Name: Saf küçük Fiber nöropati bir fare modeli ile geçici reseptör potansiyel Vanilloid tip 1 Ultrapotent Agonist kurulması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-02-13T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 39 s
Description: Öğrenin, farelerde resiniferatoksin ile saf küçük fiber nöropati modeli kurmayı. Bu yöntem termal hipaljezi ve mekanik allodini oluşturarak nöropatik ağrı mekanizmalarını incelemeye olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser Bakanlığı bilim ve Teknoloji (106-2320-B-037-024), Kaohsiung Tıp Üniversitesi (KMU-M106028, KMU-S105034) ve amaç üst üniversiteler hibe (TP105PR15), Kaohsiung Tıp Üniversitesi, Tayvan için gelen hibe tarafından desteklenmiştir.

Laboratuvar hayvanları30için etik kurallar doğrultusunda açıklanan yordamları vardır ve protokol hayvan Komitesi Kaohsiung Tıp Üniversitesi tarafından Kaohsiung, Tayvan kabul gördü.
1. RTX nöropati kurulması
Uyarı: RTX Nörotoksik ve tehlikeli. Temas, göz, müköz membranlar ve üst solunum yolu için tahriş edici olarak görür. İnhalasyon önlemek ve laboratuvar gözlük ve kat RTX hazırlık sırasında giymek. Bol suyla cilde temas durumunda veya işleme sonra durulayın.
<ol><li>RTX tozu 1 mg 200 µL eşit hacmi Tween 80 ve mutlak etanol (her çözücü için 100 µL) karışımı ekleyin.</li>
	<li>Aliquot RTX çözüm (12 µL/flakon) ve -20 ° C'de 3 aya kadar. Bu RTX hisse senedi oluşturmaktadır; süre sonu itibariyle kalan RTX çözüm atın.</li>
	<li>Son hacmi 600 µL için normal salin ile RTX stok sulandırmak. RTX çözüm son konsantrasyonu %0.01 1 µg RTX 10 µL araç çözümde eşit olmalıdır.</li>
	<li>8-hafta-yaşlı yetişkin erkek ICR fareler (35-40 g) deneysel hayvan olarak kullanın ve tek doz RTX çözüm yönetmek (doz: 200, 50 ve 10 µg/kg, sırasıyla) intraperitoneally (IP) ile mikroenjeksiyon şırınga fareler için. Fareler tarafından derin anestezi için %5 isoflurane ile inhaler anestezi. Fareler ekstremitelerde para çekme eylemi RTX enjeksiyon sırasında gösterdi, fareler daha uzun inhalasyon anestezi almalıdır. Örnek: fare 40 g ağırlığında, sonra o 50 µg/kg doz temsil eden RTX çözümün 20 µL alırsınız.</li>
	<li>Farelerin bir grup bir denetim araç (% 10 Tween 80 ve % 10 mutlak etanol tuzlu çözüm), eşit bir hacmi ver.</li>
	<li>Sonra RTX enjeksiyon, fareler üzerinde bir 12-saat ışık/12-h karanlık bir plastik kafes için döngüsü ve yiyecek sağlamak ve ad libitumsu verir.</li>
</ol>2. nöropatik davranış değerlendirilmesi
Not: kurtarma izin vermek için rahat bir ortam (Adım 1.6) hayvanlarda enjeksiyon sonra korumak. 7. gün sonrası RTX enjeksiyon (D7), her hayvan davranış testleri verimliliği teşvik ve saatine göre azaltmak için aynı gün sıcak sac ve von Frey saç filaman sınamaları gerçekleştirir. Hayvan iklimlendirme en iyi duruma getirme ve davranışsal test sırasında çevresel etkileri azaltmak için istikrarlı nem oranı (% 40) ve sıcaklık (27 ° C) de tutulur sessiz bir oda için hayvan getirmek. Hayvanlar sınav dönemlerinde rahatsız etmeyin; davranış testleri haftalık zamanlanır.
<ol><li>Sıcak plaka testi ile termal gecikme süreleri ölçümü<ol>
<li>Hayvan yavaşça bir metal Isıtma levhası (27 cm × 29 cm) ile şeffaf pleksiglas kafes yerleştirin (Uzunluk × Genişlik × Yükseklik: 22 cm × 22 cm × 25 cm; Şekil 1A). Metal sıcak plaka sıcaklık 52 ° C'ye ayarlayın</li>
		<li>Bir kez hayvanın hindpaws sıcak plaka dokunma ve hayvanın hindpaws yanıt gözlemlemek hayvanın sıcak plaka üzerinde termal gecikme süresi ile sıcak plaka adım üzerinde yerleşik zaman ölçümünü başlatmak. Hayvan sallayarak gösteriyorsa, hindpaws yalama veya sıcak plaka üzerinde atlama kaldırmak ve hayvan sıcak plaka üzerinde kaldı süresini kaydetmek. Bu süre bireysel bir hayvan termal gecikme tanımlar. Termal gecikme süresi en yakın 0,1 için kayıt s.</li>
		<li>Her test oturumu için 30 dk aralıklarla son sıcak plaka test sonra yanıt normalleştirme için üç denemeler yapın. Hayvan sıcak plaka üzerinde hiçbir yanıtı gösteriyorsa, 25 sonra kesin potansiyel doku hasarı önlemek için s.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Mekanik eşik von Frey saç filaman ile ölçüm test<ol>
<li>Özelleştirilmiş metal kafes üzerinde hayvan koymak (Kafes boyutu: 5 mm × 5 mm) bir yarı saydam silindir pleksiglas kafes ile (çapı: 13 cm; yükseklik: 12 cm) (şekil 1B) iklimlendirme için en az 2 h için.</li>
		<li>Von Frey saç filamentler farklı kalibre alçalarak yöntemi31' le hindpaw plantar bölgesine uygulayın. İlk başvuru süresi 5-8 s filaman uygulanması için von Frey saç filamentler bir dizi orta kuvvetlerinden başlatın.</li>
		<li>Filaman uygulamaları hayvan normalleştirme en iyi duruma getirmek için 2 dk aralığını kullanın. Hayvanın Son Yanıt üzerinde temel uygulamalı filaman kuvvet değiştirin. Not: 0.064, 0.085, 0.145, 0,32, 0.39, 1.1 ve 1,7 g kuvvet uygulama von Frey saç filamentler bir dizi oluşur. Örneğin, hindpaw para çekme 0,32 g ilk bir kuvvet ile oluştuysa, 0,145 g uygulanır. Pençe çekilme yokluğunda, 0,39 g kuvvet sonra uygulanır. O zaman değişen kuvvetlerin dört ek filamentler bağlı önceki yanıt olarak uygulanır ve mekanik eşik bir yayımlanan formül31göre hesaplanır.</li>
		<li>Her test oturumu için ikili hindpaws içerir. Üç denemeler her hindpaw için gerçekleştirin. Bu altı mekanik eşikleri ortalama kaba mekanik eşiğinde her hayvan (mg) hızlı.</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56651/56651fig1.jpg"> Şekil 1. Özel yapım pleksiglas kafes ve metal mesh nöropatik ağrı resiniferatoxin (RTX), fare modeli değerlendirilmesi için-küçük fiber nöropati indüklenen. (A, B) Bu grafikler ölçmek için kullanılan ekipman(a)bir şeffaf pleksiglas kafes ile metal bir sıcak plaka (27 cm × 29 cm) tarafından termal gecikme süreleri göster (Uzunluk × Genişlik × Yükseklik: 22 cm × 22 cm × 25 cm) ve (B) tarafından özelleştirilmiş bir meta mekanik eşik değer biçmek l kafes (Kafes boyutu: 5 mm × 5 mm) bir yarı saydam silindir pleksiglas kafes ile (çapı: 13 cm; yükseklik: 12 cm) ile küçük fiber RTX kaynaklı nöropati farelerde. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56651/56651fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
3. cilt biyopsisi hazırlık ve IENFs innervasyon değerlendirilmesi
<ol><li>Sınama davranışını sonra % 5 isoflurane hayvanlarla anestezi ve 0.1 M fosfat tampon (PB) (pH 7,4) ile İntrakardiyak perfüzyon hayvanlara % 4 paraformaldehyde (4 P) 0.1 M PB ardından kurban.</li>
	<li>İki hindpaws ilk ayaklıkları perfüzyon sonra kesin ve onları sonrası başka bir 6 h. 0.1 M PB uzun süreli depolama için 4 ° C'de footpad doku aktarmak için 4 P bağlayacaktın.</li>
	<li>Cryoprotect ayakları PB gecede % 30 sukroz ve yüzey şekilde plantar 30 µm kalınlığında dilimler için dikey kesim ile. Footpad bölümler ardışık olarak etiketleyin ve sonra antifriz-20 ° C'de depolayın Not: Antifriz kompozisyon gibidir: distile su, etilen gliserol, gliserol ve 2 x PB 3:3:3:1 oranında.</li>
	<li>Yeterli örnekleme sağlamak için footpad üçüncü her bölümünü seçin.<ol>
<li>Seçilen footpad bölümleri kaplamalı cam slaytlar üzerine koymak ve onları kuruması.</li>
		<li>Plastik coverplate slayt ve süreci ile standart immunostaining yordamları kapsar.<ol>
<li>Metanol için 30 dk içinde % 1 H2O2 footpad bölümlerle gidermek ve % 0,1 ile % 0.5 yağsız kuru süt Triton X-100 0.5 M Tris arabelleği (Tris) için 1 h blok.</li>
			<li>Pan aksonal marker, PGP 9.5 (büyüdü tavşan; 1:1, 000), karşı antisera bölümlerle footpad gecede 4 ° C'de kuluçkaya</li>
			<li>Footpad bölümleri ile bir biotinylated keçi Anti-tavşan IgG ikincil antikor, oda sıcaklığında (RT) 1 h için kuluçkaya ve RT, avidin-biotin kompleks için 45 dk ile kuluçkaya.</li>
			<li>Reaksiyon ürünü % 0.05 ile görselleştirmek için 45 3, 3'-diaminobenzidine (DAB) çözüm s. Sonra footpad bölümleri distile su ile yıkayın ve onları montaj için kuruması. Not: Birincil ve ikincil antisera %0,5 0.5 M Tris yağsız kuru süt ile seyreltilmiş.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. DRG bölümüne hazırlık ve yaralı küçük çaplı nöronlar değerlendirilmesi
<ol><li>Th 4 ve 5inci teşrih bel DRG ve sonrası düzeltme başka bir 2 h için.</li>
	<li>PB % 30 Sükroz Cryoprotect DRG kurcalayarak bir gecede ve bir 8-µm kalınlık için sırayla kesip, mikroskop slaytlar ve etiket yerleştirin. DRG bölümleri-80 ° C dondurucuda saklayın.</li>
	<li>Immunostain DRG bölümleri yeterli örnekleme sağlamak için 80 µm aralıklarla.<ol>
<li>Bu footpad bölümlerin çift etiketleme immünfloresan yordamlar dışında DRG immunostaining yordamları gerçekleştirin. Alternatif olarak, ATF3 dahil (büyüdü tavşan; 1: 100), bir yaralanma marker ve peripherin (büyüdü fare; 1:800), birincil antisera küçük çaplı nöronal işaretleyicisinde.</li>
		<li>DRG bölümleri gecede 4 ° C'de birincil antisera karışımı ile kuluçkaya</li>
	</ol>
</li>
	<li>Her iki Teksas kırmızı veya floresein isothiocyanate (FITC) bölümlerle DRG kuluçkaya-Birleşik ikincil antisera (1: 200), 1 h için uygun birincil antisera RT, karşılık gelen ve miktar için monte edin.</li>
</ol>

