Name: Kolesterol parçacıkları morfolojisi oransal olarak Lipid düşürücü ilaçlar farklı etkileri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-10T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 15 s
Description: Keşfedin, plak dizisi yöntemiyle lipid düşürücü ilaçların kolesterol parçacıklarının morfolojisi üzerindeki etkilerini. Bu yöntem, ateroskleroz tanısı için biyobelirteçlerin belirlenmesine yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser bir Plaxgen araştırma tarafından finanse edildi grant SM (PLX-1008) verilmiştir. Palo Alto tıbbi araştırma Vakfı Araştırma Enstitüsü ateroskleroz konulardan IRB onay altında serum numuneleri toplamak için teşekkür ediyoruz.

1. hazırlık floresan etiketli kolesterol ve Lipid düşürücü ilaçlar Not: floresan etiketli kolesterol toplamları ve statinler hazırlanan bizim önceki makalede açıklandığı gibi 21. lütfen Malzemeler tablo düşsel Akış Sitometresi, kimya Analizörleri ve veri analiz yazılımı bu çalışmada kullanılan reaktifler, ilgili ayrıntılar için bkz:.
<ol><li>Liyofilize kolesterol floresan etiketli solubilize (1 mg, Ex / Em 495 nm/507 nm =) tozu 0 alkol 1 ml.</li>
	<li>Örnek 2.040 x g de 3 dk santrifüj kapasitesi ve plak dizi tahlil çözünür Floresans etiketli kolesterol toplamları içeren supernatants kullanın.</li>
	<li>Uyuşturucu hazırlanması için ayrı ayrı simvastatin, lovastatin, atorvastatin, ezetimibe ve omega-3 yağ asidi % 100 alkol 1 ml tozlar (2 mg) solubilize.</li>
	<li>Tahlil uyuşturucu içeren supernatants 2.040 x g de 3 dk aralıklarla sonra kullanın.</li>
	<li>Tozlar (2 mg) fluvastatin, rosuvastatin, niasin, solubilize benzer şekilde, tek tek ve fibrate hisse senedi bir çözüm olarak 2 mg/mL deiyonize su 1 ml.</li>
	<li>Uyuşturucu plak dizi tahlil içeren supernatants 2.040 x g de 3 dk aralıklarla sonra kullanın.</li>
</ol> 2. Plak dizi tahlil inceleme In Vitro kolesterol parçacıkları oluşumu için <ol><li>Kullanım kimya analizörü-1 (bakınız tablo reçetesi plak dizi tahlil kolesterol parçacıkları oluşumu için ayarlamak için). Tahlil yuvarlak bir alt bölüm 1'de hazır reaktifler kullanarak düşük protein bağlayıcı 96-şey plaka gerçekleştirin. 200 µL her kuyuda son tepki hacmindeki korumak ve tüm deneyleri nüsha gerçekleştirmek.
	<ol><li>Önce yük 194.5 µL fosfat, arabelleğe alınmış serum (PBS) için her şey.</li>
		<li>Her şey, her lipid düşürücü ilaç çözüm 2.5 µL (5 µg) eklemek ve 30 plaka sallamak için düzgün ilaç çözüm karıştırmak için kimya analizörü-1 tepki tabağa yerleştirerek s. Hiç uyuşturucu negatif kontrol örnekleri eklenir.</li>
		<li>Son olarak, her şey için 2 µL (2 µg) floresan etiketli kolesterol toplu çözüm ekleyin ve 30 plaka sallamak kimya analizörü-1 tepki tabağa yerleştirerek s.</li>
		<li>Plaka 2 h 37 ° C ve 200 devir/dakika olarak ayarlamak için bir laboratuvar shaker üzerinde kuluçkaya.</li>
		<li>Kuluçka sonra Akış Sitometresi Imaging tarafından parçacıklar görüntülerini elde.</li>
	</ol></li></ol> 3. Görüntüleri, kolesterol parçacıkları kullanarak Imaging Akış Sitometresi yakalama <ol><li>doğru araç ayarları yüklemek için veri alma şablonu aç. ' I tıklatın " dosya ", o zaman seçme " şablonunu aç … " ve şablon dosyası seçin.</li>
	<li>'I tıklatın " floş, kilit, yük " enstrüman örnek yükleme için hazırlamak için.</li>
	<li>Ne zaman " yük örnek " diyalog kutusu açılır,'ı tıklatın " Tamam " her bölüm 2'de görüntüleme Akış Sitometresi hazır örnekleri 50 µL yüklemeye.</li>
	<li>Tıklama " çalıştırmak | Kur " parçacıklar gerçek zamanlı görüntüleme alanını görüntülemek için.</li>
	Görüntüleme alanını parçacıkları iyi odakta olduğunda <li>'ı tıklatın " çalıştırmak | Elde " görüntüleri, her bir nesnenin aynı anda bir yüksek-den geçerek şekilde karanlık alan (yan dağılım/SSC), parlak alan (BF), yeşil Floresans ve sarı Floresans elde etmek için.</li>
	<li>5,000-10,000 parçacıkların her örnek almaya 3.2-3.5 arasındaki adımları yineleyin.</li>
	<li>Nesne floresan yoğunluğu ve morfolojik varyasyon belirlemek için görüntü analiz yazılımı kullanarak tüm raw görüntü dosyalarını çözümlemenize.
	<ol><li>'I tıklatın " araçlar " düğmesi görüntü analiz yazılımı üstündeki sonra seçin " toplu veri dosyaları " aþaðý açýlan menüsünden, hangi açılacaktır " toplu işlemleri " penceresi.</li>
		<li>İçinde " toplu işlemleri " pencere,'ı tıklatın " Ekle toplu " düğme, hangi-ecek açık " bir toplu iş tanımlayın " penceresi.</li>
		<li>İçinde " bir toplu iş tanımlayın " pencere,'ı tıklatın " dosyaları ekle " düğme ve raw resim dosyalarını seçin, tıklatın " şablon " düğmesi ve uygun veri çözümleme şablon dosyası seçin sonra seçin " Tamam " ve " gönder toplu işlemleri " işleme ve raw resim dosyalarını analiz başlamak için.</li>
	</ol></li></ol> 4. Saf kolesterol parçacıkları üzerinde plak dizi tahlil dayalı değerlendirme, Lipid düşürücü ilaçlar etkisi <ol><li>2.1, adımda anlatıldığı gibi gerçekleştirmek arıtılmış VLDL, LDL ve HDL lipoproteinler/parçacıklar kullanarak kolesterol parçacıkları oluşumu tahlil. Plak dizi tahlil bir 96-şey tabak içinde gerçekleştirmek.
	<ol><li>İlk olarak, Bütün wells PBS ile yük; 200 µL son hacim için her iyi kullanın.</li>
	</ol></li> <li>Negatif kontrol için 4 µg VLDL, LDL, eklemek veya HDL proteinler/parçacıklar tek tek her şey ilaç kullanmadan ve 30 plaka sallamak s.
	<ol><li>Lipid düşürücü ilaç etkisi inceleyerek için 4 µg VLDL, LDL, eklemek veya HDL proteinler/parçacıklar tek tek her şey ve 30 plaka sallamak s.</li>
		<li>4 µg VLDL, LDL veya HDL ile eklendi kuyular için 2.5 µL (5 µg) ezetimibe, lovastatin, simvastatin veya Niasin çözüm ekleyin ve 30 plaka sallamak kimya analizörü-1'yerleştirerek s.</li>
