Name: Gıda kaynaklı patojen tespit etmek için bir elektrokimyasal DNA biyoalgılayıcı gelişimi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-03T12:30:00.000+00:00
Duration: 17 min 16 s
Description: Keşfedin, Vibrio parahaemolyticus tespiti için polilaktik asit ve altın nanopartiküllerle modifiye edilmiş elektrokimyasal DNA biyosensörü geliştirme yöntemini. Bu protokol gıda güvenliği uygulamalarında hızlı ve pratik patojen algılama sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar Universiti Putra Malezya destek kabul etmek istiyorum.

Not: kullanılan tüm kimyasal ve biyokimyasal reaktifleri analitik nitelikte olmalıdır ve daha fazla arıtma kullanılır. Tüm çözümler steril deiyonize su kullanarak hazırlayın. Otoklav sterilizasyon öncesinde tüm cam.
Dikkat: Lütfen denetimleri (duman hood, torpidoda) mühendislik kullanımı da dahil olmak üzere laboratuvar faaliyetleri gerçekleştirirken tüm uygun güvenlik yöntemleri kullanın ve kişisel koruyucu donanımları (koruyucu gözlük, eldiven, önlük, tam uzunlukta pantolon, Kapalı-ayak parmağı Ayakkabı).
1. imalat ve karakterizasyonu, değişikliğin PLA-AuNPs kullanarak elektrot
<ol><li>
Hazırlanması ve karakterizasyonu PLA-AuNPs
	<ol>
<li>Hızlı bir şekilde 10 mL sodyum nitrat çözeltisi (38.8 mM) kaynar sulu chloroauric asit solüsyonu (1 mM) 100 mL için eklemek ve aşağı ortam sıcaklığına kadar sakin ol. Renk olan sarı, siyahımsı değişiklikler olarak başlar ve sonunda biter koyu yakut kırmızı hazırlanan AuNPs çözümünde değişiklikleri gözlemlemek.</li>
		<li>PLA granül eritme işleminin bir paslanmaz çelik kalıp yerleştirin ve onları acil yordamını izleyin 10 dakika süreyle 190 ° C sıcaklıkta onceden: PLA sayfası hazırlık kapsamında 1 dk. için 2,2 MPa basınç altında koymak onları. PLA sayfası 3 h için soğutma sonra kullanıma hazır olacak.</li>
		<li>Şiddetle karıştırma, kloroform, oda sıcaklığında 5 ml PLA sayfaların 0,68 mg geçiyoruz. Çözünmüş PLA 10 mL önceden hazırlanmış AuNPs çözeltisi ile karıştırın ve homojen oda sıcaklığında karıştırın. Homojen karışımlar ve UV-Vis, XRD, TEM ve FESEM ile EDX ile karakterize sonra PLA-AuNPs gösterilir olabilir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Hazırlık ve değiştirilmiş Serigrafi karbon elektrot karakterizasyonu Not: Bu çalışmada kullanılan SPCE üç elektrot sistemi oluşur: bir sayaç elektrot, karbon çalışma elektrot ve bir Ag/AgCl referans elektrot.<ol>
<li>Hızlı bir şekilde pipet 25 µL PLA-AuNPs SPCE ve daha sonra hava üzerine homojen çözüm kuru 24 kullanılmadan önce s.</li>
		<li>Mamüllerinin değiştirilmiş elektrotlar karakterize içinde potasyum ferro siyanür, SPCE/PLA-AuNPs (K3[Fe(CN)6]3 -/4 -) aktif yüzey alanı, elektrokimyasal empedans spektroskopisi, tekrarlanabilirlik, ölçmek için tekrarlanabilirlik ve istikrar30.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. elektrokimyasal DNA biyoalgılayıcı gelişimi
<ol><li>
Sonda hazırlık Not: SsDNA sonda ve tamamlayıcı DNA dizileri dayalı bilgi biyoteknoloji bilgi (NCBI) veritabanı için Milli Merkezi olarak seçilmiştir.<ol>
<li>Sentetik oligonucleotides (20-mer ssDNA sonda, 20-mer tamamlayıcı DNA, 20-mer eşleşmeyen DNA ve 21-mer tamamlayıcı DNA) liyofilize toz ticari laboratuvarları, aşağıdaki dizileri dayalı olarak satın alın: thiolated ssDNA sonda: 5 ' - / 5ThioMC6-D/CGGATTATGCAGAAGCACTG - 3 ' tamamlayıcı DNA: 5 ' - CAGTGCTTCTGCATAATCCG - 3 ' bir Bankası eşleşmeyen DNA: 5 ' - CAGTGCTTCTGC ṪTAATCCG - 3 ' Üç-base eşleşmeyen DNA: 5 ' - CAGTGCTTCT Ċ ṪṪTAATCCG - 3 ' tamamlayıcı DNA: 5 ' - CGCACAAGGCTCGACGGCTGA - 3 '</li>
		<li>Tüm oligonucleotides (100 µM) hisse senedi çözümler analitik bölümlerini içine bölünmüş bir steril TE çözüm (10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 7.5) kullanarak hazırlayın. Bu-4 ° C'de tutmak ve uygun dilutions kullanmak için sadece önceden yapın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
İmmobilizasyon ve hibridizasyon duruma getirilmesi Not: Bu çalışma için kullanılan PLA-AuNPs SPCE/PLA-AuNPs gösterilir, modifiye bir SPCE ve bir damla döküm yöntemi DNA immobilizasyon ve hibridizasyon için kullanıldı.<ol>
<li>İlk olarak, thiolated ssDNA sonda SPCE/PLA-AuNPs üzerinde 25 µL hareketsiz ve sonra hava kuru bu oda sıcaklığında 24 h için sonra bu sonunda SPCE/PLA-AuNPs/ssDNA gösterilir. Üç faktör kullanarak optimizasyon immobilizasyon durumun belirleyin: ssDNA (0.2 1.4 µM arasında), saat (210 dakika 30 arasında) ve sıcaklık (75 ° C-25 arasında değişen) konsantrasyon.</li>
