Name: Vivo glikoz metabolizması farelerde Oral glukoz tolerans testi (OGTT) ve insülin tolerans testi (ITT) kullanarak yüksek yağlı diyet beslenen incelenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 13 s
Description: Öğrenin, farelerde oral glukoz tolerans testi ve insülin tolerans testi kullanarak yüksek yağlı diyetle beslenen modellerde glikoz metabolizması değişikliklerini in vivo nasıl değerlendirebilirsiniz.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu araştırma Belediye Başkanı Viyana kenti ve Österreichische Gesellschaft für Laboratoriumsmedizin und Klinische Chemie tıbbi bilimsel Fonu tarafından desteklenmiştir.

Tüm yöntem tanımlamak burada hayvan bakım ve Viyana Tıp Üniversitesi kullanım Komitesi tarafından onaylanmış ve Federasyon, Avrupa laboratuvar hayvan bilim dernekler (FELASA göre) yürütülen. Unutmayın ki bu protokol için açıklanan tüm yordamları yalnızca kurumsal ve hükümet onaylandıktan sonra yanı sıra teknik olarak uzman personel tarafından yapılmalıdır.
1. HFD beslemeli fareler
Not: tüm C57BL/6J fareler yiyecek ve su için 12-h açık/koyu döngüsü ücretsiz erişimi korumak.
<ol><li>6 hafta-in yaş, fareler obezite, ikna etmek için bir HFD (% 40-60 yağ kalori) 8-12 hafta boyunca düşük yağlı diyet (LFD) yalın kontrol grubu beslerken yerleştirin (% 10 yağ kalori).</li>
	<li>Haftalık olarak fareler vücut ağırlığını belirlemek. Ağırlık eğrileri benzer modeller HFD beslemeli grubunda daha yüksek eğimli her iki grup'yi göstermesi gerekir.</li>
</ol>2. OGTT
Not: kan örnekleme zaman Puan OGTT sırasında her 15dk seçilirse deneme en fazla paralel, 15 fareler fare başına en az 1 min işleme-süre için yapılmalıdır.
<ol><li>Bir gün önce OGTT hazırlıkları<ol>
<li>Fareler içme suyuna erişimi olmasını sağlarken fareler taze yatak ve onları gece (14 h), test etmeden önce hızlı bir kafes içine transfer (örneğin, 6:00 de ertesi sabah 8:00 am tarihinde bir başlangıç kez gıda kaldırın). Not: Oruç fareler gecede yaklaşımdır standart, ancak daha kısa hızlı (5-6 h) daha fizyolojik ( tartışma Ayrıntılar için bakınız) fareler için.</li>
	</ol></li>
	<li>Hazırlıklar gün deneme (ama deneme önce)<ol>
<li>10 mL % 20 glukoz çözeltisi hazırlamak (D-(+) dağıtılması-distile su glikoz). Not: hayvanlar için yönetilen tüm reaktifler farmakolojik sınıf olmak zorunda ve steril.</li>
		<li>Her örnekleme süresi noktası ve her fare için bir şey ile 5 µL doldurarak plazma koleksiyonu için bir 96-şey tabak hazırlamak NaEDTA (0,5 M EDTA, pH % 8.0 içinde 0.9 NaCl, depolama, RT). Deneme sırasında bu plaka buz üstünde depolar. Not: Ek Resim 1 ayrıntılı bir denetim listesi için bkz:.</li>
	</ol></li>
	<li>Bütün fareler vücut ağırlığını ölçmek ve fare ismi (örneğin, fare 1 = 1 dash, fare 2 = 2 tire, vb) yapmak için kalıcı bir kalem ile onların kuyrukları işaretlemek.</li>
	<li>Glikoz ölçüm ve kan örnekleme (Şekil 2)<ol>
<li>1-2 mm keskin makas ("değişken A" Şekil 2) kullanarak kuyruk ucu kapalı dikkatle kesin. Her zaman ilk damla kan hemoliz veya kan glikoz tayini için taze kan örnekleri çekmeden önce kirlenme doku sıvısı ile önlemek için yok etmek. (Süresi noktası 0 =) Bazal kan şekeri düzeyini Şeker Ölçüm ile ölçüm için bir küçük kan örneği (~ 3 µL) çizin. Dikkat: Kontrol edin ve üzerinde bir Şeker Ölçüm Çubuğu Strip şarj sayısını ayarlayın. Not: bir keskin neşter bıçak ("varyant B" Şekil 2) bir fare yan kuyruk ven bir alternatif kan örnekleme yöntemi olarak nick. Yanal kuyruk ven genellikle yaklaşık üçte birden fazla örnekleri için kuyruk Bankası doğru hareket kuyruk ucundan kuyruk uzunluğu boyunca erişilir. Bir lokal anestezik krem kullanılması önerilir. Kan akışını durdurmak için en az 30 yumuşak doku üzerinde parmak basınç uygulayarak hayvan onun kafes döndürülmeden önce s.</li>
		<li>Taze kılcal tüp (keep kılcal tüp yatay) kullanarak bir kan örneği (yaklaşık 30 µL) toplamak. Bir pipet pipet ucu kılcal tüp sonuna üstündeki koyarak ve dikkatli 96-şey plaka bir kuyunun içine hava kabarcıkları kaçınırken toplanan kan iterek kullanarak kılcal tüp boş. Bütün fareler - teker teker için bu yordamı yineleyin. Not: alternatif için kan toplama yolu ile kılcal tüp gibi doğru birim (örneğin, 30 µL) ayarlanmış bir pipet kan toplamak veya bir damla toplamak için kuyruk parafin film ve damlalıklı üzerinden EDTA çözümde kan. Sonraki glukoz ve insülin ölçümleri etkileyebilir gibi kesinlikle vazelin kan veya Şeker Ölçüm Çubuğu Strip ile temasından kaçının. Dikkat: OGTT fareler için çok stresli: yalın fareler kaybedebilir civarında kendi vücut ağırlığının % 15 bir gecede Bayramı sırasında. Ayrıca, kan örnekleme farklı zaman noktalarda önemli bir kan kaybına yol açar. Daha kolay kan örnekleme için vazelin ile mouse-tail dikkatle masaj mümkündür. Not: Kurumsal yönergeleri izin verilen bir zaman dilimi içinde toplanan kan miktarını sınırlayabilir. Örnekleme birimleri ve timepoints izin verilen en yüksek değerler aşmayacak şekilde ayarlanmalıdır. Fareler vücut ağırlığını toplamını hesaplamak için kullanılması gereken kan izin verilen para çekme.</li>
	</ol></li>
	<li>Vücut ağırlığı (1 g glikoz/kg vücut ağırlığı; 3 g/kg kadar artış bu can) göre glikoz çözüm gerekli hacmi hesaplamak için her fare oral gavaj tarafından yönetilecek. Örneğin, bir fare ile bir vücut ağırlığı 30 g 30 mg glikoz yönetmek için bir % 20 glikoz çözümün 150 µL gerekir. Not: farenin ağırlığını glikoz dozu üsse standart bir uygulamadır. Vücut kompozisyonu veri yoksa, OGTT hesaplanması gereken glikoz dozu yaslan temel vücut kitle (Ayrıntılar için konuya bakın).</li>
	<li>Glikoz yönetim<ol>
<li>Hazırlamak herşeyi önceden tüm deneme sırasında gerekli (zamanlayıcı, deney kayıt sayfası, glukoz monitör ve şeritler, kılcal damarlar, şırınga, glikoz çözüm, 96-şey plaka, neşter, hesap makinesi, denge, daimi marker, tezgah kağıtları, bir pipet) bahşiş ve eldiven.</li>