<ol><li>Shun, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skin+denervation+in+type+2+diabetes%3A+correlations+with+diabetic+duration+and+functional+impairments%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Skin denervation in type 2 diabetes: correlations with diabetic duration and functional impairments.</a> Brain. 127 (Pt 7), 1593-1605 (2004).</li>
<li>Polydefkis, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+time+course+of+epidermal+nerve+fibre+regeneration%3A+studies+in+normal+controls+and+in+people+with+diabetes%2C+with+and+without+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">The time course of epidermal nerve fibre regeneration: studies in normal controls and in people with diabetes, with and without neuropathy.</a> Brain. 127 (Pt 7), 1606-1615 (2004).</li>
<li>Holland, N. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small-fiber+sensory+neuropathies%3A+clinical+course+and+neuropathology+of+idiopathic+cases%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Neurol%22%5BJournal%5D)">Small-fiber sensory neuropathies: clinical course and neuropathology of idiopathic cases.</a> Ann Neurol. 44 (1), 47-59 (1998).</li>
<li>Chaudhry, V., Rowinsky, E. K., Sartorius, S. E., Donehower, R. C., Cornblath, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripheral+neuropathy+from+taxol+and+cisplatin+combination+chemotherapy%3A+clinical+and+electrophysiological+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Neurol%22%5BJournal%5D)">Peripheral neuropathy from taxol and cisplatin combination chemotherapy: clinical and electrophysiological studies.</a> Ann Neurol. 35 (3), 304-311 (1994).</li>
<li>Mellgren, S. I., Nolano, M., Sommer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cutaneous+nerve+biopsy%3A+technical+aspects%2C+indications%2C+and+contribution%5BTitle%5D)+AND+%22Handb+Clin+Neurol%22%5BJournal%5D)">The cutaneous nerve biopsy: technical aspects, indications, and contribution.</a> Handb Clin Neurol. 115, 171-188 (2013).</li>
<li>Hsieh, Y. L., Chiang, H., Lue, J. H., Hsieh, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P2X3-mediated+peripheral+sensitization+of+neuropathic+pain+in+resiniferatoxin-induced+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">P2X3-mediated peripheral sensitization of neuropathic pain in resiniferatoxin-induced neuropathy.</a> Exp Neurol. 235 (1), 316-325 (2012).</li>
<li>Fukuoka, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Re-evaluation+of+the+phenotypic+changes+in+L4+dorsal+root+ganglion+neurons+after+L5+spinal+nerve+ligation%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Re-evaluation of the phenotypic changes in L4 dorsal root ganglion neurons after L5 spinal nerve ligation.</a> Pain. 153 (1), 68-79 (2012).</li>
<li>Joint Task Force of the, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((European+Federation+of+Neurological+Societies%2FPeripheral+Nerve+Society+Guideline+on+the+use+of+skin+biopsy+in+the+diagnosis+of+small+fiber+neuropathy.+Report+of+a+joint+task+force+of+the+European+Federation+of+Neurological+Societies+and+the+Peripheral+Nerve+Society%5BTitle%5D)+AND+%22J+Peripher+Nerv+Syst%22%5BJournal%5D)">European Federation of Neurological Societies/Peripheral Nerve Society Guideline on the use of skin biopsy in the diagnosis of small fiber neuropathy. Report of a joint task force of the European Federation of Neurological Societies and the Peripheral Nerve Society.</a> J Peripher Nerv Syst. 15 (2), 79-92 (2010).</li>
<li>Hsieh, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathology+and+functional+diagnosis+of+small-fiber+painful+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neurol+Taiwan%22%5BJournal%5D)">Pathology and functional diagnosis of small-fiber painful neuropathy.</a> Acta Neurol Taiwan. 19 (2), 82-89 (2010).</li>
<li>Kennedy, W. R., Wendelschafer-Crabb, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Utility+of+the+skin+biopsy+method+in+studies+of+diabetic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Electroencephalogr+Clin+Neurophysiol+Suppl%22%5BJournal%5D)">Utility of the skin biopsy method in studies of diabetic neuropathy.</a> Electroencephalogr Clin Neurophysiol Suppl. 50, 553-559 (1999).</li>
<li>Kennedy, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Opportunities+afforded+by+the+study+of+unmyelinated+nerves+in+skin+and+other+organs%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">Opportunities afforded by the study of unmyelinated nerves in skin and other organs.</a> Muscle Nerve. 29 (6), 756-767 (2004).</li>
<li>Verdu, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiological+and+immunohistochemical+characterization+of+cisplatin-induced+neuropathy+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">Physiological and immunohistochemical characterization of cisplatin-induced neuropathy in mice.</a> Muscle Nerve. 22 (3), 329-340 (1999).</li>
<li>Ko, M. H., Hu, M. E., Hsieh, Y. L., Lan, C. T., Tseng, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptidergic+intraepidermal+nerve+fibers+in+the+skin+contribute+to+the+neuropathic+pain+in+paclitaxel-induced+peripheral+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropeptides%22%5BJournal%5D)">Peptidergic intraepidermal nerve fibers in the skin contribute to the neuropathic pain in paclitaxel-induced peripheral neuropathy.</a> Neuropeptides. 48 (3), 109-117 (2014).</li>
<li>Hsieh, S. T., Chiang, H. Y., Lin, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathology+of+nerve+terminal+degeneration+in+the+skin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuropathol+Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Pathology of nerve terminal degeneration in the skin.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 59 (4), 297-307 (2000).</li>
<li>Tseng, T. J., Hsieh, Y. L., Ko, M. H., Hsieh, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Redistribution+of+voltage-gated+sodium+channels+after+nerve+decompression+contributes+to+relieve+neuropathic+pain+in+chronic+constriction+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Redistribution of voltage-gated sodium channels after nerve decompression contributes to relieve neuropathic pain in chronic constriction injury.</a> Brain Res. 1589, 15-25 (2014).</li>
<li>Hsieh, Y. L., Lin, W. M., Lue, J. H., Chang, M. F., Hsieh, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+4-methylcatechol+on+skin+reinnervation%3A+promotion+of+cutaneous+nerve+regeneration+after+crush+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuropathol+Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Effects of 4-methylcatechol on skin reinnervation: promotion of cutaneous nerve regeneration after crush injury.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 68 (12), 1269-1281 (2009).</li>
<li>Tseng, T. J., Chen, C. C., Hsieh, Y. L., Hsieh, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+decompression+on+neuropathic+pain+behaviors+and+skin+reinnervation+in+chronic+constriction+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Effects of decompression on neuropathic pain behaviors and skin reinnervation in chronic constriction injury.</a> Exp Neurol. 204 (2), 574-582 (2007).</li>
<li>Hsieh, Y. L., Chiang, H., Tseng, T. J., Hsieh, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+cutaneous+nerve+regeneration+by+4-methylcatechol+in+resiniferatoxin-induced+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuropathol+Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Enhancement of cutaneous nerve regeneration by 4-methylcatechol in resiniferatoxin-induced neuropathy.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 67 (2), 93-104 (2008).</li>
<li>Hsieh, Y. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+Peptidergic+Nerve+Terminals+in+the+Skin%3A+Reversal+of+Thermal+Sensation+by+Calcitonin+Gene-Related+Peptide+in+TRPV1-Depleted+Neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Role of Peptidergic Nerve Terminals in the Skin: Reversal of Thermal Sensation by Calcitonin Gene-Related Peptide in TRPV1-Depleted Neuropathy.</a> PLoS One. 7 (11), e50805(2012).</li>
<li>Neubert, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peripherally+induced+resiniferatoxin+analgesia%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Peripherally induced resiniferatoxin analgesia.</a> Pain. 104 (1-2), 219-228 (2003).</li>
<li>Almasi, R., Petho, G., Bolcskei, K., Szolcsanyi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+resiniferatoxin+on+the+noxious+heat+threshold+temperature+in+the+rat%3A+a+novel+heat+allodynia+model+sensitive+to+analgesics%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Effect of resiniferatoxin on the noxious heat threshold temperature in the rat: a novel heat allodynia model sensitive to analgesics.</a> Br J Pharmacol. 139 (1), 49-58 (2003).</li>