		<li>SPCE/PLA-AuNPs/ssDNA-sonra o nihayet SPCE/PLA-AuNPs/dsDNA gösterilir hibridizasyon olay gerçekleştirmek için yüzey için tamamlayıcı DNA'ın 25 µL pipet. En iyi duruma getirme (5 ila 30 dakika arasında) zaman ve sıcaklık (75 ° C-25 arasında değişen) iki faktör üzerinden hibridizasyon durumu belirlemek.</li>
		<li>İmmobilize bırakın ve 20 µM MB 30 dakika süreyle melezleşmiştir elektrotlar 0,5 M ABS ile yıkayarak olmayan özellikle adsorbe DNA ve aşırı MB kaldırmak/deiyonize su ile durulama ve 20 mM NaCl (pH 4.5). MB azaltma DPV tekniği kullanarak en yüksek akım ölçüsü. 0.1 M PBS (pH 7) kullanarak DPV ölçüm yürütmek hiçbir gösterge içeren.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Fabrikasyon DNA biyoalgılayıcı karakterizasyonu
	<ol>
<li>SPCE/PLA-AuNPs 20 µM MB 30 dk içinde bırakın, yıkama 0.5 M ABS/20 mM NaCl (pH 4.5) ve o zaman ölçme önce deiyonize su ile durulayın. Sonda DNA, tamamlayıcı DNA, eşleşmeyen DNA ve tamamlayıcı DNA örnekleri de dahil olmak üzere tüm etkileşimler için benzer bir yordamı izleyin.</li>
		<li>Elektrokimyasal azaltma ölçmek. Not: Ticari olarak imal edilmiş bir Autolab arabirimi yazılım programıyla DPV şiddetindeydi. 0,005 V, Modülasyon genlik 0,05 V ve 7.73 mVs-1 0.1 M PBS (pH 7), tarama hızı, potansiyel bir adımla V, 0,25 -0,5 V değişen bir potansiyel gerçekleştirilen MB elektrokimyasal azaltma DPV ölçümleri hiçbir gösterge içeren. Seçicilik, hassasiyet, tekrarlanabilirlik ve ısı dayanımı fabrikasyon DNA biyoalgılayıcı, daha da incelenmiştir. Bildirilen sonuçlar olarak ortalama değer ölçüleri içinde üç çoğaltır sunuldu.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. gerçek örnekleri kullanarak fabrikasyon DNA biyoalgılayıcı doğrulama
<ol><li>Bakteri suşları hazırlanması
	<ol>
<li>Deniz ürünleri31,32 onların önemli kirlilik dayalı bakteriyel örnekleri seçin. Not: V. parahaemolyticus olarak başvuru suşları ve 8 diğer bakteri suşları (Campylobacter jejuni, Listeria Monositogenez, Salmonella typhimurium, Salmonella enterit, Klebsiella pnömoni, Escherichia coli O157: H7, Bacillus cereusve Vibrio alginolyticus) ortak gıda kaynaklı patojen istihdam elektrokimyasal DNA biyoalgılayıcı doğrulama Bu çalışma için.</li>
		<li>Rutin bir alt kültür onların anılan sıraya göre agar bakteri suşlarının iki haftada canlılığı korumak, Tablo 1 kültür koşulları için başvurmak için kuralları.</li>
		<li>Onları dondurma işlemi sırasında zarar verebilir buz kristalleri oluşumunu engelleyerek bakteri gliserol korur gibi %20 (v/v) gliserol-80 ° C'de içeren onların anılan sıraya göre artan et suları içinde bakteri suşlarının uzun vadeli koruma korumak. Ardından, gliserol stokları korunmuş bakteriyel hücre kültüründe bir döngü ilgili broths aşılamak. Et suları ilgili büyüme zaman ve sıcaklık göre bakteri canlandırmak gerek zaman kuluçkaya.</li>
		<li>Dilutions bir dizi elde edilen mikroorganizmalar numaralandırmak için bir forma plaka tekniği33, bir standart ve iyi bilinen bir yöntemi kullanarak parahaemolyticus V. hücre sayısını belirle.<ol>
<li>Kültür parahaemolyticus V. Trypticase soya suyu (TSB + % 3 NaCl) 140-rpm sallayarak koşuldaki 37 ° C'de. O zaman, bakteri hücre kültürü 1 mL TSB + % 3 9 mL transferi NaCl 10-1 seyreltme faktörü elde etmek için.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Bu dokuz kez en çok 10-10 seyreltme faktörü tam bir dizi elde etmek için tekrarlayın. Ardından, her seyreltme faktörü (10-10için 10-1 ' den başlayarak) 0.1 mL bir Vibrio'nın seçici agar plaka sayma, sırasıyla koloni için yayıldı. Plakayı 24 h 37 ° C'de inkübe kuluçkaya.</li>
		<li>Bir koloni sayaç bireysel kolonileri saymak ve sonra geri-(sayısı x seyreltme faktörü CFU/pipetted tutar) mililitre yoğunluğu (CFU mL-1) koloni oluşturan birim almak için hesaplamak için kullanın. Bakteri hücre süspansiyonlar CFU mL-1 absorbans karşı kalibrasyon komplo birimleri (CFUs) oluşturan colony konsantrasyonu türetmek.</li>
	</ol></li>
	<li>PCR tahlil hazırlanması
	<ol>
<li>Genomik DNA değiştirilmiş bir takip lizis yordamı34haşlanmış ayıklayın. Bireysel bir bakteriyel agar medyada süzün ve suyu medya, kendi göreli büyüme durumunu 140 bir koşul sallayarak rpm kuluçka tarafından takip aşılamak ilk, çizgi.</li>
		<li>Et suyu 1 mL kültürünün bir mikro santrifüj tüpüne pipette. Bu 4830 x g ve granül elde etmek için 1 dakika için 4 ° C, santrifüj kapasitesi. Steril TE arabelleği yaklaşık 500 µL re-süspansiyon ile Pelet için kullanın. Elde edilen süspansiyon için 10 dak hold 98 ± 2 ° C Isıtma blok ve hemen hücreleri parçalayıcı ve DNA'yı serbest bırakmak 10 min için-18 ° C'de chill.</li>
