Name: Monosit hedefleme peptid Amfifil Micelles için düşsel ateroskleroz sentezi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 1 s
Description: Öğrenin, monosit hedefleyen peptit amfifil miseller sentezleyerek ateroskleroz görüntülemesinde erken ve geç evre plakları ayırt etme yöntemini. Bu teknik kardiyovasküler tanıda spesifikliği artırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar mali desteği ile University of Southern California, ulusal kalp, akciğer ve kan Enstitüsü (NHLBI), R00HL124279, Eli ve Edythe geniş inovasyon ödülü ve L.K. Whittier Vakfı sigara kanser kabul etmek istiyorum EJC için verilen translasyonel araştırma ödülü. Yazarlar Merkezi elektron mikroskobu ve Microanalysis, Center of Excellence NanoBiophysics içinde Center of Excellence için moleküler karakterizasyonu ve Translational görüntüleme Merkezi, University of Southern California için yardım için teşekkür ederiz enstrümantal kurulumları.

Not: MSDS reaktifler için okumak ve tüm kimyasal güvenlik önlemleri yerel kurum tarafından gerektiği gibi izleyin.
1. MCP-1 PAMs hazırlanması
<ol><li>
MCP-1 peptid hazırlanması
	<ol>
<li>Fmoc-L-Lys (Boc) 0,25 mmol tartmak-Wang bir reaksiyon gemi (RV) içinde. 5 mL dimethylforamide (DMF) ile RV tarafında kimyasal duman mahallede durulayın.</li>
		<li>RV bir otomatik benchtop peptid synthesizer üzerine yükleyin. Önceden paketlenmiş amino asit şişeleri, N '- CYNFTINRKISVQRLASYRRITSS - C', c N-terminus yükleyin. Vasıl belgili tanımlık son final deprotection adım için boş bir şişe içerir. Not: Şifreli bir peptit dizisi, N '- CNNSIIRSKQVLRSTRYFRSATYK - C', de sentezlenmiş aynı iletişim kuralını kullanarak.</li>
		<li>Sentezi bittiğinde, tüm reçineler transfer edilene kadar peptidler bağlı ölüm mercek şişe 2-3 mL metanol ile aktarın. Sonra reçine altına batırdı, metanol süpernatant çıkarın ve kuru kadar kalan buharlaşır. Vakum kuru bir ek 2 h için ya da gece, oda sıcaklığında.</li>
		<li>Trifluoracetic asit (TFA):ethanedithiol:water:triisopropylsilane 94:2.5:2.5:1 vol % kimyasal duman başlıklı içeren 12 mL bölünme çözüm olun. Eşit olarak karışık emin olmak için bölünme çözüm girdap. Dikkat: triisopropylsilane ve ethanedithiol hava duyarlı olduğundan, argon tasfiye triisopropylsilane ve ethanedithiol onları geri koyarak önce 1 dk. için hisse senedi şişeleri.</li>
		<li>Sentez taşıyıcıyı (SV) altına ZF yarısı sıkma tarafından bir kol shaker koyun. Tüm peptid reçineler transfer edilene kadar peptid-reçine SV 2 mL bölünme çözeltisi ile aktarın.</li>
		<li>Kenarlarına ZF 3 mL bölünme çözüm ile yıkayın. ZF kapağı kapatın ve 300 salınımlarını/dk 4 h için sallamak.</li>
		<li>Bir boş 50 mL santrifüj tüpü çıkarmak tartın. Kayıt kitle.</li>
		<li>4 h sonra 50 mL santrifüj tüpüne ZF i ciddi peptid çözümden drenaj. SV birkaç kez kalan bölünme çözüm ile yıkayın.</li>
		<li>Santrifüj tüpte kalan daha az 4 mL kadar i ciddi peptid çözüm ile azot buharlaşır.</li>
		<li>Buz gibi eter 36 mL peptid i ciddi ekleyin.</li>
		<li>Girdap bu kadar tamamen beyaz veya sarı bir çözümdür. 3000 x g 4 ° C'de 5 min için de santrifüj kapasitesi ve süpernatant dikkatle boşaltmak.</li>
		<li>40 mL buz gibi eter tüp ekleyin. Girdap ve tekrar solüsyon içeren temizleyicide. Santrifüjü işlemi yineleyin. Süpernatant dikkatle boşaltmak.</li>
		<li>Eter gözle görülür buharlaşan kadar azot gaz tasfiye ile ham PA Pelet kuru.</li>
		<li>20 mL çift distile ekleyin su, girdap ve peptid çözümde tamamen eriyene kadar solüsyon içeren temizleyicide.</li>
		<li>Don eriyik ve kuru kadar lyophilize.</li>
		<li>Bir kez peptid kurutulur, ham peptid içeren santrifüj tüpü kitle tartın. Ham peptid 5 mg/mL suda çözülür.</li>
		<li>Ham MCP-1 peptid toplam konsantrasyonu 5 mg/mL 5 mL çift distile su içinde 25 mg geçiyoruz. %0.1 TFA su (a solvent) ve % 0.1 kullanarak ham MCP-1 peptid yüksek performanslı sıvı Kromatografi (HPLC) tarafından arındırmak TFA Asetonitril (solvent B) bir C8 ters fazlı sütunda mobil aşamaları olarak. Peptid 5 mL HPLC enjekte. Not: A 9.0 mL/dak akış hızında azalma çözücü A yavaş yavaş %30 27 min için ve bu kompozisyon 3 dk. dönüş % 100 solvent degradeye tutmak % 100 solvent ilk mobil faz oluşan bir 3 dk ve bu kompozisyon için vermek 1 dk at tutun bir toplam çalışma-saat 34 dk. tutun sütun sıcaklığı 55 ° C'de Pozitif İyon kaynağı modu analizi için kullanın. TFA HPLC sütun için çok asittir formik asit TFA yerine kullanılabilir. Bu organik çözücü kompozisyon rampa hız 2%/min daha iyi ayrılması için aşmaması gerektiğini tavsiye edilir.</li>
		<li>Beklenen ürün m/z 2,890 adlı için matris yardımlı lazer desorpsiyon/iyonlaşma (maldı) kütle spektrometresi kullanılarak her fraksiyonu analiz. Not: α-cyano-4-hydroxycinnamic asit 1 mg/mL Asetonitril/su (50: 50 vol %), matris çözüm olarak geçiyoruz. Matris çözüm her kesir 0,75 µL tarafından takip maldı plaka üzerine 0,75 µL nokta. 500-5000 Da toplu bir mesafeden bir pozitif yansıtıcı iyon modu kullanılarak analiz gerçekleştirmek.</li>
		<li>Ürün kesirler birleştirmek, Asetonitril darbe donma ve arıtılmış peptidler kadar kuru lyophilize.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
MCP-1 PA hazırlanması
	<ol>
<li>1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[amino(polyethylene glycol)-2000] DSPE-PEG (2000)-maleimide peptid ayrı mercek şişeleri için 1.1 molar fazlalığı hazırlayın. Her iki bileşikler yapmak için çift distile su içinde erimesi ~ 15 mg/mL. 15 dakika veya her iki çözüm de tamamen berraklaşana kadar solüsyon içeren temizleyicide. Not: Nerede çözüm pH 8,5 için ayarlanır DSPE-PEG (2000)-Amin ve N-hydroxysuccinimide (NHS) ester functionalized Cy5, adım 1.2.3, dışında aynı iletişim kuralını kullanarak DSPE-PEG (2000)-Cy5 sentezlenir.</li>
		<li>DSPE-PEG (2000)-maleimide çözüm peptid ekleyin. Girdap ve solüsyon içeren temizleyicide.</li>
		<li>1 ekleyin M NaOH dropwise (1 µL) çözüm pH 7 kadar bir zamanda.</li>
		<li>Azot tasfiye çözüm 5 dakika süreyle gecede çözüm karıştırın.</li>
		<li>Don eriyik ve kuru kadar lyophilize.</li>
		<li>Bir kez ham ürün kurutulur, katı 5 mg/mL suda çözülür.</li>
		<li>HPLC ile yukarıda açıklandığı gibi arındırmak. Not: Çekimsiz peptid ve DSPE-PEG(2000) arasında % 15-30 organik konsantrasyonu (vol %), DSPE-PEG elute (2000)-MCP-1 eşlenik % 40-50 arasında organik konsantrasyon elute.</li>
		<li>Karşılık gelen m/z. DSPE-PEG (2000)-MCP-1-meli-si olmak geniş m/z tepe 5,760 maldı kütle spektrometresi kullanıyorum her fraksiyonu analiz. Not: 2,5-dihidroksibenzoik asit en iyi matris DSPE-PEG için (2000)-MCP-1 maldı ile kullanılır.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
MCP-1 PAMs Meclisi
	<ol>
<li>Dağıtılması 1,75 mg 3 mL metanol içinde 1-Dramı şişe ile MCP-1 PAs. MCP-1 PA tamamen eriyene kadar solüsyon içeren temizleyicide. Not: Cy5 amphiphiles 10:90 MCP-1 PA görüntüleme uygulamaları için molar oranını, dahil edilebilir.</li>
		<li>Metanol azot dairesel bir hareketle altında tek tip bir film şişe dibinde oluşan kadar şişe yan kalan metanol durulama sırasında buharlaşır. Vakum-Kuru filmin gecede.</li>
		<li>Film 3 mL su veya fosfat tampon ile hidrat serum (PBS) MCP-1 PAMs bir 100 µM çözüm yapmak. Yavaşça girdap ve temiz kadar çözüm solüsyon içeren temizleyicide. 30 dk 80 ° C'de kuluçkaya. Not: Yüksek sıcaklık kendinden montajlı süreci hızlandırmak için gösterilmiştir ve kritik micelle konsantrasyonu (CMC)42,43düşürürken en istikrarlı ikincil yapı oluşturmak peptit bileşeni sağlar.</li>