		<li>Son olarak, 2 µL (2 µg) kolesterol Floresans etiketli toplu çözüm için tüm wells ekleyin ve 30 plaka sallamak kimya analizörü-1 tepki tabağa yerleştirerek s.</li>
	</ol></li> <li>37 ° C ve 200 devir/dakika olarak ayarlamak bir laboratuvar shaker 2 h plaka kuluçkaya.</li>
	<li>Aşağıdaki adımları 3.1-3.5 görüntüleme Akış Sitometresi kullanarak örnekleri elde.</li>
	<li>3.7 adımda anlatıldığı gibi görüntü analiz yazılımı kullanarak raw görüntü dosyalarını çözümlemenize.</li>
	<li>Analiz şablonunda, kolesterol parçacıkları altgrupları tanımlanması için aşağıdaki gating şemasını kullanın.
	<ol><li>Yeşil kanal doymuş piksel sayısı (x ekseni) ve karanlık alan kanal bir arsa üzerinde doymuş piksel sayısı (y ekseni), reddetmek her iki kanaldaki bir veya daha fazla doymuş pikselleri nesneleriyle.</li>
		<li>Çizim nesneleri/parçacıklar yeşil kanal yoğunluğu (x ekseni) ve SSC yoğunluğu (y ekseni) kullanarak doymuş piksel: nesneleri düşmek birine üç bölgeler (VLDL, LDL, HDL) kendi yeşil kanal ve SSC yoğunluklarda dayalı. 
		Not: Bu kapılardan denetim arıtılmış VLDL, LDL ve HDL parçacıklar/proteinler olmadan ilaç kullanarak yapılan deneyler üretilen verilere dayanan oluşturulmuş.</li>
	</ol></li> <li>Her örnek için lipid düşürücü ilaç etkisini belirlemek için başlığı altında açıklandığı adım 6,5 olarak toplam lipoprotein partikülleri konsantrasyonları yanı sıra her subpopulation (VLDL, LDL, HDL) yüzdesi hesaplamak.
	Aşağıdaki denklemi kullanarak <ol><li>Hesaplama parçacık konsantrasyonu (parçacıklar/mL): <img alt="Equation" src="/files/ftp_upload/56596/56596eq1.jpg"> Not: VLDL, LDL ve floresan nokta-arsa bölgelerde çoğunluğuna HDL algılamak ~ onların anılan sıraya göre altgrupları ve kalan % 80'i ~ parçacıkların % 20 üst üste gating diğer bölgeleriyle.</li>
	</ol></li></ol> 5. Lipid konsantrasyonlarının Serum örneklerinde ölçümü <ol><li>kimya analizörü-2 tarafından LDL, HDL, kolesterol ve trigliserit konsantrasyonları belirlemek için yaş eşlemeli dislipidemi ve normal konular elde edilen serum numuneleri kullanın.</li>
	<li>Anormal konsantrasyon LDL, HDL, kolesterol ve trigliserid serum numuneleri alt ve üst başvuru değerleri ötesinde tespit onların konsantrasyon dayalı define.</li>
	Normal referans değer recommen <li>izleyinReaktif üretici tarafından ded: kolesterol (4-200 mg/dL), HDL (3.0-65 mg/dL), LDL (4-100 mg/dL) ve trigliserid (9-200 mg/dL).</li>
	<li>Gibi ya alt referans değeri altında veya üstünde yüksek başvuru değer kolesterol ve trigliserid için ve bunları kullanmak için tarama lipid düşürücü ilaçlar da anormal bir değere sahip serum örnekleri tanımlamak.</li>
</ol> 6. Kolesterol parçacıkları oluşumu Serum örneklerinde uyuşturucu etkisi analiz <ol><li>Kullanım kimya analizörü-1 plak dizi tahlil serum numuneleri kolesterol parçacıkları oluşumu için ayarlamak için. Tahlil bir yuvarlak alt, düşük protein bağlayıcı 96-şey plaka gerçekleştirin. 200 µL/iyi son tepki hacmi kullanın ve tüm deneyleri nüsha gerçekleştirmek.</li>
	<li>Kademeli bir şekilde reaktifler yükleyerek plaka hazırlayın.
	<ol><li>Kontrol wells hazırlayın.</li>
		<li>PBS yük 193 µL için her şey.</li>
		<li>%2,5 (v/v) hasta serumu (iyi başına yalnızca bir serum örneği) ekleyin ve 30 plaka sallamak kimya analizörü tepki tabağa yerleştirerek s.</li>
		<li>Ekleyin 2 µL (2 µg) kolesterol Floresans etiketli her kuyuya çözüm toplamak ve 30 plaka sallamak kimya analizörü-1 tepki tabağa yerleştirerek s.</li>
	</ol></li> <li>Uyuşturucu Wells'le hazırlayın.
	<ol><li>Her şey için PBS, yük 191 µL.</li>
		<li>%2,5 (v/v) hasta serumu (iyi başına yalnızca bir serum örneği) ekleyin ve 30 plaka sallamak kimya analizörü-1 tepki tabağa yerleştirerek s.</li>
		<li>Ekleyin 2 µL ezetimibe, lovastatin, simvastatin veya Niasin çözüm (4 µg) negatif kontrol wells hariç bütün wells. İyi başına yalnızca bir uyuşturucu ekleyin ve 30 plaka sallamak kimya analizörü-1 tepki tabağa yerleştirerek s.</li>
		<li>Ekleyin 2 µL Floresans etiketli kolesterol her kuyuya çözüm (2 µg) toplamak ve 30 plaka sallamak kimya analizörü-1 tepki tabağa yerleştirerek s.</li>
	</ol></li> <li>Sadece tüm wells sonra uyuşturucu yüklemek (kontrol ve uyuşturucu tedavi) ile onların anılan sıraya göre serum numuneleri yüklendikten ve floresan etiketli kolesterol bu adımın sonunda ekleyin.</li>
	<li>Bir laboratuvar shaker 37 ° C, gerekse 200 devir/dakika 2 h plaka kuluçkaya.</li>
	<li>Örnekleri 3.1-3.6 adımlarda açıklanan ayarları aşağıdaki Akış Sitometresi Imaging tarafından elde.</li>
	<li>Toplu 3.7 adımlarda açıklandığı gibi aynı şablonu kullanan tüm resim dosyaları işleme için yazılım analiz görüntü kullanın.
	<ol><li>Veri çözümlemesi gates arsa üzerinde 4.5 ve 4,6 adımlarda açıklandığı gibi çizerek.</li>
	</ol></li> <li>Lipid düşürücü ilaç etkisi/yanıt (düşük, orta ve yüksek) her örnek için belirlemek için toplam lipoprotein parçacık konsantrasyonu yanı sıra toplam parçacıklar VLDL, LDL ve HDL oluşan yüzdesi hesaplamak altgrupları.</li>
	<li>Çizim nesnesi bir çubuk grafik üzerinde VLDL, LDL ve HDL nüfus ' s parlak alan resim, uzunluğu (Uzunluk - Genişlik) ve kapı küresel ya da doğrusal bölgeleri düşülen Genişlik: nesneleri (Uzunluk - Genişlik) ile ≤ 2 µm düşmek içine küresel ve doğrusal yüzdesini hesaplamak için küresel bölge şeklinde parçacıklar.</li>
	<li>Olan ve olmayan her uyuşturucu inkübe her serum örneği için tanımlanan küresel ve doğrusal şekilli LDL ve HDL kolesterol parçacıkları yüzdesi karşılaştırın. Küresel ve doğrusal yüzdesi şeklinde SD ±2 uyuşturucu etkisi belirlenmesi için aralıkta LDL ve HDL parçacıkları her serum örneği için elde edilen onaylatılacak değerler arasında kabul.</li>
</ol>