		<li>Genomik DNA 4830 x g ve açık bir süspansiyon elde etmek ve daha fazla kullanmak için-20 ° C'de süpernatant tutmak için 3 dakika için 4 ° C, santrifüj kapasitesi. Biophotometer ölçüm 260 bir dalga boyu, UV emme ile kullanmak nm (nükleik asitler dalgaboyu ışık emici) olarak ve aynı zamanda bir dalga boyu 280 nm (ışığın dalga boyu emici proteinler) olarak konsantrasyon ve ayıklanan saflığı belirlemek için genomik DNA ve standart biyokimyasal deneyleri35 kullanarak ve onları 16S rRNA gen sıralama36tarafından doğrulama tüm suşların tanımlamak. Son olarak, 92 ° c için 2 dk genomik DNA tabiatını ve hızla buz su biyoalgılayıcı için uygulamadan önce sakin ol.</li>
		<li>Daha fazla varlığı parahaemolyticus onaylamak toxR gen hedeflemek için PCR kullanarak. Bir thermocycler bir astar çift (5'-GTCTTCTGACGCAATCGTTG-3' ve 5'-ATACGAGTGGTTGCTGTCATG-3') kullanarak bu yordamı gerçekleştirin. PCR güçlendirme 25 µL steril su (15,5 µL), arabellek (5 µL), astar (1 µL, 10 µM), dNTP mix (1 µL), DNA şablonu (2 µL) ve Taq DNA polimeraz (0.2 µL, 10 x) oluşan toplam reaksiyon hacmi içinde en iyi duruma getirme.</li>
		<li>Bileşenleri karıştırın ve amplifikasyon 30 döngüleri için programlanmış bir thermocycler hedef sırada PCR amplifikasyon düzenlemek. Bizim çalışmada, her döngüsü üç adım reaksiyonlar i.eoluşuyordu., ilk denatürasyon (94 ° C, 3 dk) denatürasyon (94 ° C, 1 dk.), tavlama (63 ° C, 1,5 dk) ve son uzantısı (72 ° C, 7 dk) tarafından takip uzantısı (72 ° C, 1,5 dk), 30 döngüleri izledi.</li>
		<li>Güçlendirilmiş ürünler ve % 1.5 özel jel elektroforez ile boyutlarını belirleyin. Ticari olarak üretilen jel dokümantasyon sistemi ile jel çekim.</li>
	</ol></li>
	<li>Cockle örnekleri hazırlanması
	<ol>
<li>Taze örneklerini almak. Not: Bizim taze istiridye (Anadara granosa) Serdang, İstanbul, ıslak pazarda elde edilen ve hızlı bir şekilde bir buz soğutucusu kutusunda analiz için laboratuvara getirdi. Örnekleri 2 Grup, yani tedavi ve tedavi edilmezse grup daraltan düzgün soğuk hava deposu yerleştirerek kadar hasat başından itibaren hasat edildi varsayarak bölün.</li>
		<li>Tarak tedavi grubunda 24 h, 4 h önce DNA ekstraksiyon için 20 ° C'de UV ışığa maruz kalma ardından için-20 ° C'de depolayarak önceden tedavi. Not: Donma sıcaklığı ve kontrollü için kullanılan UV Işınlarına maruz kalma grup öldürür ya da en azından daraltan içinde doğal olarak biriken parahaemolyticus V. sınırlar. Taze daraltan gerçek durumunu taklit etmek için bu çalışmada kontrollü durumda amacı olduğu gibi 70 ° C daha yüksek bir pastörizasyon rejim geçerli değildir. Bu arada, laboratuvarda geldikleri gibi öncesi herhangi bir tedavi tedavi edilmezse grubundan doğrudan örnekleri analiz.</li>
		<li>Alt kültür parahaemolyticus V. ATCC 17802 TSB içinde bir tür (% 3 NaCl). Tekerlekli sandalye basketbolu uygun dilutions kaplama ile inoculum içinde hücrelerin düzeyini belirlemek (% 3 NaCl) 104 CFU mL-1 V. parahaemolyticus, bir inoculum elde etmek için CA'da. Her cockle distile suda yıkayın ve steril forseps laminar akış kabine dokular kabuğu'kaldırmak için kullanmadan önce kir ücretsiz fırçalayın.</li>
		<li>Bir homogenizer 90 ml steril TSB ile yaklaşık 10 g cockle doku örnekleri homojenize (% 3 NaCl) için 60 s. Ekle parahaemolyticus V. bilinen bir miktar homojenize örnek suyu için çivili örnekleri 9 ml. Unspiked örnekleri bir negatif kontrol kullanır. Cockle örnekleri için CA'da örneklerinin 0.1 mL kaplama tarafından çivili parahaemolyticus V. hücre sayısı tahmin etmek ve daha sonra emme biyoalgılayıcı ve PCR tahlil kullanılmak üzere, örnek 1 mL örnek microcentrifuge tüp içine DNA örneği almak için pipetting.</li>
		<li>Parahaemolyticus genomik DNA değiştirilmiş bir takip çivili ve unspiked örnekleri lizis yordamı36haşlanmış ayıklayın. Son olarak, DNA konsantrasyon ve UV emilimini 260 ile bir dalga boyu, biyo fotometre ölçüm kullanarak saflık belirlemek nm (nükleik asitler dalgaboyu ışık emici) olarak ve aynı zamanda bir dalga boyu 280 nm (olarak ışığın dalga boyu emici proteinler).</li>
	</ol></li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Bir dönüştürücü (nükleik asit veya DNA burada) için uygun biyolojik tanıma öğeler seçimi, elektrokimyasal biyoalgılayıcı bu tip başarılı geliştirme için bir çerçeve içinde önemli adımlardır dönüştürücü algılama tabakası oluşturmak için kimyasal bir yaklaşım; iletim malzeme; DNA immobilizasyon ve hibridizasyon duruma getirilmesi; ve gerçek numuneleri kullanılarak geliştirilen biyoalgılayıcı doğrulama.
Hassas ve seçici elektrokimyasal DNA biyoalgılayıcı başarılı gelişimine çekirdek, immobilizasy...