		<li>Elde edilen dağılımı oda sıcaklığında için ne yapıyorsun?</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. MCP-1 PAMs karakterizasyonu
<ol><li>
Dinamik ışık saçılma (DL) ve zeta potansiyel
	<ol>
<li>Yer 100 µM MCP-1 PAM veya DLS veya zeta potansiyel enstrümanın talimatlara göre bir küvet içinde şifreli PAM. Not: DLS ve zeta potansiyel cuvettes gerecin yönergeler bağlı farklı olabilir.</li>
		<li>Oda sıcaklığına enstrüman equilibrate. PAM in yüzey fiyat istemek ve boyutu ölçmek.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Transmisyon elektron mikroskobu (TEM)
	<ol>
<li>7 µL eklemek 50 µM MCP-1 PAM veya şifreli PAM TEM ızgara üzerine kendi kendine kapanan bir cımbız 5 dk. fitil uzakta içinde damlacık bir hassas görev bezle askıya alındı.</li>
		<li>7 µL kılavuz yıkamak için su ekleyin. Uzak damlacığı fitil.</li>
		<li>1 wt % phosphotungstic asit 2 dk. fitil uzakta için 7 µL damlacığı ekleyin. 2.2.2 arasındaki adımları yineleyin.</li>
		<li>TEM kılavuz TEM analiz önce kuru.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Dairesel dichroism (CD) spektroskopisi
	<ol>
<li>5-10dk için azot aracı kullanmak için önceden açın.</li>
		<li>Boş (su veya PBS) 300 µL küvet içinde yerleştirin.</li>
		<li>Spectra 190-265 nm, 0.2 mm yol-uzunluğu 1 s entegrasyon zaman ve oda sıcaklığında bir 1 nm bant genişliği ile ölçmek. 3 çoğaltır toplamak.</li>
		<li>Ölçü 100 µM MCP-1 peptid, MCP-1 PAM, peptid şifreli ve PAM 2.3.3. adımda açıklanan aynı koşul altında şifreli. Boş çıkarma.</li>
		<li>Polylysine temel spectra ürününün bir doğrusal ilişkilendirme kullanarak veri uygun.</li>
		<li>Araç dön. Azot açmadan önce 10 dakika bekleyin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. MCP-1 PAMs Vitro analiz
<ol><li>
Vitro Biyouyumluluk
	<ol>
<li>Kültür ve WEHI 274.1 Dulbecco'nın modifiye kartal % 10 fetal sığır serum ile (FBS), takıma orta fare monosit genişletin % 1 penisilin-streptomisin ve 37 ° c altında %5 0.05 mM 2-mercaptoethanol CO2 ' ye geçiş 5. Not: WEHI 274.1 hücreler süspansiyon. Ne zaman kültür, medya her 2-3 gün doldurulan.</li>
		<li>Damlalıklı monosit medya steril 50 mL santrifüj tüpü içine. 4 ° C'de 5 min için 300 x g, santrifüj</li>
		<li>Eski medya Aspire edin ve 10 mL taze medyada santrifüj tüpüne resuspend. Hücreler eşit şekilde medyada dağıtılır kadar yavaş yavaş karıştırın. Trypan mavi boyama ve bir hemasitometre kullanarak hücreleri saymak.</li>
		<li>Böyle medya iyi başına 90 µL başına 4.000 monosit hücreleri oranında seyreltin. Hücre 90 µL 96-şey plaka wells ekleyin. 24 saat kuluçkaya. Not: buharlaşma farklılıkları ve plaka ısı değişiklikleri önlemek için plaka dış kenarında kuyuları kullanmaktan kaçının. Dış kuyu 100 µL PBS ile doldurun.</li>
		<li>MCP-1 peptid, MCP-1 PAM, şifreli peptid veya 150 µL PBS ayrı, steril microcentrifuge tüpler şifreli PAM 0.15 µmol geçiyoruz. 1, 10 ve 100 µM her örneğinin 65 µL yapmak için seri seyreltme gerçekleştirin.</li>
		<li>10 µL PBS her konsantrasyon WEHI 274.1 içeren wells ekleyin (Toplam birim: şey, 6 satır, 96 toplam kuyu başına 100 µL). 72 h için kuluçkaya.</li>
		<li>Eklemek 10 µL (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium) (MTS) her şey içinde. 1s için kuluçkaya.</li>
		<li>490 bir plaka okuyucu kullanarak Absorbans analiz nm veya üreticinin yönergeleri dayalı.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Vitro micelle bağlama
	<ol>
<li>6-şey plaka 2 ml 100 µM Cy5 etiketli MCP-1 PAM (10:90 molar oranı DSPE-PEG (2000)-Cy5 ve MCP-1 PA) içeren medya her iyi tohum 500.000 monosit. 1s için kuluçkaya.</li>
		<li>Santrifüjü 300 x g 4 ° C'de 5 min için de tarafından WEHI 274.1 toplamak Medya Aspire edin.</li>
		<li>Resuspend ve 2 mL PBS hücrelerde yıkayın. 4 ° C'de 5 min için 300 x g, santrifüj PBS Aspire edin. 2 mL PBS ile yıkama işlemi tekrarlayın. PBS Aspire edin.</li>
		<li>Hücreleri düzeltmek için soğuk % 4 paraformaldehyde 2 mL ekleyin. 10 dakika oda sıcaklığında kuluçkaya.</li>
		<li>Damlalıklı steril cam coverslip 6-şey plaka kuyu içinde üzerine sabit hücreleri. 400 x g 5 min için de santrifüj kapasitesi.</li>
		<li>Paraformaldehyde kaldırın. Yıkama ve durulama 2 mL PBS ile bir kez. 1 mL PB ile resuspend Not: durulama, coverslip hücrelerdeyse engellemeden kaçının.</li>
		<li>% 90 gliserol 10 µL PBS içinde bir slayt koy. Bir iğne ve cımbız coverslip kadar almak için kullanın. Coverslip kenarına kuru. Yavaşça coverslip bir slayt üzerine yerleştirin yüzü koyun.</li>
		<li>Yavaşça kenarına açık oje ile coverslip kapatın. Görüntüleme için hazır kadar buzdolabında yerleştirin.</li>
		<li>Confocal bir lazer lazerler ile Cy5 için λuyarma yüklü mikroskop (CLSM) tarama kullanın = 650 nm.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Mozaffarian, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+Disease+and+Stroke+Statistics-2016+Update%3A+A+Report+From+the+American+Heart+Association%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart Disease and Stroke Statistics-2016 Update: A Report From the American Heart Association.</a> Circulation. 133 (4), e38-e60 (2016).</li>
<li>Falk, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Coll.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of atherosclerosis.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 47 (8, Suppl. C), C7-C12 (2006).</li>
<li>Rahmani, M., Cruz, R. P., Granville, D. J., McManus, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allograft+Vasculopathy+Versus+Atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Allograft Vasculopathy Versus Atherosclerosis.</a> Circ. Res. 99 (8), 801-815 (2006).</li>
<li>Luis, A. J. <a target="_blank" href="https://www.nature.com/nature/journal/v407/n6801/full/407233a0.html">Atherosclerosis.</a> Nature. 407 (6801), 233-241 (2000).</li>
<li>Libby, P., Ridker, P. M., Hansson, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+and+challenges+in+translating+the+biology+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+%28London%2C+U.+K%29%22%5BJournal%5D)">Progress and challenges in translating the biology of atherosclerosis.</a> Nature (London, U. K). 473 (7347), 317-325 (2011).</li>
<li>Boring, L., Gosling, J., Cleary, M., Charo, I. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+lesion+formation+in+CCR2-%2F-+mice+reveals+a+role+for+chemokines+in+the+initiation+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+%28London%29%22%5BJournal%5D)">Decreased lesion formation in CCR2-/- mice reveals a role for chemokines in the initiation of atherosclerosis.</a> Nature (London). 394 (6696), 894-897 (1998).</li>
<li>Szmitko, P. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+Markers+of+Inflammation+and+Endothelial+Cell+Activation%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">New Markers of Inflammation and Endothelial Cell Activation.</a> Circulation. 108 (16), 1917-1923 (2003).</li>
<li>Deshmane, S. L., Kremlev, S., Amini, S., Sawaya, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monocyte+Chemoattractant+Protein-1+%28MCP-1%29%3A+An+Overview%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Interferon+Cytokine+Res%22%5BJournal%5D)">Monocyte Chemoattractant Protein-1 (MCP-1): An Overview.</a> J. Interferon Cytokine Res. 29 (6), 313-326 (2009).</li>