		<li>Glikoz kullanma için fareyi sıkıca tarafından scruff tarafından açgözlü dizginlemek. Yeterli sıkılık boynuna dizginlemek dışarı büküm fare engellemek ve düzgün kafasını geri yatırmak için cilde uygulanır. Ayrıca fare düzgün nefes alabilir emin olun. Not: glikoz yönetim başladıktan sonra iyi bir zaman yönetimi çok önemlidir.</li>
		<li>Dikkatle (Adım 2.5 dayalı) glikoz çözüm besleme iğne kullanarak mide doğrudan yönetmek. Dikkatli bir şekilde doğru yemek borusu ağız yoluyla besleme iğne doğrudan. İğne yutmak için fareyi izin: iğne tamamen alt özofagus/karın fare batar. O zaman glikoz çözüm (şekil 3a) enjekte et.<ol>
<li>Herhangi bir direnç olması durumunda ya da hayvan hemen mücadeleler, iğne geri çekilin ve yeniden konumlandırmak. Sonra hemen ilk gavaj Sayacı başlatmak ve glikoz diğer fareler için 1 dk aralıklarla yönetmek. Not: Glikoz çözüm bir damla besleme iğneyi yalamak ve yutma, böylece daha kolay ekleme besleme iğne kolaylaştırmak teşvik edecek fare, ağız için uygulamak yararlı olabilir. Bu cidden hayvan zarar gibi beslenme iğne eklerken basınç uygulamayın.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
	<li>15 dk sonra kan şekeri Şeker Ölçüm ile ölçmek ve ayrıca her fare kan örnekleri (~ 30 µL) (olarak açıklandığı ayrıntılı olarak adım 2.4) sırayla enjekte edildi almak. Not: Zaman yönetimi çok önemlidir; sonda ile besleme gelince aynı zaman aralıkları kullanarak mümkün olduğunca yakın olarak izleyin. Sonuçları değiştirebilir stresi azaltmak için mümkün ve sınırı en az tüm prosedürü sırasında frenleyici olarak serbestçe hareket fare izin. Kuyruk tek elle süt ve diğer kan toplamak.</li>
	<li>2.7 beklenen sonuçları (örneğin, 30, 45, 60, 90, 120, 150 ve glikoz yönetim sonra 180 dk at) bağlı olarak seçilen zaman noktalarda arasındaki adımları yineleyin. Seçili zaman Puan 120 dk uzun olması durumunda, fareler içme suyuna erişimi olduğundan emin olun. Fareler her zaman içme suyuna erişimi olduğundan emin olun. Ne zaman tamamlanmak ile deneme, fareler yiyecek ve su ile donatılmış ev onların kafes dönün. Dikkat: OGTT fareler için çok yorucudur. Bu nedenle bir ITT gibi sonraki metabolik test yapmadan önce en az 1 hafta beklemesi.</li>
	<li>Bunu deneyden sonra kan örnekleri 2500 x g, 30 dk, 4 ° c, santrifüj kapasitesi Kuyu plaka boş ve depolamak için süpernatant (plazma)-20 ° C'de analiz kadar aktarın.<ol>
<li>Kayıt örneklerinin hemoliz varsa (bkz. Bölüm 3).</li>
	</ol></li>
	<li>Piyasada bulunan bir ELISA kullanarak plazma insülin düzeyleri Kiti ( Tablo reçetesigörmek) belirlemek kitinin üreticinin yönergeleri izleyin. Not: Açlık durumuna bağlı olarak yanı sıra incelenen farelerin metabolizmasına zorluklar bu tahlil sırasında oluşabilir: gece açlık insülin düzeyleri (süresi noktası 0) çok düşük ve bu nedenle algılama sınıra yakın vardır. Bu sorunu engellemek için önerilen plazma birim miktarı iki katına ve buna göre ELISA tahlil sonucu yarıya indirmek. Fareler insülin OGTT sırasında özellikle HFD beslenen farelerde ulaşmak, öte yandan, insülin düzeyleri algılama sınırı aşabilir: örnek seyreltik (örneğin, 10 kat ile % 0,9 NaCl) ve ELISA tahlil tekrarlayın. Plazma numuneleri hemoliz insülin, okuma değerleri bir düşüş ortaya çıkan bozulma yol açabilir. Zaman, sıcaklık ve hemoglobin konsantrasyonu örnek bozulması bağlıdır. Her zaman hemolyzed örnekleri soğuk veya insülin bozulması azaltmak için buz üzerinde tutun.</li>
</ol>3. ITT
Not: OGTT (fareler, kan, Şeker Ölçüm ve Vazelin kullanım işleme) için açıklanan aynı önlemler aynı zamanda ITT işlemi sırasında uygulanacak olması. 15 fareler paralel olarak test edilir eğer örneğin, tüm enjeksiyon içinde 15 dk 1 dk aralıklarla yapılmalıdır. ITT için sonraki kan örnekleri kılcal tüpler ile isteğe bağlı oluşur.
<ol><li>Deneme önce hazırlıklar<ol>
<li>Hızlı fare fareler içme suyuna erişimin sağlanması ise insülin enjeksiyonu, daha önce en az 2 h için (örneğin, yemek 8: 00'de kaldırmak için test fareler 2-5 h daha sonra).</li>
		<li>İnsülin 1:1,000 %0,9 oranında seyreltin NaCl (Stok: 100 U/mL insülin; çalışma konsantrasyonu 0,1 U/mL) ve % 20 glikoz hazırlamak (D-(+)-glikoz çözüm içinde çözünmüş distile su) fareler Hipoglisemik olursam yönetilecek. Not: hangi aksi takdirde gecede oluşabilir hipoglisemi önlemek için kısa hızlı hayvanlar oruç sonra ITT genellikle gerçekleştirilir. Hayvanlar için yönetilen tüm reaktifler farmakolojik sınıf olmak zorunda ve steril.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Fareler vücut ağırlığı ölçmek, kuyruk işareti, keskin makas kullanarak kuyruk ucu kesilmiş ve OGTT adım 2.4 için daha önce açıklandığı gibi Bazal kan şekeri düzeylerini ölçmek.</li>
	<li>İnsülin enjeksiyon<ol>
<li>İntraperitoneally insülin enjekte etmek (önceden hesaplanan 0,75 U insülin/kg vücut ağırlığı,), fare scruff yöntemle dizginlemek.</li>
		<li>Bir taze kullanın, steril 27-30 iğne rahatsızlık ve herhangi bir enjeksiyon izi enfeksiyon riski önlemek her hayvan için ölçmek. Not: Sterilizasyon deri insülin yönetim süresini uzatmak ve böylece ek bozuklukları için hayvan neden olabilir. Bu nedenle, bu tavsiye edilmez.</li>
		<li>Fare baş hayvan ventral tarafında ortaya çıkarmak için hafif bir açıyla aşağı eğ. Steril iğne eğimi yukarı ve 30 ° açı ile hayvanın karın (şekil 3b) sağ alt çeyreğinde yerleştirin. Hemen ilk fare enjekte edilir sonra Sayacı başlatmak. Not: Düşük doz Üstelik (0.1 U/kg) özellikle hepatik insülin duyarlılığı değerlendirmek için gerçekleştirilen. OGTT gelince, vücut ağırlığı üzerinde tabanlı enjeksiyon hacmi hesaplama standart dozu dayandırarak yordamdır vücut kompozisyon veri yoksa yağsız vücut kitle tercih edilir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Kan şekeri (örneğin, 15, 30, 45, 60 ve 90 dakika sonra) seçilen zaman noktalarda ölçmek. Not: insülin kısa bir yarı ~ 10 dk fareler13' te olduğu gibi insülin Yönetim (örneğin, sonra 2 s) sonra geç farklılıklar insülin eylem doğrudan bir etkisi yansıtmaz. Bir fare Hipoglisemik olur diye % 20 glikoz çözüm yönetmek (kan şekeri düzeyleri 35 mg/dL altında) ve ölme riski.</li>
	<li>Son kez Puan sonra fareler geri ev onların kafes bol yiyecek ve su ile hazırlanan yerleştirin.</li>
</ol>