Son yıllarda genel ve bilimsel tartışmaların önemli bir konu, gıda zehirlenmesi 3 aracıları ile ilişkili: mikroorganizmaların1, kimyasal madde2ve parazitler3. Kontamine gıda ciddi sağlık sonuçları insanlar, özellikle zayıf bağışıklık sistemi, yaşlı, hamile kadınlar, bebekler ve küçük çocuklar4olanların daha yüksek risk grubundaki neden olabilir. İle daha--dan bir milyon yılda Afrika, Asya ve Latin Amerika 5 yaşın altındaki çocuklarda meydana gelen akut ishal durumlarında, gıda zehirlenmesi büyük küresel hastalık5,6 ve Dünya Sağlık Örgütü kurdu mikroorganizmaların en önemli katkıda bulunan7olarak. Vibrio parahaemolyticus en çok tanınan öldürücü suşları arasında öne çıkmaktadır. Genellikle, nehir ağzı, kıyı ve deniz ortamlarının8' bulundu, hangi yüksek tuz ortamlarda aktif hale gelir ve yetersiz mishandled pişmiş veya çiğ deniz yenen ciddi bir insan gastroenterit tipine neden bir Ayagin Gram-negatif bakteri olduğunu ürünleri9. Ayrıca, mevcut tıbbi durumlar bazı kişilerde yara enfeksiyonu, septisemi veya kulak enfeksiyonu V. parahaemolyticus10' dan doğan eğilimli onları. Parahaemolyticus V. hemolysins virülans faktörleri hastalık patogenezinde katkıda iki türlere ayrılmıştır: tdh genler tarafından kodlanmış opsonins doğrudan hemolysin (TDH) ve trh genler11tarafından kodlanmış TDH ile ilgili hemolysin. V. parahaemolyticus virülans işaretleri (tdh ile trh gen) çoğunlukla Klinik numune yerine çevre örnekler bulunur.
Parahaemolyticus koşullar, geniş bir dizi altında hayatta yeteneği hızla yanıt çevresel değişiklikler12' ye sahip olur. Onun toksisite hücre kitle13ile paralel olarak arttıkça onun yayılmasını önleme mekanizması tehlike potansiyeli dozu artarken. Daha da kötüsü, iklim değişikliği onların hücre nüfus büyüme14hızlandırmak için yeterli koşulları ile bu bakterilerin sağlamaktadır. Yüksek frekansı nedeniyle, bilhassa ticaret ve bu ürünler büyük miktarlarda15,16 ' nerede bulunurlar olduğundan deniz ürünleri imalatı gıda tedarik zinciri boyunca izlenmesi V. parahaemolyticus ihtiyacı Dünya çapında. Şu anda bakteri tespit ve izole bir dizi biyokimyasal testleri, zenginleştirme ve seçmeli medya17, immunomagnetic jelleştirici enzim bağlı gibi yöntemleri kullanarak assay (ELISA)18, darbe alan jel elektroforez (PFGE) 19, lateks aglutinasyon test ve polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) testleri20. Bu yöntemler genellikle kalifiye personel, sofistike aletleri ve kirlenme hakkında bilgileri hemen vermeyin zahmetli teknikler gerektirir. Bu ciddi bir şekilde derhal zararlı kirlenmesine ve bünyesinde uygulamalar algılama olasılığını kısıtlar. Hızlı algılama araçları olağanüstü bir meydan kalır.
Bir zaman tasarrufu, düşük maliyetli, pratik ve gerçek zamanlı analiz yöntemi21,22,23,24 sunduğundan Biosensing gıda kaynaklı patojenler tespiti için umut verici bir seçenek olarak ortaya çıkıyor . Ancak, birçok olumlu sonuçlar analit algılama çivili örnekleri ve standart çözüm biyosensörler kullanarak rağmen hala var. sulu karışımları veya organik özler25gerçek örnekler için uygulanan araştırma eksikliği Son zamanlarda, elektrokimyasal biyosensörler doğrudan ve/veya dolaylı Deoksiribonükleik asit (DNA) algılama kullanarak tamamlayıcı hedef hibridizasyon olay26 üzerinden onların özel algılama nedeniyle bilim adamları arasında artan ilgi almış , 27 , 28 , 29. bu benzersiz yaklaşımları ile karşılaştırıldığında böylece küçültme ve ticari kullanım için gelecek vaat eden bir teknoloji sunan biyosensörler, enzim tabanlı daha stabildir. İşte parahaemolyticus V. yüksek seçicilik, duyarlılık ve pratiklik, hibridizasyon sırasında DNA dizisi özgüllük dayalı algılayabilir hızlı bir araç oluşturmak için hedef çalışma bildirdi. Kimlik stratejileri polylactic asit-sağlamlık altın nano tanecikleri (PLA-AuNPs)30 ve serigrafi karbon elektrotlar (SPCEs) ile birlikte hibridizasyon göstergesi varlığında, metilen mavisi (MB) içerir. Gelişmiş algılama yapı potansiyelini daha fazla bakteri DNA lysate ve taze cockle örnekleri kullanarak keşfedilmeden.

