Name: Meni kadın üreme sistemi ve meni الرسالة farelerde ölçümü sonrası çiftleşme koleksiyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 6 s
Description: Öğrenin farelerde çiftleşme sonrası meni toplama ve sıvılaşma süresi ölçüm yöntemlerini. Bu teknik sperm hareketliliği ve üreme biyolojisi araştırmalarında önemli bir tanı aracı sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser WW veteriner tıp Koleji (WSU) başlangıç fon tarafından desteklenmektedir. Yazarlar Sierra Olsen (WSU) bu el yazması eleştirel okuma için teşekkür ederiz.

Tüm hayvanlar ve bu çalışmada kullanılan yordamlar Washington State Üniversitesi (WSU) hayvan bakım ve kullanım Komitesi esaslarına göre ve WSU onaylı hayvan iletişim kuralları #4702 ve #4735 uygun olarak ele.
1. fareler
<ol><li>
Standart C57BL/6J yetişkin erkek fareler veya ilgi diğer suşların kullanın. Hayvanlar altında ad libitum erişim su ve gıda ile sıcaklık ve nem kontrollü bir ortam sağlamak.
	<ol>
<li>8 hafta eski 10 aylık arasında değişen erkek doğurmak kullanabilirsiniz. Sadece kanıtlanmış doğurmak deneylerde kullanın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Üreme yolu östrojen reseptör α ( Esr1 gen tarafından kodlanmış) bir doku seçici silme ile yetişkin dişi fareler içinde epitel hücreleri10 kullanın (Wnt7aCre / +; Esr1nakavt veya "KO" adı verilenf/f,) ve kontrol littermates ("CTRL" denilenEsr1f/f,) Bu çalışmada.
	<ol>
<li>8 hafta-yaşlı kadın kullanın. Yaş kadın faiz deney bağlı olarak çeşitli.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Sabah saat 08:00 h estrous döngüsünün aşamaları belirlemek. Sadece kadın döngüsünün estrus aşamasında kullanın. Vajinal bulaşması ve saytolojik analiz ayrıntılı yöntemleri için daha önce yayımlanmış yordamlar11' e bakın.</li>
</ol>2. çiftleşme ve çiftleşme tıkacı değerlendirilmesi
<ol><li>Kadın bir erkeğin kafes içinde estrus (16:00 h) gün ev.</li>
	<li>Ertesi sabah (08:00 h), dişi erkek fare ayırın.</li>
	<li>Daha önce yayımlanmış yöntemi12 bir uyarlaması varlığı ya da yokluğu bir vajinal veya çiftleşme fiş çiftleşme bir göstergesi olarak erişmek için kullanın.</li>
	<li>Kısa bir süre arka bacaklarda kaldırmak için kuyruk tabanından kadın fareyi tutun.</li>
	<li>Çiftleşme Tak bir kürdan kullanarak vajinal açılışında bir off-beyaz seminal coagulum varlığı bulun. Çiftleşme fiş varsa, kürdan vajinal kanala eklenecek mümkün olmayacaktır.</li>
</ol>3. doku toplama öncesi hazırlık
<ol><li>10 mL % 1 fetal sığır serum ile desteklenmiş iyi'nın L-15 medyanın hazırlamak (denilen L15 medya + % 1 FBS) 15 mL tüp içinde. Bir waterbath içinde 15 dakika 37 ° C'de medya kuluçkaya.</li>
	<li>Doku ve aşağı akım uygulamaları için sperm canlılığı korumak için Önceden ısıtılmış L15 medya + % 1 aliquot 2 mL 2 mL microcentrifuge FBS dokusu toplamalarında tüp.</li>
	<li>37 ° c stereomicroscope sahne sıcak 37 ° C ısı-taş ayarla ve bir boş 1.5 mL microcentrifuge tüp bloğunda yer.</li>
	<li>Aşağı akım uygulamaları sperm motilitesi görüntüleme gerektiriyorsa, cam slayt 37 ° c sıcak</li>
</ol>4. doku koleksiyonu
<ol><li>Önceden ısıtılmış L15 medya + % 1 FBS aliquot doku toplama alanına getirin.</li>
	<li>Dişi ötenazi (~ 08: 30h) karbon dioksit boğulma kullanarak takip tarafından servikal çıkığı. Not: varsayarak çiftleşme gerçekleşir gece yarısı yaklaşık 8 h çiftleşme sonra bu.</li>
	<li>Hayvanın karın bölgesi ortaya çıkarmak için sırtüstü pozisyonda yerleştirin.</li>
	<li>% 70 alkol karın arka bacaklarda yakınındaki sprey.</li>
	<li>Diseksiyon makası alt karın cilt üzerinde küçük bir kesim (~ 1 cm) yapmak için kullanın.</li>