<li>Karai, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deletion+of+vanilloid+receptor+1-expressing+primary+afferent+neurons+for+pain+control%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Deletion of vanilloid receptor 1-expressing primary afferent neurons for pain control.</a> J Clin Invest. 113 (9), 1344-1352 (2004).</li>
<li>Apostolidis, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Capsaicin+receptor+TRPV1+in+urothelium+of+neurogenic+human+bladders+and+effect+of+intravesical+resiniferatoxin%5BTitle%5D)+AND+%22Urology%22%5BJournal%5D)">Capsaicin receptor TRPV1 in urothelium of neurogenic human bladders and effect of intravesical resiniferatoxin.</a> Urology. 65 (2), 400-405 (2005).</li>
<li>Helyes, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiinflammatory+and+analgesic+effects+of+somatostatin+released+from+capsaicin-sensitive+sensory+nerve+terminals+in+a+Freund%27s+adjuvant-induced+chronic+arthritis+model+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Antiinflammatory and analgesic effects of somatostatin released from capsaicin-sensitive sensory nerve terminals in a Freund's adjuvant-induced chronic arthritis model in the rat.</a> Arthritis Rheum. 50 (5), 1677-1685 (2004).</li>
<li>Kissin, I., Bright, C. A., Bradley, E. L. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+and+long-lasting+neural+blockade+with+resiniferatoxin+prevents+inflammatory+pain+hypersensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Anesth+Analg%22%5BJournal%5D)">Selective and long-lasting neural blockade with resiniferatoxin prevents inflammatory pain hypersensitivity.</a> Anesth Analg. 94 (5), table of contents 1253-1258 (2002).</li>
<li>Helyes, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibitory+effect+of+anandamide+on+resiniferatoxin-induced+sensory+neuropeptide+release+in+vivo+and+neuropathic+hyperalgesia+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Inhibitory effect of anandamide on resiniferatoxin-induced sensory neuropeptide release in vivo and neuropathic hyperalgesia in the rat.</a> Life Sci. 73 (18), 2345-2353 (2003).</li>
<li>Kissin, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vanilloid-induced+conduction+analgesia%3A+selective%2C+dose-dependent%2C+long-lasting%2C+with+a+low+level+of+potential+neurotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesia+and+analgesia%22%5BJournal%5D)">Vanilloid-induced conduction analgesia: selective, dose-dependent, long-lasting, with a low level of potential neurotoxicity.</a> Anesthesia and analgesia. 107 (1), 271-281 (2008).</li>
<li>Pan, H. L., Khan, G. M., Alloway, K. D., Chen, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resiniferatoxin+induces+paradoxical+changes+in+thermal+and+mechanical+sensitivities+in+rats%3A+mechanism+of+action%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Resiniferatoxin induces paradoxical changes in thermal and mechanical sensitivities in rats: mechanism of action.</a> J Neurosci. 23 (7), 2911-2919 (2003).</li>
<li>Iadarola, M. J., Mannes, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+vanilloid+agonist+resiniferatoxin+for+interventional-based+pain+control%5BTitle%5D)+AND+%22Current+topics+in+medicinal+chemistry%22%5BJournal%5D)">The vanilloid agonist resiniferatoxin for interventional-based pain control.</a> Current topics in medicinal chemistry. 11 (17), 2171-2179 (2011).</li>
<li>Zimmermann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ethical+guidelines+for+investigations+of+experimental+pain+in+conscious+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Ethical guidelines for investigations of experimental pain in conscious animals.</a> Pain. 16 (2), 109-110 (1983).</li>
<li>Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+assessment+of+tactile+allodynia+in+the+rat+paw%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw.</a> J Neurosci Methods. 53 (1), 55-63 (1994).</li>
<li>Cliffer, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiological+characterization+of+Taxol-induced+large-fiber+sensory+neuropathy+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Neurol%22%5BJournal%5D)">Physiological characterization of Taxol-induced large-fiber sensory neuropathy in the rat.</a> Ann Neurol. 43 (1), 46-55 (1998).</li>
<li>Lipton, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Taxol+produces+a+predominantly+sensory+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Taxol produces a predominantly sensory neuropathy.</a> Neurology. 39 (3), 368-373 (1989).</li>
<li>Bennett, G. J., Xie, Y. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+peripheral+mononeuropathy+in+rat+that+produces+disorders+of+pain+sensation+like+those+seen+in+man%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">A peripheral mononeuropathy in rat that produces disorders of pain sensation like those seen in man.</a> Pain. 33 (1), 87-107 (1988).</li>
<li>Ko, M. H., Hsieh, Y. L., Hsieh, S. T., Tseng, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nerve+demyelination+increases+metabotropic+glutamate+receptor+subtype+5+expression+in+peripheral+painful+mononeuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Nerve demyelination increases metabotropic glutamate receptor subtype 5 expression in peripheral painful mononeuropathy.</a> Int J Mol Sci. 16 (3), 4642-4665 (2015).</li>
<li>Jeftinija, S., Liu, F., Jeftinija, K., Urban, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+capsaicin+and+resiniferatoxin+on+peptidergic+neurons+in+cultured+dorsal+root+ganglion%5BTitle%5D)+AND+%22Regul+Pept%22%5BJournal%5D)">Effect of capsaicin and resiniferatoxin on peptidergic neurons in cultured dorsal root ganglion.</a> Regul Pept. 39 (2-3), 123-135 (1992).</li>
<li>Caudle, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resiniferatoxin-induced+loss+of+plasma+membrane+in+vanilloid+receptor+expressing+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotoxicology%22%5BJournal%5D)">Resiniferatoxin-induced loss of plasma membrane in vanilloid receptor expressing cells.</a> Neurotoxicology. 24 (6), 895-908 (2003).</li>
<li>Acs, G., Biro, T., Acs, P., Modarres, S., Blumberg, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+activation+and+desensitization+of+sensory+neurons+by+resiniferatoxin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Differential activation and desensitization of sensory neurons by resiniferatoxin.</a> J Neurosci. 17 (14), 5622-5628 (1997).</li>
<li>Athanasiou, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vanilloid+receptor+agonists+and+antagonists+are+mitochondrial+inhibitors%3A+how+vanilloids+cause+non-vanilloid+receptor+mediated+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Vanilloid receptor agonists and antagonists are mitochondrial inhibitors: how vanilloids cause non-vanilloid receptor mediated cell death.</a> Biochem Biophys Res Commun. 354 (1), 50-55 (2007).</li>
<li>Wu, C. H., Ho, W. Y., Lee, Y. C., Lin, C. L., Hsieh, Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EXPRESS%3A+NGF-trkA+signaling+modulates+the+analgesic+effects+of+prostatic+acid+phosphatase+in+resiniferatoxin-induced+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Pain%22%5BJournal%5D)">EXPRESS: NGF-trkA signaling modulates the analgesic effects of prostatic acid phosphatase in resiniferatoxin-induced neuropathy.</a> Mol Pain. 12, (2016).</li>
<li>Hsiao, T. H., Fu, Y. S., Ho, W. Y., Chen, T. H., Hsieh, Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Promotion+of+thermal+analgesia+and+neuropeptidergic+skin+reinnervation+by+4-methylcatechol+in+resiniferatoxin-induced+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Kaohsiung+J+Med+Sci%22%5BJournal%5D)">Promotion of thermal analgesia and neuropeptidergic skin reinnervation by 4-methylcatechol in resiniferatoxin-induced neuropathy.</a> Kaohsiung J Med Sci. 29 (8), 405-411 (2013).</li>
<li>Chao, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiology+of+neuropathic+pain+in+type+2+diabetes%3A+skin+denervation+and+contact+heat-evoked+potentials%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">Pathophysiology of neuropathic pain in type 2 diabetes: skin denervation and contact heat-evoked potentials.</a> Diabetes Care. 33 (12), 2654-2659 (2010).</li>
<li>Kim, S. H., Chung, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+experimental+model+for+peripheral+neuropathy+produced+by+segmental+spinal+nerve+ligation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">An experimental model for peripheral neuropathy produced by segmental spinal nerve ligation in the rat.</a> Pain. 50 (3), 355-363 (1992).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa yoktur