<li>Chung, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monocyte-Targeting+Supramolecular+Micellar+Assemblies%3A+A+Molecular+Diagnostic+Tool+for+Atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Healthcare+Mater%22%5BJournal%5D)">Monocyte-Targeting Supramolecular Micellar Assemblies: A Molecular Diagnostic Tool for Atherosclerosis.</a> Adv. Healthcare Mater. 4 (3), 367-376 (2015).</li>
<li>Chung, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+and+therapeutic+peptides+in+nanomedicine+for+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Biol+Med+%28Maywood%29%22%5BJournal%5D)">Targeting and therapeutic peptides in nanomedicine for atherosclerosis.</a> Exp Biol Med (Maywood). 241 (9), 891-898 (2016).</li>
<li>Sanz, J., Fayad, Z. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+atherosclerotic+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+%28London%2C+U.+K.%29%22%5BJournal%5D)">Imaging of atherosclerotic cardiovascular disease.</a> Nature (London, U. K.). 451 (7181), 953-957 (2008).</li>
<li>Tarkin, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://circres.ahajournals.org/content/118/4/750">Imaging Atherosclerosis.</a> Circ. Res. 118 (4), 750-769 (2016).</li>
<li>Hennerici, M., Baezner, H., Daffertshofer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasound+and+arterial+wall+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cerebrovasc+Dis%22%5BJournal%5D)">Ultrasound and arterial wall disease.</a> Cerebrovasc Dis. 17 Suppl 1, 19-33 (2004).</li>
<li>Nissen, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+intravascular+ultrasound+to+characterize+coronary+artery+disease+and+assess+the+progression+or+regression+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Application of intravascular ultrasound to characterize coronary artery disease and assess the progression or regression of atherosclerosis.</a> Am J Cardiol. 89 (4A), 24B-31B (2002).</li>
<li>Khalil, M. M., Tremoleda, J. L., Bayomy, T. B., Gsell, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+SPECT+Imaging%3A+An+Overview%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Imaging%22%5BJournal%5D)">Molecular SPECT Imaging: An Overview.</a> Int J Mol Imaging. 2011, 796025(2011).</li>
<li>Lerakis, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+the+vulnerable+plaque%3A+noninvasive+and+invasive+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Imaging of the vulnerable plaque: noninvasive and invasive techniques.</a> Am J Med Sci. 336 (4), 342-348 (2008).</li>
<li>Sun, Z. H., Rashmizal, H., Xu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+imaging+of+plaques+in+coronary+arteries+with+PET+and+SPECT%5BTitle%5D)+AND+%22J+Geriatr+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Molecular imaging of plaques in coronary arteries with PET and SPECT.</a> J Geriatr Cardiol. 11 (3), 259-273 (2014).</li>
<li>Godin, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+applications+of+nanomedicine+for+the+diagnosis+and+treatment+of+cardiovascular+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Pharmacol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Emerging applications of nanomedicine for the diagnosis and treatment of cardiovascular diseases.</a> Trends Pharmacol. Sci. 31 (5), 199-205 (2010).</li>
<li>Branco de Barros, A. L., Tsourkas, A., Saboury, B., Cardoso, V. N., Alavi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+role+of+radiolabeled+nanoparticles+as+an+effective+diagnostic+technique%5BTitle%5D)+AND+%22EJNMMI+Res%22%5BJournal%5D)">Emerging role of radiolabeled nanoparticles as an effective diagnostic technique.</a> EJNMMI Res. 2 (1), 31-39 (2012).</li>
<li>Jayagopal, A., Linton, M. F., Fazio, S., Haselton, F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+into+atherosclerosis+using+nanotechnology%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Atheroscler.+Rep%22%5BJournal%5D)">Insights into atherosclerosis using nanotechnology.</a> Curr. Atheroscler. Rep. 12 (3), 209-215 (2010).</li>
<li>Khodabandehlou, K., Masehi-Lano, J. J., Poon, C., Wang, J., Chung, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+cell+adhesion+molecules+with+nanoparticles+using+in+vivo+and+flow-based+in+vitro+models+of+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Biol+Med+%28Maywood%29%22%5BJournal%5D)">Targeting cell adhesion molecules with nanoparticles using in vivo and flow-based in vitro models of atherosclerosis.</a> Exp Biol Med (Maywood). 242 (8), 799-812 (2017).</li>
<li>Trent, A., Marullo, R., Lin, B., Black, M., Tirrell, M. <a target="_blank" href="http://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/sm/2011/c1sm05862b#!divAbstract">Structural properties of soluble peptide amphiphile micelles.</a> Soft Matter. 7 (20), 9572-9582 (2011).</li>
<li>Hartgerink, J. D., Beniash, E., Stupp, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptide-amphiphile+nanofibers%3A+A+versatile+scaffold+for+the+preparation+of+self-assembling+materials%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Peptide-amphiphile nanofibers: A versatile scaffold for the preparation of self-assembling materials.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 99 (8), 5133-5138 (2002).</li>
<li>Missirlis, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+the+Peptide+Secondary+Structure+on+the+Peptide+Amphiphile+Supramolecular+Structure+and+Interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Effect of the Peptide Secondary Structure on the Peptide Amphiphile Supramolecular Structure and Interactions.</a> Langmuir. 27 (10), 6163-6170 (2011).</li>
<li>Zhong, L., Johnson, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Environment+affects+amino+acid+preference+for+secondary+structure%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Environment affects amino acid preference for secondary structure.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 89 (10), 4462-4465 (1992).</li>
<li>Shimada, T., Lee, S., Bates, F. S., Hotta, A., Tirrell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wormlike+Micelle+Formation+in+Peptide-Lipid+Conjugates+Driven+by+Secondary+Structure+Transformation+of+the+Headgroups%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Phys.+Chem.+B%22%5BJournal%5D)">Wormlike Micelle Formation in Peptide-Lipid Conjugates Driven by Secondary Structure Transformation of the Headgroups.</a> J. Phys. Chem. B. 113 (42), 13711-13714 (2009).</li>
<li>Missirlis, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Linker+Chemistry+Determines+Secondary+Structure+of+p5314-29+in+Peptide+Amphiphile+Micelles%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chem%22%5BJournal%5D)">Linker Chemistry Determines Secondary Structure of p5314-29 in Peptide Amphiphile Micelles.</a> Bioconjugate Chem. 21 (3), 465-475 (2010).</li>
<li>Elbert, D. L., Hubbell, J. A. <a target="_blank" href="http://www.annualreviews.org/doi/abs/10.1146/annurev.ms.26.080196.002053">Surface treatments of polymers for biocompatibility.</a> Annu. Rev. Mater. Sci. 26, 365-394 (1996).</li>
<li>Xue, Y., O'Mara, M. L., Surawski, P. P. T., Trau, M., Mark, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+Poly%28ethylene+glycol%29+%28PEG%29+Spacers+on+the+Conformational+Properties+of+Small+Peptides%3A+A+Molecular+Dynamics+Study%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Effect of Poly(ethylene glycol) (PEG) Spacers on the Conformational Properties of Small Peptides: A Molecular Dynamics Study.</a> Langmuir. 27 (1), 296-303 (2011).</li>
