Name: CRE-lox rekombinasyon fare serebral korteks rahim içinde elektroporasyon ile inducing (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-17T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 29 s
Description: Öğrenin fare serebral korteksinde Cre-Lox rekombinasyonunu rahim içinde elektroporasyon ile nasıl indükleyeceğinizi. Bu yöntem, nöronal fenotipleri hücre özerk şekilde incelemek için genetik mozaikler oluşturur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazar James Madison Üniversitesi Biyoloji bölümü ve James Madison Üniversitesi ışık mikroskobu ve tesis Imaging cömert destek teşekkür ederiz. Dr. Mark L. Gabriele için yararlı tavsiyeler genç doğum sonrası doku hazırlık, ilgili ve Drs. Justin W. Brown ve Corey L. Cleland cerrahi malzemeler ve mekan cömert koordinasyon için. Bu araştırma kısmen 4-VA, ilerleyen Virginia Commonwealth (G.S.V.) için işbirliğine dayalı bir ortaklık tarafından ve tarafından bir Virginia Akademisi bilim küçük proje araştırma Grant'ın (G.S.V.) bir ortak araştırma hibe tarafından finanse edildi. Destek cömertçe sağlanmıştır Betty Jo sevgi dolu Butler 58 ' bağış tarafından lisans araştırma bursu (için K.M.B.), Farrell yaz araştırma bursu (için K.M.B.), James Madison Üniversitesi ikinci yüzyıl burs (K.M.B.), James Madison Üniversitesi Centennial burs (C.J.H.), James Madison Üniversitesi Lucy Robinson arama ' 30 Memorial burs (Z.L.H.) ve James Madison üniversiteler, bilim ve matematik Fakültesi yardım Grant (için G.S.V.).

