Name: Perkütan kontrast Ekokardiyografi güdümlü Intramyocardial enjeksiyon ve hücre teslim büyük preklinik modeli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-21T15:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 24 s
Description: Öğrenin, tavşan kalbinde kontrast ekokardiyografi güdümlü intramyokardial enjeksiyon tekniğini. Bu yöntem, kardiyak rejeneratif tedavilerin preklinik modellerde güvenli test edilmesini sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar Sheila Monfort, Brenda Martínez, Carlos Micó, Alberto Muñoz ve Manuel Molina EGFP(+) HEK-293 hücreler sağlamak için veri ve Carlos Bueno toplanması sırasında sağlanan mükemmel destek için teşekkür ederiz. Bu eser kısmen tarafından desteklenmiştir: Fundación Séneca, Agencia de Ciencia y Tecnología, Región de Murcia, İspanya (JT) (izni numarası: 11935/PI/09); Red de Terapia Celular, ISCIII-Sub. Gral. Redes, VI PN de ben + D + ben 2008-2011 (vermek yok. RD12/0019/0001) (JMM), ortak finanse yapısal fon ile Avrupa Birliği'nin (FEDER,) (JMM); ve okuma Üniversitesi, Amerika Birleşik Devletleri (AG, GB) (Merkez fon). Fon çalışma tasarım, veri toplama ve analizi, yayımlamaya karar veya el yazması hazırlanması herhangi bir rolü yoktu.