<table><tbody><tr><td>Asetik asit</td><td>Merck</td><td>100056</td><td></td></tr><tr><td>Kloroform</td><td>Merck</td><td>102445</td><td></td></tr><tr><td>Diaminoetan tetraasetik asit</td><td>Promega</td><td>E5134</td><td></td></tr><tr><td>Dibazik sodyum fosfat ve nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9763</td><td></td></tr><tr><td>Disodyum hidrojen fosfat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>255793</td><td></td></tr><tr><td>Etanol&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>16368</td><td></td></tr><tr><td>Altın (III) klorür trihidrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>520918</td><td></td></tr><tr><td>Hidroklorik asit</td><td>Merck</td><td>100317</td><td></td></tr><tr><td>Metilen mavisi</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M44907</td><td></td></tr><tr><td>Monobazik sodyum fosfat, monohidrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S3522</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu salin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5119</td><td></td></tr><tr><td>Poli (laktik asit) reçinesi, ticari sınıf 4042D</td><td>NatureWorks</td><td>4042D</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum klorür</td><td>R& M Kimyasalları</td><td>59435</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum dihidrojen fosfat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9791</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum hekzasiyanoferrat III</td><td>R& M Kimyasallar</td><td>208019</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum asetat susuz tuz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S2889</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum klorür</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9888</td><td></td></tr><tr><td>Trisodyum sitrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S1804</td><td></td></tr><tr><td>Tris (hidroksimetil) aminometan</td><td>Fisher Scientific</td><td>T395-100</td><td></td></tr><tr><td>Tris-Base</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP152-500</td><td></td></tr><tr>Çift Boya <td>Norgen Biotek</td><td>28240</td><td></td>Agaroz jel Merck 101236<td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Bolton Agar</td><td>Merck</td><td>100079</td><td></td></tr><tr><td>Bolton Et Suyu</td><td>Merck</td><td>100079</td><td></td></tr><tr><td>CHROMagar Vibrio</td><td>CHROMagar</td><td>VB910</td><td></td></tr><tr><td>dNTP'ler</td><td>Promega</td><td>U1511</td><td></td></tr> <tr><td>ile 2X PCR Master KarışımıNükleaz içermeyen su</td><td>Thermo Scientific</td><td>R0581</td><td></td></tr><tr><td>Eozin metilen mavisi agar&nbsp;</td><td>Merck</td><td>101347</td><td></td></tr><tr><td>GelRed</td><td>Biotium</td><td>41001</td><td></td></tr><tr><td>Gliserol</td><td>Merck</td><td>104092</td><td></td></tr><tr><td>Git Taq Tamponu</td><td>Promega</td><td>M7911</td><td></td></tr><tr><td>Yükleme boyası 100 bp DNA merdiveni</td><td>Promega</td><td>G2101</td><td></td></tr><tr><td>Yükleme boyası 1kb DNA merdiveni</td><td>Promega</td><td>G5711</td><td></td></tr><tr><td>Magnezyum klorür</td><td>Promega</td><td>91176</td><td></td></tr><tr><td>Mannitol yumurta sarısı polimiksin agar</td><td>Merck</td><td>105267</td><td></td></tr><tr><td>McConkey Agar</td><td>Merck</td><td>105465</td><td></td></tr><tr><td>Besin Suyu</td><td>Merck</td><td>105443</td><td></td></tr><tr><td>Taq polimeraz</td><td>Merck</td><td>71003</td><td></td></tr><tr><td>Triptikaz Soya Suyu</td><td>Merck</td><td>105459</td><td></td></tr><tr><td>Triptikaz Soya Agar</td><td>Merck</td><td>105458</td><td></td></tr></tbody></table>