Küçük fiber nöropati klinikte etkili tedavisi hastaların yaşam kalitesi ve fonksiyonel iyileşme teşvik için gereklidir. Şu anda, küçük çaplı nöronal yaralanma temel moleküler mekanizmaları kapsamlı anlayış eksikliği küçük fiber nöropati ile ilgili duyusal bozukluk hedefleme terapötik bir rehber eksikliği vardır. Nöropati önceki modellere genellikle her iki büyük - ve küçük çaplı duyusal sinir etkilenen; Örneğin, kemoterapi kaynaklı nöropati12,32,<sup c...

IENFs dejenerasyon tarafından belirgindir, nöropatik ağrı içeren küçük fiber nöropati koşulları, DM gibi ve kemoterapötik ajanlar1,2Nörotoksik etkileri sonucunda çeşitli türleri yaygındır, 3,4,5. IENFs dorsal kök gangliyon (DRG) bulunan küçük çaplı nöronların periferik terminalleri ve paralel IENF dejenerasyon6durumlarında etkilenir. Örneğin, nöronal somata değişmiş ters yönde genetik transkripsiyon transkripsiyon faktörü-3 (ATF3)6,7etkinleştirme upregulation tarafından kanıtlanmıştır. Ayrıca, IENFs innervasyon cilt biyopsisi ile değerlendirilmesi küçük fiber nöropati5,8,9tanısı için yararlıdır. Geleneksel olarak, Cilt biyopsisi üzerinde IENFs profilleri protein gen ürünü immunohistokimyasal serilerinden 9,5 (PGP 9.5)1,10,11bağlıydı. Birlikte ele alındığında, DRG ve IENFs patolojik profilleri fonksiyonel durumu temel küçük fiber nöropati yansıtmak ve fonksiyonel sonuçları nöropati küçük çaplı nöronlar üzerinde bu tür bir göstergesi olabilir.
Daha önce çeşitli deneysel modeller IENF dejenerasyon sıkıştırma veya transeksiyon14,15 tarafından neden kemoterapi kaynaklı nöropati12,13 ve sinir yaralanma durumlarda sorunu ele sahip , 16. etkilenen bu modeller de geniş çaplı sinirler; Bu nedenle oldu, gözlenen küçük fiber nöropati; etkilenen büyük çaplı sinirler katkısını dışlamak mümkün değil Örneğin, thermosensation bozukluk zararlı çekilme tarafından incelenmesi fonksiyonel motor sinir lifleri17,18,19üzerinde bağlıdır. Böylece, bir saf küçük fiber nöropati model kurma ve sistematik olarak nöronal somata ve küçük çaplı nöronlar içinde onların çevre Kutanöz sinir lifleri patolojik durumunu araştıran gerekli ve zorunludur.
RTX kapsaisin Analog ve hangi nosiseptif işleme20,21,22aracılık eder geçici reseptör potansiyel vanilloid reseptör 1 (TRPV1), için güçlü bir agonist var. Son zamanlarda, periferik RTX tedavi nöropatik ağrı23,24,25 rahatlamış ve intraganglionic enjeksiyonu RTX DRG nöronlar22geri alınamaz kaybına bağlı. Periferik RTX yönetim geçici duyarsızlaştırma veya IENFs dejenerasyonu sonuçlanan doz bağımlı20,26,27, etkisidir. Çoğu intriguingly konularda, sistematik yüksek doz RTX tedavi nöropatik ağrı28için küçük fiber nöropati belirtisi yol açtı. Bu bulgular tedavi modu ve RTX doz belirgin patolojik etkileri ve nöronal yanıt-e doğru üretmek öneririz; Çevre Yönetim ağrı iletim yerel etkileri29 tarafından engelledi ve nöropatik davranış6geliştirilen nöronal somata etkiledi. Toplu olarak, bu bulgular RTX multipotency etkisi ve sistematik olarak periferik IENFs ve merkezi nöronal somata gibi periferik sinirleri etkileyebilir RTX belirli bir doz olup gündeme gösterir. Eğer öyleyse, RTX özellikle küçük çaplı nöronlar etkiler ve küçük fiber nöropati klinikte taklit potansiyel bir ajan olabilir. Örneğin, DM klinikte metabolik bozukluk ve küçük fiber nöropati temel özelliklerinin çoğu periferik sinirlerin nevropatoloji dahil olmak üzere karmaşık bir konudur. Küçük fiber DM ilişkili nöropati mekanizmaları periferik sinirleri etkileyen ana Ajan olmayabilir metabolik bozukluk katkısını dışlamak değil. Bu nedenle, küçük fiber DM ilişkili nöropati sistematik metabolik bozukluk etkileri dışlamak saf hayvan modeli gerektirir. Bu iletişim kuralı RTX IENF dejenerasyon ve küçük çaplı nöron yaralanma, değiştirilmiş immunostaining analiz tarafından gösterildiği gibi bir tipik küçük fiber nöropati modeli geliştirmek için çalışma doz açıklar.