<ol><li>Southwell, D. G., Froemke, R. C., Alvarez-Buylla, A., Stryker, M. P., Gandhi, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cortical+plasticity+induced+by+inhibitory+neuron+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Cortical plasticity induced by inhibitory neuron transplantation.</a> Science. 327 (5969), 1145-1148 (2010).</li>
<li>Hanson, J. E., Madison, D. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presynaptic+FMR1+genotype+influences+the+degree+of+synaptic+connectivity+in+a+mosaic+mouse+model+of+fragile+X+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Presynaptic FMR1 genotype influences the degree of synaptic connectivity in a mosaic mouse model of fragile X syndrome.</a> J. Neurosci. 27 (15), 4014-4018 (2007).</li>
<li>Patel, A. B., Hays, S. A., Bureau, I., Huber, K. M., Gibson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Target+Cell-Specific+Role+for+Presynaptic+Fmr1+in+Regulating+Glutamate+Release+onto+Neocortical+Fast-Spiking+Inhibitory+Neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A Target Cell-Specific Role for Presynaptic Fmr1 in Regulating Glutamate Release onto Neocortical Fast-Spiking Inhibitory Neurons.</a> J. Neurosci. 33 (6), 2593-2604 (2013).</li>
<li>Patel, A. B., Loerwald, K. W., Huber, K. M., Gibson, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postsynaptic+FMRP+promotes+the+pruning+of+cell-to-cell+connections+among+pyramidal+neurons+in+the+L5A+neocortical+network%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Postsynaptic FMRP promotes the pruning of cell-to-cell connections among pyramidal neurons in the L5A neocortical network.</a> J. Neurosci. 34 (9), 3413-3418 (2014).</li>
<li>McConnell, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mosaic+Copy+Number+Variation+in+Human+Neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Mosaic Copy Number Variation in Human Neurons.</a> Science. 342 (6158), 632-637 (2013).</li>
<li>McConnell, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intersection+of+diverse+neuronal+genomes+and+neuropsychiatric+disease%3A+The+Brain+Somatic+Mosaicism+Network%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Intersection of diverse neuronal genomes and neuropsychiatric disease: The Brain Somatic Mosaicism Network.</a> Science. 356 (6336), eaal1641(2017).</li>
<li>Gu, H., Marth, J. D., Orban, P. C., Mossmann, H., Rajewsky, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deletion+of+a+DNA+polymerase+beta+gene+segment+in+T+cells+using+cell+type-specific+gene+targeting%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Deletion of a DNA polymerase beta gene segment in T cells using cell type-specific gene targeting.</a> Science. 265 (5168), 103-106 (1994).</li>
<li>Hodges, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Astrocytic+Contributions+to+Synaptic+and+Learning+Abnormalities+in+a+Mouse+Model+of+Fragile+X+Syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Astrocytic Contributions to Synaptic and Learning Abnormalities in a Mouse Model of Fragile X Syndrome.</a> Biol. Psychiatry. (17), 1-11 (2016).</li>
<li>Young, P., Qiu, L., Wang, D., Zhao, S., Gross, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-neuron+labeling+with+inducible+cre-mediated+knockout+in+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Single-neuron labeling with inducible cre-mediated knockout in transgenic mice.</a> Nat. Neurosci. 11 (6), 721-728 (2011).</li>
<li>Zong, H., Espinosa, J. S., Su, H. H., Muzumdar, M. D., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mosaic+Analysis+with+Double+Markers+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Mosaic Analysis with Double Markers in Mice.</a> Cell. 121 (3), 479-492 (2005).</li>
<li>Hippenmeyer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+mosaic+dissection+of+Lis1+and+Ndel1+in+neuronal+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Genetic mosaic dissection of Lis1 and Ndel1 in neuronal migration.</a> Neuron. 68 (4), 695-709 (2010).</li>
<li>De la Rossa, A., Jabaudon, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+rapid+gene+delivery+into+postmitotic+neocortical+neurons+using+iontoporation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">In vivo rapid gene delivery into postmitotic neocortical neurons using iontoporation.</a> Nat. Protoc. 10 (1), 25-32 (2015).</li>
<li>Lu, W., Bushong, E. A., Shih, T. P., Ellisman, M. H., Nicoll, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cell-autonomous+role+of+excitatory+synaptic+transmission+in+the+regulation+of+neuronal+structure+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">The cell-autonomous role of excitatory synaptic transmission in the regulation of neuronal structure and function.</a> Neuron. 78 (3), 433-439 (2013).</li>
<li>Duan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Semaphorin+5A+inhibits+synaptogenesis+in+early+postnatal-+and+adult-born+hippocampal+dentate+granule+cells%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Semaphorin 5A inhibits synaptogenesis in early postnatal- and adult-born hippocampal dentate granule cells.</a> eLife. 3, 1-24 (2014).</li>
<li>Dixit, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+Gene+Delivery+into+Multiple+CNS+Territories+Using+In+utero+Electroporation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Efficient Gene Delivery into Multiple CNS Territories Using In utero Electroporation.</a> J. Vis. Exp. (52), e2957(2011).</li>
<li>Matsui, A., Yoshida, A. C., Kubota, M., Ogawa, M., Shimogori, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+in+utero+Electroporation%3A+Controlled+Spatiotemporal+Gene+Transfection%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Mouse in utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection.</a> J. Vis. Exp. (54), e3024(2011).</li>
<li>Briz, C. G., Navarrete, M., Esteban, J. A., Nieto, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+utero+Electroporation+Approaches+to+Study+the+Excitability+of+Neuronal+Subpopulations+and+Single-cell+Connectivity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">In utero Electroporation Approaches to Study the Excitability of Neuronal Subpopulations and Single-cell Connectivity.</a> J. Vis. Exp. (120), (2017).</li>
<li>Saito, T., Nakatsuji, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+gene+transfer+into+the+embryonic+mouse+brain+using+in+vivo+electroporation%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Efficient gene transfer into the embryonic mouse brain using in vivo electroporation.</a> Dev. Biol. 240 (1), 237-246 (2001).</li>