<li>Canalle, L. A., Loewik, D. W. P. M., van Hest, J. C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polypeptide-polymer+bioconjugates%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Soc.+Rev%22%5BJournal%5D)">Polypeptide-polymer bioconjugates.</a> Chem. Soc. Rev. 39 (1), 329-353 (2010).</li>
<li>Hamley, I. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PEG-Peptide+Conjugates%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">PEG-Peptide Conjugates.</a> Biomacromolecules. 15 (5), 1543-1559 (2014).</li>
<li>Acar, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-assembling+peptide-based+building+blocks+in+medical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Drug+Delivery+Rev%22%5BJournal%5D)">Self-assembling peptide-based building blocks in medical applications.</a> Adv. Drug Delivery Rev. , (2016).</li>
<li>Busseron, E., Ruff, Y., Moulin, E., Giuseppone, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Supramolecular+self-assemblies+as+functional+nanomaterials%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale%22%5BJournal%5D)">Supramolecular self-assemblies as functional nanomaterials.</a> Nanoscale. 5 (16), 7098-7140 (2013).</li>
<li>Barrett, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/acsbiomaterials.6b00422">Modular Peptide Amphiphile Micelles Improving an Antibody-Mediated Immune Response to Group A Streptococcus.</a> ACS Biomater. Sci. Eng. 3 (2), 144-152 (2017).</li>
<li>Toughrai, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction-Sensitive+Amphiphilic+Triblock+Copolymers+Self-Assemble+Into+Stimuli-Responsive+Micelles+for+Drug+Delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Macromol.+Biosci%22%5BJournal%5D)">Reduction-Sensitive Amphiphilic Triblock Copolymers Self-Assemble Into Stimuli-Responsive Micelles for Drug Delivery.</a> Macromol. Biosci. 15 (4), 481-489 (2015).</li>
<li>Swirski, F. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monocyte+accumulation+in+mouse+atherogenesis+is+progressive+and+proportional+to+extent+of+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Monocyte accumulation in mouse atherogenesis is progressive and proportional to extent of disease.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 103 (27), 10340-10345 (2006).</li>
<li>Kashiwagi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+of+monocyte+subsets+with+vulnerability+characteristics+of+coronary+plaques+as+assessed+by+64-slice+multidetector+computed+tomography+in+patients+with+stable+angina+pectoris%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis+%28Amsterdam%2C+Neth%29%22%5BJournal%5D)">Association of monocyte subsets with vulnerability characteristics of coronary plaques as assessed by 64-slice multidetector computed tomography in patients with stable angina pectoris.</a> Atherosclerosis (Amsterdam, Neth). 212 (1), 171-176 (2010).</li>
<li>Chung, E. J., Tirrell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+Advances+in+Targeted%2C+Self-Assembling+Nanoparticles+to+Address+Vascular+Damage+Due+to+Atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Healthcare+Mater%22%5BJournal%5D)">Recent Advances in Targeted, Self-Assembling Nanoparticles to Address Vascular Damage Due to Atherosclerosis.</a> Adv. Healthcare Mater. 4 (16), 2408-2422 (2015).</li>
<li>Cassetta, L., Pollard, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+immunosurveillance%3A+role+of+patrolling+monocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Cancer immunosurveillance: role of patrolling monocytes.</a> Cell Res. 26 (1), 3-4 (2016).</li>
<li>Williams, C. B., Yeh, E. S., Soloff, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor-associated+macrophages%3A+unwitting+accomplices+in+breast+cancer+malignancy%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Breast+Cancer%22%5BJournal%5D)">Tumor-associated macrophages: unwitting accomplices in breast cancer malignancy.</a> NPJ Breast Cancer. 2, (2016).</li>
<li>Richards, D. M., Hettinger, J., Feuerer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monocytes+and+Macrophages+in+Cancer%3A+Development+and+Functions%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Microenviron%22%5BJournal%5D)">Monocytes and Macrophages in Cancer: Development and Functions.</a> Cancer Microenviron. 6 (2), 179-191 (2013).</li>
<li>Schick, M. J. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/j100803a013">Effect of temperature on the critical micelle concentration of nonionic detergents. Thermodynamics of micelle formation.</a> J. Phys. Chem. 67 (9), 1796-1799 (1963).</li>
<li>Marullo, R., Kastantin, M., Drews, L. B., Tirrell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptide+contour+length+determines+equilibrium+secondary+structure+in+protein-analogous+micelles%5BTitle%5D)+AND+%22Biopolymers%22%5BJournal%5D)">Peptide contour length determines equilibrium secondary structure in protein-analogous micelles.</a> Biopolymers. 99 (9), 573-581 (2013).</li>
<li>Hilbich, C., Kisters-Woike, B., Reed, J., Masters, C. L., Beyreuther, K. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/1453457">Substitutions of hydrophobic amino acids reduce the amyloidogenicity of Alzheimer's disease βA4 peptides.</a> J. Mol. Biol. 228 (2), 460-473 (1992).</li>
<li>Trevino, S. R., Scholtz, J. M., Pace, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Amino+Acid+Contribution+to+Protein+Solubility%3A+Asp%2C+Glu%2C+and+Ser+Contribute+more+Favorably+than+the+other+Hydrophilic+Amino+Acids+in+RNase+Sa%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Amino Acid Contribution to Protein Solubility: Asp, Glu, and Ser Contribute more Favorably than the other Hydrophilic Amino Acids in RNase Sa.</a> J. Mol. Biol. 366 (2), 449-460 (2007).</li>
<li>Kim, S. W., Shi, Y. Z., Kim, J. Y., Park, K. N., Cheng, J. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overcoming+the+barriers+in+micellar+drug+delivery%3A+Loading+efficiency%2C+in+vivo+stability%2C+and+micelle-cell+interaction%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin+Drug+Delivery%22%5BJournal%5D)">Overcoming the barriers in micellar drug delivery: Loading efficiency, in vivo stability, and micelle-cell interaction.</a> Expert Opin Drug Delivery. 7 (1), 49-62 (2010).</li>
<li>Rangel-Yagui, C. O., Pessoa, A. Jr, Tavares, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micellar+solubilization+of+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharm.+Pharm.+Sci%22%5BJournal%5D)">Micellar solubilization of drugs.</a> J. Pharm. Pharm. Sci. 8 (2), 147-163 (2005).</li>
<li>Batrakova, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fundamental+relationships+between+the+composition+of+pluronic+block+copolymers+and+their+hypersensitization+effect+in+MDR+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm.+Res%22%5BJournal%5D)">Fundamental relationships between the composition of pluronic block copolymers and their hypersensitization effect in MDR cancer cells.</a> Pharm. Res. 16 (9), 1373-1379 (1999).</li>
<li>Chen, L. J., Lin, S. Y., Huang, C. C. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/jp9804345?journalCode=jpcbfk">Effect of Hydrophobic Chain Length of Surfactants on Enthalpy-Entropy Compensation of Micellization.</a> J. Phys. Chem. B. 102 (22), 4350-4356 (1998).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