Burada açıklanan deneyleri etik University of Murcia, İspanya, araştırma Komitesi tarafından onaylanmış ve Avrupa Komisyonu yönergesi 2010/63/AB uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Açıklanan adımları çalışmalarının planının bir parçası olduğunu ve yalnızca bu kağıt için beraberindeki video çekimi amacıyla gerçekleştirilen değil standart çalışma protokolleri altında yapıldı.
1. hücre ve memeli ifade vektör hazırlanması
Not: Burada, biz kısa bir süre için bir protokolü hazırlama ve transfection hücre satır (insan embriyonik böbrek 293 (HEK-293)); tarif Ancak, uygun hücreye belirli protokolleri faiz hücre türü için en iyi duruma getirilmiş (örneğin, kök hücre) olmalıdır.
<ol><li>Korumak yüksek glikoz Dulbecco hücrelerde HEK-293'ın modifiye takıma % 10 fetal buzağı serum (FCS), % 1 sodyum pyruvate, 2 mM glutamin, % 1 penisilin/streptomisin ve oksijen bir atmosferde % 5 içeren 37 ° C'de inkübe kartal orta (DMEM) CO2 . Bir kez bir oranı 1:3 split alt Konfluent hücrelerdir.</li>
	<li>Yıkama bir kez steril fosfat ile serum fizyolojik (PBS) arabelleğe alınmış sonra medya, aspirating tarafından hücreleri bölme başlatmak, aşırı PBS kaldırmak ve sonra 2.5 mL tripsin-Ethylenediaminetetraacetic asit (EDTA) (5 dk, 37 ° C) x 0,5 ile kuluçkaya.<ol>
<li>DMEM medya (yukarıda açıklandığı gibi takıma) bir birim eklemek reaksiyonu durdurmak ve sonra hücreleri yavaş yavaş ve nazikçe yukarı ve aşağı ile elektronik bir pipet alıyorum tarafından ayırmak için.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Ardından, hücre süspansiyon (örneğin, 15-50 mL konik santrifüj tüpü) uygun bir kaba aktarın. Bir salıncak kova (100 x g) santrifüj kapasitesi, süpernatant atmak ve Pelet steril PBS ile iki kez yıkayın.</li>
	<li>Taze DMEM medya ve tohum bir uygun hücre yoğunluğu (örneğin, 1 x 106 hücrelerde bir 75 cm2 şişe), pelet taze kültür şişeler veya yerel laboratuvar uygulamaları göre büyük yemekler resuspend.<ol>
<li>Varolan ortam yerine taze medya ile 2 günde. Not: İfade vektör pIRES1hyg türetilmiş ve üreticinin yönergelerine göre yukarıda açıklanan21kullanılır. p(EGFP) IRES1hyg EGFP cDNA gibi bir BamHI + NotI pEGFP-N1 BamHI ekler + NotI pIRES1hyg21sindirilmiş subcloning tarafından oluşturuldu.</li>
	</ol>
</li>
	<li>1 gün önce transfection, tohum HEK-293 0.5 x 12 veya 24 iyi doku kültürü plakaları 105 hücreleri/cm2 yoğunluğu, hücreleri.</li>
	<li>Transfection günü, DNA-lipid transfection reaktif kompleksleri ayrı 1.5 mL microcentrifuge tüpler (1 tüp/de) hazırlayın.<ol>
<li>Başlatmak indirimli serum orta 250 µL her tüpün içine ekleyerek ve 4 µg DNA ekleyin (karışımı yavaşça).</li>
		<li>Daha sonra 250 µL 10 µL lipid transfection reaktif önceden hazırlanmış bir karışımı ve düşük serum orta, 250 µL her tüpün ekler (tekrar yavaşça karıştırın).</li>
		<li>Son olarak, DNA lipid transfection reaktif kompleksleri için 4 h, hücrelerle HEK-293 kuluçka tarafından transfections ile devam (yukarıdaki adım 1.1) açıklandığı gibi takıma DMEM orta yerine ve başka bir 48 h. gerçekleştir ilaç seçimi istikrarlı kuluçkaya transfectants ile 100 µg/mL hygromycin d.</li>
	</ol>
</li>
	<li>HEK-293 hücreleri (yukarıdaki adım 1.2) açıklandığı gibi tripsin ile bağlantısını kesin. Steril PBS hücrelerde yıkadıktan sonra 5 x 106/mL son hücre konsantrasyonu elde etmek için bir uygun araç içinde (örneğin, % 10 v/v ını PBS), resuspend.</li>
</ol>2. tavşan hazırlanması
Not: Tavşan ve dönüştürücü ımı için konumlandırma morfoloji ve hayvan kalp fonksiyonu değerlendirmek için en uygun değildir. Böylece, deneysel tasarım tarafından tanımlanan bir tam Ekokardiyografik inceleme20 ımı (aşağıya bakın) önce ve sonraki zaman noktalarda gerçekleştirmek için tavsiye edilir. Bu bir enjeksiyon almak ve ayrıca etkileri ımı kalp işlevindeki değerlendirmek temel anatomik ve fonksiyonel özellikleri kalbin hayvan olarak değerlendirmek amacı olacak.
<ol><li>Kardiyovasküler görüntüleme için kör bir moda ve Amerikan Koleji veteriner iç hastalıkları ve Amerikan Derneği Ekokardiyografi/Avrupa Birliği Ekokardiyografi Komitesi yönergeleri izleyerek bu sınavın gerçekleştirmek 22 , 23 , 24.</li>
	<li>Aynı anda 1-kurşun Elektrokardiyogram (EKG) izleme bütün Ekokardiyografik çalışma boyunca elde etmek.</li>
	<li>Ketamin ile tavşan anestezi 10 mg/kg, medetomidine 200 µg/kg ile kas içi (sohbet) enjeksiyon kombine.</li>