<li>Saito, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+electroporation+in+the+embryonic+mouse+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+protocols%22%5BJournal%5D)">In vivo electroporation in the embryonic mouse central nervous system.</a> Nature protocols. 1 (3), 1552-1558 (2006).</li>
<li>Tabata, H., Nakajima, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+in+utero+gene+transfer+system+to+the+developing+mouse+brain+using+electroporation%3A+Visualization+of+neuronal+migration+in+the+developing+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Efficient in utero gene transfer system to the developing mouse brain using electroporation: Visualization of neuronal migration in the developing cortex.</a> Neuroscience. 103 (4), 865-872 (2001).</li>
<li>Matsuda, T., Cepko, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlled+expression+of+transgenes+introduced+by+in+vivo+electroporation%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Controlled expression of transgenes introduced by in vivo electroporation.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 10 (3), 1027-1032 (2007).</li>
<li>Pacary, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+and+Genetic+Manipulation+of+Dendrites+and+Spines+in+the+Mouse+Cerebral+Cortex+and+Hippocampus+using+In+utero+Electroporation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation.</a> J. Vis. Exp. (65), e4163(2012).</li>
<li>Mizuno, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NMDAR-Regulated+Dynamics+of+Layer+4+Neuronal+Dendrites+during+Thalamocortical+Reorganization+in+Neonates%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">NMDAR-Regulated Dynamics of Layer 4 Neuronal Dendrites during Thalamocortical Reorganization in Neonates.</a> Neuron. 82 (2), 365-379 (2014).</li>
<li>Luo, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Supernova%3A+A+Versatile+Vector+System+for+Single-Cell+Labeling+and+Gene+Function+Studies+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+Rep%22%5BJournal%5D)">Supernova: A Versatile Vector System for Single-Cell Labeling and Gene Function Studies in vivo.</a> Sci. Rep. 6, 35747(2016).</li>
<li>Mader, S. L., Libal, N. L., Pritchett-Corning, K., Yang, R., Murphy, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Refining+timed+pregnancies+in+two+strains+of+genetically+engineered+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+animal%22%5BJournal%5D)">Refining timed pregnancies in two strains of genetically engineered mice.</a> Lab animal. 38 (9), 305-310 (2009).</li>
<li>Vidal, G. S., Djurisic, M., Brown, K., Sapp, R. W., Shatz, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-Autonomous+Regulation+of+Dendritic+Spine+Density+by+PirB%5BTitle%5D)+AND+%22eNeuro%22%5BJournal%5D)">Cell-Autonomous Regulation of Dendritic Spine Density by PirB.</a> eNeuro. 3 (5), 1-15 (2016).</li>
<li>Byers, S. L., Wiles, M. V., Dunn, S. L., Taft, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+estrous+cycle+identification+tool+and+images%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Mouse estrous cycle identification tool and images.</a> PLoS ONE. 7 (4), 1-5 (2012).</li>
<li>Andreu-Agullo, C., Maurin, T., Thompson, C. B., Lai, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ars2+maintains+neural+stem-cell+identity+through+direct+transcriptional+activation+of+Sox2%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Ars2 maintains neural stem-cell identity through direct transcriptional activation of Sox2.</a> Nature. 481, 195-198 (2011).</li>
<li>Scotto-Lomassese, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fragile+X+mental+retardation+protein+regulates+new+neuron+differentiation+in+the+adult+olfactory+bulb%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Fragile X mental retardation protein regulates new neuron differentiation in the adult olfactory bulb.</a> J. Neurosci. 31, 2205-2215 (2011).</li>
<li><a target="_blank" href="https://moodle2.units.it/pluginfile.php/145932/mod_resource/content/0/Plasmids%20101%20eBook%203rd%20Ed%20Final.pdf">Plasmids 101: A Desktop Resource</a>. , 3rd ed, Addgene. Cambridge, Massachusetts. (2017).</li>
<li><a target="_blank" href="https://www.sutter.com/PDFs/pipette_cookbook.pdf">Pipette Cookbook</a>. , rev. ed, Sutter Instrument Company. Novato, California. (2015).</li>
<li>Cuddington, B., Verschoor, M., Mossman, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Handling+of+the+Cotton+Rat+in+Studies+for+the+Pre-clinical+Evaluation+of+Oncolytic+Viruses%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Handling of the Cotton Rat in Studies for the Pre-clinical Evaluation of Oncolytic Viruses.</a> J. Vis. Exp. (93), e52232(2014).</li>
<li>Leary, S., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLeary%2C+S+%22AVMA+Guidelines+for+the+Euthanasia+of+Animals%3A+2013+Edition%22">AVMA Guidelines for the Euthanasia of Animals: 2013 Edition</a>. , American Veterinary Medical Association. Schaumburg, Illinois. (2013).</li>
<li>Anderson, S. A., Eisenstat, D. D., Shi, L., Rubenstein, J. L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interneuron+Migration+from+Basal+Forebrain+to+Neocortex%3A+Dependence+on+Dlx+Genes%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Interneuron Migration from Basal Forebrain to Neocortex: Dependence on Dlx Genes.</a> Science. 28 (5337), 474-476 (1997).</li>
<li>Parker, J. M., Austin, J., Wilkerson, J., Carbone, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Multimodal+Analgesia+on+the+Success+of+Mouse+Embryo+Transfer+Surgery%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Assoc.+Lab.+Anim.+Sci%22%5BJournal%5D)">Effects of Multimodal Analgesia on the Success of Mouse Embryo Transfer Surgery.</a> J. Am. Assoc. Lab. Anim. Sci. 50 (4), 466-470 (2011).</li>
<li>Kim, J. -Y., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23347239">Viral transduction of the neonatal brain delivers controllable genetic mosaicism for visualising and manipulating neuronal circuits in vivo.</a> Eur. J. Neurosci. 37 (8), 1203-1220 (2013).</li>
<li>Pierfelice, T. J., Gaiano, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasound-Guided+Microinjection+into+the+Mouse+Forebrain+In+Utero+at+E9.5%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Ultrasound-Guided Microinjection into the Mouse Forebrain In Utero at E9.5.</a> J. Vis. Exp. (45), e2047(2010).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir ifşa etmek çıkar çatışması var.