MCP-1 PAMs bir hidrofilik hedefleme peptid ve nanoparçacık kendi kendine monte doğası sürücüler hidrofobik kuyruk oluşan bir umut verici moleküler görüntüleme platformu vardır. Bu monosit hedefleme micelle basit sentez ve arıtma adımlardan MCP-1 peptid ve DSPE-PEG (2000)-MCP-1 tarafından hazırlanmış olabilir. PAMs vivo içinde gibi moleküler görüntüleme için birçok yararlı özelliklere sahip kendi kendinden montajlı altında hafif koşulları, iç biodegradability ve yapısal ve kimyasal çeşitlilik diğer görüntüleme mo...

Kalp-damar hastalıkları önde gelen yaklaşık 17.3 milyon ölüm dünya çapında1ile tüm dünyada ölüm nedenleri olarak kalır. Kalp-damar hastalıkları ateroskleroz, hangi arterler, böylece inhibe kan ve oksijen akışı vücut2,3hücrelere plaklar inşa bir koşul tarafından katkıda bulunmuştur. Ateroskleroz ilerleme bir enflamatuar yanıt, düzensiz lipid metabolizması ve plak birikmesi, plak rüptürü ve miyokard infarktüsü4,5' e lider tarafından kalınlaşma ve damar sertliği içerir. Endotel hücreleri monosit6,7,8yüzeyinde bulunan C-C Kemokin reseptör (CCR2) bağlar MCP-1 dahil sitokinler ve adezyon molekülleri ifade. Oksitlenmiş kolesterolü monosit makrofaj için hangi bölgede inflamatuar yanıt güçlendirir ve doku yaralanması ve kararsız ya da kolay incinir plaklar9, oluşumuna yol açar plak oluşumu erken aşamasında dönüştürür 10.
Geleneksel olarak, ateroskleroz luminal stenoz anjiyografi veya ultrason11,12kullanarak anatomik görüntüleme tarafından değerlendirilmesi tarafından değerlendirilir. Ancak, bu yöntemler sadece ciddi daralma değil ateroskleroz, erken evre ve atardamar duvarının belirleyebilirsiniz arter arter büyüklüğünü korumak ve akış oranı12,13, kan remodeling ilk plak büyüme neden olur 14. Bu nedenle, Anjiyo ateroskleroz yaygınlık underrepresent. Ayrıca, noninvaziv görüntüleme teknikleri gibi tek foton emisyon tomografi, Pozitron emisyon tomografi ve manyetik rezonans görüntüleme son zamanlarda kullanılan ilk ayrıntıları sağlayabilir plak Morfoloji karakterize hesaplanan ve plaklar karakterizasyonu. Ancak, Bu modalities kez duyarlılık, Uzaysal çözünürlük, eksikliği nedeniyle sınırlıdır veya iyonizan radyasyon, görüntüleme plak ilerleme farklı aşamalarında15,16çok daha zorlu hale kullanımını gerektiren, 17. Özellikle plaklar ateroskleroz farklı aşamalarında tanımlamak görüntüleme bir dağıtım sistemi geliştirilecek kalmaya devam eder.
Nano tanecikleri vivo içinde plak hedefleme ve tanılama18,19,20,21için gelişmekte olan bir platform olmasını göstermiştir. Özellikle, PAMs onların kimyasal çeşitlilik ve moieties, besteleri, boyut, şekil ve yüzey functionalization22çeşitli uyum yeteneği nedeniyle avantajlı. "Bir hidrofobik kuyruğuna olan genellikle lipidler; bağlı bir hidrofilik, peptid headgroup" peptid amphiphiles (PAs) oluşur Bu amfifilik yapı kendi kendine montaj yetenekleri confers ve peptidler parçacık22,23,24yüzeyinde multivalent bir görünümünü sağlar. Peptid headgroups parçacık şekil katlama ve peptidler25arasında hidrojen ile etkileyebilir. β-yapraklık etkileşim yoluyla kat peptidler Helisel α onayı hem küresel ve uzun micelles22,23,24, oluşabilir iken uzun micelles, oluşturmak için gösterilmiştir 25,26,27. Hidrofilik peptid ve sistemik dolaşım28, nanopartikül kullanılabilirliği artırmanın PAMs, hidrofobik kuyruk arasında peptid yüzey ücretten kalkan polietilen glikol (PEG) halkalı yerleştirilebilir 29 , 30 , 31. Biyouyumlu ve çok çeşitli uygulamalar32,33için göstermiştir çünkü PAMs da avantajlı. Micelles su çözünürlük bazı polimerik nano tanecikleri suda çözünür olmayan ve solubilizers enjeksiyonları34için askıya zorunda gibi diğer nanoparçacık tabanlı sistemler üzerinde bir avantaj sunuyor. Ayrıca, belirli uyaranlara yanıt olarak sökmeye PAMs oluşturma yeteneği PAMs kontrollü hücre içi uyuşturucu teslim35için çekici bir aday yapar.
CCR2 reseptör bağlama ve aort içinde biriken, PAMs daha önce monosit aort9aterosklerotik lezyonların farklı aşamaları izlemek için hedefleme için geliştirilmiştir. ApoE- / - fareler monosit birikimi plak ilerleme36için orantılı olarak artar. Ayrıca, bu hastalarda rüptür eğilimli, son aşama plaklar monosit37daha yüksek miktarda içerir bulundu. Bu nedenle, PAMs MCP-1 dahil etmek için değişikliği daha fazla hedefleme özgüllük ve farklılaşma ve geç-aşamasındaki aterosklerotik lezyonları arasında izin veren bir yayın için yararlıdır. Bu kanıtı-of-concept çalışmalar Ayrıca PAMs pre-clinically kullanılmak üzere güvenli ve renally38temizlenir doğrulanmadı. Monosit ve inflamasyon karakteristik diğer hastalıklar için olduğundan, MCP-1 PAMs ateroskleroz8,39,40 ötesinde diğer hastalıkların tedavi ve teşhis uygulamalarında kullanılmak üzere potansiyel var , 41.
Burada, biz son derece ölçeklenebilir ve kendi kendine monte MCP-1 gösterdi parçacığın en uygun boyutu, yüzey ücret ve monosit ateroskleroz'Gelişmiş görüntüleme uygulamaları için seçici hedefleme PAMs imalatı raporu.