	<li>Anestezi düzeyi 10-20 dk sonra Yönetim anestezi takip doğrulayın.</li>
	<li>Saç kesme makinesi kullanarak göğüs saç yaygın kaldırın (örneğin, alt xiphoid bölgesine boyun altında) (şekil 1A).</li>
	<li>1-2 cm2 iç yüzüne doğru forelimb (mediocubital bölgesi) ve her iki arka bacaklarda (mediotibial bölgesi) ek bölgeler tıraş (şekil 1B).</li>
	<li>Kalp ritmi (şekil 1 c) işlemi sırasında zaman uyumlu olarak izlemek için bacaklarda traş bölgeler üzerindeki yapışkanlı ECG elektrotlar yer.</li>
	<li>Hayvan termal battaniye, dekübitus sırtüstü pozisyonda tabloya (şekil 1 c) bağlı cerrahi bant kullanarak uzanmış bacaklarda yerleştirin.<ol>
<li>Kulaklar geriye doğru tavşan ve bu prosedür boyunca hayvan Toraks doğru konumlandırma korumak için yardımcı olur bu yana, onun forelimbs düşük bir pozisyonda baş/arka arkasında fleksiyondayken emin olun.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Hayvan kendiliğinden yüz maskesi tüm prosedürü (% 100, 2-3 L/dakika) boyunca tarafından oksijen yönetme ederken nefes sağlar.</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56699/56699fig1.jpg"> Şekil 1. Tavşan hazırlanması için ımı. (A)klip saç Toraks; (B) küçük saç bacaklarda; (C) elektrotlar iliştirin ve termal battaniye üzerinde uzanmış bacaklar ile tavşan getirin. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56699/56699fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
3. perkütan kontrast Ekokardiyografi güdümlü ımı teknikte tavşan
<ol><li>Temiz ve dezenfekte klorheksidin tabanlı bir çözümü ile Toraks cilt.<ol>
<li>Tüm prosedürü boyunca bir aseptik teknik göre geçerli en iyi yöntem kullanın.</li>
		<li>Mümkün olduğunda ve eğer makul uygulanabilir, dahil, ancak bunlarla sınırlı olmamak, önlük, eldiven, cerrahi yara perdeler, steril malzeme tablo gibi steril bir ultrason için giyinme gibi steril malzeme kullanımı tamamen steril bir yordamı gerçekleştirmek dönüştürücü kapak ve steril ultrason jeli. Bu minimumda patojenler ımı alma hayvan tanıtmaktan riski azaltacak ve klinik ortamda (örneğin, kardiyak ponksiyon sırasında) standart bir uygulamadır. Not: Her zaman hayvan araştırma yerel kurum için ilgili yerel ve ulusal düzenlemelere ve ülke uygulama doğrultusunda devam etmek için önerilir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Ultrason iletim jel göğüs ve/veya dönüştürücü ve deneyci'nın boynuna dönüştürücü kablosu ile geçerlidir, bir kez anatomi görselleştirmek için ve için ımı planlamak için yararlıdır hayvan kalbi hızlı penceresi tarama gerçekleştirin.</li>
	<li>Dönüştürücü el ile 4th-6inci interkostal boşluk, 2-3 cm uzakta bir açı of insidansı doğru parasternal satırıyla yerleştirmekte ~ 90 ° ile ilgili torasik duvarın (şekil 2A) sağ tarafında.</li>
	<li>Dönüştürücü interkostal boşluk yanı sıra hastanın ve değiştirilmiş kısa eksen görünümü papiler kaslar düzeyinde en iyi duruma getirmek için dorsoventral açı göreli konumunu ayarlamak. Bu görünümde sağ ventrikül (RV), sol ventrikül (LV), interventricular septum (serum), posterior duvar (PW), hem de anterolateral (AL) ve posteromedial (PM) meme basinin Papiller kaslar (2B rakam) tanımlayın.<ol>
<li>Geniş bir görüş alanı (örneğin, düğme, arama) sistemindeki uygun denetimi kullanarak derinlik önemli ölçüde artırarak var.</li>
		<li>Bu görünüm, hem de uygun endocardial ve epicardial kontür farklılaşma simetrik bir görüntü elde etmek için özellikle dikkat ve gerekiyorsa (örneğin, kazanç) görüntü optimizasyon denetimler arasında ayarlayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>En iyi Ekokardiyografik görünümü (şekil 2B) alındığında, ımı (aşağıya bakın) ikinci bir işleç gerçekleştirir iken yordamı, geri kalan tüm bu pozisyonu koruyun.<ol>
<li>Dönüştürücü tutarak iken, her zaman ileri, böylece sonraki adımda (şekil 2A, C) iğne ile onun hizalama izin bakmalıdır dönüştürücü yönlendirme işareti gizlemek kaçının.</li>
	</ol>
</li>
	<li>24-G iğne 1 mL şırınga bağlı bir dönüştürücü ile ilgili olarak simetrik bir yansıtma pozisyonda sol hemithorax cilt yakın iğne yerleştirin. Sonra el ile hizalamak dönüştürücü yönlendirme işareti bir açıyla iğneyle ~ 90° (şekil 2C) ve yavaş yavaş deri yoluyla ve göğüs boşluğu içine iğne ilerlemek. Not: Bu pozisyon ve yönlendirme perkütan iğne ekleme (2D rakam, E), ultrason demetinin bir düzlemde iğne görselleştirme kolaylaştırır böylece gerçek zamanlı izleme izin ve gerektiğinde, düzeltilmesi İğneyi Miyokardiyum (Şekil 2 G, H) hedef bölgenin göreli konumu.</li>