	<li>Dominant el kuyruk (ve arka bacaklarda gerekirse) çekmek için kullanın sigara dominant el cilt (doğru kafa) ters yönde karın kas ortaya çıkarmak için çeker iken. Bu yöntem saç kirlenme visseral organlara en aza indirmek için kullanılır.</li>
	<li>Karın kas bir V-viseral organlar ortaya çıkarmak için şekil içinde karın, vajina için bitişik temelini kesti.</li>
	<li>Bağırsak ve karın yağ üreme yolu ortaya çıkarmak için kenara çek.</li>
	<li>Mesane ve diğer dokular vajinal bölgede yukarıda kapalı döşeme.</li>
	<li>Kasık symphysis vajinal doku erişmek için ayrı kesti.</li>
	<li>Vajinal doku vajinal açılışında kaldırın ve vajinal kanal rektal dokusundan ayırmak için makas kullanarak.</li>
	<li>Dikkatle bahar makas kullanırken rahim her iki taraftan Mezenterik yağı kırpın. Dikkat: Rahim içinde sperm ile çok kırılgandır. Rahim delik değil dikkatli olun yoksa meni kaybolacak.</li>
	<li>Alt üreme sistem kaldırın ve her iki kapalı yumurtalık yağ yastığı kesti.</li>
	<li>Önceden ısıtılmış iyi'nın L-15 medya + % 1 tüp içine tüm üreme yolu aktarım FBS.</li>
</ol>5. rahim içerik koleksiyonundan meni الرسالة (viskozite) ölçümü
<ol><li>Stereomicroscope ısıtmalı sahnede bir 35 mm steril doku kültürü çanak içine belgili tanımlık doku dolu ile 3,5 mL transfer önceden sıcak L-15 medya + % 1 FBS dokuların kan ve diğer kirleri temizlemek için. Dikkat: yıkama sırasında dokuların yağ tarafından değil rahim al. Bu noktada, meni bekleniyor rahim içinde sağlam olmalı.</li>
	<li>Laboratuvar mendil kullanarak aşırı medya dokuların leke.</li>
	<li>Doku vajinal sonunda Önceden ısıtılmış microcentrifuge tüpte yumurtalık biter yerleştirerek süre tutun. Vajinal sonuna tutarken, temelini microcentrifuge tüp içine düşmek rahim boynuzları sağlayan rahim, rahim boynuzları kesti.</li>
	<li>Meni izin tüp içine rahim boynuzları dışarı akışı. Dişsiz forseps yavaşça kalan meni kovma vajinal sonuna yumurtalık sonundan itibaren boynuzları rahim sıkmak için kullanın.</li>
	<li>Biohazard çanta ve dokularda atın ve yakıp kül.</li>
	<li>Kısaca bir minicentrifuge meni aşağı spin (~ 1-2 s).</li>
	<li>Tüp, ısıtmalı sahneye paralel lay - meni dışarı dökülecek değil.</li>
	<li>Hazır çekim var ve 'saymak için ' set.</li>
	<li>Meni örneği (tüp duvara paralel) 180 ° açıyla bir 25 µL kılcal tüp takın. Kılcal tüp farklı açılarda holding üzerinden her araştırmacı arasında değişkenlik en aza indirmek için bu.</li>
	<li>Kılcal Boru yapar zamanlayıcıyı basın meni ile temas.</li>
	<li>Meni 25 µL çizgisine ulaşmak gereken süreyi (s) kaydedin.</li>
	<li>Ölçüm bittiğinde hemen geri daha fazla fonksiyonel analiz, sperm motilitesi video görüntüleme gibi kuru sıcak blok meni içeren tüp koymak.</li>
	<li>20 dk için % 10 çamaşır suyu çözüm tüpte çeker tarafından meni içeren kılcal tüp dezenfekte ve kılcal tüp "Sharps" kap içinde atın.</li>
</ol>6. Sperm motilitesi video görüntüleme
<ol><li>Mikroskop ve video görüntüleme yazılımını açın.</li>
	<li>Sahne Alanı'nda ısıtmalı cam slayt yerleştirilir iken, Önceden ısıtılmış cam slayt üzerine kalan meni 20 µL pipet.</li>
	<li>Bir cam coverslip ile kapak.</li>
	<li>Slayt coverslip yan mikroskobunun yerleştirin.</li>
	<li>20 X objektif lens ilgi alanı bulmak için kullanın.</li>
	<li>100 X objektif lens için video görüntüleme için değiştirin.</li>
	<li>Video: 12 kare/s (fps) 30 kayıt s.</li>
	<li>Rastgele videolar hayvan başına en az 3 farklı alanlarda kaydedin.</li>
	<li>Görüntüleme gerçekleştirmek hızlı bir şekilde ve sperm motilitesi ve canlılığı korumak için slayda ışık pozlandırmayı en aza indirmek. Not: Görüntüleme bu yordamı 2-3 dakika içinde yapılmalıdır.</li>
	<li>ImageJ yazılım yukarıda açıklanan8olarak kullanarak veri çözümlemesi gerçekleştirin.</li>
</ol>