Burada, rahim içinde elektroporasyon Cre recombinase mozaik beyin doku oluşturmak için floxed farelerde ile kombinasyonu tanıtmak. Bu yaklaşımın avantajı, yeni bir fare satır farklı hücresel alt türü hedef için her zaman var olmak oluşturmak yeterli değil olmasıdır: rahim içinde elektroporasyon eksitatör nöronlar, inhibitör nöronlar veya glia süreye bağlı olarak hedeflemek için kullanılan ve konumu elektroporasyon15,16,<sup class="xre...

Genetik bir mozaik üreten ilgi bir gen işlevini anlamak için deneysel bir klasik örnektir. Bir gen bir hücresel fenotip için gerekli olup olmadığını belirlemek için en basit yaklaşım organizma (örneğin nakavt) boyunca gen fonksiyon kaybına neden oluyor. Ancak, bir gen özellikle belirli bir hücre türü içinde gerekli belirlemek için nakavt gen organizma boyunca geçerli bir yaklaşım değildir. Bunun yerine, bir yöntem gereklidir bu-ecek neden bir gen fonksiyon kaybı belirli bir hücrenin wildtype (Yani genetik olarak soğukkanlı) doku tarafından çevrili iken — başka bir deyişle, mozaik doku oluşturma. Eğer bir mutant fenotip mutant hücre gösterir ama çevreleyen wildtype hücreleri hücre özerk bir şekilde gen fonksiyonları yok. Analiz mozaik doku, mutasyona uğramış hücreler wildtype doku ile çevrili olan genlerin, özellikle nerede neurons ve glia dokusunun geniş bir birbirine bağlı ağ oluşturmak beyin hücre özerk işlevleri anlamak için idealdir.
Mozaik beyin dokusunun birkaç form genlerin hücre özerk fonksiyonlarını araştırmak için güçlü modeller hazırladık. Çalışmalar nöronal nakli1' de, kadın X'e mozaizm2,3,4, odaklı ve endojen somatik mozaizm5,6 çizilmiş onların sonuçlar mozaik üzerinde dayalı beyin dokusu. Bir genin Cre-lox rekombinasyon sistemi aracılığıyla koşullu silme transgenik fare satırları büyük kullanılabilirliğini yararlanır bir yöntemdir. Bu yöntemde, iki loxP site gideriş o ("floxed") aynı yönde iki yüz loxP siteleri tarafından çevrili bir gen (örneğin bir exon), gerekli bir dizi her iki tarafında tanıtılmaktadır. CRE recombinase loxP siteleri7arasında sıra excises. CRE-aracılı rekombinasyon geçiş floxed fareler Cre recombinase ile birlikte bir alt hücre ("Cre muhabir çizgi") floresan işaretleyicisinde ifade başka bir fare çizgi için elde edilebilir. Bu işlevleri eksitatör nöronlar veya astrocytes8gibi hücrenin alt kümeleri içinde bir gen ortaya çıkarmak için yol çeşitli göstermiştir. CRE muhabir satırları Cre-aracılı rekombinasyon uyuşturucu indüklenebilir (tek-nöron indüklenebilir Cre-aracılı nakavt veya KAYGAN ile etiketleme) olmak izin vermek için CreERT2 ifade9. Mozaik analiz çift işaretleri (MADM)10,11ile adı verilen başka bir strateji, heterozigoz dokusu ile birlikte oluşturulacak homozigoz mutant interchromosomal rekombinasyon Cre-aracılı sağlar. Bu yaklaşımlar, farelerin yeni bir satır her aday gen ya da mercek altına alındı hücresel alt türü için her zaman üretilmesi gerekiyor. Alternatif olarak, Cre recombinase postnatally İyontoforez12 veya viral vektörler (hücresel alt türü özel taşıyanörneğin adeno ilişkili virüs13 ya da lentiviruses14 aracılığıyla tanıttı olabilir Organizatör). Bu strateji etiketleme güçlü ve postnatal oluşturur. Seyrek ve prenatally serebral kortikal nöronlar geliştirme hedeflemek için bir ideal Cre recombinase floresan bir marker ile rahim içinde elektroporasyon stratejisidir.
CRE-lox rekombinasyon üretmek için rahim içinde elektroporasyon ile birleştirerek yanı sıra doku vivo içindeMozaik, biz diğer yayımlanmış protokolleri15,16yordamları için çeşitli uyarlamalar tanıtmak, 17,18,19,20,21. Üreme zaman aşımına uğradı-hamile kadın başarısında geliştirmek için bilgi veriyoruz. Biz de seyrek ve parlak kortikal doku nöronlarda etiketlerine göre tanıtmak bizim iki strateji anahat: bir strateji bir tek yapı Cre recombinase ve floresan marker22için kodlama düzeyleri titre etmektir. Bu parametreler zihin23,24ile özel tasarlanmış "Süpernova" sistemini kullanmak için başka bir stratejidir. Ayrıca, biz tutarlı mikroenjeksiyon Pipetler ve basitleştirmeler rahim içinde elektroporasyon cerrahi üretmek geliştirmeleri sunar. Son olarak, biz daha fazla boyama ve immünhistokimya dendritik spines ve dendritik ve aksonal arbors, analizini verir basitleştirilmiş bir histolojik hazırlık kritik adımlar verilmiştir.