<ol><li>Pahan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipid-lowering+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Lipid-lowering drugs.</a> Cell Mol Life Sci. 63, 1165-1178 (2006).</li>
<li>Laforest, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+low+high-density+lipoprotein+cholesterol+and+hypertriglyceridaemia+in+patients+treated+with+hypolipidaemic+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Cardiovasc+Dis%22%5BJournal%5D)">Prevalence of low high-density lipoprotein cholesterol and hypertriglyceridaemia in patients treated with hypolipidaemic drugs.</a> Arch Cardiovasc Dis. 102, 43-50 (2009).</li>
<li>Roberts, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preventing+and+arresting+coronary+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+Heart+J%22%5BJournal%5D)">Preventing and arresting coronary atherosclerosis.</a> Am Heart J. 130, 580-600 (1995).</li>
<li>Goldstein, J. L., Brown, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+century+of+cholesterol+and+coronaries%3A+from+plaques+to+genes+to+statins%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A century of cholesterol and coronaries: from plaques to genes to statins.</a> Cell. 16, 161-172 (2015).</li>
<li>Drexel, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Statins%2C+fibrates%2C+nicotinic+acid%2C+cholesterol+absorption+inhibitors%2C+anion-exchange+resins%2C+omega-3+fatty+acids%3A+which+drugs+for+which+patients%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Fundam+Clin+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Statins, fibrates, nicotinic acid, cholesterol absorption inhibitors, anion-exchange resins, omega-3 fatty acids: which drugs for which patients?</a> Fundam Clin Pharmacol. 23, 687-692 (2009).</li>
<li>Camelia, S., Anca, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Statins%3A+Mechanism+of+action+and+effects%5BTitle%5D)+AND+%22J.Cell.Mol.Med%22%5BJournal%5D)">Statins: Mechanism of action and effects.</a> J.Cell.Mol.Med. 5, 378-387 (2001).</li>
<li>Schaefer, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparisons+of+effects+of+statins+%28atorvastatin%2C+fluvastatin%2C+lovastatin%2C+pravastatin%2C+and+simvastatin%29+on+fasting+and+postprandial+lipoproteins+in+patients+with+coronary+heart+disease+versus+control+subjects%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Comparisons of effects of statins (atorvastatin, fluvastatin, lovastatin, pravastatin, and simvastatin) on fasting and postprandial lipoproteins in patients with coronary heart disease versus control subjects.</a> Am J Cardiol. 93, 31-39 (2004).</li>
<li>Meyers, C. D., Kamanna, V. S., Kashyap, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Niacin+therapy+in+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+in+Lipid%22%5BJournal%5D)">Niacin therapy in atherosclerosis.</a> Curr Opin in Lipid. 15, 659-665 (2004).</li>
<li>Phan, B. A., Dayspringm, T. D., Toth, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ezetimibe+therapy%3A+mechanism+of+action+and+clinical+update%5BTitle%5D)+AND+%22Vasc+Health+Risk+Mana%22%5BJournal%5D)">Ezetimibe therapy: mechanism of action and clinical update.</a> Vasc Health Risk Mana. 8, 415-427 (2012).</li>
<li>Leitersdorf, E., Fruchart, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+action+of+fibrates+on+lipid+and+lipoprotein+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Mechanism of action of fibrates on lipid and lipoprotein metabolism.</a> Circulation. 98, 2088-2093 (1998).</li>
<li>Backes, J., Anzalone, D., Hilleman, D., Catini, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+clinical+relevance+of+omega-3+fatty+acids+in+the+management+of+hypertriglyceridemia%5BTitle%5D)+AND+%22Lipids+Health+Dis%22%5BJournal%5D)">The clinical relevance of omega-3 fatty acids in the management of hypertriglyceridemia.</a> Lipids Health Dis. 15, 118(2016).</li>
<li>Davidson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+Significance+of+Statin+Pleiotropic+Effects+Hypotheses+Versus+Evidence%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Clinical Significance of Statin Pleiotropic Effects Hypotheses Versus Evidence.</a> Circulation. 111, 2280-2281 (2005).</li>
<li>Chinetti-Gbaguidi, G., Fruchart, J. C., Staels, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pleiotropic+effects+of+fibrates%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Atheroscler+Rep%22%5BJournal%5D)">Pleiotropic effects of fibrates.</a> Curr Atheroscler Rep. 7, 396-401 (2005).</li>
<li>McTaggart, F., Jones, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Statins+on+High-Density+Lipoproteins%3A+A+Potential+Contribution+to+Cardiovascular+Benefit+Effects+of+Statins+on+High-Density+Lipoproteins%3A+A+Potential+Contribution+to+Cardiovascular+Benefit%5BTitle%5D)+AND+%22CardiovascDrugs+Ther%22%5BJournal%5D)">Effects of Statins on High-Density Lipoproteins: A Potential Contribution to Cardiovascular Benefit Effects of Statins on High-Density Lipoproteins: A Potential Contribution to Cardiovascular Benefit.</a> CardiovascDrugs Ther. 22, 321-338 (2008).</li>
<li>Quehenberger, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Human+Plasma+Lipidome%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">The Human Plasma Lipidome.</a> N Engl J Med. 365, 1812-1823 (2011).</li>
<li>Lund-Katz, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+responsible+for+the+compositional+heterogeneity+of+nascent+high+density+lipoprotein%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Mechanisms responsible for the compositional heterogeneity of nascent high density lipoprotein.</a> J. Biol Chem. 288, 23150-23160 (2013).</li>
<li>Krauss, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipoprotein+subfractions+and+cardiovascular+disease+risk%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Lipidol%22%5BJournal%5D)">Lipoprotein subfractions and cardiovascular disease risk.</a> Curr Opin Lipidol. 21, 305-311 (2010).</li>
<li>Krauss, R. M., Burke, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+multiple+subclasses+of+plasma+low+density+lipoproteins+in+normal+humans%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Identification of multiple subclasses of plasma low density lipoproteins in normal humans.</a> J Lipid Res. 23, 97-104 (1982).</li>
<li>Rosenson, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HDL+measures%2C+particle+heterogeneity%2C+proposed+nomenclature%2C+and+relation+to+atherosclerotic+cardiovascular+Events%5BTitle%5D)+AND+%22Clinic+Chemi%22%5BJournal%5D)">HDL measures, particle heterogeneity, proposed nomenclature, and relation to atherosclerotic cardiovascular Events.</a> Clinic Chemi. 57, 392-410 (2011).</li>
<li>Madasamy, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plaque+array+method+and+proteomics-based+identification+of+biomarkers+from+Alzheimer%27s+disease+serum%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chim+Acta%22%5BJournal%5D)">Plaque array method and proteomics-based identification of biomarkers from Alzheimer's disease serum.</a> Clin Chim Acta. 441, 79-85 (2015).</li>
<li>Madasamy, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonenzymatic+Mechanism+of+Statins+in+Modulating+Cholesterol+Particles+Formation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Nonenzymatic Mechanism of Statins in Modulating Cholesterol Particles Formation.</a> Am J Cardiol. 118, 1187-1191 (2016).</li>
<li>Peter, O. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+relevance+of+the+biochemical%2C+metabolic%2C+and+genetic+factors+that+influence+low-density+lipoprotein+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Clinical relevance of the biochemical, metabolic, and genetic factors that influence low-density lipoprotein heterogeneity.</a> Am J Cardiol. 90, 30-47 (2002).</li>
<li>Weissglas-Volkov, D., Pajukanta, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+causes+of+high+and+low+serum+HDL-cholesterol%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Genetic causes of high and low serum HDL-cholesterol.</a> J Lipid Res. 51, 2032-2057 (2010).</li>
<li>Abela, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+statins+on+cholesterol+crystallization+and+atherosclerotic+plaque+stabilization%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Effect of statins on cholesterol crystallization and atherosclerotic plaque stabilization.</a> Am J Cardiol. 107, 1710-1717 (2011).</li>
<li>Nidorf, S. M., Eikelboom, J. W., Thompson, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+cholesterol+crystal-induced+inflammation+for+the+secondary+prevention+of+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Pharmacol+Ther%22%5BJournal%5D)">Targeting cholesterol crystal-induced inflammation for the secondary prevention of cardiovascular disease.</a> Cardiovasc Pharmacol Ther. 19, 45-52 (2014).</li>
<li>Thacker, S. G., Zarzour, A., Chen,, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+density+lipoprotein+reduces+inflammation+from+cholesterol+crystals+by+inhibiting+inflammasome+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol%22%5BJournal%5D)">High density lipoprotein reduces inflammation from cholesterol crystals by inhibiting inflammasome activation.</a> Immunol. 149, 306-319 (2016).</li>
<li>Kim, S. H., Lee, E. S., Lee, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+coherent+anti-stokes+Raman+Spectroscopy+images+intact+atheromatous+lesions+and+concomitantly+identifies+distinct+chemical+profiles+of+atherosclerotic+lipids%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Multiplex coherent anti-stokes Raman Spectroscopy images intact atheromatous lesions and concomitantly identifies distinct chemical profiles of atherosclerotic lipids.</a> Circ Res. 106, 1332-1341 (2010).</li>
<li>Lim, R. S., Suhalim, J. L., Miyazaki-Anzai, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+cholesterol+crystals+in+plaques+of+atherosclerotic+mice+using+hyperspectral+CARS+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Identification of cholesterol crystals in plaques of atherosclerotic mice using hyperspectral CARS imaging.</a> J Lipid Res. 52, 2177-2186 (2011).</li>
<li>Rothblat, G. H., Phillips, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-density+lipoprotein+heterogeneity+and+function+in+reverse+cholesterol+transport%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Lipidol%22%5BJournal%5D)">High-density lipoprotein heterogeneity and function in reverse cholesterol transport.</a> Curr Opin Lipidol. 21, 229-238 (2011).</li>
<li>Kontush, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HDL+particle+number+and+size+as+predictors+of+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Front+in+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">HDL particle number and size as predictors of cardiovascular disease.</a> Front in Pharmacol. , (2015).</li>
<li>Karathanasis, S. K., Freeman, L. A., Gordon, S. M., Remaley, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+changing+face+of+HDL+and+the+best+way+to+measure+it%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Chem%22%5BJournal%5D)">The changing face of HDL and the best way to measure it.</a> Clin. Chem. 63, 196-210 (2017).</li>
</ol>

