin pentylenetetrazole kaynaklı çıra fare modelini, epilepsi ve davranışsal değişiklikleri incelemek için 129 SV fareleri kullanarak. Bu yöntem nöropsikiyatrik gelişim bozukluklarının mekanizmalarını araştırmaya olanak tanır.

Pentylenetetrazole kaynaklı çıra fare modeli

Daha fazla video keşfet