	<li>Hedef konumda ucu ile yavaş yavaş injectate teslim (ilâ enjeksiyon site başına 0.25 mL) 10-30 s (yavaş yavaş ve nazikçe iğneyi enjeksiyon sırasında Miyokardiyum kapsamını artırmak için geri çeker tedavi ederkenşekil 2E), içinde.<ol>
<li>INI kullanmak % 10 (v/v) PBS içinde tekniği ve in situ izleyici olarak standardizasyon Miyokardiyum içerisindeki tüm dört ımı sitelerin başarılı hedefleme onaylamak olarak yetkinlik, de elde ederken brüt patoloji ve histopatoloji (bkz: tarafından seyreltilmiş Temsilcisi sonuçları). Yetkinlik elde sonra ını uygun ticari ultrason kontrast Aracısı tarafından istenirse yerine. Not: Teslimat % 10 (v/v) ını PBS içinde olan veya olmayan hücreleri transmural hyperechogenicity (Yani, yankı parlak görünüm) Miyokardiyum sonuçlarında içine enjeksiyon (şekil 2E, F) hedef sitede seyreltilmiş. İğne epicardium ile ilk kişiden bile sık sık gözlenen geçici yavaşlama veya ivme ile Prematüre Ventriküler kasılma (izoleörneğin, couplets ve üçüz) ilişkili nabız gibi sırasında ve/veya kısa bir süre sonra ımı. Ancak, hiçbir hayati aritmiler geliştirilmiştir ve akut yan etkiler nadiren gözlenen ımı enjeksiyon yeri kadar 0.25 mL (1,25 x 106 hücreler) injectate kullanarak (bkz: Temsilcisi sonuçları ve tartışma).</li>
	</ol>
</li>
	<li>İnce değişiklikleri her (üç sol ventrikül duvar (LVFW) ve IVs birinde ücretsiz) dört hedef ımı siteler için 0.25 mL enjeksiyonlari tamamlamak için gereken iğneyi açı of insidansı gerçekleştirin.</li>
	<li>Perkütan kontrast Ekokardiyografi güdümlü ımı yordamı tamamladıktan sonra kalp ritmi (örneğin, seri ECG izleme ve/veya 24 saat Holter ECG yoluyla) değerlendirmek ve yokluğu doğrulamak için seri halinde pencere Ekokardiyografik taramalar komplikasyonlar, hayvan tam anestezi ve sadece sonra transfer bir ışık-siklet odasına kurtarılır kadar.<ol>
<li>Burada, 24 saat Holter ECG kalp ritmi 24 h için ımı ını ile etkilerini izlemek için kullanın. Bunun için biz bir grup normal fenotip (Normal grup) ile 6 tavşan ve doksorubisin (bir Kardiyotoksik Antrasiklin ilaç kanser; tedavisinde yaygın olarak kullanılan, intravenöz yönetimini alınan 6 tavşan bir grup göre DOX grubu) adlı bir doz 2 mg/kg/hafta 8 hafta ve daha sonra her iki birlik için ımı ile ını aldı.</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56699/56699fig2.jpg"> Resim 2 . Perkütan kontrast Ekokardiyografi güdümlü intramyocardial enjeksiyon in tavşan. Dönüştürücü bir açıyla doğru hemithorax içinde(a)yerleşimini ~ 90 °. (B) temsilcisi görünümünün resmi bir parasternal kısa eksen (PSSX) kalbin tavşan Papiller kaslar düzeyde. (C) hizalama iğne bir açıyla ~ 90 ° dönüştürücü yönlendirme işareti göre. Kalp (iğne ultrason ışın düzlemde kolayca görselleştirildiği Not) PSSX görünümünde hedef sitede iğne (D) konumu. (E ve F) hyperechogenicity intramyocardial enjeksiyon üzerine hedef sitede gösteri çini mürekkebi (ok uçları vurgulamak transmural hyperechogenicity) ile. (G) LV odası iğneyi yanlışlıkla konumunu (ok uçları vurgulamak İğne mili). (H) Repositioning LV ücretsiz duvara iğne (ok uçları vurgulamak İğne mili). RV sağ ventrikül; = LV sol ventrikül; = Serum interventricular septum; = PW = posterior duvar; AL anterolateral Papiller kas; = PM posteromedial Papiller kas =. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56699/56699fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
4. mesaj ımı analizleri
<ol><li>Histopatolojik analiz kalp doku örnekleri tavşan gerçekleştirin.<ol>
<li>Doku 24 h için % 10 formaldehit, aşağıdaki gibi etanol konsantrasyonları artan su kaybı ardından fix: • 1 x % 70 (60 dk) </li><li></li><li></li></ol></li><li><ol><li></li><li></li><li><li><li><li><li><li> </li></ol></li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Tavşan (bir büyük ölçekli preklinik hayvan modeli)17,18, Miyokardiyum içine kök hücrelerin tesliminde kullanımı yararlanan ederken kullanılabilecek bir minimal invaziv tekniği geliştirmek için birincil hedefi oldu bir nispeten ucuz görüntüleme sistemi birçok klinik kullanıma hazır ve araştırma merkezleri. Burada, biz, bir klinik Ekokardiyografi sistemi kullanarak göstermek ve ını, in situ izleme yetenekleri ve echogenic özellikleri, başarılı perkütan kon...