Dr. Madasamy hibe desteği Plaxgen, Inc alınan ve rakip bir mali ilgi vardır. Diğer yazarlar ifşa rakip hiçbir mali ilgi alanlarına sahip.

Genel olarak, dağıtım ve kan dolaşımını VLDL, LDL ve HDL kolesterol parçacıkların fonksiyonel özellikleri esas olarak metabolik, genetik, epidemiyolojik, cep ve plazma faktörler22,23tarafından belirlenir. Bu da çalışmanın, lipid değiştirmenin etkileri inceleyerek uyuşturucu arabellek ortaya ezetimibe, simvastatin, lovastatin ve atorvastatin gibi son derece lipofilik ilaçların kolesterol parçacıkları morfolojisi üzerinde daha yüksek bir düzey karmaşıklık indüklenen yüksek hidrofilik rosuvastatin ve fluvastatin ilaçlarla gözlenen alt düzey etkisi ile karşılaştırıldığında. Bu sonuçlar iyi anlaşma statinler LDL ve HDL kolesterol parçacıkları oluşumunda tampon ve serum örnekleri21oransal olarak enzimatik olmayan mekanizması dayalı etkisini açıklayan bizim önceki çalışma ile bulunmaktadır. Buna göre bu da çalışmanın sonuçlarından bir enzimatik olmayan etki mekanizması ezetimibe, niasin, fibrate, ve kolesterol parçacıkları oluşumu oransal doğrudan bir rol oynayabilir omega-3 yağ asidi ilaçlar ortaya koydu. Uyuşturucu ve kolesterol toplamları arasındaki etkileşimler küresel ve doğrusal strand türleri Morfoloji sergilenmesi Meclisi 2-60 µm2, büyük boy kolesterol parçacıkları için yol mümkündür.
Ayrıca, saf lipoprotein partikülleri kullanarak elde edilen sonuçları kolesterol toplamları ve besteleri ve kolesterol Morfolojik özellikleri değiştirebilir VLDL, LDL ve HDL proteinler de dahil olmak üzere plazma faktörler arasındaki etkileşimleri önermek parçacıklar. Arıtılmış lipoprotein partikülleri içeren uyuşturucu tedavi sonuçları VLDL parçacıkların oluşumu LDL kolesterol parçacıkları oluşumu gözlenen etkileri kıyasla daha yüksek bir düzey uyuşturucu etkisi belirtti. Lovastatin, simvastatin ve ezetimibe uyuşturucu pro-ilaç olarak kullanılan ve deneyleri kendi dozlarda fizyolojik konsantrasyonları yüksek olabilir.
İlginçtir, VLDL, LDL ve HDL kolesterol parçacıkları oluşumu profilleri değiştirme üzerinde uyuşturucu etkisi varyasyonları gösterdi serum örneklerinin eleme, doğrusal oluşumlar üzerindeki etkileri özellikle LDL ve HDL parçacıklar şeklinde. Bu ilaçlar LDL ve HDL kolesterol parçacıkları oluşumunda dislipidemi ve yaş eşlemeli normal serum numuneleri şeklinde azaltma doğrusal olarak indüklenen. Doğrusal şekilli parçacıkların oluşumu azaltılması üzerinde gözlenen uyuşturucu etkileri daha yüksek simvastatin, ezetimibe, lovastatin ve Niasin. Kolesterol parçacıkları ile küresel ve doğrusal strand türleri Morfoloji dislipidemi ve normal serum örneklerinde tanımlaması parçacıkları ile benzer türleri Morfoloji in vivo koşullarda oluşabilir öneriyor. Önceki çalışmalarda disk ve insan ve ApoE- / - LDLR- / - fare modelleri24,25,26 aterosklerotik plaklar iğne gibi kolesterol kristaller varlığı belirledik ,27,28.
Türdeş olmayan bir karışımı ve küçük ve büyük boy HDL parçacıkları ile birlikte fonksiyonel etkinlik düzeyini ters kolesterol taşıma araçları ile onların kardiyo-koruyucu etki gösterirler gereken önemli faktörlerdir kanda dolaşan HDL parçacıklar mevcut yolu29,30. Son yıllarda yapılan çalışmalarda HDL kolesterol parçacık subfractions kolesterol sızma, anti-inflamasyon, Anti-trombotik ve anti-oksidatif gibi birden çok Biyolojik işlevleri içindeki rollerine31 elucidating için tanımlama önemini vurguladıktan . Ayrıca, çalışmalar bir dizi düşük HDL düzeyini plazma1,5,21ılımlı artan lipid düşürücü tedavi etkisi bildirdin. Buna göre bu çalışmanın sonuçlarından kolesterol parçacıkları Morfolojik özellikleri hakkında yeni bilgiler sağlar. Özellikle, dislipidemi deneklerin serum numuneleri doğrusal şekilli HDL kolesterol parçacıkları daha yüksek düzeyde tespiti onlar tanı ve lipid değiştirme etkilerini değerlendirmek için güvenilir biyomarker olabileceğini düşündürmektedir hastalarda ilaç. Ancak, daha fazla araştırma farklı türleri morfoloji ve CVD için onların dernek ile kolesterol parçacıkları daha iyi anlamak için büyük klinik numuneleri kullanılarak gereklidir.