<ol><li>Qatanani, M., Lazar, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+obesity-associated+insulin+resistance%3A+many+choices+on+the+menu%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of obesity-associated insulin resistance: many choices on the menu.</a> Genes Dev. 21 (12), 1443-1455 (2007).</li>
<li>Wilcox, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+and+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Biochem+Rev%22%5BJournal%5D)">Insulin and insulin resistance.</a> Clin Biochem Rev. 26 (2), 19-39 (2005).</li>
<li>Reaven, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiology+of+insulin+resistance+in+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Pathophysiology of insulin resistance in human disease.</a> Physiol Rev. 75 (3), 473-486 (1995).</li>
<li>Kahn, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+2+diabetes%3A+when+insulin+secretion+fails+to+compensate+for+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Type 2 diabetes: when insulin secretion fails to compensate for insulin resistance.</a> Cell. 92 (5), 593-596 (1998).</li>
<li>Gregor, M. F., Hotamisligil, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+mechanisms+in+obesity%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Inflammatory mechanisms in obesity.</a> Annu Rev Immunol. 29, 415-445 (2011).</li>
<li>Odegaard, J. I., Chawla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pleiotropic+actions+of+insulin+resistance+and+inflammation+in+metabolic+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Pleiotropic actions of insulin resistance and inflammation in metabolic homeostasis.</a> Science. 339 (6116), 172-177 (2013).</li>
<li>Srinivasan, K., Ramarao, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+in+type+2+diabetes+research%3A+an+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+J+Med+Res%22%5BJournal%5D)">Animal models in type 2 diabetes research: an overview.</a> Indian J Med Res. 125 (3), 451-472 (2007).</li>
<li>Surwit, R. S., Kuhn, C. M., Cochrane, C., McCubbin, J. A., Feinglos, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diet-induced+type+II+diabetes+in+C57BL%2F6J+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Diet-induced type II diabetes in C57BL/6J mice.</a> Diabetes. 37 (9), 1163-1167 (1988).</li>
<li>Winzell, M. S., Ahren, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+high-fat+diet-fed+mouse%3A+a+model+for+studying+mechanisms+and+treatment+of+impaired+glucose+tolerance+and+type+2+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">The high-fat diet-fed mouse: a model for studying mechanisms and treatment of impaired glucose tolerance and type 2 diabetes.</a> Diabetes. 53, Suppl 3. S215-S219 (2004).</li>
<li>Ayala, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standard+operating+procedures+for+describing+and+performing+metabolic+tests+of+glucose+homeostasis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">Standard operating procedures for describing and performing metabolic tests of glucose homeostasis in mice.</a> Dis Model Mech. 3 (9-10), 525-534 (2010).</li>
<li>Jais, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heme+oxygenase-1+drives+metaflammation+and+insulin+resistance+in+mouse+and+man%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Heme oxygenase-1 drives metaflammation and insulin resistance in mouse and man.</a> Cell. 158 (1), 25-40 (2014).</li>
<li>Teperino, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hedgehog+partial+agonism+drives+Warburg-like+metabolism+in+muscle+and+brown+fat%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Hedgehog partial agonism drives Warburg-like metabolism in muscle and brown fat.</a> Cell. 151 (2), 414-426 (2012).</li>
<li>Cresto, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Half+life+of+injected+125I-insulin+in+control+and+ob%2Fob+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiol+Lat+Am%22%5BJournal%5D)">Half life of injected 125I-insulin in control and ob/ob mice.</a> Acta Physiol Lat Am. 27 (1), 7-15 (1977).</li>
<li>First report of the BVA/FRAME/RSPCA/UFAW joint working group on refinement. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Removal+of+blood+from+laboratory+mammals+and+birds%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">Removal of blood from laboratory mammals and birds.</a> Lab Anim. 27 (1), 1-22 (1993).</li>
<li>McGuill, M., Rowan, A. <a target="_blank" href="https://academic.oup.com/ilarjournal/article/31/4/5/655393/Biological-Effects-of-Blood-Loss-Implications-for">Biological Effects of Blood Loss: Implications for Sampling Volumes and Techniques.</a> ILAR. 31 (4), 5-18 (1989).</li>
<li>Hoff, J. <a target="_blank" href="http://www.osa.sunysb.edu/dlar/newitems/mouseblood.pdf">Methods of Blood Collection in the Mouse.</a> Lab Animal. 29 (10), 47-53 (2000).</li>
<li>NIH. National Institute of Health - Guidelines for Survival Bleeding of Mice and Rats. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://oacu.od.nih.gov/ARAC/survival.pdf">http://oacu.od.nih.gov/ARAC/survival.pdf</a> (2017).</li>
<li>Jacobson, L., Ansari, T., McGuinness, O. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Counterregulatory+deficits+occur+within+24+h+of+a+single+hypoglycemic+episode+in+conscious%2C+unrestrained%2C+chronically+cannulated+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Counterregulatory deficits occur within 24 h of a single hypoglycemic episode in conscious, unrestrained, chronically cannulated mice.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 290 (4), E678-E684 (2006).</li>
<li>Guariguata, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+estimates+of+diabetes+prevalence+for+2013+and+projections+for+2035%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Res+Clin+Pract%22%5BJournal%5D)">Global estimates of diabetes prevalence for 2013 and projections for 2035.</a> Diabetes Res Clin Pract. 103 (2), 137-149 (2014).</li>
<li>Freeman, H. C., Hugill, A., Dear, N. T., Ashcroft, F. M., Cox, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deletion+of+nicotinamide+nucleotide+transhydrogenase%3A+a+new+quantitive+trait+locus+accounting+for+glucose+intolerance+in+C57BL%2F6J+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Deletion of nicotinamide nucleotide transhydrogenase: a new quantitive trait locus accounting for glucose intolerance in C57BL/6J mice.</a> Diabetes. 55 (7), 2153-2156 (2006).</li>
<li>Pelleymounter, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+the+obese+gene+product+on+body+weight+regulation+in+ob%2Fob+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Effects of the obese gene product on body weight regulation in ob/ob mice.</a> Science. 269 (5223), 540-543 (1995).</li>
<li>Chen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+that+the+diabetes+gene+encodes+the+leptin+receptor%3A+identification+of+a+mutation+in+the+leptin+receptor+gene+in+db%2Fdb+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Evidence that the diabetes gene encodes the leptin receptor: identification of a mutation in the leptin receptor gene in db/db mice.</a> Cell. 84 (3), 491-495 (1996).</li>
<li>Rossini, A. A., Like, A. A., Dulin, W. E., Cahill, G. F. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pancreatic+beta+cell+toxicity+by+streptozotocin+anomers%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Pancreatic beta cell toxicity by streptozotocin anomers.</a> Diabetes. 26 (12), 1120-1124 (1977).</li>
<li>Bailey, C. J., Flatt, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hormonal+control+of+glucose+homeostasis+during+development+and+ageing+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Metabolism%22%5BJournal%5D)">Hormonal control of glucose homeostasis during development and ageing in mice.</a> Metabolism. 31 (3), 238-246 (1982).</li>
<li>Shi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sexually+different+actions+of+leptin+in+proopiomelanocortin+neurons+to+regulate+glucose+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Sexually different actions of leptin in proopiomelanocortin neurons to regulate glucose homeostasis.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 294 (3), E630-E639 (2008).</li>
<li>Collins, S., Martin, T. L., Surwit, R. S., Robidoux, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+vulnerability+to+diet-induced+obesity+in+the+C57BL%2F6J+mouse%3A+physiological+and+molecular+characteristics%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Behav%22%5BJournal%5D)">Genetic vulnerability to diet-induced obesity in the C57BL/6J mouse: physiological and molecular characteristics.</a> Physiol Behav. 81 (2), 243-248 (2004).</li>
<li>Heijboer, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sixteen+hours+of+fasting+differentially+affects+hepatic+and+muscle+insulin+sensitivity+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Sixteen hours of fasting differentially affects hepatic and muscle insulin sensitivity in mice.</a> J Lipid Res. 46 (3), 582-588 (2005).</li>
<li>Kohsaka, A., Bass, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+sense+of+time%3A+how+molecular+clocks+organize+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">A sense of time: how molecular clocks organize metabolism.</a> Trends Endocrinol Metab. 18 (1), 4-11 (2007).</li>
<li>Drucker, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incretin+action+in+the+pancreas%3A+potential+promise%2C+possible+perils%2C+and+pathological+pitfalls%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Incretin action in the pancreas: potential promise, possible perils, and pathological pitfalls.</a> Diabetes. 62 (10), 3316-3323 (2013).</li>
<li>Andrikopoulos, S., Blair, A. R., Deluca, N., Fam, B. C., Proietto, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+the+glucose+tolerance+test+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Evaluating the glucose tolerance test in mice.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 295 (6), E1323-E1332 (2008).</li>
<li>Ahren, B., Winzell, M. S., Pacini, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+augmenting+effect+on+insulin+secretion+by+oral+versus+intravenous+glucose+is+exaggerated+by+high-fat+diet+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">The augmenting effect on insulin secretion by oral versus intravenous glucose is exaggerated by high-fat diet in mice.</a> J Endocrinol. 197 (1), 181-187 (2008).</li>
<li>Bowe, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+phenotyping+guidelines%3A+assessing+glucose+homeostasis+in+rodent+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Metabolic phenotyping guidelines: assessing glucose homeostasis in rodent models.</a> J Endocrinol. 222 (3), G13-G25 (2014).</li>
<li>Arioli, V., Rossi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Errors+related+to+different+techniques+of+intraperitoneal+injection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Errors related to different techniques of intraperitoneal injection in mice.</a> Appl Microbiol. 19 (4), 704-705 (1970).</li>
<li>Miner, N. A., Koehler, J., Greenaway, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraperitoneal+injection+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Intraperitoneal injection of mice.</a> Appl Microbiol. 17 (2), 250-251 (1969).</li>
<li>Heikkinen, S., Argmann, C. A., Champy, M. F., Auwerx, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+glucose+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Mol+Biol.+Chapter%22%5BJournal%5D)">Evaluation of glucose homeostasis.</a> Curr Protoc Mol Biol. Chapter. , Chapter 29 Unit 29B 23(2007).</li>
<li>Muniyappa, R., Lee, S., Chen, H., Quon, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+approaches+for+assessing+insulin+sensitivity+and+resistance+in+vivo%3A+advantages%2C+limitations%2C+and+appropriate+usage%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Current approaches for assessing insulin sensitivity and resistance in vivo: advantages, limitations, and appropriate usage.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 294 (1), E15-E26 (2008).</li>
<li>McGuinness, O. P., Ayala, J. E., Laughlin, M. R., Wasserman, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NIH+experiment+in+centralized+mouse+phenotyping%3A+the+Vanderbilt+experience+and+recommendations+for+evaluating+glucose+homeostasis+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">NIH experiment in centralized mouse phenotyping: the Vanderbilt experience and recommendations for evaluating glucose homeostasis in the mouse.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 297 (4), E849-E855 (2009).</li>
<li>Pacini, G., Omar, B., Ahren, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+and+models+for+metabolic+assessment+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Diabetes+Res%22%5BJournal%5D)">Methods and models for metabolic assessment in mice.</a> J Diabetes Res. 2013, 986906(2013).</li>
<li>Polonsky, K. S., Rubenstein, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C-peptide+as+a+measure+of+the+secretion+and+hepatic+extraction+of+insulin.+Pitfalls+and+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">C-peptide as a measure of the secretion and hepatic extraction of insulin. Pitfalls and limitations.</a> Diabetes. 33 (5), 486-494 (1984).</li>
<li>Hughey, C. C., Wasserman, D. H., Lee-Young, R. S., Lantier, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Approach+to+assessing+determinants+of+glucose+homeostasis+in+the+conscious+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Mamm+Genome%22%5BJournal%5D)">Approach to assessing determinants of glucose homeostasis in the conscious mouse.</a> Mamm Genome. 25 (9-10), 522-538 (2014).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Şeker hastalığı ve dünya nüfusunun ilişkili hastalıkları yüksek yaygınlığı, araştırma moleküler mekanizması, önlenmesi ve tedavisi hastalığı19adresleme için güçlü bir gereklilik vardır. Sunulan Protokolü HFD fareler, nesil metabolik araştırma yanı sıra tüm vücut metabolik değişiklikler değerlendirilmesi için güçlü araçlardır OGTT ve ITT, iletim için kullanılan güçlü bir hayvan modeli için köklü yöntem açıklanır insülin direnci gibi. Bu raporda sunulan yöntemleri şüpheli genler, çevresel faktörler ...