<table><tbody><tr><td>C57BL/6J fareler</td><td>Jackson Laboratuvarı</td><td>#000664</td><td>Bkz. "1. Fare kurulumu" (adım 1.1, "vahşi tip fareler")</td></tr><tr><td>GFP. Cre boş vektör</td><td>AddGene</td><td>#20781</td><td>Bkz. "2. DNA kurulumu" (adım 2.1 "Cre rekombinaz ve aynı zamanda bir floresan işaretleyiciyi kodlayan tek DNA yapısı"). GFP'yi seçin. Cre boş vektör Tyler Jacks'ten bir hediyeydi.</td></tr><tr><td>pK029.CAG-loxP-stop-loxP-RFP-ires-tTA-WPRE (Süpernova)</td><td>AddGene</td><td>#69138</td><td>Bkz. "2. DNA kurulumu" (adım 2.1 "Süpernova" sistemi) ve http://snsupport.webcrow.jp/. pK029.CAG-loxP-stop-loxP-RFP-ires-tTA-WPRE (Süpernova), Takuji Iwasato'nun bir hediyesiydi.</td></tr><tr><td>pK031.TRE-Cre (Süpernova)</td><td>AddGene</td><td>#69136</td><td>Bkz. "2. DNA kurulumu" (adım 2.1 "Süpernova" sistemi) ve http://snsupport.webcrow.jp/. pK031.TRE-Cre (Süpernova), Takuji Iwasato'nun bir hediyesiydi.</td></tr><tr><td>pK038.CAG-loxP-stop-loxP-EGFP-ires-tTA-WPRE (Süpernova)</td><td>AddGene</td><td>#85006</td><td>Bkz. "2. DNA kurulumu" (adım 2.1 "Süpernova" sistemi) ve http://snsupport.webcrow.jp/. pK038.CAG-loxP-stop-loxP-EGFP-ires-tTA-WPRE (Süpernova), Takuji Iwasato'nun bir hediyesiydi.</td></tr><tr><td>EndoFree Plazmid Maxi Kiti (10)</td><td>Qiagen</td><td>#12362</td><td>Bkz. "2. DNA kurulumu" (adım 2.3 "endotoksin içermeyen plazmit saflaştırma kiti")</td></tr><tr><td>Tripan Mavisi tozu, BioReagent sınıfı</td><td>Sigma</td><td>T6146-5G</td><td>Bkz. "2. DNA kurulumu" (adım 2.5 "tripan mavisi")</td></tr><tr><td>Sodyum Klorür, ACS, 2.5 kg</td><td>VWR</td><td>BDH9286-2.5KG</td><td>Bkz. "2. DNA kurulumu" (adım 2.5 "NaCl")</td></tr><tr><td>Potasyum Klorür, ACS, 500 g</td><td>VWR</td><td>#97061-566</td><td>Bkz. "2. DNA kurulumu" (adım 2.5 "KCl")</td></tr><tr><td>Sodyum fosfat dibazik, ReagentPlus, 100 g</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0876-100G</td><td>Bkz. "2. DNA kurulumu" (adım 2.5 "Na2HPO4")</td></tr><tr><td>Potasyum fosfat monobazik, ReagentPlus, 100 g</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P5379-100G</td><td>Bkz. "2. DNA kurulumu" (adım 2.5 "KH2PO4")</td></tr><tr><td>Hidroklorik asit, ACS reaktifi, 500 mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>A144-500</td><td>Bkz. "2. DNA kurulumu" (adım 2.5 "HCl")</td></tr><tr><td>P-97 Mikropipet Çektirme</td><td>Sutter Aleti</td><td>P-97</td><td>Bkz. "3. Pipet kurulumu" (adım 3.1 "cam kılcal çektirme")</td></tr><tr><td>3,0 mm genişliğinde oluk filamenti</td><td>Sutter Aleti</td><td>FT330B</td><td>Bkz. "3. Pipet kurulumu" (adım 3.1 "cam kılcal çektirme")</td></tr><tr><td>İnce Cidarlı Cam Kılcal Damarlar, 4", 1 / 0.75 OD/ID</td><td>World Precision Instruments</td><td>TW100-4</td><td>Bkz. "3. Pipet kurulumu" (adım 3.1.1 "cam kılcal")</td></tr><tr><td>Tek Katlı Yumuşak Teknolojili Mendiller, 4,5"</td><td>Phenix</td><td>LW-8148</td><td>Bkz. "3. Pipet kurulumu" (adım 3.2.1 "tek katlı görev silme"); diğer tek katlı mendiller (örneğin Kimwipes) kullanılabilir.</td></tr><tr><td>Graefe Forseps, 7 cm, Düz, 0,7 mm 1x2 Diş</td><td>Dünyası Hassas Aletler</td><td>#14140</td><td>Bkz. "4. In utero elektroporasyon" (adım 4.1 "Graefe forseps")</td></tr><tr><td>İris Makası, 11,5 cm, Düz, 12'li paket</td><td>World Precision Instruments</td><td>#503708-12</td><td>Bkz. "4. In utero elektroporasyon" (adım 4.1 "iris makası")</td></tr><tr><td>Hartman Sivrisinek Forseps, 9 cm, Düz, 12'li paket</td><td>World Precision Instruments</td><td>#503728-12</td><td>Bkz. "4. In utero electroporation" (adım 4.1 "Hartman sivrisinek forseps")</td></tr><tr><td>Genel Amaçlı Dokumasız Süngerler, 2" x 2", 4 katlı</td><td>Medrepexpress</td><td>#2204-c</td><td>Bkz. "4. Rahim içi elektroporasyon" (adım 4.1 "dokunmamış gazlı bez süngerler")</td></tr><tr><td>Halka Uçlu Forseps, 10 cm, Düz, 2,2 mm ID</td><td>World Precision Instruments</td><td>#503203</td><td>Bkz. "4. In utero elektroporasyon" (adım 4.1 "halka uçlu forseps")</td></tr><tr><td>Pyrex petri kapları tamamlandı, OD ve zamanlar; H 100 mm ve kez; 20 mm</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CLS3160102-12EA</td><td>Bkz. "4. In utero elektroporasyon" (adım 4.1 "Petri kapları")</td></tr><tr><td>Düz Tip Alet Tepsisi, Paslanmaz Çelik, 13-5/8" x 9-3/4" x 5/8"</td> <td>Amazon</td><td>B007SHGAHA</td><td>Bkz. "4. In utero electroporation" (adım 4.1 "paslanmaz çelik tepsi")Platin</td></tr> <tr><td>Cımbız, 5 mm</td><td>BTX</td><td>#45-0489</td><td>Bkz. "4. In utero elektroporasyon" (adım 4.3 ve 4.16 "cımbız tipi elektrotlar")</td></tr><tr><td>ECM 830 Ayak Pedalı</td><td>BTX</td><td>#45-0211</td><td>Bkz. "4. In utero elektroporasyon" (adım 4.3 ve 4.17 "ayak pedalı")</td></tr><tr><td>ECM 830 Jeneratör</td><td>BTX</td><td>#45-0052</td><td>Bkz. "4. In utero elektroporasyon" (adım 4.3 "jeneratör")</td></tr><tr><td>Küçük İndüksiyon Kutulu Tek Hayvan İzofluran Anestezi Sistemi</td><td>Harvard Aparatı</td> <td># 