Hücre ve gen terapileri heyecan verici ve hiç HFrEF yaralı Miyokardiyum Yenileyici/onarmak için stratejiler geliştirmek. Bir kaç çalışmalar hücre teslim, ımı üstünlük intrakoroner veya intravenöz yol1,2 üzerinde tutarlı bir şekilde göstermiştir farklı yolların etkinliği (örneğin, hücre tutma oranı) karşılaştırıldığında var , 3 , 4 , 5. böylece, kök hücre tedavisi yaralı Miyokardiyum translasyonel modelleri üzerinde çalışmalar büyük bir kısmı injectate bir açık göğüs yordamı '6,7 doğrudan görünümü altında gerçekleştirilen ımı üzerinden teslim şaşırtıcı değildir . Ancak, bu yaklaşım peri-usul mortalite (genellikle altında bildirilen)8risk taşıdığını yordam invaziv yapısı dahil olmak üzere bazı sınırlamaları vardır. Buna ek olarak, doğrudan görünümü altında bir ımı ventrikül boşluğuna içine yanlışlıkla enjeksiyon için olasılığı ortadan kaldırmaz. Klinik pratikte bir ımı açık göğüs cerrahisi sırasında olabilir uygun bir yöntem'tedavi hücre dır, örneğin, sırasında koroner arter bypass greft cerrahisi (CABG); Ancak, bu yaklaşım içinde küresel kardiyomiyopati (örneğin, HFrEF Antrasiklin kaynaklı kardiyomiyopati (AICM) ikincil) iskemik olmayan menşe hücre teslimat için uygun olmayabilir.
Hiç şüphe yok ki bu iskemik kalp hastalığı (IHD) olduğunu HFrEF en sık nedeni olduğunu (~ % 66)9,10; ancak, Sigara iskemik kardiyomiyopati, AICM, dahil olmak üzere hala hasta HFrEF (% 33)9 ile önemli bir bölümünü etkiler . Nitekim, klinik Onkoloji son gelişmeler kanser ABD tek başına11, 10 milyondan fazla ölüm tahminler Avrupa'daki kanser hastaları12 geliştirilmiş yaşama doğru genel bir eğilim ile tutarlı benzer bir sayının ile sonuçlandı ,13. Böylece, kök hücre nakli olmayan iskemik kardiyomiyopati, hem de kök hücre teslimat etkili ve minimal invaziv bir rotanın trialing için son derece önemlidir gibi yeni tedaviler faydaları keşfetmek, verilen hastaların sayısının artması rastlantısal antikanser ilaçlar için ikinci tarafından etkilenen.
Not, Hipotez testleri kullanarak kök hücre tedavisi yaralı Miyokardiyum sık onarım/yeniden amaçlayan çalışmalar küçük kemirgen (örneğin, fare ve sıçanlar) kullanımını gerektirir. Bu modeller genellikle genellikle bazı içerdiği ilişkili sınırlamaları (örneğin, yankı)14olan doğrusal dizi dönüştürücüler ile donatılmış miyokard fonksiyon değerlendirilmesi için pahalı yüksek frekans ultrason sistemleri gerektirir. Ancak, tavşanlar, büyük preklinik modeli temsil gibi diğer modeller HFrEF kök hücre tedavilerin Hipotez testleri için bazı avantajları var. Böylece, sıçanlar ve fareler aksine, tavşan bir Ca+ 2 taşıma sistemi ve insan ve (diğer büyük hayvanlarörneğin, köpek ve domuz)15,16,17 benzer hücresel Elektrofizyoloji korumak ,18,19. Diğer bir avantajı, kardiyak ultrason görüntüleme nispeten ucuz kullanarak ve yaygın olarak kullanılan klinik Ekokardiyografi sistemleri gibi nispeten yüksek frekans faz dizi güç çeviriciler, örneğin, 12 MHz ile donatılmış için onların amenability olduğunu Bu sık kullanılan yenidoğan ve pediatrik Kardiyoloji. Bu sistemlerin en modern teknoloji ile mükemmel Ekokardiyografik görüntülemede izin ve harmonik20düşsel üstünlük yararlanmak. Ayrıca, potansiyel kardiyak rejeneratif terapileri (örneğin, kök hücre tedavisi), onların Emanet, etkinlik, cardiomyogenic potansiyel yanı sıra bir kez injectate kaderi değerlendirilmesi geniş Hipotez testleri teslim içine Miyokardiyum, zorunlu önce insan kullanım için kabul edilebilir ve onlar tavşan17,19gibi büyük preklinik hayvan modelleri kullanılmasını gerektirir. Burada, kök hücre nakli tabanlı tedavisi olmayan iskemik kardiyomiyopati20 için amaçlayan bir klinik Ekokardiyografi sistemi kullanarak perkütan kontrast-Ekokardiyografi destekli ımı ile hücre teslimat için minimal invaziv tekniği tarif . Ayrıca, injectate tavşan kalbinde bir ultrason kontrast Ajan ve in situ izleyici olarak çini mürekkebi (ını, Çin mürekkep olarak da bilinir) faydaları açıklar.