Gelişmiş dünyada obezite ve diyabet fiziksel hareketsizlik ve işlenmiş gıda, aşırı tüketiminin hızlı kentleşme, sanayileşme gibi Küreselleşme tarafından tahrik edilmektedir etkileri nedeniyle salgın boyutlara ulaştı. Her ne kadar araştırma hiperlipidemi ve ateroskleroz, kazanmıştır gibi gibi önem son yıllarda, insülin direnci ve 's komorbiditeler, sağlığı ve hastalıkları metabolizma düzenleyen karmaşık biyolojik mekanizmaları eksik olarak kalır anlaşılır ve hala önlemek ve bu hastalıkları1tedavi yeni tedavi yöntemleri için acil bir ihtiyaç.
İnsülin ve onun counter-regulatory hormon glukagon hücresel enerji temini ve macronutrient denge, böylece de sağlamak uygun sistemik kan şekeri konsantrasyonları2asıl düzenleyiciler hizmet vermektedir. İken diğer macronutrients, humoral faktörler gibi sinirsel giriş daha fazla bu yanıtı değiştirmek glikoz kendisi pankreas β-hücreleri tarafından insülin salgılanması ana Bitikilerin biri olarak davranır. İnsülin anabolik işlemler Federal devletin aşırı kan şekeri Difüzyon kas ve yağ hücrelerinin içine kolaylaştırmak ve daha fazla Glikoliz yanı sıra protein veya yağ asidi sentezi, sırasıyla etkinleştirme sonuç olarak tetikler. Ayrıca, insülin hepatik glikoz çıkış gluconeogenesis engelleyerek bastırır. Kronik aşırı enerji tüketimi ve meta-inflamasyon Hiperinsülinemi ve insülin reseptör ifade hem de değişiklikler böylece Engelli sonuçlanan aşağı akım sinyal yolları içinde aşağı düzenleme nedeniyle periferik insülin direnci yol glikoz insülin-aracılı elden çıkarma gibi yetersiz hepatik glukoz üretimi3,4,5,6inhibisyonu için duyarlılık.
Hayvan modelleri geniş bir hastalık genetik, beslenme veya deneysel indüksiyon ile insülin direnci ve diyabet gibi onun eşlik eden hastalıklar7 çeşitli formları moleküler mekanizmaları incelemek için mükemmel araçlar olmak kanıtlanmıştır . Bir ilk örnek hızlı kilo alımı nedeniyle artan besin alımını birlikte insülin direnci8', kaynaklanan düşük metabolik verimlilik ile karakterizedir yaygın olarak kullanılan ve iyi kurulmuş HFD kaynaklı fare modeli olduğunu 9. hayvan modelleri ve insanlar, açlık kan şekeri ve insülin düzeyleri, bir ayrıcalık hem de glikoz yönetim Engelli bir hoşgörü yanı sıra diğer sistemik değişiklik glukoz ve insülin direnci sık kullanılan göstergeler vardır metabolizma. İzleme kan şekeri ve insülin düzeyleri Bazal devlet veya stimülasyon sonra bu nedenle kolayca erişilebilir veriler vardır.
Mevcut iletişim kuralı HFD beslenen farelerin yanı sıra iki sık kullanılan yöntem, oral glukoz tolerans testi (OGTT) ve insülin direnci testi (ITT), metabolik fenotip karakterize etmek ve incelemek için yararlı olan nesil özetliyor değişiklikler glikoz metabolizması. OGTT bir sözlü olarak yönetilen glikoz yük ve insülin salgısı zaman içinde atılması değerlendiriyor ayrıntılı olarak açıklanmaktadır. Ayrıca, kan glikoz konsantrasyonu insülin yanıt bir bolus olarak izleyerek tüm vücut insülin-eylem araştırmak için ITT kuralları konusunda yönergeler sağlar. Bu makalede açıklanan protokoller köklü ve birden fazla çalışmalar10,11,12' kullanılmıştır. Başarı artırmak için yardımcı olabilir hafif değişiklikler yanı sıra deneysel tasarım ve veri analizi, aynı zamanda yararlı ipuçları potansiyel tuzaklar önlemek için yönergeler sağlar. Burada açıklanan protokoller tüm vücut glikoz metabolizması ve insülin direnci gibi onun ilişkili bozukluklar genetik, farmakolojik, diyet ve diğer çevresel faktörler etkisini araştırmak için çok güçlü araçlar olabilir. Glikoz veya insülin ile stimülasyon yanı sıra, diğer bileşikler çeşitli bireysel araştırma amacına bağlı olarak uyarılması için kullanılabilir. Bu yazının kapsamı, ancak dışında diğer birçok aşağı akım uygulama üzerinde çizilmiş kan örnekleri, glukoz ve insülin (örneğin, lipid ve lipoprotein profilleri) dışındaki kan değerleri çözümlemesi gibi detaylı yanı sıra gerçekleştirilen metabolik işaretleri (örneğin, nicel gerçek zamanlı Polimeraz zincir tepkimesi (PCR), Western blot analizi ve Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) tarafından) analizi. Daha fazla Akış Sitometresi ve floresan aktif hücre sıralama (FACS) transcriptomic, proteomik ve metabolomic yaklaşımlar Ayrıca hedeflenmemiş analiz için kullanılan süre ayrı tek hücre popülasyonlarının, etkileri araştırmak için uygulanabilir.
Genel olarak, biz daha da tüm vücut metabolik değişiklikler, OGTT ve hastalık patogenezinde çalışmak için yararlı araçlar olabilir ITT çalışma için iki güçlü yaklaşım tasvir ederken bir HFD kaynaklı fare modeli oluşturmak için basit bir protokol sağlar ve insülin direnci ve şeker hastalığı gibi metabolizma ilişkili hastalıklar alanında özellikle yeni tedavilerin geliştirilmesi.