Kolesterol parçacıkları Meclisi uyuşturucu etkisi incelenmesi için plak dizi assay olarak, biz çünkü kolesterol toplamları ve 5 µgof uyuşturucu etiketli floresan 2 µg kullanılır: (1) uyuşturucu rekabetçi kolesterol etiketli her iki floresan bağlamak ve endojen lipidler serum örneklerinde sunmak; (2) her örnek, biz büyük ebat ve şekillerde ~ 2-60 µ2den değişen içine monte 5.000-10.000 kolesterol parçacıkları elde; (3) biz uyuşturucu yanıt uyuşturucu (5 µg doz 300 ng) ve bunların yüksek dozlarda kolesterol parçacıkları oluşumu profilinde tespit değişiklik gösterdi inkübe ~ 1-%5 ile inkübe serum örnekleri arasında geniş bir varyasyon gözlenen; ve (4) kolesterol toplamları ve lipid düşürücü ilaçlar arasındaki etkileşimi enzimatik olmayan bir işlem tarafından aracılık ettiği. Bu nedenle, tahlil kullanılan reaktifler konsantrasyonları kendi fizyolojik düzeyi daha yüksek olabilir.
Sonuç olarak, başarılı bir şekilde morfoloji ve kompozisyon kolesterol oransal olarak lipid düşürücü ilaçlar geniş bir yelpazede etkisini belirlemek için bu çalışmada açıklanan yöntemi Imaging bir vitro avantajlarını göstermiştir parçacıklar. Görselleştirme ve morfolojisi lipid parçacıkların görüntü analiz algoritmaları bir takımyıldızı istihdam ederek miktarının bir yaklaşım her iki ateroskleroz ve hastalarda lipid düşürücü tedavinin sonuçları değerlendirmek için tanı yardımcı olabilir.

Birçok klinik çalışma plazma düzeyleri düşük yoğunluklu lipoproteinler (LDL) kolesterol ve düşük artış yüksek yoğunluklu lipoprotein (HDL) kolesterol, makul ses seviyelerinde azaltılmasında lipid düşürücü ilaçların yararlı etkileri göstermiştir ki birincil ve ikincil olaylar istenmeyen kardiyovasküler olaylar ateroskleroz ile ilgili1,2,3,4,5engeller. Statinler, HMG-CoA redüktaz enzim inhibitörleri, bir grup endojen kolesterol düşürmek için sıra kurşun kan6,7LDL kolesterol düzeyleri dolaşan karaciğer sentezinde engelleyin. Aynı şekilde, lipid düşürücü etkisini Niasin onun doğrudan ve noncompetitive Hepatosit diacylglycerol asiltransferaz-2, trigliserid sentezi8içinde yer alan bir anahtar karaciğer enzim inhibisyonu tarafından aracılık ettiği. Nispeten, ezetimibe9ince bağırsak epitel hücrelerinde bulunan Niemann-Pick C1-Like 1 (NPC1L1) protein bağlama yaparak eksojen kolesterol emilimini sınırlayarak LDL plazma düzeyini düşürür. Fenofibrate, başka bir lipid düşürücü ilaç, trigliserid plazma konsantrasyonları önemli ölçüde azaltır ve ayrıca orta LDL kolesterol ile peroxisome reseptörleri proliferatör-harekete geçirmek yolu10azalır. Ayrıca, omega-3 yağ asidi LDL11plazma düzeylerini düşürmek için onun yetenek nedeniyle anti-aterosklerotik etkisinin olmadığı bildirilmektedir.
Lipid düşürücü ilaçlar LDL kolesterol düşürücü üzerinde birincil onların etkisi ek olarak HDL düzeyi artırılması, endotel fonksiyonları geliştirmek, iltihabı azaltır ve trombosit inhibe dahil olmak üzere faydalı pleiotropic etkileri bir dizi var toplamalardan12,13,14. Ancak, HDL kolesterol parçacıkları artan ve yapısal özellikleri değiştirme bu ilaçların temel mekanizması tam olarak anlaşılamamıştır. Bu ilaçlar yaygın ateroskleroz bağlı kardiyovasküler hastalıklar (CVDs) tedavisi için reçete edilir beri Morfolojik özellikleri ve dağıtım lipid parçacıkların belirlemede olası rolleri daha ayrıntılı araştırmaya esastır. Yaklaşık 600 farklı lipidler ve 22 moleküler farklı çeşitli boyut, şekil, yoğunlukları ve besteleri15,16,17 içinde mevcut bıraktırırsanız insan plazma lipidome oluşur . Ultra-Santrifüjü, NMR ve degrade Jel Elektroforez gibi analitik yöntemleri LDL ve HDL parçacıklar ve onların subfractions18,19karakterize etmek için kullanılır. Ancak, uygulama bu yöntemlerin morfoloji ve lipid parçacıklar Meclisi oransal olarak ilaç etkisini belirlemede yönelik çalışmalar sınırlıdır. Akış Sitometresi tabanlı plak işlevsel bir biyokimyasal tahlil tespiti için geliştirilen ve görselleştirme serum lipid ve amiloid plak parçacıklar20türetilmiş dizidir. Bu çalışmada açıklanan yöntemi Imaging vitro avantajları morfoloji ve kolesterol parçacıkları tampon ve serum örneklerinde dağılımı değiştirme lipid oransal uyuşturucu etkileri tanımlaması etkinleştirin.