<table><tbody><tr><td>HD11 XE Ultrason Sistemi</td><td>Philips</td><td>10670267</td><td>Ekokardiyografi sistemi.</td></tr><tr><td>S12-4</td><td>Philips</td><td>B01YgG</td><td>4-12 MHz faz dizisi dönüştürücü</td></tr><tr><td>Ultrason İletim Jeli (Aquasone)</td><td>Parket laboratories Inc</td><td>N 01-08</td><td></td></tr><tr><td>Vasovet 24G</td><td>Braun</td><td>REF 381212</td><td>&nbsp; iğne üstü kateter</td></tr><tr><td>Omnifix-F 1 ml şırınga</td><td>Braun</td><td>9161406V</td><td></td></tr><tr><td>Imalgene (Ketamin)</td><td>Merial</td><td>RN 9767</td><td>Veteriner reçetesi gereklidir</td></tr><tr><td>Domtor (Medetomidin)</td><td>Esteve</td><td>CN 570686.3</td><td>Veteriner reçetesi gereklidir</td></tr><tr><td>Isıtma Yastığı</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Faber-Castel TG1</td><td>Faber-Castel</td><td>16 33 99</td><td>Hindistan (Çin) Mürekkep</td></tr><tr><td>Holter Syneflash</td><td>Ela medikal</td><td>SF0003044S</td><td>24 saat Holter EKG sistemi.</td></tr><tr><td>Elektrotlar Mavi Sensör&reg;</td><td>Ambu (NUMED)</td><td>VLC-00-S</td><td>Holter EKG elektrotları.</td></tr><tr><td>Mikrotom</td><td>Leica Biosystems</td><td>RM2155</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Olimpus</td><td>CO11</td><td></td></tr><tr><td>ABC Vektör Elit</td><td>Vektör Laboratuvarları</td><td>PK-6200</td><td>Avidin Biyotin Kompleks Kiti.</td></tr><tr><td>Tavuk anti-GFP antikoru</td><td>Invitrogen</td><td>A10262</td><td>Birincil antikor.</td></tr><tr><td>Biyotinile keçi anti-tavuk IgG Antikoru Vektör</td><td>Laboratuvarları</td><td>BA-9010</td><td>İkincil Antikor.</td></tr><tr><td>3,30-diaminobenzidin tetrahidroklorür (DAB)</td><td>DAKO (Agilent)</td><td>S3000</td><td></td></tr><tr><td>Floresan Mikroskobu</td><td>Carl Zeiss MicroImaging</td><td>Zeiss AX10 Axioskop</td><td></td></tr><tr><td>Holter EKG</td><td>Elamedical</td><td>Syneflash SF0003044S</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' s modifiye Eagle ortamı (DMEM)&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>11965084</td><td></td></tr><tr><td>%10 fetal buzağı serumu (FCS)</td><td>Fisher Scientific</td><td>11573397</td><td></td></tr><tr><td>%0.05 Tripsin-Etilendiamintetraasetik asit (EDTA)</td><td>Fisher Scientific</td><td>25300054</td><td></td></tr><tr><td>Lipofectamine 2000 (Lipid transfeksiyon reaktifi)</td><td>Fisher Scientific</td><td>11668019</td><td></td></tr><tr><td>Azaltılmış serum ortamı (Opti-MEM)</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td>31985070</tr><tr><td>Higromisin B</td><td>Calbiochem (MERCK)</td><td>400051</td><td></td></tr><tr><td>Ksilen (histolojik)</td><td>Fisher Scientific</td><td>X3S-4</td><td></td></tr><tr><td>Hidrojen Peroksit Çözeltisi (H2O2)</td><td>Sigma</td><td>H1009</td><td></td></tr><tr><td>Pronase</td><td>Fisher Scientific</td><td>53-702-250KU</td><td></td></tr></tbody></table>