<table><tbody><tr><td>Fare suşu: C57BL/6J</td><td>Jackson Laboratuvarı</td><td>664</td><td>LFD/HFD</td></tr><tr><td>Accu Chek Performa - Şeker Ölçüm Cihazı</td><td>Roche</td><td>6870228</td><td>OGTT/ITT</td></tr><tr><td>Accu Chek Performa - Şeritler</td><td>Roche</td><td>6454038</td><td>OGTT/ITT</td></tr><tr><td>D-(+)-Glikoz çözeltisi</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8769</td><td>OGTT</td></tr><tr><td>Actrapid - İnsülin</td><td>Novo Nordisk</td><td>417642</td><td>ITT</td></tr><tr><td>Yeniden Kullanılabilir Besleme İğneleri</td><td>İnce Bilim Araçları</td> <td># 18061-22</td><td>OGTT; 22 gauge (genç fareler için -24 gauge)</td></tr> <tr><td>Omnifix-Fine dozaj şırıngaları</td><td>Braun</td><td>9161406V</td><td>OGTT/ITT</td></tr><tr><td>Sterican İnsülin iğnesi (30G x 1/3"; &oslash; 0,30 x 13 mm)</td><td>Braun</td><td>304000</td><td>ITT; yağsız fareler</td></tr><tr><td>Sterican (G 27 x 3/4"; &oslash; 0,40 x 20 mm)&nbsp; &nbsp;</td><td>Braun</td><td>4657705</td><td>ITT; HFD</td></tr><tr><td>96 Kuyulu PCR Plakaları üzerinde fareler, eteksiz, esnek</td><td>Braintree Scientific, Inc.</td><td>SP0016</td><td>OGTT</td></tr><tr><td>Ultra Hassas Fare İnsülin ELISA kiti</td><td>Crystam Chem</td><td>90080</td><td>OGTT</td></tr><tr><td>%60 kcal% yağ içeren Kemirgen Diyeti</td><td>Research Diets Inc</td><td>D12492</td> %10 kcal% yağ içeren <td>HFD</td></tr><tr><td>Kemirgen Diyetinde</td> fareler.<td>Research Diets Inc</td><td>,</td><td>LFD</td></tr><tr><td>MARKA mikro hematokrit kılcal</td><td>damar Sigma-Aldrich</td><td>BR749321</td><td>OGTT/ITT</td></tr><tr><td>Vazelin - krem</td><td>Riviera</td><td>P1768677</td><td>OGTT/ITT</td></tr> üzerinde fareler D12450B</tbody></table>