<table><tbody><tr><td><güçlü > kimyasal reaktif< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Resiniferatoksin</td><td>Sigma</td><td>R8756</td><td></td></tr><tr><td>Tween 80</td><td>Sigma</td><td>P1754</td><td></td></tr><tr><td>3,3'-diaminobenzidin</td><td>Sigma</td><td>D8001</td><td></td></tr><tr><td>avidin-biyotin kompleksi</td><td>Vektör</td><td>PK-6100</td><td></td></tr><tr><td><güçlü > Adı< / güçlü></td><td>Company</td><td>Katalog Numarası</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Primary Antisera</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Peripherin</td><td>Chemicon</td><td>MAB-1527</td><td></td></tr><tr><td>ATF3</td><td>Santa Cruz</td><td>SC-188</td><td></td></tr><tr><td>PGP9.5</td><td>UltraClone</td><td>RA95101</td><td></td></tr><tr><td>< güçlü > Adı< / güçlü ></td> <td>< güçlü > Şirket< / güçlü ></td> <td>< güçlü > Katalog Numarası</td><td> Comments</td></tr><tr><td>İkincil Antiserum< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Biyotinillenmiş keçi anti-tavşan IgG</td><td>Vektör</td><td>BA-1000</td><td></td></tr><tr><td>Texas Kırmızı konjuge keçi anti-fare</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>115-075-146</td><td></td></tr><tr><td>İzotiyosiyanat (FITC) konjuge eşek anti-tavşan</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>711-095-152</td><td></td></tr> <tr><td>< güçlü > Adı< / güçlü > <</td> <td>güçlü > Şirket< / güçlü ></td> <td>< güçlü > Katalog Numarası< / güçlü ></td> <td>< güçlü > Yorumlar< / güçlü ></td></tr> <tr><td>< güçlü > Ekipman< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Sıcak plaka</td><td>IITC</td><td>Model 39</td><td></td></tr><tr><td>von Frey filament</td><td>Somedic Sales AB</td><td>10-600-0001</td><td></td></tr> <tr><td>Name<</td><td>strong>Company</td><td>Katalog Numarası</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Malzeme</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Shandon kapak plakası</td><td>Thermo Bilimsel</td><td>72110017</td><td></td></tr><tr><td>Sürgülü raf</td><td>Termo bilimsel</td><td>73310017</td><td></td></tr></tbody></table>