<table><tbody><tr><td>Peptit sentezi için</td> <td>1,2-etanedithiol</td><td>VWR</td><td>E0032</td></tr><tr><td>10 mL tek kullanımlık serolojik pipetler</td><td>Hücre kültürü için</td><td>VWR</td><td>89130-898</td></tr><tr><td>15 mL santrifüj tüpleri, polipropilen</td> Çeşitli <td>uygulamalar için</td><td>VWR</td><td>89401-566</td></tr><tr><td>2,5-dihidroksibenzoik asit, %99</td><td></td> <td>MALDI 25</td><td></td></tr> <tr><td>mL tek kullanımlık için Fisher Scientific AC165200050 serolojik pipetler</td> hücre <td>kültürü için</td><td>VWR</td><td>89130-900</td></tr><tr><td>2-Merkaptoetanol, 50 mM</td> Hücre <td>kültürü için</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>31350010</td></tr><tr><td>5 mL tek kullanımlık serolojik pipetler</td><td>Hücre kültürü için</td><td>VWR</td><td>89130-896</td></tr><tr><td>50 mL santrifüj tüpleri</td> Çeşitli <td>uygulamalar için</td><td>VWR</td><td>89039-658</td></tr><tr><td>75 cm2 kültür şişesi</td><td>Fisher Scientific</td><td>Hücre kültürü için 13-680-65</td><td></td></tr><tr><td>75 mL reaksiyon kabı</td><td></td><td>Peptit sentezi için</td><td>3000005</td></tr><tr><td>96 kuyulu hücre kültürü plakası</td><td>MTS tahlili için</td><td>VWR</td><td>40101-346</td></tr><tr><td>Asetonitril, HPLC sınıfı</td><td>HPLC saflaştırması için</td><td>Fisher Scientific</td><td>A998SK-4</td></tr><tr><td>Borosilikat cam, PAM</td><td>sentezi için</td> 1 dram <td>VWR</td><td>66011-041</td></tr><tr><td>Borosilikat cam pipet, Çeşitli</td><td>uygulamalar için</td>uzun uçlar <td>VWR</td><td>14673-043</td></tr><tr><td>Lamel, 0,16-0,19 mm, 22 x 22 mm</td><td>Konfokal mikroskopi için</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-542B</td></tr><tr>Peptit konjugasyonu için<td>Cy5 amin</td><td>Abcam</td><td>ab146463</td><td>Peptit çökeltme için</td></tr><tr><td>dietil eter, ACS sınıfı</td><td>Fisher Scientific</td><td>E138-1</td><td></td></tr><tr><td>Tek kullanımlık şırıngalar,</td><td>HPLC saflaştırması için</td>20 mL <td>Fisher Scientific</td><td>14-817-54</td></tr><tr><td>Hücre sayımı için</td><td>çift neubauer kurallı hemositometre</td><td>VWR</td><td>63510-13</td></tr><tr><td>Peptit konjugasyonu için</td><td>DSPE-PEG (2000) amin</td><td>Avanti</td><td>880128P</td> peptit konjugasyonu</tr><tr><td></td><td></td><td>için</td><td>DSPE-PEG (2000</td></tr><tr><td>) -NHS ester ve nbsp;</td>Cy5 Dulbecco'nun modifiye kartal orta-yüksek glikozuna <td>konjugasyon için</td> <td>Nanocs</td><td>PG2-DSNS-10K</td></tr><tr><td></td><td>Hücre kültürü için</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D5796-500ML</td></tr><tr><td>Fetal sığır serumu, nitelikli, ısıyla inaktive edilmiş</td><td>ThermoFisher Bilimsel</td><td>10438026</td> hücre <td>kültürü için</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Ala-OH / HBTU</td><td>Protein Teknolojileri</td><td>Peptit sentezi</td><td></td></tr> <tr><td>için PS3-H5-APeptit sentezi için Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH /HBTU</td><td>Protein Teknolojileri</td><td>PS3-H5-RBF</td><td>Peptit</td></tr><tr>sentezi için<td>Fmoc-L-Asn(Trt)-OH/HBTU</td><td>Protein Teknolojileri</td><td>Peptit sentezi için</td><td>Fmoc-L-Cys</td></tr><tr><td>(Trt)-OH /HBTU</td><td>Protein Teknolojileri</td><td>Peptit sentezi için</td><td>PS3-H5-CT</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Gln(Trt)-OH /HBTU</td><td>Protein Teknolojileri</td><td>Peptit sentezi için</td> <td>PS3-H5-QT</td></tr><tr><td>Peptit sentezi için</td> <td>Fmoc-L-Ile-OH /HBTU</td><td>Protein Teknolojileri</td><td>PS3-H5-I</td> Peptit</tr><tr>sentezi için<td>Fmoc-L-Leu-OH /HBTU</td><td>Protein Teknolojileri</td><td>PS3-H5-L</td><td>Peptit sentezi için</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Lys(Boc)-OH /HBTU</td><td>Protein Teknolojileri</td><td>Peptit sentezi için</td><td>PS3-H5-KBC</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Phe-OH /HBTU</td><td>Protein Teknolojileri</td><td>PS3-H5-F</td><td></td></tr><tr><td>Peptit sentezi için</td> <td>Fmoc-L-Ser(tBu)-OH /HBTU</td><td>Protein Teknolojileri</td><td>PS3-H5-SB</td></tr><tr><td>Peptit sentezi için</td><td>Fmoc-L-Thr(tBu)-OH /HBTU</td><td>Protein Teknolojileri</td> Peptit sentezi için <td>PS3-H5-TB</td></tr><tr><td>Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH /HBTU</td><td>Protein Teknolojileri</td><td>Peptit sentezi için</td><td>PS3-H5-YB</td></tr><tr><td>Peptit sentezi için</td> <td>Fmoc-L-Val-OH /HBTU</td><td>Protein Teknolojileri</td><td>PS3-H5-V</td></tr><tr><td>Fmoc-Lys(Boc)-wang reçinesi, peptit sentezi için 100-200 gözlü</td><td>Novabiochem</td><td>856013</td><td></td></tr><tr><td>Formik asit, optima LC / MS sınıfı</td><td>HPLC saflaştırması için</td><td>Fisher Scientific</td><td>A117-50</td></tr><tr><td>Konfokal mikroskopi için</td><td>Gliserol</td><td>VWR</td><td>M152-1L</td></tr><tr><td>Hücre sayımı için</td><td>el çetele sayacı</td><td>Fisher Scientific</td><td>S90189</td></tr><tr><td>Manyetik karıştırma çubukları, </td><td>peptit konjugasyonu için</td>yumurta şeklinde <td>VWR</td><td>58949-006</td></tr><tr><td>Metanol, ACS sertifikalı</td><td>PAM sentezi için</td><td>Fisher Scientific</td><td>A412-4</td></tr><tr><td>MTS hücre proliferasyonu kolorimetrik test kiti MTS</td><td>tahlili için</td><td>VWR</td><td>10191-104</td></tr><tr><td>N, N-Dimetilformamid, sıralama derecesi</td><td>Peptit sentezi için</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1160-4</td></tr><tr><td>N-Metilmorfolin</td><td>Peptit sentezi için</td> <td>Protein Teknolojileri</td><td>S-1L-NMM</td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td>Fisher Scientific</td><td>AC416780250</td> hücreleri <td>sabitlemek için</td></tr><tr><td>PBS, pH 7.4</td> Çeşitli <td>uygulamalar için</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>10010049</td></tr><tr><td>Penisilin/streptomisin, 10.000 U/mL</td> Hücre <td>kültürü için</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td></td></tr><tr><td>15140122 Peptit sentez kabı, 25 mL& nbsp;</td><td>Peptit sentezi için</td> <td>Fisher Scientific</td><td>CG186011</td></tr><tr><td>Fosfotungstik asit&nbsp;</td><td>TEM</td>Piperidin Spektrumu için <td>Fisher Scientific</td><td>A248-25</td></tr><tr><td></td><td></td><td>Peptit sentezi için</td><td>P1146-2.5LTGL</td></tr><tr><td>Düz cam mikroskop lamı 75 x 25 mm</td><td>Konfokal mikroskopi</td>için <td>Fisher Scientific</td><td>12-550-A3</td></tr><tr><td>Reaktif rezervuarları, steril ve nbsp;</td><td>Hücre kültürü için</td> <td>VWR</td><td>95128093</td></tr><tr><td></td><td>TEM için</td><td>kendiliğinden kapanan cımbız</td><td></td></tr><tr><td>TEM için TEM destek filmi</td><td>TedPella</td><td>01814F</td><td></td></tr><tr><td>Trifloroasetik asit&nbsp;</td><td>Peptit bölünmesi ve HPLC saflaştırması için</td> <td>Fisher Scientific</td><td>BP618-500</td></tr><tr><td>Peptit bölünmesi için</td><td>triizopropilsilan</td><td>VWR</td><td>TCT1533-5ml</td></tr><tr><td>Tripan mavisi çözeltisi,</td> <td>hücre sayımı için</td>%0,4 <td>ThermoFisher Scientific</td><td>15250061</td></tr><tr>Cımbız, <td>konfokal mikroskopi için</td><td>genel amaçlı tırtıklı</td><td>VWR</td><td>231-SA-SE</td></tr><tr><td>WEHI-274.1</td><td>ATCC</td><td>ATCC&nbsp; CRL-1679</td><td>murin monosit</td></tr><tr><td>otomatik tezgah üstü peptit sentezleyici</td><td>Protein Teknolojileri</td><td></td><td>PS3 Tezgah Üstü Peptit Sentezleyici</td></tr> <tr><td>ve alfa; - siyano-4-hidroksisinnamik asit,</td> <td>MALDI için</td>% 99 <td>Sigma Aldrich</td><td>476870-2G</td></tr></tbody></table>

