Laboratuvarda ölçmek yüzeyler bitki bakterilerin bağlılık

Bu prosedürün genel amacı, bakterilerin bitki yüzeylerine bağlanmasını gözlemlemek, bir ölçmektir. Bu yöntem hem bitki patolojisinde hem de gıda güvenliğinde önemli sorulara cevap verebilir. Özellikle, bakterilerin bitki yüzeylerine nasıl bağlandığı ve nasıl uzaklaştırılabileceği ile ilgili sorulara cevap verebilir.

Bu tekniğin temel avantajı kolay, hızlı ve ucuz olmasıdır. Suda yetişen fideleri hazırlamak için 30, 50, 100 veya 150 mililitrelik bir cam kabın içine az sayıda tohum koyun. Burada domates tohumları kullanılır.

Tohumları% 80 etanol ile örtün ve kısa bir süre döndürün. Sonra tohumların bir dakika ıslanmasına izin verin. Etanolü dökün ve tohumları %50 ticari çamaşır suyu ve %0.1 Triton X-100 ve musluk suyu çözeltisine batırın.

Fasulye tohumları gibi tohumlar büyükse tohumların 20 dakika veya daha uzun süre ıslanmasına izin verin. Çamaşır suyu karışımını dökün ve tohumları üç kez steril suyla yıkayın, tohumların her yıkamada bir dakika suda bekletilmesine izin verin. Tohumları ve az miktarda suyu steril bir petri kabına dökün ve fideler istenen boyuta ulaşana kadar bir santimetre ile 10 santimetre arasında karanlıkta inkübe edin.

Kumda yetişen tohum veya fideleri hazırlamak için, tohumları ve ekim malzemelerini sterilize ettikten sonra, tohumları veya fideleri metin protokolüne göre bakteri ile aşılayın. Steril bir cam çubuk kullanarak, tohumu yüzeyin altına yerleştirmek için kumda yeterince derin sığ bir delik açın. Tohumu deliğe yerleştirin ve ince bir kum tabakasıyla örtün.

Ardından, su kaybını ve ek mikropların girmesini önlemek için kabın üstünü kapatmak için sızdırmazlık filmi kullanın. Bitkileri laboratuvarda bir ışık altında veya serada bitkinin türü ve çeşidi için uygun sıcaklık ve gün uzunluğunda büyütün. Fideleri kuma dikin.

Bir delik açmak için steril bir cam çubuk kullanın. Daha sonra steril bir paslanmaz çelik kroşe kancası ile kökü dikkatlice deliğe yönlendirin ve deliğin kenarlarını doldurmak için kum kullanın. Bitkileri metin protokolüne göre bakterilerle inkübe ettikten sonra, bir mikroskop lamı üzerinde bir damla suya veya inkübasyon ortamına yerleştirerek mikroskopi için bir numune hazırlayın ve doğrudan gözlemleyin.

Görünür serbest bakteri yoksa, inkübasyonun gerçekleştirildiği kaba bakteri ölümü veya bakteri bağlanması olmuş olabilir. Numuneyi bir sıvı şişesine koyarak ve şişeyi hafifçe ters çevirerek su veya inkübasyon ortamında yıkayın. Daha sonra numuneyi gözlem için taze sıvı içinde mikroskop lamına yerleştirin.

Numuneyi monte etmek için sıradan bir kapak fişi kullanın. Numune kalınsa ve bir çıkıntı yapıyorsa, sıvıyı ve numuneyi bir pres kuyusuna ekleyin, kenarında kauçuk veya plastik bir halka bulunan kapak kayması, uygulayın. Sürgüyü üstüne yerleştirin ve kapak kızağını sürgüye kapatmak için hafifçe aşağı bastırın.

Örneği incelemek için slaydı ters çevirin. Alternatif olarak, benzer şekilde bir yosun sayma sürgüsü ve kapak fişi kullanın ve en fazla 20 kat büyütme ile görüntüleyin. Kumda yetişen bitkilerde bulunan canlı bakteri sayısını belirlemek için, sızdırmazlık malzemesini kabın üstünden ve altından çıkararak başlayın.

Kabı bir parça steril kağıdın üzerine yerleştirin ve bitkiyle birlikte kumu kaptan nazikçe kaldırmadan önce kumu gevşetmek için kabı yüzeye hafifçe vurun. Kum silindiri ve bitki kağıt üzerinde serbest kaldığında, bitki kökünü ortaya çıkarmak için kumu ortadan ikiye bölün. İstenirse, kabın kenarına yakın bir yerden ve kökün yakın bir yerinden kum örnekleri alın.

Bu, bakterilerin yayılmasını, birikmesini ve büyümesini belirlemek için yararlı olabilir. Kökü alın ve gevşek bir şekilde yapışan kum ve bakterileri, kökü ölçülen bir hacimde suya veya tampona batırarak ve hafifçe sallayarak çıkarın. Elde edilen süspansiyondaki bakterilerin canlı hücre sayısını, luria agar gibi uygun ortamlara kaplayarak belirleyin.

Bu, kökle gevşek bir şekilde ilişkili bakteri sayısını temsil eder. Son olarak, sıkıca bağlı bakterileri sonikasyon ile çıkarın ve sayılarını belirleyin. Bu grafik, iki farklı selüloz eksi mutasyonunun bakterilerin domates köklerini kolonize etme yeteneği üzerindeki etkisini göstermektedir.

Bazı ölçümlerin standart sapmaları 10'un 0.9 log tabanı kadar yüksek olmasına rağmen, selüloz eksi mutantların bağlanmasındaki azalma açıkça görülmektedir. Bu deneyde, çeşitli ekzopolisakkaritler üretemeyen mutantlarda yabani tip E.Coli 0157:H7 yonca filizlerine bağlanma ölçüldü. Her iki suşta da, poli-beta bir altı glukuronik asit veya PGA üretiminin, patojenik E.coli'nin bitki yüzeylerine bağlanmasına en büyük katkıyı yaptığı görülmüştür.

Klonik asit ayrıca bağlanmada önemli bir rol oynamıştır. Burada, bitki yüzeylerine bağlanamayan iki bakteri türü, domates köklerine bakteri bağlanmasına neden olmanın yeterli olup olmadığını belirlemek için PGA üretecek şekilde tasarlanmıştır. A.tumefaciens A1045 durumunda, PGA bakterilerin kök yüzeyine ayrı ayrı bağlanmasına neden oldu.

Öte yandan, S.meliloti, bakterilerin sadece birkaçının doğrudan köke bağlandığı ve bakterilerin çoğunluğunun diğer bakterilere bağlandığı büyük kümeler halinde bağlandı. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik, örneğe bağlı olarak ilk kurulum için bir saatten daha kısa sürede, artı kuluçka süresinde ve 10 dakika ile bir saatlik puanlama süresi arasında yapılabilir. Bu prosedürü denerken, bakterilerin hemen hemen her yüzeye yapışabileceğini hatırlamak önemlidir.

Bu videoyu izledikten sonra, bakterilerin bitki yüzeylerine bağlanmasını nasıl gözlemleyeceğinizi iyi anlamış olmalısınız. Bakterilerin bitkinin neresine bağlandığını belirleyin ve bağlı bakteri sayısını belirleyin. Bu prosedürleri insan patojenleri ile gerçekleştirirseniz, prosedürün son derece tehlikeli olabileceğini ve bir muhafaza başlığında çalışmak ve eldiven giymek gibi önlemlerin her zaman alınması gerektiğini unutmayın.