gıda kaynaklı patojen tespit etmek için bir elektrokimyasal dna biyoalgılayıcı gelişimi

Development of an Electrochemical DNA Biosensor to Detect a Foodborne Pathogen

Vibrio parahaemolyticus (V. parahaemolyticus) insan mortalite ve morbidite oranı önemli ölçüde etkileyen küresel olarak, halk sağlığı sorunları büyük bir oranda katkıda ortak bir gıda kaynaklı patojen var. Parahaemolyticus tespiti kültür tabanlı yöntemleri, immünolojik deneyleri ve moleküler tabanlı yöntemleri gibi geleneksel yöntemlerle karmaşık örnek işlem gerektirir ve zaman alıcı, sıkıcı ve pahalı. Son zamanlarda, biyosensörler umut verici ve kapsamlı algılama yöntemi ile hızlı algılama, maliyet-etkililik ve pratiklik avantajları olduğu kanıtlanmıştır. Bu araştırma parahaemolyticus V. yüksek seçicilik ve DNA hibridizasyon kullanılmasının duyarlılık ile algılama hızlı bir yöntem geliştirmeye odaklanmaktadır. Çalışma, sentezlenmiş polylactic asit-sağlamlık altın nano tanecikleri (PLA-AuNPs) karakterizasyonu kullanarak x-ışını kırınım (XRD), ultraviyole görünür spektroskopisi (UV-VIS), transmisyon elektron mikroskobu (TEM), alan emisyon elde edildi Elektron mikroskobu (FESEM) ve çevrimsel Voltammetry (CV) tarama. Biz de daha fazla istikrar, hassasiyet ve tekrarlanabilirlik PLA-AuNPs in test dışarı taşıdı. PLA AuNPs sulu çözüm ses yapısını stabilize nano tanecikleri kurdu bulduk. Biz de duyarlılık daha küçük bir ücret transferi direnç (Rct) değer ve aktif yüzey alanı (0,41 cm2) artış sonucunda geliştirilmiş gözlenen. Bizim DNA biyoalgılayıcı gelişimi PLA-AuNPs ve redoks göstergesi olarak metilen mavisi (MB) kullanarak bir Serigrafi karbon elektrot (SPCE) değişiklik dayanıyordu. İmmobilizasyon ve hibridizasyon olayları fark nabız voltammetry (DPV) tarafından değerlendirildi. Tamamlayıcı, tamamlayıcı bulduk ve uyumsuz oligonucleotides özellikle tarafından uydurma biyoalgılayıcı ayırt edildi. Ayrıca çeşitli gıda kaynaklı patojenlere karşı olan çalışmalar ve parahaemolyticus V. kimlik taze istiridye içinde güvenilir bir şekilde duyarlı algılama gösterdi.