monosit hedefleme peptid amfifil micelles için düşsel ateroskleroz sentezi

Synthesis of Monocyte-targeting Peptide Amphiphile Micelles for Imaging of Atherosclerosis

Ateroskleroz hangi 17.3 milyon kişinin hayatına her yıl kalp-damar hastalıkları, dünya çapında, ölüm önde gelen nedenidir için büyük bir katkıda bulunuyor. Ateroskleroz da miyokard infarktüsü, rüptürü ve damar uyarmadan tıkamanın kararsız plaklardan tarafından teşvik ve ani ölüm önde gelen nedenidir. Geçerli görüntüleme yöntemleri rüptürü istikrarlı ve kararsız plaklar arasında ayırt edemez. Özellikle hastalıklı doku için bağlamak moieties hedefleyen çeşitli ile değiştirilebilir gibi peptid amphiphiles micelles (PAMs) bu dezavantaj üstesinden gelebilir. Monosit monosit büyük birikimi rüptürü eğilimli plaklar ile ilişkili olmakla birlikte ateroskleroz, erken işaretler olduğu gösterilmiştir. Bu nedenle, monosit hedefleyebilirsiniz nano tanecikleri ateroskleroz farklı aşamalarında ayırımcılık için kullanılabilir. Bu amaçla, biz burada, monosit hedefleme-PAMs hazırlık için bir protokol tarif (monosit chemoattractant protein-1 (MCP-1) PAMs). MCP-1 PAMs kendinden 15 formu nano tanecikleri için hafif koşullarda sentez yoluyla monte nm ile çapı nötr yüzey şarj yakınındaki. Vitro, PAMs Biyouyumlu bulundu ve monosit için yüksek bağlama ilgi vardı. Burada açıklanan yöntemleri ateroskleroz yanı sıra diğer inflamatuar hastalıklar geniş bir uygulama yelpazesi için umut verici.

MCP-1 PAM hazırlanması MCP-1 protein [YNFTNRKISVQRLASYRRITSSK] veya şifreli peptid [YNSLVFRIRNSTQRKYRASIST] CCR2-bağlama motif (artıkları 13-35) N-terminus üzerinde bir sistein kalıntı ekleyerek güncellenmiştir. MCP-1 peptid bir Fmoc-aracılı katı faz yöntemiyle bir otomatik peptid synthesizer kullanarak sentez. Ham peptid ters fazlı HPLC C8 sütun kullanarak %0,1 50 ° C'de tarafından saflaştırıldı TFA Asetonitril/su karışımları ve maldı kütle spektrometresi (<strong cla...

Bu kağıt malzemelerin ve monosit hedefleme peptid Amfifil micelles içeren bir yöntem sunar ve Biyouyumluluk ve monosit için bağlamak için micelle yeteneğini sınamak için ilgili deneyleri.

Monosit hedefleme peptid Amfifil Micelles için düşsel ateroskleroz sentezi

Atherosclerosis is a major contributor to cardiovascular disease, the leading cause of death worldwide, which claims 17.3 million lives annually. ...

Bu protokolün genel amacı, ateroskleroz görüntülemesi için monosit hedefli peptit amfifil misellerini sentezlemektir. Bu yöntem, aterosklerotik plağın tanısal görüntülemesi ile ilgili kardiyovasküler alandaki anahtar soruyu yanıtlamaya yardımcı olabilir. Bu tekniğin ana avantajı, peptit amfifil misellerinin MCP-1 ile dahil edilmesinin, erken ve geç evre aterosklerotik lezyonlar arasında daha büyük bir hedefleme özgüllüğü ve farklılaşmasına izin vermesidir.Bu tekniğin etkileri, aterosklerozun farklı aşamalarında plak tanısına kadar uzanır, çünkü rüptüre eğilimli, geç evre plakları olan hastalar daha fazla sayıda monosit içerir. Bu yöntem ateroskleroz hakkında bilgi verebilse de, kanser gibi diğer hastalıklara da uygulanabilir. Prosedürü benimle birlikte gösteren, laboratuvarımızdan bir yüksek lisans öğrencisi olan Jonathan Wang olacak.Bir reaksiyon kabında 0.25 milimol fmach-L-lizin-bach-wong-reçinesini tartarak başlayın. Kabı kimyasal bir çeker ocak içine aktarın ve kap taraflarını beş mililitre dimetilforamid ile durulayın. Reaksiyon kabını ve önceden paketlenmiş amino asit şişelerini C-to-N terminalinden otomatik bir tezgah üstü peptit sentezleyiciye yükleyin, son koruma giderme seti için uçta boş bir şişe dahil.Sentezi çalıştırdıktan sonra, peptitleri ve reçineyi reaksiyon kabından, reçinenin tamamı transfer edilene kadar iki ila üç mililitre metanol içeren bir sintilasyon şişesine aktarın. Reçine şişenin dibine battığında, süpernanı çıkarın ve reçinenin kurumasına izin verin, ardından oda sıcaklığında en az iki saat vakumla kurutun. Flakon tamamen kuruduğunda, bir sentez kabının alt yarısını bir kol çalkalayıcıya sabitlemek için bir kelepçe kullanın ve sintilasyon şişesine iki mililitre bölünme solüsyonu ekleyin.Peptit reçinesinin tüm hacmini sentez kabına aktarın ve kabın kenarlarını üç militer taze bölünme çözeltisi ile yıkayın. Daha sonra, dakikada 300 salınımla dört saat boyunca kapaklı kabı sallayın. Çalkalama inkübasyonunun sonunda, bölünmüş peptit çözeltisini dengeli tartılmış 50 mililitrelik konik bir tüpe boşaltın ve sentez kabını kalan bölünme çözeltisi ile birkaç kez durulayın.Santrifüj tüpünde dört mililitreden daha az çözelti kalana kadar bölünmüş peptit çözeltisini nitrojen ile buharlaştırın ve peptit parçalanmış çözeltiye 36 mililitre buz gibi soğuk eter ekleyin. Elde edilen çözeltiyi girdaplayın. Süspansiyon tamamen beyaz veya sarıya döndüğünde, peptitleri santrifüjleme ile peletleyin.Peptiti 40 mililitre buz gibi soğuk eter ve girdapta yeniden süspanse edin ve peptidi tekrar sonikleştirin. İkinci bir santrifüjleme ve süpernatan boşaltma işleminden sonra, ham peptit amfifil peletini nitrojen gazı tahliyesi ile kurutun. Eter gözle görülür şekilde buharlaştırıldığında, tüpe 20 mililitre çift damıtılmış su ekleyin ve peptit çözelti içinde tamamen çözünene kadar tüpü girdaplayın ve sonikleştirin.Çözeltiyi dondurun ve kuruyana kadar canlandırın. Daha sonra tüpü tekrar tartın ve ham peptidi mililitre su başına beş miligram içinde çözün. Daha sonra, ham MCP-1 peptidinin tüm hacmini yüksek performanslı bir sıvı kromotografi veya HPLC cihazına enjekte edin.2.890'da beklenen ürün kütle yükü için matris destekli lazer desorpsiyon iyonizasyon kütle spektroskopisi kullanarak her bir fraksiyonu analiz edin. Ardından ürün fraksiyonlarını birleştirin. Asetonitril'i üfleyin ve saflaştırılmış peptitleri kuruyana kadar dondurun ve canlandırın.MCP-1 peptit amfifillerini veya PA'ları hazırlamak için, önce canlandırılmış peptidi mililitre su başına 15 miligram içinde çözün ve peptit çözeltisini mililitre başına 15 miligram DSPE PEG 2000 milimid çözeltisi ile birleştirin. Çözeltinin pH'ı yediye eşit olana kadar damla damla bir mol sodyum hidroksit ekleyin. Daha sonra beş dakika nitrojen tahliyesi yapın, ardından gece boyunca karıştırın.Ertesi sabah, çözeltiyi dondurun ve canlandırın. Ham ürün kuruduğunda, katıyı mililitre su başına beş miligram içinde çözün ve peptidi gösterildiği gibi HPLC ile saflaştırın. PA membranlarını monte etmek için, 1.75 miligram MCP-1 PA'ları bir dram şişesinde üç mililitre metanol içinde çözün ve MCP-1 PA tamamen çözülene kadar sonikat yapın.Şişeyi dairesel hareketlerle hareket ettirirken ve kalan metanolü şişenin kenarlarından altta homojen bir film oluşana kadar durularken metanolü nitrojen altında buharlaştırın. Filmi gece boyunca vakumla kurutun. Ertesi sabah, 100 mikromolar MCP-1 PAM çözeltisi yapmak için filmi üç mililitre su ile nemlendirin ve çözeltiyi berrak olana kadar nazikçe girdap ve sonikasyon yapın.Çözeltiyi 80 santigrat derecede 30 dakika inkübe edin, ardından elde edilen dispersiyonu soğutun. Aşağıdaki temsili deneyde, MCP-1 ve karıştırılmış peptit, asetonitril su karışımlarında% 0.1 trifloroasetik asit kullanılarak% 50 santigrat derecede bir CA sütunu üzerinde ters fazlı HPLC ile saflaştırıldı. Ve az önce gösterildiği gibi matris destekli lazer desorpsiyon iyonizasyon kütle spektrometresi ile karakterize edilir.Desisting içeren peptitler, bir tiyoeter bağı yoluyla DSPE PEG 2000 peptit konjugatları elde etmek için DSPE PEG 2000 miliamid üzerine konjuge edildi ve bir C4 kolonu kullanılarak HPLC ile saflaştırıldı. Dinamik ışık saçılımı analizi ve monosit hedefleme PAM'lerinin transmisyon elektron mikroskobu görüntülemesi, hafif pozitif zeta potansiyellerine sahip iyi dağılmış küresel nanopartikülleri ortaya çıkardı. Dairesel dikroskopi spektroskopisi analizi, MCP-1 peptidinin misel içine dahil edilmesinin ikincil yapıyı güçlendirdiğini doğruladı.72 saat boyunca 100 mikromolar konsantrasyona kadar MCP-1 peptit, MCP-1 PAM, karıştırılmış peptit ve karıştırılmış PAM içeren inkübasyon amalse monositleri, peptitlerin canlılığını ve biyouyumluluğunu göstermiştir. Monositlerin karıştırılmış PAM'lara kıyasla MCP-1 PAM'lara spesifik bağlanması daha sonra konfokal mikroskopi ile belirlenir. Bu videoyu izledikten sonra, MCP-1 peptidinin sentezi ve saflaştırılması ve MCP-1 peptid amfifil ve misel düzeneğinin hazırlanması yoluyla monosit hedefleme peptit amfifil miselinin nasıl hazırlanacağını iyi anlamış olmalısınız.Kimyasal reaktifle çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve bu malzemelerle çalışırken MSDS'yi okumak ve kimyasal çeker ocak içinde çalışmak gibi önlemlerin her zaman alınması gerektiğini unutmayın.