vivo glikoz metabolizması farelerde oral glukoz tolerans testi (ogtt) ve insülin tolerans testi (itt) kullanarak yüksek yağlı diyet beslenen incelenmesi

Study of In Vivo Glucose Metabolism in High-fat Diet-fed Mice Using Oral Glucose Tolerance Test (OGTT) and Insulin Tolerance Test (ITT)

Obezite en önemli tek risk faktörü tip 2 diyabet, insülin uyarılmış glikoz alımı ve Brüt dekompansasyon sistemik glikoz metabolizmasının bir direnç ile karakterize bir hastalık patogenezinde temsil eder. Önlemek ve diyabet tedavisinde yeni yaklaşımlar acilen ihtiyaç vardır glikoz metabolizmasının anlamada önemli ilerlemeye rağmen onun yönetmelikte sağlık ve hastalık moleküler mekanizmaları altında soruşturma, kalır. Sistemik enerji durumu korumak için türetilmiş glikoz hücresel anabolik işlemler asıl regülatör beslenen devlet sırasında hizmet vermektedir ve böylece kan şekeri dengeleri insülin pankreas salgısı uyarır diyet düzeyleri. Kronik overfeeding Tetikleyicileri meta-periferik insülin reseptör ilişkili değişikliklere yol açan inflamasyon, sinyal ve böylece glikoz insülin-aracılı bertaraf karşı hassasiyetini azaltır. Bu olaylar sonuçta bir azalma yanı sıra yükselmiş açlık şekeri ve insülin düzeyleri glikoz toleransı, sırayla insülin direnci önemli göstergeleri olarak hizmet neden. Burada, üretimi ve yüksek yağlı diyet (HFD) metabolik karakterizasyonu için bir iletişim kuralı mevcut-diyet kaynaklı insülin direnci sık kullanılan bir model olarak fareler beslenir. Zaman içinde bir sözlü olarak yönetilen glikoz yük ve insülin salgısı periferik elden izler oral glukoz tolerans testi (OGTT), ayrıntılı olarak gösterilmektedir. Ayrıca, biz tüm vücut insülin eylem izlemek insülin tolerans testi (ITT) için bir iletişim kuralı mevcut. Birlikte, bu yöntemleri ve aşağı akım uygulamaları genel metabolik fenotip farelerin özellikle değişiklikler glikoz metabolizması değerlendirmek için de karakterize etmek için güçlü araçlar temsil eder. İnsülin direnci, diyabet ve obezite daha iyi de patogenezinde etkileri tedavi müdahaleler test olarak anlaşılması için geniş araştırma alanında özellikle yararlı olabilirler.

Şekil 1 şematik saat tablo için fare üstünde yiyecek metabolik fenotipleme göstermektedir. Bir LFD grup kontrol grubu hizmet verebilir süre yaklaşık 6 hafta bir yaşta, fareler bir HFD üzerinde yerleştirilmelidir. Önemlisi, vücut ağırlığı haftalık beklenen artış vücut ağırlığı olup olmadığını gözlemlemek için tespit edilmelidir. Stres (örneğin, gürültü veya saldırgan erkek davranış) her türlü vücut kilo alımı ile engelleyebilir ve hemen bertaraf edilm...

Geçerli makalenin üretimi ve yüksek yağlı diyet beslenen farelerin metabolik karakterizasyonu diyet kaynaklı insülin direnci ve obezite bir model olarak açıklar. Daha fazla oral glukoz tolerans testi ve glukoz metabolizma vivo içindetüm vücut değişikliklere izleme insülin tolerans testi gerçekleştirmek için detaylı iletişim kuralları bulunmaktadır.