AuNPs oluşumu ile sodyum sitrat mevcut sulu çözüm renk değişikliği ile ortaya çıktı. Bu rengi açık sarı bir derin yakut kırmızı değiştirmek için neden oldu. PLA-AuNPs nesil yüzey plasmon rezonans (SPR) en yüksek büyüme bulunduğu yaklaşık 540 UV-vis spectra (Şekil 1) üzerinden teyit edildi nm. Oluşumu ve PLA-AuNPs varlığını parçacık boyutu37bağlı olarak 500-600 nm dalga boyu aralıkları belirtilen. AuNPs ve PLA-AuNPs XRD şekillerinin <st...

Vibrio parahaemolyticus algılamak için polylactic asit-sağlamlık, altın nano tanecikleri değiştirilme tarihi, Serigrafi karbon elektrot oluşan bir elektrokimyasal DNA biyoalgılayıcı geliştirilmesi için bir protokol sunulmuştur.

Gıda kaynaklı patojen tespit etmek için bir elektrokimyasal DNA biyoalgılayıcı gelişimi

Vibrio parahaemolyticus (V. parahaemolyticus) is a common foodborne pathogen that contributes to a large proportion of public health problems globally, ...

Gıda kaynaklı patojenler, küresel olarak halk sağlığı sorunlarının büyük bir kısmına katkıda bulunmakta ve bu da insan ölüm ve morbidite oranını önemli ölçüde etkilemektedir. Gıda kaynaklı patojenlerin tespiti için kullanılan geleneksel yöntemler, karmaşık numune işlemleri gerektirir ve zaman alıcıdır. Son zamanlarda, biyosensörlerin hızlı algılama ve pratiklik avantajları ile umut verici ve kapsamlı bir algılama yöntemi olduğu kanıtlanmıştır.Biyosensörlerin geliştirilmesi, polilaktik asit ile stabilize edilmiş altın nanopartiküller ile modifiye edilmiş elektrot üzerine kuruludur. Serigrafi baskılı karbon elektrot, çalışma elektrodu aktif yüzey alanını artırmak için modifiye edildi. Redoks kompleksi olarak kullanılan metilen mavisi, hareketsizleştirilmiş prob DNA'sının tek sarmallı DNA'sı ile güçlü bir bağa sahiptir.Bu yüksek afinite ilişkisi, yüksek bir tepe akımı ile temsil edilir. Tek sarmallı DNA'nın tamamlayıcı dizisi ile hibridizasyonu, bağlı metilen mavisi moleküllerinin yerini alır, bu da diferansiyel darbe voltametrisinin akımını azaltır. Bunun nedeni, guanin bazları arasındaki ulaşılamayan etkileşimin neden olduğu, tamamlayıcı çift sarmallı DNA ile modifiye elektrotun yüz

development-an-electrochemical-dna-biosensor-to-detect-foodborne

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Trichothecenes (insan sağlığı için endişe mikotoksinler) rekabetçi bir immünokimyasal yöntemi ve bir final elektrokimyasal algılama dayalı yeni geliştirilen bir tarama yöntemi kullanılarak tespit etmek için bir protokol olduğunu göstermiştir.

Mikotoksin Algılama ELIME (Enzim İmmüno Manyetik Elektrokimyasal Bağlantılı) Yöntem

"E-DNA" sensörleri, reagentless, kan ve diğer karmaşık matrisler doğrudan meydan bile iyi bir performans elektrokimyasal biyosensörler, nükleik asit, protein ve küçük molekül analitler geniş bir algılama için adapte edilmiştir. Burada bu tür sensörlerin üretimi ve kullanımı için genel bir prosedür mevcut.

Nükleik Asitler, Proteinler ve Küçük Moleküller Reagentless Algılama Elektrokimyasal DNA Biyosensörler Fabrikasyon

Biz son zamanlarda basit bir bakteriyel tespiti için floresan assay "mix-ve-okuma" kurmak için uygulanabilir Flourogenik DNAzyme probları üretmek için yeni bir yaklaşım bildirdin. Bu özel DNA sondaları böylece floresans sinyali kuşağa bakteriyel algılama çevirme belirli bakteri tarafından üretilen ham hücre dışı karışımı (CEM) varlığında, bir kromofor-değiştirilmiş-DNA RNA kimerik substratın bölünme katalize. Bu yazıda, "RFD-EC1" ifade belirli bir DNAzyme prob modeli bakterinin tespiti için...