perkütan kontrast ekokardiyografi güdümlü intramyocardial enjeksiyon ve hücre teslim büyük preklinik modeli

Percutaneous Contrast Echocardiography-guided Intramyocardial Injection and Cell Delivery in a Large Preclinical Model

Hücre ve gen tedavisi heyecan verici ve kalp yetmezliği ile kardiyak rejenerasyon ayarında amacıyla umut verici stratejileri düşük ejeksiyon fraksiyonu (HFrEF). Onlar kullanım için kabul ve insanlarda uygulanan önce geniş preklinik çalışmaları büyük hayvan modellerinde güvenlik, etkinlik ve bir kez Miyokardiyum teslim kaderi injectate (örneğin, kök hücre) değerlendirmek için gerekir. Küçük kemirgen modelleri (maliyet etkinliği, amenability genetik manipülasyon içinörneğin); avantaj sunar Ancak, bu modeller içerdiği sınırlamaları göz önüne alındığında, bu bulguların nadiren kliniğe çevirmek. Diğer taraftan, büyük hayvan tavşan gibi modellerinde avantajları (örneğin, insanlar ve diğer büyük hayvanlar ile karşılaştırıldığında benzer kardiyak Elektrofizyoloji), ederken iyi bir maliyet-etkin denge koruyarak. Burada, minimal invaziv, güvenli, iyi tolere ve injectates hücreleri de dahil olmak üzere, hedeflenen teslimat çok etkili bir perkütan kontrast Ekokardiyografi güdümlü intramyocardial enjeksiyon (ımı) teknik gerçekleştirme göstermek, bir tavşan modeli Miyokardiyum içinde birkaç adresleri girmiş. Bu tekniğin uygulanması için yaygın olarak kullanılan klinik Ekokardiyografi sistemin avantajı da aldık. Burada açıklanan protokol pratikte konulduktan sonra bir araştırmacı temel ultrason bilgisi olan bu çok yönlü ve minimal invaziv teknik deney, Hipotez testleri amaçlı, rutin kullanım için performans yetkili olacak tavşan modelindeki kardiyak rejeneratif therapeutics yeteneklerini. Tavşan anaesthetizing sonra yetkinlik elde sonra tüm prosedürü 25 dk içinde gerçekleştirilebilir.

Perkütan kontrast Ekokardiyografi güdümlü ımı ını ile:
Yukarıda açıklanan iletişim kuralını kullanarak ve sonra iğne ucu en iyi konumlandırma Ekokardiyografi ve yerleştirme başlatıldı tarafından doğrulandı, transmural hyperechogenicity ını teslim sırasında gözlendi (% 10 PBS, v/v) (şekil 2E) , ımı (şekil 2F) hedef bölgesine de olarak kısa bir süre sonra...

Onlar insanlar kullanmak için kabul edilebilir önce kardiyak rejeneratif tıp roman tedavi stratejileri kapsamlı ve detaylı çalışmalar büyük preklinik hayvan modellerinde gerektirir. Burada, biz perkütan kontrast Ekokardiyografi güdümlü intramyocardial enjeksiyon tekniği Tavşanlarda, roman böyle tedavilerin etkinliğini test hipotez için değerli olan göstermek.

Perkütan kontrast Ekokardiyografi güdümlü Intramyocardial enjeksiyon ve hücre teslim büyük preklinik modeli

Cell and gene therapy are exciting and promising strategies for the purpose of cardiac regeneration in the setting of heart failure with reduced ejection ...

Bu prosedürün genel amacı, tavşan kalbinin sol ventrikül miyokardına güvenli ve doğru bir şekilde bir miktar enjekte etmektir. Ve bunu perkütan kontrast ekokardiyografi rehberliğinden yararlanarak yapmak. Bu, önce hayvanın uyuşturulması ve ardından göğsün prosedür için hazırlanmasıyla gerçekleştirilir.Daha sonra, tavşanı termal bir battaniyeye yerleştirdikten ve bir EKG sinyalinin doğru görüntülendiğini doğruladıktan sonra, uygun bir akustik pencere elde etmek için bir klinik ultrason sistemi kullanın ve görüntüyü geniş bir görüş alanında optimize edin. Daha sonra, şırıngayı uygun bir kontrast madde ile karıştırılmış işaretli hücrelerle yükledikten sonra ve ultrason rehberliğinde, iğneyi dönüştürücünün karşısına dikkatlice hizalayın ve iğneyi miyokardın hedef bölgesine ilerletmeyi yavaşlatmadan önce sol hemitoraksın derisine yakın bir şekilde konumlandırın. Son olarak, ekokardiyografik görüntüde enjeksiyon bölgesinde transmural hiperekojenite ile gösterildiği gibi enjekte güvenli bir şekilde verilir.Sonuç olarak, enjekte edilen maddenin başarılı bir şekilde verilmesinin ex vivo doğrulanması, miyokardda boya varlığı ile gösterilirken, miyokard dokusu kesitlerinin kesitsel immünohist

percutaneous-contrast-echocardiography-guided-intramyocardial

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Hipertansiyon ya da miyokart enfarktüsü gibi kalp-damar hastalıkları, kemirgen modellerinde intramiyokardiyal hücre dağıtım yaygın rejeneratif çalışmalarda farklı hücre tiplerinin terapötik potansiyelini test etmek için kullanılır. Bu nedenle, ayrıntılı bir açıklama ve bu cerrahi işlemin açık bir görselleştirme küçük kemirgenler kardiyovasküler hücre tedavi analizlerin sınırlarını ve avantajlarını tanımlamak için yardımcı olacaktır.

Intramiyokardiyal Hücre Teslimat: Mürin Hearts Gözlemler

Ekokardiyografi perkü- intramiyokardiyal enjeksiyon sıçangil kalp gen transfer ajanları veya hücre verilmesi için etkili, güvenilir ve hedeflenebilir yaklaşımı olmaktadır. Bu protokolde belirtilen adımları izleyerek, operatör hızla bu çok yönlü, minimal invaziv teknikle yetkin olabilir.