Vivo glikoz metabolizması farelerde Oral glukoz tolerans testi (OGTT) ve insülin tolerans testi (ITT) kullanarak yüksek yağlı diyet beslenen incelenmesi

Obesity represents the most important single risk factor in the pathogenesis of type 2 diabetes, a disease which is characterized by a resistance to ...

Bu prosedürlerin genel amacı, farelerin genel metabolik fenotipini karakterize etmek ve in vivo olarak glukoz metabolizmasındaki değişiklikleri spesifik olarak değerlendirmektir. Bu yöntemler metabolizma alanındaki temel soruları cevaplamaya yardımcı olabilir. Genetik, farmakolojik veya diyet faktörlerinin in vivo olarak glikoz metabolizması üzerindeki etkisini araştırmak için temsili ve güçlü araçlardır.Bu tekniklerin temel avantajı, gerçekleştirilmelerinin nispeten kolay olmasıdır. Oral glukoz tolerans testinden bir gün önce, fareleri taze yatak takımı ve içme suyu olan bir kafese aktarın, ancak testten önce gece boyunca oruç tutmak için yiyecek olmadan. Ertesi gün, damıtılmış suda% 45 D-glikozu seyrelterek 10 mililitre% 20 glikoz çözeltisi hazırlayın.Daha sonra, 96 oyuklu bir plakanın kuyucuklarına her fare için zaman noktası başına beş mikrolitre sodyum EDTA ekleyerek plazma toplama için bir plaka hazırlayın. Deney sırasında bu plakayı buz üzerinde saklayın. Ardından, tüm farelerin vücut ağırlığını ölçün ve farelerin kolayca ayırt edilebilmesini sağlamak için kuyruklarını kalıcı bir işaretleyici ile işaretleyin.Temel örnekleme için kan toplamak için, kuyruk ucunun bir ila iki milimetresini dikkatlice kesmek için keskin bir makas kullanın. Kan şekeri tayini için yeni kan örnekleri almadan önce hemoliz veya doku sıvısı ile kontaminasyonu önlemek için ilk kan damlasını silin. Glükometre ile bazal kan şekeri seviyesinin ölçümü için küçük bir kan örneği alın.Daha sonra yeni bir kılcal tüp kullanarak daha büyük bir kan örneği alın. Pipet ucunu kılcal boru ucunun üstüne koyarak ve toplanan kanı hava kabarcıklarından kaçınarak 96 oyuklu plakanın bir kuyusuna dikkatlice iterek kılcal boruyu bir pipet kullanarak boşaltın. Damıtılmış suda çözülmüş% 20 D-glikoz hazırlayın.Bir glikoz çözeltisi uygulamak için, önce fareyi tırnağından sıkıca kavrayarak kısıtlayın. Farenin bükülmesini önlemek ve başını geriye doğru eğmek için boynun etrafındaki cilde yeterince sıkılık uygulayın. Farenin düzgün nefes alabildiğinden emin olun.Daha sonra dikkatli bir şekilde beslenme iğnesini ağızdan yemek borusuna doğru yönlendirin. Farenin iğneyi yutmasına izin verin. İğne farenin alt yemek borusuna battıktan sonra, glikoz çözeltisini enjekte edin.İlk gavajdan hemen sonra zamanlayıcıyı başlatın ve diğer tüm farelere bir dakikalık aralıklarla glikoz uygulayın. Glikoz uygulamasına başlandıktan sonra, iyi bir zaman yönetimi çok önemlidir. 15 dakika sonra, daha önce olduğu gibi glukometre ile kan şekeri seviyelerini ölçün.Daha sonra her fareden enjekte edildikleri sırayla 30 mikrolitre kan örneği daha alın. Kan alımı, glikoz uygulamasından 30, 45, 60, 90, 120, 150 ve 180 dakika sonra tekrarlanmalıdır. Bu süre zarfında farelerin içme suyuna erişimi olduğundan emin olun.Ölçümler bittiğinde, fareleri yiyecek ve su ile donatılmış ev kafeslerine geri koyun. Daha sonra kan örneklerini dört santigrat derecede 30 dakika boyunca 2.500 kez G'de santrifüjleyin. Plazma süpernatanı 96 oyuklu plakanın boş kuyularına aktarın.Ve sonra plakayı analize kadar eksi 20 santigrat derecede saklayın. Glikoz tolerans testinden en az bir hafta sonra, farelerin içme suyuna erişimi olduğundan emin olmak için insülin enjeksiyonundan önce fareleri en az iki saat aç bırakın. İnsülin stok çözeltisini %0.9 sodyum klorür ile bir ila bin oranında seyreltin ve fareler hipoglisemik hale gelirse uygulanmak üzere damıtılmış suda çözülmüş %20 D-glikoz hazırlayın.Fareleri tarttıktan ve kuyruklarını işaretledikten sonra, vücut ağırlığının kilogramı başına 0.75 ünite insülin uygulamak için gereken insülin hacmini hesaplayın. Ardından keskin bir makas kullanarak kuyruk ucunu kesin ve daha önce olduğu gibi bazal kan şekeri seviyelerini ölçün. İntrülini intraperitoneal olarak enjekte etmek için, fareyi scruff yöntemiyle kısıtlayın ve hayvanın ventral tarafını ortaya çıkarmak için fare kafasını hafif bir açıyla aşağı doğru eğin.Doldurulmuş şırıngayı hayvanların karnının sağ alt çeyreğine 30 derecelik bir açıyla yerleştirin ve steril 30 gauge iğnenin eğimi yukarı bakacak şekilde hacmi enjekte edin. İlk fare enjekte edildikten hemen sonra zamanlayıcıyı başlatın. Seçilen zaman noktalarında kan şekeri seviyelerini ölçün.Son zaman noktalarından sonra, fareleri bol miktarda yiyecek ve su ile hazırlanmış ev kafeslerine geri koyun. Oral glukoz tolerans testi, 12 hafta boyunca yüksek yağlı bir diyetle beslenen farelerin metabolik fenotipini düşük yağlı bir diyetle beslenen farelerle karşılaştırmak için kullanıldı. Glikoza toleranslı LFD farelerinde, desilitre başına yaklaşık 240 miligramlık en yüksek kan şekeri seviyesine, glikoz uygulamasından yaklaşık 15 dakika sonra ulaşıldı ve hemen ardından uygun glikoz eliminasyonunu gösteren başlangıç seviyesine doğru bir azalma izledi.Buna karşılık, HFD fareleri desilitre glikoz başına yaklaşık 320 miligramda zirve yaptı ve neredeyse hiç glikoz atılımı göstermedi. İki grup arasındaki kan şekeri seviyeleri açlık durumunda farklılık gösterdiğinden, başlangıç glikozunun üzerindeki eğrinin altındaki alanın bir hesaplaması yapıldı ve bu, önceki sonuçları doğruladı. Ek olarak, kan insülin seviyeleri bir insülin ELISA kullanılarak belirlendi.HFD'de beslenen fareler, kontrol grubuna kıyasla yüksek açlık insülin seviyeleri ve ayrıca HFD'nin neden olduğu telafi edici hiperinsülinemiyi gösteren artmış bir insülin yanıtı gösterdi. HFD ile beslenen farelerde insülin duyarlılığını ölçmek için, oral glukoz tolerans testinden bir hafta sonra bir insülin tolerans testi yapıldı. LFD ile beslenen kontrol grubu ile karşılaştırıldığında, HFD ile beslenen fareler, insülin uygulamasından sonra insülin direncini düşündüren kan şekeri seviyelerinde bozulmuş bir azalma gösterdi.Bu prosedürü denerken, sağlam, tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek için fareler için stres seviyelerini en aza indirmenin yanı sıra iyi bir zaman yönetimi sağlamak özellikle önemlidir. Yöntemlerin yüzdesi ile elde edilen glikoz toleransı, insülin seviyeleri ve insülin duyarlılığındaki farklılıklar, sonraki karmaşık adımların harmanlanmasına yardımcı olabilir. Bu, örneğin, hiperglisemik veya hiperinsülinemik iddiaları veya izole pankreas adacıkları ile yapılan deneyleri içerebilir.