72-6468</td><td>Bkz. "4. In utero elektroporasyon" (adım 4.4 ve 4.6 "burun konisi", adım 4.4 "indüksiyon odası")</td></tr><tr><td>Oftalmik merhem</td><td>Hanna Pharmaceutical Supply Co</td><td>#0536108691</td><td>Bkz. "4. In utero elektroporasyon" (adım 4.7 "veteriner oftalmik merhem")</td></tr><tr><td>Space Gel (AIMS)</td><td>VWR</td><td>#95059-640</td><td>Bkz. "4. In utero elektroporasyon" (adım 4.8 "aşırı doymuş tuz çözeltisi ile doldurulmuş kapalı kese")</td></tr><tr><td>Saç Çıkarıcı Jel Krem, Hassas Formül</td><td>Veet</td><td>#062200809951</td><td>Bkz. "4. In utero elektroporasyon" (adım 4.9 "tüy dökücü krem")</td></tr><tr><td>10ul Düşük Tutma Ucu Starter (960 uç/pk)</td><td>Phenix Research Products</td><td>TSP-10LKIT</td><td>Bkz. "4. In utero elektroporasyon" (adım 4.12 "steril 10 & mikro; L mikropipet ucu")</td></tr><tr><td>Kalibre edilmiş mikrokılcal pipetler için aspiratör borusu tertibatları</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5177</td><td>Bkz. "4. In utero elektroporasyon" (adım 4.15 "aspiratör tüpü tertibatı")</td></tr><tr><td>Örgülü Emilebilir Sütür, 4-0, İğne NFS-2(FS-2), 27"</td><td>Medrepexpress</td><td>MV-J397</td><td>Bkz. "4. In utero elektroporasyon" (adım 4.19 "emilebilir sütürler")</td></tr><tr><td>" LiquiVet Hızlı" Doku yapıştırıcısı</td><td>Medrepexpress</td><td>VG3</td><td>Bkz. "4. In utero elektroporasyon" (adım 4.20 "doku yapıştırıcısı")</td></tr><tr><td>Hipodermik şırıngalar, polipropilen, Luer kilit ucu, kapasite 1.0 mL</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z551546-100EA</td><td>Bkz. "4. In utero elektroporasyon" (adım 4.21 "1 mL şırınga")</td></tr><tr><td>BD Precisionglide şırınga iğneleri ölçü 26, L 1/2 inç.</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z192392-100EA</td><td>Bkz. "4. In utero elektroporasyon" (adım 4.21 "26G, &frac12; &rdquo; iğne")</td></tr><tr><td>Yuvacıklar Yuvalama Materyali</td><td>Ancare</td><td>NES3600</td><td>Bkz. "4. In utero elektroporasyon" (adım 4.24 "yuvalama malzemeleri")</td></tr><tr><td>Ayçiçeği Tohumu, Siyah Yağ, Steril</td><td>Bio-Serv</td><td>S5137</td><td>Bkz. "4. In utero elektroporasyon" (adım 4.24 "ayçiçeği tohumları")</td></tr><tr><td>Paraformaldehit, %97</td> <td>Alfa Aesar</td><td>A11313</td><td>Bkz. "5. Histoloji" (adım 5.1.1 "PFA")</td></tr><tr><td>Ekonomi Cımbız #3, 11 cm, 0,2 x 0,4 mm uçlar</td><td>World Precision Instruments</td><td>#501976</td><td>Bkz. "5. Histoloji" (adım 5.5 "cımbız")</td></tr><tr><td>Agar tozu</td><td>Alfa Aesar</td><td>#10752</td><td>Bkz. "5. Histoloji" (adım 5.8.1 "agar")</td></tr><tr><td>Tek kenarlı tıraş bıçağı, #9 bıçak</td><td>Stanley Tools</td><td>#11-515</td><td>Bkz. "5. Histoloji" (adım 5.9 "tek kenarlı tıraş bıçağı")</td></tr><tr><td>Numune diski S D 50 mm</td><td>Leica</td><td>#14046327404</td><td>Bkz. "5. Histoloji" (adım 5.9 "titreşimli mikrotom numune diski")</td></tr><tr><td>Tampon tepsisi S düzeneği</td><td>Leica</td><td>#1404630132</td><td>Bkz. "5. Histoloji" (adım 5.10 "tampon tepsisi")</td></tr><tr><td>VT1000 S Vibratom</td><td>Leica</td><td>#14047235612</td><td>Bkz. "5. Histoloji" (adım 5.10 "titreşimli mikrotom")</td></tr><tr><td>Çift Kenarlı Tıraş Bıçakları</td><td>Personna</td><td>BP9020</td><td>Bkz. "5. Histoloji" (adım 5.10 "bıçak")</td></tr><tr><td>Bıçak Tutucu S</td><td>Leica</td><td>#14046230131</td><td>Bkz. "5. Histoloji" (adım 5.10 "bıçak tutucu")</td></tr><tr><td>Studio Elements Altın Taklon Kısa Saplı Yuvarlak Fırça Seti</td><td>Amazon</td><td>B0089KU6XE</td><td>Bkz. "5. Histoloji" (adım 5.12.1 "ince uçlu boya fırçası")</td></tr><tr><td>Superfrost Plus Slaytlar Elektron</td><td>Mikroskobu Hizmetleri</td><td>#71869-11</td><td>Bkz. "5. Histoloji" (adım 5.12.1 "mikroskop slaytı")</td></tr><tr><td>ProLong Elmas Antifade Mountant, 10 ml</td><td>Thermofisher</td><td>P36970</td><td>Bkz. "5. Histoloji" (adım 5.12.3-5.12.4 "montaj")</td></tr><tr><td>Kapak Camı, 24 x 50 mm, No. 1</td><td>Phoenix Araştırma Ürünleri</td><td>MS1415-10</td><td>Bkz. "5. Histoloji" (adım 5.12.4 "lamelli")</td></tr><tr><td>4&prime;,6-Diamidino-2-fenilindol dihidroklorür (DAPI)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9542</td><td>Bkz. "5. Histoloji" (adım 5.13.1 "DAPI")</td></tr><tr><td>Sabit Stage Dik Mikroskop</td><td>Olympus</td><td>BX51WI</td><td>Bkz. "5. Histoloji" (adım 5.15 "ışık mikroskobu")</td></tr><tr><td>Lazer Taramalı Konfokal Mikroskop</td><td>Nikon</td><td>TE2000/C2si</td><td>Bkz. "5. Histoloji" (adım 5.15 "konfokal mikroskop")</td></tr><tr><td>4x objektif, NA = 0.20</td><td>Nikon</td><td>CFI Plan Apo Lambda 4X</td><td>Bkz. "5. Histoloji" (adım 5.15 "düşük güç hedefi")</td></tr><tr><td>20x objektif, NA = 0.75</td><td>Nikon</td><td>CFI Plan Apo Lambda 20X</td><td>Bkz. "5. Histoloji" (adım 5.15 "orta güç hedefi")</td></tr><tr><td>60x hedef, NA = 1.40</td><td>Nikon</td><td>CFI Plan Apo VC 60X Yağ</td><td>Bkz. "5. Histoloji" (adım 5.15 "yüksek güç hedefi")</td></tr></tbody></table>