<ol><li>Suarez, S. S., Pacey, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sperm+transport+in+the+female+reproductive+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Reprod+Update%22%5BJournal%5D)">Sperm transport in the female reproductive tract.</a> Hum Reprod Update. 12 (1), 23-37 (2006).</li>
<li>Bedford, J. M., Yanagimachi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initiation+of+sperm+motility+after+mating+in+the+rat+and+hamster%5BTitle%5D)+AND+%22J+Androl%22%5BJournal%5D)">Initiation of sperm motility after mating in the rat and hamster.</a> J Androl. 13 (5), 444-449 (1992).</li>
<li>Lilja, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+biology+of+semenogelin%5BTitle%5D)+AND+%22Andrologia%22%5BJournal%5D)">Cell biology of semenogelin.</a> Andrologia. 22 Suppl 1, 132-141 (1990).</li>
<li>Lilja, H., Abrahamsson, P. A., Lundwall, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Semenogelin%2C+the+predominant+protein+in+human+semen.+Primary+structure+and+identification+of+closely+related+proteins+in+the+male+accessory+sex+glands+and+on+the+spermatozoa%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Semenogelin, the predominant protein in human semen. Primary structure and identification of closely related proteins in the male accessory sex glands and on the spermatozoa.</a> J Biol Chem. 264 (3), 1894-1900 (1989).</li>
<li>Veveris-Lowe, T. L., Kruger, S. J., Walsh, T., Gardiner, R. A., Clements, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seminal+fluid+characterization+for+male+fertility+and+prostate+cancer%3A+kallikrein-related+serine+proteases+and+whole+proteome+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Thromb+Hemost%22%5BJournal%5D)">Seminal fluid characterization for male fertility and prostate cancer: kallikrein-related serine proteases and whole proteome approaches.</a> Semin Thromb Hemost. (33), 87-99 (2007).</li>
<li>Emami, N., Deperthes, D., Malm, J., Diamandis, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Major+role+of+human+KLK14+in+seminal+clot+liquefaction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Major role of human KLK14 in seminal clot liquefaction.</a> J Biol Chem. 283 (28), 19561-19569 (2008).</li>
<li>Gerhard, I., Roth, B., Eggert-Kruse, W., Runnebaum, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+kallikrein+on+sperm+motility%2C+capillary+tube+test%2C+and+pregnancy+rate+in+an+AIH+program%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Androl%22%5BJournal%5D)">Effects of kallikrein on sperm motility, capillary tube test, and pregnancy rate in an AIH program.</a> Arch Androl. 24 (2), 129-145 (1990).</li>
<li>Li, S., Garcia, M., Gewiss, R. L., Winuthayanon, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crucial+role+of+estrogen+for+the+mammalian+female+in+regulating+semen+coagulation+and+liquefaction+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Crucial role of estrogen for the mammalian female in regulating semen coagulation and liquefaction in vivo.</a> PLoS Genet. 13 (4), e1006743(2017).</li>
<li>Elia, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+semen+hyperviscosity%3A+prevalence%2C+pathogenesis+and+therapeutic+aspects%5BTitle%5D)+AND+%22Asian+J+Androl%22%5BJournal%5D)">Human semen hyperviscosity: prevalence, pathogenesis and therapeutic aspects.</a> Asian J Androl. 11 (5), 609-615 (2009).</li>
<li>Winuthayanon, W., Hewitt, S. C., Orvis, G. D., Behringer, R. R., Korach, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uterine+epithelial+estrogen+receptor+alpha+is+dispensable+for+proliferation+but+essential+for+complete+biological+and+biochemical+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Uterine epithelial estrogen receptor alpha is dispensable for proliferation but essential for complete biological and biochemical responses.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (45), 19272-19277 (2010).</li>
<li>McLean, A. C., Valenzuela, N., Fai, S., Bennett, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Performing+vaginal+lavage%2C+crystal+violet+staining%2C+and+vaginal+cytological+evaluation+for+mouse+estrous+cycle+staging+identification%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Performing vaginal lavage, crystal violet staining, and vaginal cytological evaluation for mouse estrous cycle staging identification.</a> J Vis Exp. (67), e4389(2012).</li>
<li>JoVE Science Education Database. <a target="_blank" href="http://www.jove.com/science-education/10293">Lab Animal Research. Fundamentals of Breeding and Weaning.</a> JoVE. , Cambridge, MA (2017).</li>
<li>Prassas, I., Eissa, A., Poda, G., Diamandis, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unleashing+the+therapeutic+potential+of+human+kallikrein-related+serine+proteases%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Unleashing the therapeutic potential of human kallikrein-related serine proteases.</a> Nat Rev Drug Discov. 14 (3), 183-202 (2015).</li>
<li>Muytjens, C. M., Vasiliou, S. K., Oikonomopoulou, K., Prassas, I., Diamandis, E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Putative+functions+of+tissue+kallikrein-related+peptidases+in+vaginal+fluid%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Urol%22%5BJournal%5D)">Putative functions of tissue kallikrein-related peptidases in vaginal fluid.</a> Nat Rev Urol. 13 (10), 596-607 (2016).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Meni ve kadın üreme yolu. salgılar arasındaki fizyolojik etkileşimler eski gösterdiği gibi fare uteri sperm toplama semen analizi vitro avantajları sağlayabilir Bu çalışmada sunulan teknikleri araştırmacılar sperm kalitesi hem de sperm canlılığı ve motilite ideal fizyolojik koşullarda belirlemek için izin verir. Ayrıca, uteri toplanan sperm kullanılarak gerçekleştirilen çeşitli aşağı akım analizleri, örneğin, sperm rahim ve sperm girme gerçek sperm sayısı ayrıca hareketliliği deneyleri için yansıması be...