saf küçük fiber nöropati bir fare modeli ile geçici reseptör potansiyel vanilloid tip 1 ultrapotent agonist kurulması

Establishing a Mouse Model of a Pure Small Fiber Neuropathy with the Ultrapotent Agonist of Transient Receptor Potential Vanilloid Type 1

Diabetes mellitus (DM) veya bu kemoterapötik ajanların Nörotoksik etkileri yaşıyor olan hastalarda duyu bozuklukları dejenerasyon ve küçük çaplı duyusal nöronların, küçük fiber nöropati anılacaktır yaralanma nedeniyle gelişebilir. Her iki büyük - ve küçük çaplı duyusal lifler etkiler ve böylece bir nevropatoloji düzgün yaralı küçük çaplı duyusal lifler etkilerini değerlendirmek için çok karmaşık oluşturmak küçük fiber nöropati mevcut hayvan modelleri. Bu nedenle, yeterli bu sorunları incelemek için saf küçük fiber nöropati deneysel bir model geliştirmek gereklidir. Özellikle resiniferatoxin (RTX), geçici reseptör potansiyel vanilloid tip 1 (TRPV1), tek bir doz ile ultrapotent bir agonist ile küçük çaplı duyu sinirleri etkileyen küçük fiber nöropati bir deneme modeli bu protokolünü açıklar mayi enjeksiyon, RTX nöropati anılacaktır. Patolojik bulgular ve küçük fiber nöropati, intraepidermal Sinir lifi (IENF) dejenerasyonu, özellikle yaralanma dahil olan hastalarda klinik özelliklerini taklit davranış anormallikleri gösterdi bu RTX nöropati küçük çaplı neurons ve indüksiyon termal hypoalgesia ve mekanik allodynia. Bu iletişim kuralı RTX üç doz test (200, 50 ve 10 µg/kg, sırasıyla) ve sonucuna RTX kritik bir doz (50 µg/kg) tipik küçük fiber nöropati tezahürlerini gelişimi için gerekli ve değiştirilmiş immunostaining yordamına hazırlanan IENF dejenerasyon ve nöronal soma yaralanma araştırmak. Hızlı, sistematik ve ekonomik değiştirilmiş işlemdir. Nöropatik ağrı davranış değerlendirilmesi küçük çaplı duyusal sinir fonksiyonu ortaya çıkarmak için önemlidir. Deneysel Rodents mekanik eşikleri değerlendirilmesi özellikle zordur ve bu iletişim kuralı için bu tür bir değerlendirme Rodents uygundur özelleştirilmiş bir metal kafes açıklar. Özetle, moleküler önemi ve nöropatik ağrı terapötik ajanlar gelişimi için temel müdahale değerlendirmek için yeni ve kolayca kurulan deneysel bir model RTX nöropati var.

Bu iletişim kuralı özellikle küçük çaplı nöronlar, IENF dejenerasyon, duyusal bozukluklar (Şekil 2) ile ilgili de dahil olmak üzere etkiler RTX nöropati bir roman fare modeli açıklar. Burada açıklanan iletişim kuralı hayvanlar termal hypoalgesia ve D7 yazı RTX enjeksiyon, mekanik allodynia sergilendi. Bu küçük fiber nöropati model RTX üç doz kurmak için: 200, 50 ve 10 µg/kg ı.p. rota tarafından idare. Belgili tanımlık RTX doz (50 µg/kg) kritik kabul edildi ve...

Bu çalışmada deneysel bir model saf küçük fiber nöropati ile resiniferatoxin (RTX) kurar. RTX benzersiz bir doz (50 µg/kg) hasta özellikleri taklit eden bir küçük fiber nöropati modeli geliştirmek için en uygun ve nöropatik ağrı altında yatan nosiseptif moleküler önemini araştırmak yardımcı olabilir.

Saf küçük Fiber nöropati bir fare modeli ile geçici reseptör potansiyel Vanilloid tip 1 Ultrapotent Agonist kurulması

Patients with diabetes mellitus (DM) or those experiencing the neurotoxic effects of chemotherapeutic agents may develop sensation disorders due to ...