synthesis-monocyte-targeting-peptide-amphiphile-micelles-for-imaging

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Fare prostat kanseri modelinde tümör stroma içinde pıhtılaşmış plazma proteinlerine özel bir MRT-kontrast maddesi hedefleyen küçük peptid ile MR kanser moleküler görüntüleme göstermek için.

Küçük Moleküler CLT1 Peptide Hedefli Kontrast Agent ile Prostat Kanseri MR Moleküler Görüntüleme

Polymalic asit bazlı bir nano ilacın bir örnek kanser için de geçerlidir kişiye tıp rasyonel tasarım karşı sunulmuştur. Bu, bir çıplak fare Her2-pozitif insan meme kanseri tedavisi için bir nano ilacın sentezini tarif eder.

Çoklu Tümör Belirteçleri Hedefleme için Polymalic Asit bazlı Nano Biopolymers: Kişiselleştirilmiş Tıp için Bir Fırsat?

Kanserin fotoakustik görüntülemesi için altın nanoçubuklar içeren hücresel araçların hazırlanmasını gösteriyor ve fizibilitesini ele alıyoruz.

Altın nanorods İçeren Hücresel Araçların Hazırlama ve foto akustik Analizi

Mikrodalga teknolojisi ateroskleroz plak karakterizasyonu için demir oksit nanopartiküllerinin son derece hızlı bir sentez edilmesine imkan verir. nanoparçacık dış tarafında bir aminobisfosfonat kullanımı aterosklerotik alanda hızlı bir birikim sağlar.

Ateroskleroz Hızlı Algılama Demir Oksit Nanopartiküller Mikrodalga odaklı sentezi

Kanser ilaçlarını tümör bölgelerine yüksek özgüllük ve azaltılmış yan etkilerle ulaştırmak için nanopartiküllere dayalı yeni yöntemler gereklidir. Burada, hidrojen peroksit aracılı oksidasyon ile kolayca hazırlanabilen ve yükleri serbest bırakmak için indirgeyici bir tümör ortamı altında verimli bir şekilde ayrışabilen disülfür çapraz bağlı miselleri açıklıyoruz.

Döner disülfür Çapraz bağlı misellerin Üretimi için basit ve etkin Yaklaşım

Antikor-conjugates için (ACs) birleştiğinde Viral kaynaklı peptidler, moleküler yükleri artan tümör hücre birikmesi ile teslim etme potansiyeli nedeniyle ivme kazanıyor bir yaklaşım var. Peptid konjügasyon, AC ve hücre içi yük birikimi ve tümör hedefleme değerlendirmek için ortak yöntemleri kullanarak, bu protokolü anahtar ilk geliştirme aşamalarında araştırmacılar yardımcı olur.

Antikor conjugates ilk değerlendirilmesi ile Viral kaynaklı peptidler hücresel birikimi artan ve tümör hedefleme artırmak için değiştirilmiş

Monosit arteriogenesis periferik arter hastalığı bağlamında önemli arabulucu vardır. Bu iletişim kuralı bir membran benzeri matris ve intravital mikroskobu kullanarak, monosit enjeksiyon femoral arter ligasyonu fare modeli sonra monosit izleme ve tümör ile ilgili angiogenez inceler.

Monosit posta ve tümör ile ilgili angiogenez periferik arter hastalığı, bir fare modeli intravital mikroskobu

Biz hicret monosit karşısında insan endotel monolayers tarafından ve onların sonraki olgunlaşma köpük hücrelerine ölçmek için bir protokol tanımlamak. Bu farklı hastalık koşullara sahip insanlardan izole monosit aterojenik özelliklerini değerlendirmek için ve bu eğilimi geliştirmek kan faktörleri değerlendirmek için çok yönlü bir yöntem sağlar.

Miktar monosit hicret ve köpük hücre oluşumu kronik inflamatuar koşullara sahip bireylerden

Burada fare modellerinde kan monositlerinin kemotaktik aktivitesini ölçmek, beslenme, farmakolojik ve genetik müdahalelerin kan monositi üzerindeki etkilerini değerlendirmek ve kan monositlerinden elde edilen makrofajları karakterize etmek için bir protokol sıyoruz. monosit-kemoattractant protein-1 (MCP-1) yüklü bazal membran kaynaklı jel fişleri kullanarak fare modelleri.

İn Vivo Monosit Kemotaktik Aktivitenin Ölçülmesi ve Kan Monosit Türevi Makrofajların Karakterizasyonu

Burada kendi kendine montaj 3-boyutlu iskele kültür insan nöral progenitör hücrelerin kullanımını tanımlamak. Biz flow sitometri ile analiz edilecek daha sonra örneğin iskeleleri hücreleri serbest bırakmak için bir protokol mevcut. Bu protokol detaylı mekanistik çalışmalar gerçekleştirmek için diğer hücre türlerine adapte olabilir.

3 boyutlu montaj Self-Peptid Hidrojel İnsan Sinir Progenitör Hücreler Yetiştiriciliği

Öğrenin, monosit hedefleyen peptit amfifil miseller sentezleyerek ateroskleroz görüntülemesinde erken ve geç evre plakları ayırt etme yöntemini. Bu teknik kardiyovasküler tanıda spesifikliği artırır.

Monosit hedefleme peptid Amfifil Micelles için düşsel ateroskleroz sentezi

Daha fazla video keşfet