Kadın üreme yolu alt ve üst yolları oluşur. Üst üreme yolu fallop tüpleri, rahim ve endocerviks içerir. Alt üreme sistem ectocervix ve vajina içerir. İnsanlarda, vajina, ectocervix1' e komşu ön duvara ejaculated meni yatırılır. Farelerde, ancak, sperm rahim içine2çiftleşme sonra dakika içinde süpürüldü.
Sperm boşalma, sperm entrapped neden zarfında katılaşmış ve3immobilize seminal jel içerir. الرسالة immobilize sperm meni bir jel gibi sulu bir tutarlılık değiştirerek serbest bırakır. Sperm motilitesi ve memeli üreme için gerekli bir süreçtir. Meni الرسالة bilgisine nerede meni bir kültür tabak içinde sıvılaştırılmış olur vitro çalışmalar çoğunlukla dayanmaktadır. İnsanlarda, enzimatik aktivite Prostat spesifik antijen veya PSA (olarak da bilinen kallikrein ilgili peptidaz 3 veya KLK3) semenogelins (meni mevcut proteinler jel şekillendirme)4 hidroliz ile الرسالة için büyük katkıda bulunuyor. ,5,6. Semenogelins bozulma sperm sperm hareketliliği artan seminal coagulum, dan özgür kılar. Sperm yüzmek fallop tüpü yumurtayı döllemek için doğru serbest. الرسالة (ya da meni viskozite) bir erkek üreme7değerlendirmek için doğurganlık klinikleri semen analizi için standart ilk gösterimleri testlerdir.
Kısa bir süre önce bir makale dişi fare üreme yolu sonrası çiftleşme üzerinden toplanan meni analizi daha sonra doğurganlık kusurları8neden olabilir الرسالة bir eksikliği göstermek için kullanılabileceğini gösterir. Meni hiperviskozite gibi arızalı الرسالة infertil erkek9normal الرسالة memeli üreme için vazgeçilmez olduğunu düşündüren, durumlarda 11,8 32.3 oranında katkıda bulunur. Ancak, çalışmalar ve الرسالة kusur tedavisinde sadece erkek7üzerinde odaklanmıştır. Kadın üreme sistemi meni الرسالة içinde bir rol oynar olasılığını araştırdı değil. Bu nedenle, sperm toplama ve الرسالة zaman ölçme yöntemleri araştırmacılar الرسالة ilgi model organizma olarak infertilite nedenlerinden biri olabilir olup olmadığını belirlemek için yeni bir tanı aracı sağlar.