Fareler için bu duyusal spesifik, nörotoksin verme prosedürünün genel amacı, küçük bir hayvan duyusal nöropati modeli oluşturmaktır. Bu teknik, duyusal nöropatide küçük, duyusal liflerin yaralanma yasalarını ortaya çıkarmaya yardımcı olur. Başlıca avantajı hızlı ve kolay olmasıdır.Bu fareler, büyük duyusal lifler için hangi yolun çok önemli bir katkı olduğu gibi duyusal nöropatik alandaki temel soruları yanıtlamaya yardımcı olabilir. Başlamak için, kişisel koruyucu ekipman giyin ve Resiniferatoksin veya RTX stok çözeltisini hazırlarken uygun önlemleri alın. Deney için 600 mikrolitrelik bir alikotu tuzlu su ile seyreltin ve geri kalanını saklamak için 12 mikrolitrelik alikotlara bölün.Test fareleri için, 35 ila 40 gram ağırlığında sekiz haftalık, yetişkin erkek ICR fareleri kullanın. Bir mikro enjeksiyon şırıngası ile intraperitoneal olarak tek bir doz RTX solüsyonu uygulayın. Daha sonra, kontrol görevi görmesi için eşit hacimde bir araca sahip ikinci bir fare grubuna enjekte edin.Tüm enjeksiyonları yaptıktan sonra, fareleri ev kafeslerinde barındırın ve yiyecek ve suya serbestçe erişimleri olduğundan emin olun. Yedi gün sonra, haftada bir kez davranış testleri yapmaya başlayın. Her iki testi de aynı gün, sakin bir test odasında, istikrarlı bir ortamda gerçekleştirin.Sıcak plaka testi ile hayvanların termal gecikmelerini ölçmekle başlayın. Metal bir sıcak plakayı 52 santigrat dereceye ayarlayın. Ardından, bir hayvanı nazikçe sıcak plakanın üzerindeki şeffaf, pleksiglas bir kafese yerleştirin.Hayvanın arka pençeleri sıcak kafese dokunur dokunmaz bir zamanlayıcı başlatın. Hayvan titremeye, arka pençelerini yalamaya veya zıplamaya başlarsa, çıkarın ve ocak gözünü saniyenin en yakın onda birine kadar ne kadar süre dayandığını kaydedin. Hayvan ocak gözünde yanıt göstermezse, olası doku hasarını önlemek için seansı 25 saniye sonra durdurun.Denemeler arasında 30 dakikalık bir dinlenme süresi ile hayvan başına üç deneme yapın. Daha sonra, üç testin ortalama süresini hayvanın nihai puanı olarak kullanın. Ardından, hayvanın mekanik duyu eşiğini ölçün.Hayvanı, zemin için metal bir ağ ile şeffaf, yuvarlak bir kafese koyun. Alıştırmadan sonra, farklı kalibrelerde von Frey saç filamentlerini yukarı ve aşağı yöntemini kullanarak arka pençenin plantar bölgesine uygulayın. İlk stimülasyon için 5 ila 8 saniye boyunca orta kuvvet filamenti uygulayın.Her stimülasyondan sonra iki dakika bekleyin, ardından hayvanın önceki tepkisine göre bir sonraki kuvveti uygulayın. Arka pençe geri çekilirse, bir sonraki düşük kalibreli filamenti kullanın. Ve eğer arka pençe geri çekilmediyse, bir sonraki daha büyük filamenti kullanın.Fare altı kez dürtülene kadar bu işleme devam edin. Ardından, yerleşik bir formül kullanarak mekanik eşiği hesaplayın. Her test gününde, her bir arka pençe üzerinde üç deneme yapın.Bu altı mekanik eşiğin ortalamasını her bir hayvanın ortalama mekanik eşiği olarak ifade edin. Ötenazi için yüzde 5 izofluran ve ardından intrakardiyak perfüzyon kullanın. Ardından, iki arka pençenin ilk ayak pedlerini çıkarın ve altı saat boyunca yüzde 4 PFA'da sabitleyin.Fiksasyondan sonra, bunları 4 santigrat derecede 0.1 Molar fosfat tamponuna aktarın. Bu, uzun vadeli bir depolama çözümü olarak hizmet eder. Kriyoseksiyondan önce, ayak pedlerini gece boyunca PBS'de% 30 sükroz içine batırın.Ertesi gün, plantar yüzeye dikey olarak kesen 30 mikronluk doku dilimleri yapmak için bir kriyostat kullanın. Ayak pedi bölümlerini sırayla etiketleyin ve ardından eksi 20 santigrat derecede bir anti-feeze solüsyonunda saklayın. Bölümlerden numune alırken, her üç bölümden birini seçin ve havayla kuruması için kaplamalı bir cam slayta aktarın.Daha sonra, her iki tarafı bir kapak plakası ile örtün ve bunları standart bir immün boyama prosedürü ile işleyin. İlk olarak, ayak pedi bölümlerini metanol içinde %1 hidrojen peroksit ile 30 dakika söndürün. Daha sonra, dokuları oda sıcaklığında, 0.5 Molar Tris tamponu kullanarak üç kez yıkayın.Daha sonra, dokuları bir saat boyunca blok çözelti içinde inkübe edin. Daha sonra, bölümleri gece boyunca 4 santigrat derecede pan-aksonal işaretleyiciye karşı bir anti-serum ile inkübe edin. Ertesi gün, bölümleri Tris tamponu ile üç kez yıkayın ve ardından bölümleri bir saat boyunca oda sıcaklığında biyotinile edilmiş anti-tavşan IgG içinde inkübe edin.Daha sonra, bağlanmamış antikorları çıkarmak için Tris tamponu ile üç yıkama kullanın. Daha sonra, dokuları avidin biotin kompleksi ile oda sıcaklığında 45 dakika inkübe edin. Reaksiyon ürününü lekelemek için, 45 saniye boyunca kısaca DAB solüsyonu uygulayın, ardından ayak pedi bölümlerini damıtılmış suyla yıkayın ve montajdan önce havayla kurutun.Ayak pedlerini ötenazi yapılan hayvandan çıkardıktan sonra, dördüncü ve beşinci lomber DRG'yi inceleyin. Daha sonra, disseke edilmiş DRG dokularını oda sıcaklığında yüzde dört PFA'da iki saat boyunca sabitleyin. Daha sonra, DRG dokularını gece boyunca PBS'de% 30 sükroz ile kriyoprotektif.Ertesi gün, onları sekiz mikronluk bölümlere ayırın. Bunları slaytlara yerleştirin ve etiketleyin. Bu bölümleri eksi 80 santigrat derecede saklayın.Etiketleme dışında, ayak pedi bölümleri için kullanılanla aynı yöntemi kullanın, bir yaralanma belirteci olan ATF-3'ü ve birincil anti-serumda küçük çaplı bir nöronal belirteç olan periferini dahil edin ve bu reaksiyonu gece boyunca çalıştırın. Bölümleri yıkadıktan sonra, uygun ikincil anti-serum ile inkübe edin. Daha sonra başka bir dizi yıkamadan sonra, miktar tayini için bölümleri monte edin.Bu protokol, duyusal bozukluklarla ilişkili IENF dejenerasyonu da dahil olmak üzere küçük çaplı nöronları spesifik olarak etkileyen Resiniferatoksin nöropatisinin yeni bir fare modelini tanımlar. Kilogram başına 50 mikrogram doz kritik kabul edildi ve daha yüksek bir doz sıklıkla öldürücüydü. RTX enjeksiyonundan yedi gün sonra, hayvanlar termal hipoaljezi ve mekanik allodini sergiledi.Kritik dozda, IENF dejenerasyonu ve belirgin ATF-3 indüksiyonu vardı. Yaralanan nöronlar periferin pozitif, küçük çaplı nöronlardı. Buna karşılık, düşük RTX dozu küçük lif nöropatisi oluşturmadı ve innervasyonda herhangi bir değişiklik göstermedi.Düşük doz, nöronal hasarın bir belirteci olan herhangi bir ATF-3 indüksiyonu da göstermedi. Bu nedenle, tarif edilen yöntemin uygulanması için kilogram başına 50 mikrogram RTX'in kritik dozu önerilmektedir. Bu videoyu izledikten sonra, saf bir duyusal nöropati modelinin nasıl kurulacağını iyi anlamış olmalısınız.Geliştirildikten sonra, bu teknik, küçük duyusal nöropati alanındaki araştırmaların önünü açtı, küçük duyusal sinirlerin yaralanması, gelişiminde nöropatik ağrı. RTX'in nörotoksik ve tehlikeli olduğunu ve gözleri, mukoza zarını ve üst solunum yollarını tahriş edebileceğini unutmayın. Solumaktan kaçının ve RTX'i tutarken laboratuvar gözlüğü ve ceket giyin.Cilt teması halinde ve kullandıktan sonra bol su ile durulayın.