<table><tbody><tr><td>TopFluor floresan kolesterol</td><td>Avanti Polar lipidler</td><td></td><td>100 & mikro; l alikotlar -20 &°C'de; C</td></tr><tr><td>simvastatin (pro-ilaç)</td><td>Cayman Chemicals</td><td></td><td>mağazası 100 & l alikotlar -20 &°C'de; C</td></tr><tr><td>lovastatin (pro-ilaç)</td><td>Cayman Chemicals</td><td></td><td>mağazası 100 & l alikotlar -20 &°C'de; C</td></tr><tr><td>rosuvastatin</td><td>Cayman Kimyasallar</td><td></td><td>mağaza 100 & mikro; l alikotlar -20 &°C'de; C</td></tr><tr><td>atorvastatin</td><td>Cayman Kimyasalları</td><td></td><td>100 ve mikro depolar; l alikotlar -20 &°C'de; C</td></tr><tr><td>fluvastatin</td><td>Cayman Kimyasallar</td><td></td><td>deposu 100 & l alikotlar -20 &°C'de; C</td></tr><tr><td>ezetimibe (ilaç yanlısı)</td><td>Cayman Chemicals</td><td></td><td>mağazası 100 & l alikotlar -20 &°C'de; C</td></tr><tr><td></td><td>Niasin MilliporeSigma</td><td></td><td>mağazası 100 ve mikro; l alikotlar -20 &°C'de; C</td></tr><tr><td>fibrat</td><td>MilliporeSigma</td><td></td><td>deposu 100 ve mikro; l alikotlar -20 &°C'de; C</td></tr><tr><td>omega-3 yağ asidi</td><td>MilliporeSigma</td><td></td><td>store 100 & l alikotlar -20 &°C'de; C</td></tr><tr><td>saflaştırılmış VLDL proteinleri/partikülleri</td><td>Lee Bio</td><td></td><td></td></tr><tr><td>saflaştırılmış LDL proteinleri/partikülleri</td><td>Lee Bio</td><td></td><td></td></tr><tr><td>saflaştırılmış HDL proteinleri/partikülleri</td><td>Lee Bio</td><td></td><td></td></tr><tr><td>İnsan yaşına uygun serum</td><td>Dx Biyonumuneler</td><td></td><td></td></tr><tr><td>İnsan ateroskleroz serumu</td><td>Bioserve</td><td></td><td></td></tr><tr><td>İnsan normal serumu</td><td>Stanford Kan merkezi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>LDL ölçüm reaktif paketi</td><td>Roche Diangostics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HDL ölçüm reaktif paketi</td><td>Roche Diangostics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Toplam kolesterol ölçümü</td><td>Roche Diangostics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>96 oyuklu mikrotitre plakaları</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trigliserit ölçümü</td><td>Roche Diangostics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Amnis Görüntüleme Akış sitometresi</td><td>Amnis Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IDEAS görüntü analiz yazılımı</td><td>Amnis Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kimya Analizörü-1, ChemWel 2902</td><td>Awarness Teknoloji</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kimya Analizörü-2, Intergra 400</td><td>Roche Diangostics</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

kolesterol parçacıkları morfolojisi oransal olarak lipid düşürücü ilaçlar farklı etkileri

Differential Effects of Lipid-lowering Drugs in Modulating Morphology of Cholesterol Particles

Lipid düşürücü ilaçlar hastalarda dislipidemi tedavisinde düşük yoğunluklu lipoproteinler (LDL) seviyesi ve düşük yüksek yoğunluklu lipoprotein (HDL) kolesterol plazma artış makul ses seviyelerinde olarak önemli bir azalma yol açar. Ancak, bu ilaçların morfoloji ve kolesterol parçacıkları dağılımı değiştirme içinde olası bir rol kötü anlaşılmaktadır. Burada, Akış Sitometresi Imaging ile plak array yöntemi kullanarak kolesterol parçacıkların Morfolojik özellikleri oransal lipid düşürücü ilaç etkileri vitro değerlendirilmesi açıklayın. Kolesterol parçacıkların görüntü analizleri belirtilen lovastatin, simvastatin, ezetimibe ve atorvastatin iplikçik şeklinde parçacıkları, hem küresel hem de doğrusal oluşumu teşvik Niasin, Fibratlar, fluvastatin ve rosuvastatin neden ise Sadece küresel şekilli parçacıkların oluşumu. Sonraki, saflaştırılmış çok düşük yoğunluklu lipoprotein (VLDL) ve bu ilaçlar ile inkübe LDL partikülleri değişiklikleri kolesterol morfoloji ve görüntü doku parçacıkları altgrupları gösterdi. Ayrıca, tarama 50 serum örneklerinin doğrusal şekilli HDL kolesterol parçacıkları yaş eşlemeli normal (%11,1 ortalaması) örnekleri karşılaştırıldığında dislipidemi (%18,3 ortalaması) olan bireylerde daha yüksek düzeyde varlığı ortaya koydu. Biz de doğrusal azaltmak lipid düşürücü ilaç etkileri önemli değişimler serum numuneleri LDL ve HDL kolesterol parçacıkları oluşumu şeklinde gözlenen. Bu bulgular yanı sıra Hücre-aracılı hypolipidemic etkileri, lipid düşürücü ilaçlar doğrudan bir enzimatik olmayan etki mekanizmaları tarafından kolesterol parçacıkları morfolojisi modüle göstermektedir. Bu sonuçlar sonuçlar tanı ateroskleroz bilgilendirmek ve en uygun lipid düşürücü tedavi tahmin potansiyeline sahiptir.

Bu çalışmanın amacı kolesterol parçacıkları morfolojisi oransal vitro lipid düşürücü ilaç etkileri değerlendirmek için yapıldı. Karşılaştırma lipid düşürücü ilaçların kolesterol parçacıkları Morfolojik özellikleri oransal olarak etkileri varyasyonlar saptandı.

Kolesterol parçacıkları morfolojisi oransal olarak Lipid düşürücü ilaçlar farklı etkileri

Treatment of dyslipidemia patients with lipid-lowering drugs leads to a significant reduction in low-density lipoproteins (LDL) level and a low to ...