<table><tbody><tr><td>Kürdan</td><td>Diamond</td><td>750-Düz</td><td>Otoklavlanmış steril, körelmiş kürdan kullanın. Nokta uçlu</td></tr><tr><td>Diseksiyon makası</td><td>kullanmayın Fisher</td><td>08-940</td><td></td></tr><tr><td>Yaylı makas</td><td>Roboz</td><td>RS-5600</td><td></td></tr><tr><td>İnce forseps</td><td>Roboz</td><td>RS-5045</td><td></td></tr><tr><td>25-&mu; L cam kılcal boru</td><td>VWR</td><td>53432-761</td><td></td></tr><tr><td>Leibovitz ' s L-15 medya</td><td>Yaşam</td><td>Teknolojileri</td><td>11415064 %1 FBS içeren takviye</td></tr><tr><td>Fetal sığır serumu (FBS)Gemini</td> <td>Bio-Products</td><td>100-106</td><td></td></tr><tr><td>1.5 mL mikrosantrifüj tüpü</td><td>Axygen</td><td>MCT-150-C</td><td></td></tr><tr><td>2 mL mikrosantrifüj tüpü</td><td>Axygen</td><td>MCT-200-A</td><td></td></tr><tr><td>Dijital kuru blok ısıtıcı</td><td>VWR</td><td>13259-052</td><td>Mikrosantrifüj tüpünü ısıtmak için Semen toplamadan önce</td></tr><tr><td>Minisantrifüj</td><td>Corning</td><td>LSE 6765</td><td></td></tr><tr><td>35 mm kültür kabı</td><td>VWR</td><td>10861-656</td><td></td></tr><tr><td>15 mL polipropilen santrifüj tüpü</td><td>VWR</td><td>10025-686</td><td></td></tr><tr><td>Su Banyosu</td><td>Hassasiyeti</td><td>TSGP05</td><td></td></tr><tr><td>Isıtmalı sahne stereomikroskobu</td><td>Leica Microsystems</td><td>MZ10F</td><td>Dokuyu sıcak tutmak için semen toplama</td></tr><tr><td>Brightfield mikroskobu</td><td>Leica Microsystems</td><td>DMi8</td><td>İsteğe bağlı. Sperm hareketliliğinin video görüntülemesi için</td></tr><tr><td>Kamera</td><td>Leica Microsystems</td><td>DMC2900</td><td>Opsiyoneldir. Sperm hareketliliğinin video görüntülemesi için</td></tr><tr><td>Cam slaytlar</td><td>Fisher</td><td>12-552-3</td><td>İsteğe bağlı. Sperm hareketliliğinin video görüntülemesi için</td></tr><tr><td>Lamel</td><td>VWR</td><td>48393-059</td><td>İsteğe bağlı. Sperm motilitesinin video görüntülemesi için</td></tr><tr><td>Bleach</td><td></td><td></td><td>dH2O ila %10 konsantrasyonda seyreltin</td></tr></tbody></table>

meni kadın üreme sistemi ve meni الرسالة farelerde ölçümü sonrası çiftleşme koleksiyonu

Collection of Post-mating Semen from the Female Reproductive Tract and Measurement of Semen Liquefaction in Mice

Farelerde, boşalmış sperm rahim içinde yatırılır. Boşalma sonra meni değiştirir tutarlılık jel benzeri için sulu, adı verilen işlem الرسالة. Bu çalışmada, kadın üreme sistemi bir fare modeli sonrası ejaculated meni toplamak için nasıl gösterir. İlk, yetişkin dişi fareler içinde estrus sahne bir erkeğin kafeste gecede yer. Ertesi sabah, birleşme vajinal açılışında çiftleşme fiş varlığı tarafından doğrulandı. Çiftleşme tıkacı ile dişi fareler euthanized ve üreme her yolu (vajina, rahim, oviducts, yumurtalık), bir bütün olarak toplanan meni içerecek şekilde kapalı bir sistem sağlamak. Vajina meni tüpün içine serbest bırakmak için kesilmiş ve üreme yolu bir 1.5 mL microcentrifuge tüp yerleştirildi. En fazla sperm cilt analizi için emin olmak için dişsiz forseps vajinal sona kalan meni kovma yumurtalık ucundan boynuzları rahim sıkmak için kullanılmıştır. Tüm üreme yolu sonra atıldı. Meni içeren tüp kısaca aşağı bükülmüş. 25 μL kapiller pipet 180 ° açıyla (tüp duvara paralel) tüp içine yerleştirilmiştir. Kılcal Boru 25 μL hattına doldurmak için kullanılan süreyi kaydedildi. Meni--dan a kanıtlanmış erkek doğurmak genellikle yaklaşık 60-180 s 25 μL kılcal tüp doldurmak için alır. Bu sperm toplama tekniği de sperm görüntüleme ve motilite analizi gibi aşağı akım diğer uygulamalarda kullanılabilir.

Meni ile verimli CTRL erkek çiftleşme sonra CTRL ve KO kadın yaklaşık 8 h dan toplanmıştır. 25 μL kılcal tüp meni ile doldurmak için geçen süre tarafından الرسالة (ya da meni viskozite) sayılabilir. CTRL uteri toplanan meni aldı 2.06 ±0.12 min (mean±S.E.M, n = 5) kılcal tüp (şekil 1) doldurmak için. Ancak, KO uteri toplanan meni 60 dk uzun sürdü (60,0 ±0.0, mean±S.E.M, n = 5) deneysel zaman. Bu veriler meni önemli ölçüde daha fazla dizel veya daha az CTRL viskoz KO uteri ka...

Meni الرسالة sperm seminal jel--dan özgür olmak için gereklidir. Bu çalışma yordamları kadın üreme sistemi sonrası cinsel birleşme sperm toplama ve meni الرسالة Süre ölçümünü sağlar.