Flourogenik DNAzymes kullanarak Bakterilerin Tespiti

Biz hızlı bakteri bulunması ve belirlenmesi için bir elektrokimyasal sensör test yöntem açıklanmaktadır. Tahlil, ribozomal RNA (rRNA) türe özgü dizileri için DNA oligonükleotid probları yakalama fonksiyonuna sahip bir sensör dizisi içerir. Yakalama prob ve yaban turpu peroksidaz bağlı DNA oligonükleotid dedektör prob ile hedef rRNA Sandwich melezleme ölçülebilir bir amperometrik akım üretir.

Elektrokimyasal Sensörler kullanarak Bakteriyel Algılama ve Tanıma

Kaynak: Barber, A. E., ve diğerleri. Ateşli silah kalıntısının varsayımsal tespiti için yeni bir bakteriyel biyosensörün hazırlanması ve uygulanması. J. Vis. Uzm. (2019).Bu video, bakteriyel bir biyosensör kullanılarak spesifik analitlerin tespitini göstermektedir. Analite duyarlı bir promotör altında kırmızı floresan protein (RFP) genine sahip bir plazmit taşıyan bir bakteri kültürü alınır. Test yüzeyi iyice silindikten sonra, mendilin küçük bir bölümü kültüre daldırılır ve inkübe edilir.

Bakteriyel Biyosensör Kullanarak Hedef Analitin Tespiti

Bu videoda, nanosensörler kullanarak gıda ve su numunelerindeki bakteriyel kirleticileri tespit etmek için kullanılan bir teknik gösterilmektedir. Hedef patojenik bakteriler, manyetik gevşeme ve floresan emisyon modalitelerinin bir kombinasyonu ile tespit edilir.

Manyeto-floresan nanosensörler kullanarak bakteriyel kontaminasyonu tespit etme

Bakterilerin hızlı tespiti için bir etiket içermeyen optik biyosensör sokulur. Biosensor direkt olarak yüzey üzerine, hedef bakteri hücreleri yakalamak için tasarlanmış bir nano yapılı gözenekli Si, dayanmaktadır. Bu yakalama problar olarak, gözenekli transdüktörün üzerine immobilize monoklonal antikorları kullanır. Çalışmalarımız (örneğin, hücre liziz gibi) önceden bir numune işleme ile birkaç dakika içinde, düşük bakteriyel konsantrasyonlarının saptanması için, bu biyosensör...

Optik Algılama E. coli Bakteri

RNA parçalayan DNAzime, üreaz ve manyetik boncuklardan yararlanan modifiye bir turnusol testi kullanarak E. coli'nin kolorimetrik tespiti için bir protokol açıklıyoruz.

Turnusol Testi kullanarak Bakterilerin Kolorimetrik Tespiti

Hızlı algılama özellikle patojenik bakterilerin manyetik gevşeme ve floresan emisyon modaliteleri kombinasyonu ile hedef ve bu protokol genel amacı, düşük maliyetli, taşınabilir için fonksiyonel nanosensors sentez etmektir.

Gıda kaynaklı patojen tarama kullanarak Manyeto-floresan Nanosensor: E. Coli O157: H7 hızlı tespiti

Salmonella spp. /Shigella spp. ortak patojenler için ishal atfedilen. Burada, biz yüksek üretilen iş platformu Salmonella spp. testi ile taranması için tarif / gerçek zamanlı PCR kullanarakShigella spp. rehberli kültürü ile kombine.

Salmonella spp. testi ile taranması için yüksek üretilen iş platformu /Shigella spp.

Elektrowetting tabanlı dijital mikroakışkan, manipülasyonunu kolaylaştırmak için mikrolitre hacimli damlacıkların görünür temas açısında voltaj güdümlü bir değişiklik kullanan bir tekniktir. Bunu fonksiyonel manyetik boncuklarla birleştirmek, enzime bağlı İmmünosorbent Test (ELISA) kullanılarak numune hazırlama ve patojenlerin tanımlanması için birden fazla laboratuvar ünitesi operasyonunun entegrasyonunu sağlar.

Otomatik Enzimbağlantılı İmmünosorbent Assay için Elektrowetting tabanlı Dijital Mikroakışkanplatformu

Keşfedin, Vibrio parahaemolyticus tespiti için polilaktik asit ve altın nanopartiküllerle modifiye edilmiş elektrokimyasal DNA biyosensörü geliştirme yöntemini. Bu protokol gıda güvenliği uygulamalarında hızlı ve pratik patojen algılama sağlar.

Gıda kaynaklı patojen tespit etmek için bir elektrokimyasal DNA biyoalgılayıcı gelişimi

Daha fazla video keşfet