cre-lox rekombinasyon fare serebral korteks rahim içinde elektroporasyon ile inducing

Inducing Cre-lox Recombination in Mouse Cerebral Cortex Through In Utero Electroporation

Genlerin hücre özerk nöronal işlevleri kaybına neden tarafından ortaya ya da küçük ve seyrek nüfus nöronların bir genin fonksiyonunun kazanmak. Bunu yapmak için hangi genetik olarak soğukkanlı doku tarafından nöronlar kaybı veya kilo alma işlevinin bir gen ile çevrili olan bir mozaik oluşturma gerektirir. Burada, biz Cre-lox rekombinasyon sistemi ile rahim içinde elektroporasyon nöronlar genlerin hücre özerk işlev eğitim için kullanılan mozaik beyin doku oluşturmak için birleştirmek. DNA yapıları (depoları ile kullanılabilir) bir floresan etiket ve Cre recombinase, kodlama, kortikal nöronlar içinde utero kullanarak fare embriyo beynindeki loxP siteleri ile çevrili genleri içeren gelişmekte içine tanıtıldı elektroporasyon. Ayrıca, biz survivability ve tekrarlanabilirlik artırmak çeşitli uyarlamalar rahim içinde elektroporasyon yöntemi açıklanmaktadır. Bu yöntem aynı zamanda bir titresi Cre-aracılı rekombinasyon nöronların seyrek veya yoğun nüfus için oluşturma içerir. Etiketli beyin dokusu histolojik hazırlıkları gerektirmez (ancak için adapte edilebilir) immünhistokimya. Kullanılan yapıları bu fluorescently Cre recombinase için gen nöronlar taşımak etiketli garanti. Histolojik hazırlıklar nöronların confocal görüntüleme dendritik ve aksonal arbors ve dendritik spines ile morfolojik analiz sağlar. Seyrek mozaik doku kaybı veya kilo alma işlevinin elde çünkü bu yöntem hücre özerk gerekliliği, çalışma ve gen ürünleri içinde vivoyeterliliği izin verir.

Tek yapı GFP. CRE electroporated E15.5 de yapıldı (malzeme listesine bakınız) ve P14 görüntülenir. Yapı konsantrasyon ve enjeksiyon hacmine bağlı olarak, bir seyrek veya yoğun sonuç22,26elde edilebilir. Örneğin, 2 mg/ml GFP 1 µL enjeksiyon. Etiketli hücre, biraz-in hangi-ebilmek var olmak parlak (şekil 1A) ve yerelleştirilmiş içinde katman II/III (şekil 1B) seyrek bir dağ...

Gen beyinde hücre-otonom fonksiyonları kaybı inducing tarafından okudu ya da seyrek nüfus hücre işlevinin kazanmak. Burada, rahim içinde elektroporasyon Cre recombinase işlev içinde vivokaybına neden için floxed genler ile kortikal nöronlar geliştirme seyrek nüfus sunmak için açıklamak.

CRE-lox rekombinasyon fare serebral korteks rahim içinde elektroporasyon ile inducing

Cell-autonomous neuronal functions of genes can be revealed by causing loss or gain of function of a gene in a small and sparse population of neurons. To ...

Bu prosedürün genel amacı, in utero elektroporasyon yoluyla Cre-Lox rekombinasyonunu indükleyerek fare serebral korteksinde genetik bir mozaik oluşturmaktır. Genetik mozaikler üretmenin bu yöntemi, nörobiyolojideki temel soruları yanıtlamaya yardımcı olabilir. Belirli bir nöronal fenotip için hücre özerk bir şekilde bir genin gerekli olup olmadığının belirlenmesi gibi.Bu tekniğin temel avantajı, etkili Cre-Lox rekombinasyon sisteminin, utero elektroporasyonda eşit derecede etkili bir gen verme tekniği ile birleştirilmesidir. Bu yöntem iki-üç kortikal nöronları hedeflemeye odaklanmış olsa da, diğer kortikal tabaka derinliklerindeki nöronları hedeflemek için kullanılabilir. Beyin dokumuzda genetik mozaikler yapmaya çalıştığımızda, deney hayvanlarımızın doğumdan sonra hayatta kalmalarını sağlamada çeşitli problemlerle karşılaştık, bu yüzden tekniğimize çeşitli basitleştirmeler ve iyileştirmeler getirdik.Embriyonik kök hücre enjeksiyonu veya nükleer transfer için tipik olan çok uzun konik ve çok ince uçlu bir pipet hazırlayın, önce cam kılcal damarı pipet çekiciye yerleştirerek. Kelepçeleri sabitledikten sonra, programı çekme protokolüne etkinleştirin ve cam kılcal damar üzerinde bir k

inducing-cre-lox-recombination-mouse-cerebral-cortex-through-utero

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

E15 Fare Embriyolar Utero İntraventriküler Enjeksiyon ve Elektroporasyon

Utero elektroporasyon gelişmekte olan merkezi sinir sistemi (MSS) bir mekansal ve zamansal olarak kontrollü bir şekilde hızlı bir gen teslimat için izin verir. Burada son derece uyarlanabilir tarif telencephalon diensefalon ve retina da dahil olmak üzere birden fazla embriyonik MSS etki alanı ifade yapıları sunmak için kullanılabilir utero elektroporasyon protokol.

Verimli kullanarak birden çok CNS Topraklar&#39;da Gen Teslimat In Utero Elektroporasyon

Gelişmekte olan fare beyninin içine bir gen transferi yöntemi eşsiz bir cerrahi yöntem ve elektrotlar özel şekli ile tarif edilir. Bu benzersiz tekniği, beyin gelişimi okuyan birçok Nörobilimadamları yardımcı olacak zamansal ve mekansal plazmid DNA transfeksiyon sağlar.