Meni kadın üreme sistemi ve meni الرسالة farelerde ölçümü sonrası çiftleşme koleksiyonu

In mice, ejaculated semen is deposited in the uterus. After ejaculation, the semen changes consistency from gel-like to watery, a process called ...

Bu çalışmanın amacı, dişi üreme sisteminden çiftleşme sonrası spermanın nasıl toplanacağını ve farelerde semen sıvılaşmasının nasıl ölçüleceğini belirlemektir. Bu çalışmada kullanılan hayvanlar, Washington Eyalet Üniversitesi Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi yönergelerine göre ve WSU onaylı hayvan protokolleri 4702 ve 4735'e uygun olarak ele alındı. İnsanda, boşalan meni, ektoservikse bitişik vajinanın ön duvarında biriktirilir.Bununla birlikte, farelerde, meni çiftleşmeden birkaç dakika sonra uterusa süpürülür. Semen, boşalmadan birkaç saniye sonra katılaşan ve spermin hareketsiz hale gelmesine neden olan seminal jel içerir. Sıvılaştırma işlemi, spermi jel benzerinden sulu bir kıvama değiştirir.Bu süreç sperm hareketliliği ve memeli üremesi için gereklidir. Prostat Spesifik Antijen veya PSA'nın enzimatik aktivitesi, menide bulunan seminal jel veya jel oluşturan proteinin hidrolizi yoluyla sıvılaştırmaya en önemli katkıda bulunan faktördür. Jel oluşturan proteinin bozunması, spermi seminal pıhtıdan serbest bırakır ve sperm hareketliliğini arttırır, böylece sperm, fallop tüpündeki yumurtayı döllemek için üst kadın üreme sistemine doğru yüzer.Kadın üreme sisteminden semen toplama yöntemi ve bu çalışmada bulunan sıvılaşma süresinin ölçülmesi, araştırmacılara sıvılaşmanın ilgilenilen model organizmada kısırlığın nedenlerinden biri olup olmadığını belirlemek için yeni bir tanı aracı sağlayacaktır. Daha sonra farelerin çiftleştirildiği ve vajinal tıkacın belirlendiği prosedürler var. Standart C57BL / 6 yetişkin erkek fareler veya diğer ilgili suşlar kullanılabilir.Sadece döngünün östrus aşamasındaki dişiler kullanıldı. Vajinal smear ve sitolojik analiz için ayrıntılı yöntem için lütfen daha önce yayınlanmış prosedürlere bakın. Saat dörtte.Kızgınlık gününde, dişi erkeğin kafesine yerleştirildi. Ertesi sabah saat sekizde dişi, erkeğin kafesinden ayrılır. Steril düz bir kürdan kullanılarak, vajinal veya çiftleştirici bir tıkaç birikiminin varlığı veya yokluğu, daha önce yayınlanmış bir yöntemden uyarlanan bir prosedür kullanılarak çiftleşmenin bir göstergesi olarak değerlendirildi.Daha sonra doku toplama öncesi hazırlık prosedürüdür. 15 mililitrelik bir tüpte% 1 fetal sığır serumu veya% 15 besiyeri ve% 1 FBS ile desteklenmiş 10 mililitre Leibovitz L-15 ortamı hazırlayın. Ortamı 37 santigrat derecede 15 dakika ısıtın.Aşağı akış uygulamaları için doku ve spermin canlılığını korumak için, doku toplama için iki mililitrelik bir tüpte iki mililitre ortamı alikot edin. Stereo mikroskobun sahnesini 37 santigrat dereceye ısıtın. Isı bloğunu 37 santigrat dereceye ayarlayın.Isı bloğuna boş bir tüp yerleştirin. Ayrıca, aşağı akış uygulaması sperm hareketliliğinin görüntülenmesini gerektiriyorsa, cam slaytı 37 santigrat dereceye ısıtın. Daha sonra doku toplama prosedürleri var.