Bu çalışmanın genel amacı, lipid düşürücü ilaçların kolesterol partiküllerinin morfolojik özelliklerini bir plak dizisi yöntemi kullanarak modüle etmedeki etkisini değerlendirmek ve ateroskleroz tanısı ve ilaç etkilerini belirlemek için potansiyel biyobelirteçleri belirlemektir. Lipid düşürücü ilaçların kolesterol partikül oluşumunu modüle etmedeki rolü tam olarak anlaşılamamıştır. Burada, lipid düşürücü ilaçların, kolesterol partikül oluşumunun profillerini ve morfolojik özelliklerini değiştirmede doğrudan bir rol oynadığını gösteriyoruz.Plak dizisi tabanlı in vitro görüntüleme yönteminin diğer partikül tespit yöntemlerine göre en büyük avantajı, serum içinde lipid düşürücü ilaçların etkisini değerlendirmek için kolesterol partiküllerinin görüntülenmesine olanak sağlamasıdır. Plaxgen'in laboratuvar teknisyeni Jason Lundry, bir kimya analizörü kullanarak plak dizisi testini nasıl kurduğumuzu gösterecek. Millipore Sigma'da kıdemli bilim adamı olan Raymond Kong, görüntüleme akışı sitometrisini kullanarak numune işlemeyi nasıl yaptığımızı gösterecek.Son olarak, Plaxgen laboratuvar teknisyeni David Liu, kolesterol parçacık görüntüleri için veri analizini gösterecek. Kolesterol partikülü oluşumu için plak dizisi testini ayarlamak için bir kimya analizörü-1 kullanın. Tahlil boyunca, her bir oyuktaki son reaksiyon hacmini 200 mikrolitrede tutun ve tüm tahlilleri üç nüsha halinde gerçekleştirin.İlk olarak, yuvarlak tabanlı, düşük protein bağlayıcı 96 oyuklu bir plakanın her bir oyuğuna 194 nokta beş mikrolitre fosfat tamponlu salin veya PDS yükleyin. Her bir oyuğa, her bir lipit düşürücü ilaç çözeltisinden iki nokta beş mikrolitre ekleyin, negatif kontrol örneklerine ilaç eklenmez. Ardından, ilacı çözeltiye eşit şekilde karıştırmak için kimya analizörü-1 reaksiyon plakasına yerleştirerek plakayı 30 saniye çalkalayın.Son olarak, her oyuğa iki mikrolitre floresan etiketli kolesterol agrega çözeltisi ekleyin. Plakayı daha önce olduğu gibi kimya analizörü-30 reaksiyon plakasına yerleştirerek 1 saniye çalkalayın. Ardından, plakayı 37 santigrat derece ve 200 rpm'ye ayarlanmış iki saat boyunca bir laboratuvar çalkalayıcı üzerinde inkübe edin.İnkübasyondan sonra, akış sitometrisini görüntüleyerek parçacıkların görüntülerini elde edin. Doğru cihaz ayarlarını yüklemek için veri toplama şablonunu açın. Dosya'ya tıklayın, ardından Şablonu Yükle'yi seçin ve şablon dosyasını seçin.Cihazı numune yüklemeye hazırlamak için Yükle'ye tıklayın. Örnek Yükle iletişim kutusu açıldığında, 50 mikrolitre örneği görüntüleme akış sitometresine yüklemek için Tamam'a tıklayın. Parçacıklar görüntüleme alanında gerçek zamanlı olarak görülene kadar bekleyin.Görüntüleme alanındaki parçacıklar iyi odaklandığında, karanlık alan, parlak alan, yeşil floresan ve sarı floresan için her nesnenin görüntülerini aynı anda yüksek verimli bir şekilde almak için Al'a tıklayın. Alımın sonunda, numuneyi iade etmek için İade Et düğmesine tıklayın. Her numuneden 5.000 ila 10.000 parçacık elde etmek için bu adımları tekrarlayın.Metin protokolünde açıklandığı gibi nesne floresan yoğunluğunu ve morfolojik varyasyonlarını belirlemek için görüntü analiz yazılımını kullanarak tüm ham görüntü dosyalarını analiz edin. Oyuk başına 200 mikrolitrelik bir son reaksiyon hacmi kullanarak, reaktifleri kademeli olarak yükleyerek yuvarlak tabanlı düşük protein bağlayıcı 96 oyuklu bir plaka hazırlayın. İlk önce kontrol kuyularını hazırlayın.Her kuyucuğa 193 mikrolitre PBS yükleyin. Hasta serumunun% 2.5'ini ekleyin, kuyucuk başına sadece bir serum örneği yükleyin. Ardından, kimya analizörü reaksiyon plakasına yerleştirerek plakayı 30 saniye çalkalayın.Daha sonra, her bir oyuğa iki mikrolitre floresan etiketli kolesterol agrega çözeltisi ekleyin. Yine plakayı kimya analizörü-1 reaksiyon plakasına yerleştirerek 30 saniye çalkalayın. Kuyuları ilaçlarla hazırlamak için, her kuyucuğa 191 mikrolitre PBS yükleyin.Daha sonra, her hasta serumunun% 2.5'ini ekleyin ve plakayı bir kimya analizörü-1 reaksiyon plakasına yerleştirerek 30 saniye boyunca çalkalayın. Negatif kontrol kuyuları dışındaki tüm kuyucuklara iki mikrolitre ezetimib, lovastatin, simvastatin veya niasin çözeltisi ekleyin. Kuyucuk başına sadece bir ilaç eklemek.Plakayı daha önce olduğu gibi 30 saniye sallamaya devam edin. Daha sonra, plakayı 30 saniye çalkalamadan önce her bir oyuğa iki mikrolitre floresan etiketli kolesterol agrega çözeltisi ekleyin. Ardından, plakayı 37 santigrat derece ve 200 rpm'ye ayarlanmış bir laboratuvar çalkalayıcıda iki saat inkübe edin.İnkübasyonun ardından, daha önce olduğu gibi aynı ayarları izleyerek akış sitometrisini görüntüleyerek numuneleri alın. Metin protokolünde açıklandığı gibi tüm görüntü dosyalarını toplu olarak işlemek için görüntü analiz yazılımını kullanın. Burada, enzimatik olmayan bir mekanizma ile statinler tarafından indüklenen küresel ve doğrusal iplik şekilli kolesterol partiküllerinin tanımlanmasını gösteren temsili sonuçlar gösterilmiştir.Diğer lipid düşürücü ilaçlar tarafından indüklenen kolesterol partikül oluşumunun iki farklı morfolojisinin doğrulanması gösterilmiştir. Ezetimib, niasin, fibrat ve omega-3 yağ asidi dahil. Burada, X ekseninin yeşil floresan kanalında tespit edilen kolesterol parçacıklarının bir spektrumunu gösterdiği nokta grafikleri gösterilmiştir.Ve Y ekseni yan saçılmayı gösterir, geçit, floresan nokta grafiklerinde tespit edilen çok düşük yoğunluklu lipo-protein, düşük yoğunluklu lipoprotein ve yüksek yoğunluklu lipoprotein parçacıklarının bölgelerini gösterir. Bu sonuçlar, lipid düşürücü etkinin, ilaç, ezemid, lovastatin, simvastatin ve niasin varlığında saflaştırılmış VLDL ve LDL kolesterol partiküllerinin profillerini nasıl değiştirdiğini göstermektedir. Burada, VLDL, LDL ve HDL kolesterol partikül oluşumunun profillerini modüle eden çeşitli lipid düşürücü ilaçların diferansiyel etkisinin tanımlanması için üç farklı serum örneğinin bir ekranı gösterilmektedir.Bu profiller, üç farklı serum örneği arasındaki yanıt seviyelerinde de bir değişiklik olduğunu göstermektedir. İlaç olmadan ve çeşitli lipid düşürücü ilaçların varlığında oluşan küresel ve doğrusal şekilli kolesterol partikülleri için serum numunesi bir'in taranması, hem küresel hem de doğrusal iplik şekilleri gösteren serum türevli kolesterol partiküllerinin iki farklı morfolojisini doğrular. Bu nedenle, kolesterol partikül oluşumu ve klinik önemi ile ilişkiyi modüle eden lipid düşürücü ilaç etkisinin tanımlanması için bir in vitro görüntüleme yaklaşımını başarıyla gösterdik.Ön sonuçlarımız umut vericidir ve büyük ölçekli klinik örnekler kullanarak bu plak dizisi testini daha fazla doğrulama sürecindeyiz. Standart lipid paneliniz serumdaki LDL ve HDL kolesterol seviyelerini ölçer. Plak dizisi testimiz, ateroskleroz riskinin doğruluğunu artırmayı umuyor ve serum kullanarak lipid düşürücü ilaç yanıtını tahmin ediyor.