Fare Utero Elektroporasyon: Kontrollü Spatiotemporal Gen Transfeksiyon

Bu makalede ayrıntılı olarak utero serebral korteks ve farelerde E14.5 de hipokampus electroporate bir protokol tanımlamaktadır. Biz de bu bu iki beyin bölgelerinde dendrit ve dikenler incelemek için değerli bir yöntem olduğunu göstermektedir.

Kullanarak Fare Serebral Korteks ve Hippocampus Görselleştirme ve Dendritler ve Spine Genetik Manipülasyon<em&gt; Utero olarak</em&gt; Elektroporasyon

Bu videoda, serebral kavernöz malformasyonları (CCM'ler) indüklemek için loxP bölgeleri ve bir östrojen reseptörüne kaynaşmış Cre rekombinaz ile çevrili Ccm2 genini taşıyan genetik olarak değiştirilmiş bir fare yavrusu kullanılmaktadır. 4-hidroksitamoksifen uygulaması, endotel hücrelerinde Cre'yi aktive ederek Ccm2'nin silinmesine ve beyinde CCM'lerin oluşumuna yol açar.

Bir Fare Modelinde Serebral Kavernöz Malformasyonların Cre-LoxP Aracılı İndüksiyonu

Kaynak: Denaxa, M., el al., Kemogenetik Olarak Tasarlanmış Kortikal İnternöron Progenitörlerinin Erken Doğum Sonrası Fare Beyinlerine Nakli. J. Vis. Uzm. (2019)Bu video, ilgilenilen geni taşıyan bir plazmit vektörünün embriyonik bir beyin dilimindeki internöron progenitörlerine enjekte edilmesi ve ardından plazmit girişi ve gen ekspresyonu için elektroporasyon prosedürünü göstermektedir. Bu modifiye edilmiş progenitörler daha sonra beyin bozukluklarını tedavi etmek için kullanılabilir.

Fare Kortikal İnternöron Progenitörlerinde Agaroz Gömülü Elektroporasyon Destekli Gen Transferi

Nöron göçü, çok sayıda hücre otonom ve hücre dışı otonom faktör tarafından düzenlenir.  Bu protokol, transgenik bir faredeki bir fenotipin bir hücre içsel mekanizmasının bozulmasından mı yoksa nöron ile çevresi arasındaki etkileşimin bozulmasından mı kaynaklandığını belirlemek için utero elektroporasyonun nasıl kullanılabileceğini gösterir.

Protein silinmesi indüksiyonu yoluyla In Utero Elektroporasyon Transgenik Modelleri Nöronal Göç Açıkları tanımlayın

İkili bir genetik stratejiden yararlanarak, Cre aracılı rekombinasyondan sonra tamamlayıcı transsinaptik izleyicileri eksprese eden farelerde nöral devre izleme için ayrıntılı bir protokol sağlıyoruz. Hücreye özgü izleyici üretimi genetik olarak kodlandığından, deneysel yaklaşımımız, murin embriyonik beyin gelişimi sırasında tek hücre çözünürlüğünde nöral devrelerin oluşumunu ve olgunlaşmasını incelemek için uygundur.

Embriyonik Fare beyninde İzleme Koşullu Genetik transsinaptik

Bu protokol, in utero elektroporasyon yoluyla C57BL/6 merkezi sinir sistemindeki farklı bölgelerin spesifik olarak nasıl transfekte edileceğini ayrıntılı olarak açıklar. Bu protokolde korteks, hipokampus, talamus, hipotalamus, lateral septal çekirdek ve striatuma dönüşen bölgelerin transfeksiyonları için ayrıntılı talimatlar bulunmaktadır.

Korteks, Hippocampus-, Thalamus-, Hypothalamus-, Lateral Septal Nucleus- ve Striatum özgü<em&gt; In Utero</em&gt; C57BL / 6 Fare Elektroporasyon

Uteros elektroporasyonda çift mekansal ve zamansal olarak ayrılmış hücre popülasyonları hedefleme sağlar. Bu teknik, bu hücre popülasyonları arasındaki etkileşimleri normal koşullarda floresan proteinler ihsallaştırmak için değil, aynı zamanda fonksiyonel deneylerden sonra ilgi genlerini tedirgin etmek için görselleştirmek için yararlıdır.

Geçici ve Mekansal Olarak Ayrılmış Hücre Popülasyonlarını Hedef lemek için Utero Elektroporasyonunda Çift

Astrositler serebral korteksi düzgün bir şekilde döşer ve karmaşık morfolojilerinin analizini hücresel düzeyde zorlaştırır. Burada sağlanan protokol, kortikal astrositleri ayırmak ve hacimlerini ve morfolojilerini kullanıcı dostu bir görüntü analizi ardışık düzeni ile analiz etmek için rahim elektroporasyonunu temel alan çok renkli etiketleme kullanır.

Kortikal Fare Astrositlerini Bireyselleştirmek için Çok Elbiseli Genom Bütünleştirici Renk (MAGIC) İşaretçilerinin Utero Elektroporasyonunda

Öğrenin fare serebral korteksinde Cre-Lox rekombinasyonunu rahim içinde elektroporasyon ile nasıl indükleyeceğinizi. Bu yöntem, nöronal fenotipleri hücre özerk şekilde incelemek için genetik mozaikler oluşturur.

CRE-lox rekombinasyon fare serebral korteks rahim içinde elektroporasyon ile inducing

Daha fazla video keşfet