establishing-mouse-model-pure-small-fiber-neuropathy-with-ultrapotent

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu video, bir fare modelinde duyusal sinir fonksiyonunun bir tarafı cerrahi olarak denerve ederek ve diğer tarafı kontrol olarak bırakarak test edilmesini gösterir. Mekanik stimülasyona verilen yanıt, duyusal sinirlerin rolünü doğrular.

Cerrahi Olarak İnterve Edilmiş Bir Fare Modelinde Duyusal Sinir Fonksiyonunun Test Edilmesi

Bu video, TRPV1 agonisti resiniferatoksin (RTX) kullanılarak farelerde küçük bir fiber nöropati modeli oluşturmak için bir yöntemi göstermektedir. RTX'in farelere uygulanmasında yer alan adımları ana hatlarıyla belirtir ve RTX'in küçük çaplı duyusal nöronlarda nöronal ölümü nasıl indüklediğini ve böylece nöropati modelini nasıl oluşturduğunu açıklar.

Resiniferatoksin Kullanarak Küçük Lif Nöropatisinin Fare Modelinin Oluşturulması

Nöropatik ağrı somatosensory sistemini etkileyen bir yara ya da hastalık, bir sonucudur. Farelerde nöropatik ağrı "ağzı model" siyatik sinirin ana dal etrafında bir polietilen manşetin implantasyon oluşur. Mekanik alodinia von Frey filamentleri kullanılarak test edilir.

Farelerde Nöropatik Ağrı Siyatik Sinir cuffing Modeli

Bu raporu başarıyla miyelin protein kullanarak deneysel otoimmün nörite (EAN) sıfır (P0)180-199 peptid Freund'ın tam adjuvan ve boğmaca toksin ile birlikte ikna etmek için basit bir yaklaşım özetlenmektedir. Biz doğru bir şekilde işlevsel açıkları ve bu EAN meydana nevropatoloji ölçüde değerlendirirken yetenekli sofistike bir paradigma mevcut.

C57BL/6 farelerde deneysel otoimmün nörite fonksiyonel ve Neuropathological değerlendirmeler için ikna etmek için basit bir yaklaşım

Sinir iletim ölçümü ateş fare modelleri değerlendirmek için yararlı bir araçtır ama sık sık öyle yalnızca hindlimbs siyatik sinir uyarmak için geçerlidir. Burada, bileşik kas aksiyon potansiyeli (CMAP) vivo brakiyal pleksus tarafından innervated fare forelimb kaslarda ölçmek için bir teknik açıklayın.

Vivo Bileşik kas aksiyon potansiyeli Motor nöron hastalığı, fare modellerinde ön ayakları üzerinden elektrofizyolojik ölçümü

Bu teknik amacı birincil motoneurons (MNs) fare omurilik üzerinden zenginleştirilmiş kültürünün hazırlamaktır. Tarif MN hastalıklar neden mutasyonlar sonuçlarını değerlendirmek için biz burada bu yalıtım MNs ve onların transfection magnetofection tarafından izole.

Fare birincil Motoneurons Transfecting tarafından Charcot Marie Tooth hastalığı Vitro modelleme

Ayak takımı aşılama modeli in vivo viral kaynaklı nöroinflamatuar yanıtları karakterize etmek için değerli bir araçtır. Özellikle, viral kinetik ve ilgili immünopatolojik süreçlerin periferik sinir sisteminde başlatılan net bir değerlendirme sağlar.

Viral Kaynaklı Nöroinflamatuar Yanıtları İncelemek Için Fare Ayak Takımı Aşılama Modeli

Modifiye cerrahi, hem ortak peroneal hem de sural sinirleri yaralamak için sadece bir ligasyon ve bir kesi gerektiren fare veya sıçan korunmuş sinir yaralanması modeli için basitleştirilmiş bir yöntemdir.

Farelerde Nöropatik Ağrının Modifiye Edilmiş Korunmuş Sinir Yaralanması Cerrahisi Modeli

Parsiyel siyatik sinir ligasyonu, termal ve mekanik uyaranlara abartılı tepkilerle karakterize uzun süreli kronik nöropatik ağrıya neden olur. Nöropatik ağrının bu fare modeli, ağrı yönetimi için yenilikçi terapileri incelemek için yaygın olarak kullanılır. Bu makalede, standardizasyonu ve tekrarlanabilirliği artırmak için cerrahi prosedür ayrıntılı olarak anlatılmaktadır.

Kısmi Siyatik Sinir Ligasyonu: Yeni Tedavilerin Antinosiseptif Etkisini İncelemek için Kronik Nöropatik Ağrının Bir Fare Modeli

Farelerde distal infraorbital sinirin kronik daralma yaralanması, devam eden ağrı ve allodinin belirtileri olan dokunsal stimülasyona (von Frey saç stimülasyonuna aşırı duyarlılık) yanıt olarak spontan davranışta (artmış yüz bakım aktivitesi) ve nosifensif davranışta değişikliklere neden olur ve trigeminal nöropatik ağrı için bir model görevi görür.

Trigeminal Nöropatik Ağrıyı İncelemek İçin Farelerde Distal İnfraorbital Sinirin (DIoN-CCI) Kronik Daralma Hasarı

Bu protokol, insan nöroma ağrısını taklit etmek ve cerrahi tedavileri değerlendirmek için duyu sinirlerini kullanan tekrarlanabilir bir sıçan modeli sunar ve translasyonel nöroma araştırmaları için değerli bir araç sunar.

Safen Sinir Yoluyla Hedeflenen Kas Reinnervasyonunu Kullanarak Nöroma Ağrısı Tedavi Seçeneklerini İncelemek için Yeni Cerrahi Kemirgen Modeli

Öğrenin, farelerde resiniferatoksin ile saf küçük fiber nöropati modeli kurmayı. Bu yöntem termal hipaljezi ve mekanik allodini oluşturarak nöropatik ağrı mekanizmalarını incelemeye olanak tanır.

Saf küçük Fiber nöropati bir fare modeli ile geçici reseptör potansiyel Vanilloid tip 1 Ultrapotent Agonist kurulması

Daha fazla video keşfet