study-vivo-glucose-metabolism-high-fat-diet-fed-mice-using-oral

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Hiperinsülinemik öglisemik kelepçe, ya da insülin kelepçe, insülin etkisini değerlendirmek için altın...

Bilinçli Mesnetlenmemiş Fare hiperinsülinemik öglisemik Kelepçeleri

Bu videoda, bir laboratuvar faresinde oral glukoz tolerans testinin nasıl yapılacağı anlatılmaktadır.

Oral Glukoz Tolerans Testi (OGTT): Farelerde Glukoz Metabolizmasının Ölçülmesi

Bu protokolün amacı, insan dışı primatlarda glisemik kontrolü değerlendirmek ve dismetabolik sağlıklı onların metabolik durumunu değerlendirmek için intravenöz glikoz tolerans testi (IVGTT'ler) gerçekleştirmek için standart bir yöntem sunmaktır.

İntravenöz Glikoz Tolerans Testi ile insan olmayan primatlarda Metabolik Durumu Karakterizasyonu

Bu iletişim kuralı bir antagonisti, MetCCL5, bir mikro-ozmotik pompa beyin infüzyon sistemi kullanarak fare beyin içine sunarak Kemokin (C-C motifi) ligand 5 (CCL5) üzerindeki rolünü inceliyor. CCL5 faaliyet geçici bu inhibisyon sinyal, glukoz intoleransı ve periferik sistemik insülin duyarlılık için lider hipotalamik insülin kesildi.

Hipotalamik insülin sinyal fare beyin içine sürekli uyuşturucu infüzyon sistemi ile periferik glikoz intoleransı için eğitim

Obezite sıklığı artıyor ve kronik akciğer hastalıkları riskini artırır. Temel mekanizmaları ve Önleme stratejileri, iyi tanımlanmış hayvan kurmak için modelleri ihtiyaç vardır. Burada, üç yöntem (glikoz tolerans testi, vücut pletismografisi ve akciğer fiksasyon) obezite etkisi farelerde akciğer sonuçlar üzerine eğitim sağlamak.

Mayi glikoz tolerans testi, akciğer işlev ölçümü ve akciğer fiksasyonu obezite ve pulmoner sonuçlar üzerine Engelli metabolizma etkisini incelemek için

Bu çalışmada, insülin mimetic bileşikler yaşayan bir organizma test etmek için umut verici bir araç olarak bir ovo sistemi açıklanmaktadır. Ana avantajı yeterli üretilen iş hızları ve fitokimyasallar insülin mimetic özelliklere sahip kimliği etkinleştirme kabul edilebilir maliyeti içerir.

İnsülin mimetic bileşikler test etmek için bir Ovo içinde modeli

Bu iletişim kuralı bir vücut kompozisyon analiz ve metabolik hayvan izleme sistemi vücut kompozisyonu ve farelerde metabolik parametreleri tanımlamak için kullanımını açıklar. Yüksek yağlı beslenme tarafından indüklenen bir obezite modeli örnek olarak bu tekniklerin uygulanması için kullanılır.

Vücut kompozisyonu ve metabolik Caging Analizi yüksek yağ Fed farelerde

Bu makalede, yabani tip ve ob/ob farelerde obezite ve bozulmuş glikoz metabolizmasına karşı korumak ve tedavi etmek için izokalorik 2:1 aralıklı oruç için ayrıntılı bir protokol açıklanmaktadır.

Farelerde Izokalorik 2:1 Aralıklı Orucun Metabolik Etkilerinin Değerlendirilmesi

Bu çalışma, polikistik over sendromu fare modelinde hepatik glikoz üretiminin hem oruç hem de glikoz bakımından zengin durumlarda kuyruk damarı yoluyla stabil bir izotopik glikoz izleyici kullanılarak doğrudan ölçülen ölçümünü açıklar.

Polikistik Over Sendromu Fare Modelinde Hepatik Glikoz Üretiminin Değerlendirilmesi

Daha yüksek kan şekeri konsantrasyonu ile insülin salınımını ölçmek için bir hiperglisemik kelepçe kullanılır. Hipoglisemik bir kelepçe, karşı düzenleyici yanıtların neden olduğu glikoz üretimini ölçmek içindir. Her iki yöntemde de aynı cerrahi prosedür kullanılır. Burada, sistemik glukoz metabolizmasını değerlendirmek için bir klemp tekniği sunuyoruz.

Bilinçli Farelerde Hiperglisemik Kelepçe ve Hipoglisemik Kelepçe

Öğrenin, farelerde oral glukoz tolerans testi ve insülin tolerans testi kullanarak yüksek yağlı diyetle beslenen modellerde glikoz metabolizması değişikliklerini in vivo nasıl değerlendirebilirsiniz.

Vivo glikoz metabolizması farelerde Oral glukoz tolerans testi (OGTT) ve insülin tolerans testi (ITT) kullanarak yüksek yağlı diyet beslenen incelenmesi (Video) | JoVE Journal

Vivo glikoz metabolizması farelerde Oral glukoz tolerans testi (OGTT) ve insülin tolerans testi (ITT) kullanarak yüksek yağlı diyet beslenen incelenmesi

Daha fazla video keşfet