Farelerde ultrason eşliğinde transtorasik intramiyokardiyal Enjeksiyon

Farelerde miyokard enfarktüsü bölgesi etrafında ultrason rehberliğinde hücre dağıtımı, hücre nakli için güvenli, etkili ve uygun bir yoldur.

Miyokard Enfarktüslü Farelerde Ultrason Rehberliğinde İndüklenen Pluripotent Kök Hücre Kaynaklı Kardiyomiyosit İmplantasyonu

Bu protokol, bir domuz modelinde kardiyoaktif terapötik ajanların uygulanmasının üç yöntemini açıklamaktadır. Dişi kara ırkı domuzları, (1) torakotomi ve transepikardiyal enjeksiyon, (2) kateter bazlı transendokardiyal enjeksiyon veya (3) juguler ven ozmotik mini pompa yoluyla intravenöz infüzyon yoluyla tedavi gördü.

Domuz Miyokard Enfarktüsü Modelinde Kardiyoaktif Terapötiklerin Verilmesi

Bu makale, 29 G x 88 mm'lik bir iğne kullanılarak miyokard enfarktüsünün sıçan modellerinde ekokardiyografi kılavuzluğunda intramiyokard enjeksiyonları için optimize edilmiş bir protokolü detaylandırmaktadır. Bu teknik, terapötik ajanların doğrudan peri-enfarktüs bölgesine sağlam, kesin ve tekrarlanabilir bir şekilde verilmesini sağlar.

Miyokard Enfarktüsünün Sıçan Modelinde Hedefli ve Güvenilir İntramiyokardiyal Kök Hücre Dağıtımı için Ekokardiyografi Kılavuzluğunda Enjeksiyon

Çok sayıda genetik manipülasyonlar ve / veya genler, proteinler, hücre ve / veya biyomalzemeler intramiyokardiyal enjeksiyonu, akut iskemi / reperfüzyon hasarı ve farelerde kronik remodeling çalışmaları zaman boyutu üzerine bindirilmiş. Bu video iskemi / reperfüzyon için mikrocerrahi prosedürleri, kalıcı koroner arter ligasyonu ve intramiyokardiyal enjeksiyon çalışmaları göstermektedir.

Enfarktüsü bir murin Model Koroner Arter ligasyon ve intramiyokardiyal Enjeksiyon

Karaciğer metastazlarının klinik öncesi bir sıçangil modeli, hemispleen enjeksiyon tekniği ile gerçekleştirilir.

Karaciğer metastazları Klinik öncesi fare modeli

Bu prosedürün genel amacı, bir farenin kaburgasından alınan kemiğin bir kısmını başarılı bir şekilde rezeke etmektir. Prosedür, büyük ölçekli uzun kemik onarımını incelemek için bir model olarak geliştirilmiştir.

Fare kaburga Rezeksiyonu için Cerrahi Prosedür: Büyük Ölçekli Uzun Kemik Onarım İçin Bir Model

Kendiliğinden müteahhitlik insan kaynaklı pluripotent türetilmiş cardiomyocytes syncytia kök hücre insan kalp fizyolojisi ve farmakoloji yararlı modelleri vardır. Burada frekans yenerek, bir Ca duyarlı floresan boya ve ısı kontrollü görüntüleme çok iyi plaka okuyucu kullanarak eksojen bileşikler etkilerini ölçmek için bir yüksek-den geçerek tarama sistemi mevcut.

384-şey plakaları ısı kontrollü bir Ca duyarlı floresan boya ile ölçülen insan IPSC türetilmiş Cardiomyocyte Syncytia kasılmalar

Biz hiperlipidemi ve diyabet ile tavşanlar periferik iskemi ikna etmek için kullanılan bir cerrahi prosedür açıklanmaktadır. Bu cerrahi hastalarda periferik arter hastalığında deneyimli koşullar için preklinik bir model olarak davranır. Anjiyografi, tanıtılan iskemi ve perfüzyon iyileşmesi kapsamını ölçmek için bir araç olarak da tanımlanır.

Diyabetik tavşanların arka ekstremite Iskemi preklinik modeli

Öğrenin, tavşan kalbinde kontrast ekokardiyografi güdümlü intramyokardial enjeksiyon tekniğini. Bu yöntem, kardiyak rejeneratif tedavilerin preklinik modellerde güvenli test edilmesini sağlar.

Perkütan kontrast Ekokardiyografi güdümlü Intramyocardial enjeksiyon ve hücre teslim büyük preklinik modeli

Daha fazla video keşfet