İşte doku toplama için kullanılacak araçlar. Dişi kontrol ettikten hemen sonra karbondioksit boğulması ve ardından servikal çıkık kullanarak dişiyi ötenazi yapın. Karın bölgesini ortaya çıkarmak için hayvanı sırtüstü pozisyona getirin.Karnın üzerine% 70 etanol püskürtün. Alt karın bölgesindeki cilt üzerinde yaklaşık bir santimetre küçük bir kesi yapın. Karın kasını ortaya çıkarmak için kuyruğu ve cildi zıt yönlerde çekin.Karın kasını karın tabanında V şeklinde kesin. Üreme sistemini ortaya çıkarmak için bağırsakları ve karın yağını yana doğru hareket ettirin. Mesaneyi ve vajinal bölgenin üzerindeki diğer dokuları kesin.Vajinal dokulara erişim sağlamak için kasık simfizini ayırın. Vajinal kanalı ortaya çıkarmak için tüp forseps kullanarak kasık simfizine bağlı kısmı çekin. Vajinal açıklıktaki vajinal dokuyu kaldırın ve vajinal kanalı aşağıdaki rektal dokudan ayırmak için makas kullanın.Yaylı makas kullanarak uterusun her iki tarafındaki mezenterik yağı dikkatlice kesin. Rahim, içindeki meni ile çok kırılgandır. Bu nedenle, araştırmacı uterusu delmemeye dikkat etmelidir, aksi takdirde meni kaybolacaktır.Yumurtalık yağ yastığını yumurtalıkların her iki tarafından kesin. Tüm üreme sistemini önceden ısıtılmış ortam tüpüne aktarın. Sonraki, semen sıvılaşmasının ölçülmesi için yöntemdir.İşte meni toplama araçları. Sıcak ortamın üç mililitresini 3,5 santimetrelik bir tabağa aktarın. Dokuyu tabağa aktarın.Yağ pedini tutarak dokuyu birkaç kez yıkayın. Bu noktada, meni rahim içinde hala sağlam olmalıdır. Fazla ortamdan kurtulmak için dokuyu Kimwipes üzerinde kurulayın.Dokuyu vajinal uçta tutun ve yumurtalık uçlarını boş bir tüpün içine kaldırarak dokuyu önceden ısıtılmış tüpe koyun. Vajina ve rahim arasındaki her iki rahim boynuzunu da kesin. Spermin rahim boynuzlarından tüpe akmasına izin verin.Rahim boynuzlarında kalan spermi nazikçe sıkmak ve dışarı atmak için dişsiz forseps kullanın. Meniyi bir ila iki saniye kısaca döndürün. Tüpü ısıtılmış aşamaya paralel olarak yerleştirin.Semen örneğine 180 derecelik bir açıyla 25 mikrolitrelik bir kılcal tüp yerleştirin. Bu, her bir araştırmacının kılcal boruyu farklı açılarda tutması arasındaki değişkenliği en aza indirmek içindir. Spermin 25 mikrolitre çizgisine ulaşması için geçen süreyi kaydedin.Sıvılaşma süresi, 25 mikrolitrelik kılcal tüpü meni ile doldurmak için geçen süre ile ölçülür. Kontrol uterusundan toplanan spermanın kılcal boruyu doldurması yaklaşık iki dakika sürdü. Bununla birlikte, nakavt uteriden toplanan sperma, 60 dakikadan daha uzun deneysel süre aldı.Bu veriler, spermin nakavt uterusa kıyasla kontrolde önemli ölçüde daha fazla sıvılaştırıldığını göstermektedir. İşte sperm motilitesinin video görüntülemesini kullanan aşağı akış uygulama örneklerinden biri. Cam slayt ısıtıcı aşamasına yerleştirilirken, kalan meninin 25 mikrolitresini önceden ısıtılmış cam slayta pipetlemek için bir pipet ucu kullanın.Lamel bir cam lamel ile slaytı kapatın. Lamel lamel aşağı yerleştirilerek lamı mikroskoba aktarın. Spermi bulmak için 20X objektif lens kullanın.Ardından video görüntüleme için 100X objektif lense geçin. Videoyu 30 saniye boyunca saniyede 12 kare hızında kaydedin. Kontrol uterusundan toplanan sperm, mikroskobik alan içinde serbestçe yüzen spermi gösterir.Bununla birlikte, nakavt uteriden toplanan meni, spermin çoğunluğunun minimum hareketlilik ile birlikte kümelendiğini gösterdi. Bu bulgular, çiftleşmeden sekiz saat sonra dişi üreme sisteminden toplanan spermin daha ileri analizler için kullanılabileceğini düşündürmektedir. Bu alt uygulamalara ek olarak, araştırmacılar ayrıca sperm taşınmasının farklı süreçlerine, sperm sıvılaşması, yoldaki sperm sayısı, sperm hareketliliği veya kadın üreme sisteminin farklı bölgelerinde sperm göçü gibi süreçlere müdahale eden inhibitörlerin veya ilgilenilen bileşiklerin etkisini de değerlendirebilirler.Bileşikler, çiftleşmeden önce dişi üreme sistemine uygulanabilir. Daha sonra, bu inhibitörlerin veya bileşiklerin etkisi, çiftleşme sonrası semen örneğinden değerlendirilebilir. Bu yöntemler, sperm taşınmasını engelleyen kontraseptif ilaçların pratikliğini test etmek için yararlı olabilir.