differential-effects-lipid-lowering-drugs-modulating-morphology

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Kolesterol tahlilini kültürü hücrelerinden kolesterol akışı hızı ve hücreler serbest kolesterol kabul plazma alıcısının kapasitesi ölçmek için tasarlanmıştır. Tahlil içi havuzu ve ekstrasellüler alıcı için kolesterol serbest bırakılması arasında kolesterol kolesterol, denge ile hücrelerin etiketlenmesi oluşur.

Kolesterol akışı Testi

Daha fazla protein yarısından elektron mikroskobu görüntüleme ve üç boyutlu rekonstrüksiyon hem de zor küçük proteinler (moleküler kütle &lt;200 kDa) 'dir. Optimize negatif boyama, yüksek kontrast ve nispeten yüksek çözünürlük (~ 1 nm) farklı fizyolojik koşullar altında, küçük, asimetrik proteinlerin ya da komplekslerin görüntüleri elde etmek için güçlü ve yüksek verimli bir protokoldür.

Optimize Negatif Boyama: Elektron Mikroskobu ile Küçük ve Asimetrik Protein Yapısı incelenmesi için Yüksek verim Protokolü

Bu iletişim kuralı görüntüleme sistemi içinde çeşitli hücre tiplerinin bir canlı hücre kullanarak gerçek zamanlı akını oranları ile LDL kolesterol alımını ölçme verimli bir yaklaşım sağlar. Bu teknik Farmakolojik aktivite LDL akını hücre morfolojisi ve dolayısıyla potansiyel sitotoksisite izleme sırasında etkileyen bileşiklerin ekran için bir platform sağlar.

LDL kolesterol alımını tahlil canlı hücre analizi ile hücre Imaging kullanarak sistem durumu izleme

Burada, lipoprotein parçacıklarının yerel Micro-RNA içeriğinin (mutlak/göreceli) belirlenmesi için nicel gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyon tabanlı protokol sunulur. Buna ek olarak, Mikro-RNA seviyesini artırmak için bir yöntem, hem de lipoprotein parçacıkları hücresel alımını oranını belirlemek için bir yöntem gösterilmiştir.

MicroRNA ile yerli lipoprotein parçacıkları zenginleştirme ve onların mutlak/bağıl microRNA Içerik ve onların hücresel transfer hızı sonraki belirlenmesi

Kolesterol zenginleştirme iki yöntem sunulmaktadır: siklodekstrin memeli doku ve hücreleri zenginleştirmek için kolesterol ile doymuş uygulanması, ve kolesterol zenginleştirilmiş fosfolipid tabanlı dağılımları kullanımı (lipozomlar) Xenopus oositleri zenginleştirmek için. Bu yöntemler moleküler, hücresel ve organ fonksiyonu nda yüksek kolesterol düzeylerinin etkisini belirlemek için etkilidir.

Memeli Dokuları ve Kenopus Oositlerinin Kolesterol ile Zenginleşmesi

Plazma lipoproteinlerinin analizi için çeşitli yöntemler kullanılmıştır; ancak, ultrasantrifüjleme hala en popüler ve güvenilir yöntemlerden biridir. Burada, sıralı yoğunluklu ultrasantrifüjasyon kullanarak lipoproteinlerin plazmadan nasıl izole edilmesi ve apolipoproteinlerin hem tanı hem de araştırma amacıyla nasıl analiz edilmesi ile ilgili bir yöntem açıklıyoruz.

Plazma Lipoproteinlerinin Ultracentrifugation ile İzolasyonu ve Analizi

Burada, tüm insan plazmasında veya serumunda bulunan yüksek yoğunluklu lipoprotein (HDL) tarafından lipid donör partiküllerinden spesifik olarak uzaklaştırılan floresan fosfolipid miktarını ölçmek için protokolleri açıklıyoruz. HDL işlevselliğinin bu metriğinin, kardiyovasküler hastalık olayını öngördüğünü gösterdik.

Yüksek Yoğunluklu Lipoproteine Özgü Fosfolipid Akış Testi

Günümüzde glioblastoma (GBM) 'nin ex vivo modelleri, insan tümörü invazyonunun fizyolojik olarak ilgili çalışması için optimize edilmemiştir. Burada, taze insan GBM dokusundan alınan organotipik dilim kültürlerinin üretimi ve bakımı için bir protokol sunuyoruz. Zaman atlamalı mikroskopi ve kantitatif hücre göç analiz tekniklerinin bir açıklaması sağlanmıştır.

Tümör Hücre Göçü ve İnvaziv Olmayan İlaçların Hastaya Özel Etkilerinin İncelenmesi İçin Bir İnsan Glioblastoma Organotipik Dilim Kültürü Modeli

Bu protokolün amacı, tümör ve non-tümör hem hücreleri içeren karışık kültürleri kullanılarak in vitro antikanser ilaçların özgüllüğünü değerlendirmektir.

Antikanser İlaçların Özgüllük değerlendirilmesi<em&gt; İn Vitro</em

Tavşanlar, göz içi ilaçların farmakokinetiğini incelemek için yaygın olarak kullanılmaktadır. Tavşan gözleri kullanarak göz içi ilaçların farmakokinetik çalışmalarını yürütmek için bir yöntem tarif ediyoruz.

Göziçi İlaçların Farmakokinetik Çalışmaları Tavşan Gözlerinde Kullanımı

Keşfedin, plak dizisi yöntemiyle lipid düşürücü ilaçların kolesterol parçacıklarının morfolojisi üzerindeki etkilerini. Bu yöntem, ateroskleroz tanısı için biyobelirteçlerin belirlenmesine yardımcı olur.

Kolesterol parçacıkları morfolojisi oransal olarak Lipid düşürücü ilaçlar farklı etkileri

Daha fazla video keşfet