collection-post-mating-semen-from-female-reproductive-tract

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Bu protokol, erkeklerin testislerde sperm açılan ve daha sonra dişi farelerin döllemeden yöntemleri göstermektedir. Bu prosedür de transgenik çalışma olarak gelişim çalışmalarında hassas zaman gerekli olduğunda yararlıdır.

Farelerin Hasat Sperm ve Suni Tohumlama

Bu protokol Fare preimplantasyon embriyolar soy özellikleri çalışma protein ekspresyonu in situ analiz kantitatif, tek hücreli gerçekleştirmek için bir yöntem sunmaktadır. blastosist toplanması için gerekli işlemler, proteinlerin immunofluorescent algılama tüm montaj, bir konfokal mikroskop ve nükleer segmentasyon ve görüntü analizi örneklerin görüntüleme açıklanmıştır.

Protein İfade Kantitatif Analiz Fare Preimplantasyon Embriyolar Lineage Şartname Eğitim için

Bu tübül squash teknik hızla hücresel bütünlüğünü koruyarak fare spermatocytes geliştirme saytolojik özellikleri değerlendirmek için hedeftir. Bu yöntem tüm aşamalarında spermatogenez çalışma için izin verir ve diğer biyokimyasal ve moleküler biyolojik yaklaşımlar için fare mayoz çalışmanın yanında kolayca uygulanabilir.

Seminifer tübül Squash tekniği fare modeli kullanarak sperma saytolojik analizi için

Birçok tedaviler ve genetik mutasyonlar cinsel olgunluk ve doğurganlık zamanlaması etkisi. Bu iletişim kuralı fare ve sıçanlar cinsel olgun hayvanlar doğurganlık çalışmada kurma önce pubertal başlangıçlı değerlendirmek için non-invaziv bir yöntem açıklanır.

Pubertal başlangıçlı teyit ve doğurganlık tahlil fare ve sıçanlar üreme yetkinlik belirlenmesi

Rahim kasılmaları dişilerin refahı için önemlidir. Ancak, patolojik olarak artan kontraktilite dismenore neden olabilir, özellikle genç kadınlarda. Burada, dismenore tedavisinde kullanılabilecek düz kas gevşeticilerin etkinliğinin hızlı bir şekilde değerlendirilmesini sağlayan basit bir ex vivo hazırlık tarif ediyoruz.

Fare Üreme Yolu Spontan Hareketliliği Değerlendirmek için Ex Vivo Yöntemi ve Veri Analizi için MATLAB tabanlı Rahim Hareket Takip Algoritması

Bu makalede, erkek farelerde cinsel davranış testleri nasıl yapılacağını açıklamaktadır.

Erkek Farelerin Cinsel Davranışlarının Değerlendirilmesi

Sunulan servikal manipülasyon yöntemi, vazektomize erkeklerle üreme dişilerine gerek kalmadan farelerde yalancı gebeliği indükleyebilir. Yalancı gebelik indüksiyonu, her ikisi de sunulan ameliyatsız embriyo transferi ve ameliyatsız suni tohumlamanın başarısı için gereklidir.

Cerrahi olmayan embriyo transferi veya suni tohumlamadan önce vazektomize erkeklere ihtiyaç duymadan dişi farelerde yalancı gebeliğin indüklenmesi

Burada, farelerde yuvarlak spermatid enjeksiyonu (ROSI) gerçekleştirmek için bir yöntem sunuyoruz, umut verici klinik uygulamaları olan ve embriyonik gelişimin altında yatan mekanizmaları araştırmak için faydalı bir teknik.

Fare Yuvarlak Spermatid Enjeksiyonu

Bu prosedür, 2H2O veya U13C Glukoz ile stabil izotop etiketleme ve ardından metabolomik analiz kullanılarak döllenme sırasında spermden oositlere aktarılan metabolitleri tanımlamayı amaçlar. Döteryum etiketli sirler, etiketlenmemiş barajlarla eşleştirilir. Toplanan implantasyon öncesi embriyolar, maternal (döteratlanmamış) metabolitlerden paternal (döteratlanmış) metabolitleri ayırmak için kütle spektrometresi ile analiz edilir.

Döllenme Sırasında Spermden Oosit'e Aktarılan Baba Metabolitlerinin Kütle Spektrometresi Tanımlaması için Kararlı İzotop In-Vivo Etiketleme

Matrisi kullanarak simüle mikrogravite koşuldaki kültür hücrelere olmadan doku oluşturmak için son derece gelecek vaat eden bir teknik oluşturur. Döner kültür sistemiyle, yumurtalık folikülü büyüme ve oosit olgunlaşma folikül hayatta kalma, morfolojisi, büyüme ve oosit işlevini simüle mikrogravite koşul altında açısından incelenmiştir.

Vitro Simüle mikrogravite altında fare Preantral follikül gelişimi

Öğrenin farelerde çiftleşme sonrası meni toplama ve sıvılaşma süresi ölçüm yöntemlerini. Bu teknik sperm hareketliliği ve üreme biyolojisi araştırmalarında önemli bir tanı aracı sunar.

Meni kadın üreme sistemi ve meni الرسالة farelerde ölçümü sonrası çiftleşme koleksiyonu

Daha fazla video keşfet