February 27th, 2018
Bu protokol mekanizmaları ameliyat sonrası neuroinflammation ve davranış değişiklikleri ve doku rejenerasyonu yaşlanma sırasında çalışmaya parabiosis, birlikte çalışma için kullanılan ortopedik cerrahi bir fare modeli açıklar.
Bu cerrahi yöntemlerin genel amacı, travmanın çoklu organ disfonksiyonu üzerindeki etkilerini gözlemlemektir, özellikle parabiyoz, genç ve yaşlı bir farenin birlikte anastomoz edilmesi için kullanılacak ve bu da ortak bir kan kaynağı ile sonuçlanacaktır. Bu modeldeki farelerden biri daha sonra genç ve yaşlı farenin paylaşılan sistemi ile ilgili olarak rejeneratif etkileri ve bilişsel işlev üzerindeki etkiyi gözlemlemek için kırılacaktır. Bu yöntemler, immünoloji, yaşlanma, doku yenilenmesi ve bilişsel işlev alanıyla ilgili temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir.
Ortopedik prosedürün temel avantajı, bu bulguların ameliyat sonrası yaygın komplikasyonlara, örneğin deliryum ve ameliyat sonrası bilişsel işlev bozukluğuna klinik olarak uygulanabilirliğidir. Deneyden önce, fareleri 12 saatlik aydınlık ve karanlık döngülere ve standart yiyecek ve suya uygun erişime sahip klimalı bir ortamda tutun. Kafes başına en fazla beş çöp arkadaşı barındırın ve kavgayı teşvik edebilecek koşullardan kaçının.
Üç aylıkken bir dişi fare ve 17 aylıkken bir yaşlı fare kullanın. Parabiyoz için, ameliyattan önce en az iki hafta boyunca iki fareyi bir araya getirin. Farelerin vücut durumunu ve genel görünümünü günlük olarak kontrol edin.
Ameliyata hazırlanmak için iki fareyi tartın. Genel anestezi uygulandıktan sonra, fareleri sırtüstü pozisyonda ısıtılmış bir ped üzerine yerleştirin. Son olarak, her fare için doğru anestezi seviyesini koruyun.
Daha sonra, iki farenin her birini dirsekten, yandan ve birleştirilecek taraftaki dizden sürekli bir çizgi boyunca tıraş edin. İnsizyona hazırlık olarak iyot artı %70 alkol ile dezenfekte edin, üç alternatif döngü boyunca cilt peelingi. İndüksiyondan sonra ve cerrahi manipülasyondan önce analjezi uygulayarak başlayın.
Açmadan hemen önce yanlara% 0.25 bupivakain enjekte edin. Her farede, diz proksimalinden dirseğin hemen proksimaline kadar ve cildin altındaki kasları rahatsız etmeden yan boyunca bir cilt kesisi yapmak için bir neşter kullanın. Hayvanların trisepslerini iki kesikli sütürle birleştirin.
Daha sonra, yedi ila dokuz geçişli sürekli bir sütürle vücut duvarlarını yanlar boyunca birleştirin. Daha sonra, hayvanın kuadrisepslerini iki kesintili sütürle birleştirin ve iki parabiontun derisini kesintili dikişlerle kapatın. Fare yüzüstü pozisyonda iken kesintili dikişleri tamamlayın.
Farelerin ortam havasında uyanmasına izin verin. Her çifti ayrı ayrı yerleştirin ve haftada iki kez vücut kondisyon puanlaması yaparak ve çiftleri haftada iki kez tartarak çiftleri günlük olarak izlediğinizden emin olun. Son olarak, tibia kırığı ameliyatı yapıyorsanız parabiyontlar arasında ortak dolaşımı sağlamak için dört haftalık iyileşme süresine izin verin.
Ardından, cerrahi alanı ortaya çıkarmak için farenin sağ arka bacağının medial yönünü tıraş edin ve üç alternatif döngü boyunca iyot artı %70 alkol cilt peelingi ile dezenfekte edin. İndüksiyondan sonra ve cerrahi manipülasyondan önce analjezi uygulayarak başlayın. Açılıştan hemen önce dizin proksimalindeki cerrahi bölgeye% 0.25 bupivakain enjekte edin.
Otoklavlanmış aletler kullanarak prosedür boyunca steril bir cerrahi alan sağlayın. Sol farede sağ arka bacağın medial yönü boyunca diz proksimalinde kaval kemiğin orta miline kadar makas kullanarak bir kesi yapın. Tibianın orta şaftını ortaya çıkarın ve diyafizi görsel olarak bulun.
Dizinizi esnetin ve patellofemoral ligamenti bir dönüm noktası olarak kullanarak tibial platoyu görselleştirin. Patellar tendonu görselleştirin. Ardından, parmağın ve başparmağın yuvarlanma hareketini kullanarak 25 gauge bir iğne kullanarak intramedüller kanalda manuel olarak bir delik açın.
Daha sonra, direnç hissedilene kadar medüller boşluğa yaklaşık 15 milimetrelik delikten 0,38 milimetre paslanmaz çelik bir pim sokun ve bir tel kesici kullanarak eti tibial plato ile kesin. Ardından tibia orta milini kırmak için düz bağ makası kullanın. Kırık bölgesinin stabilizasyonunu incelemek için kırık bölgesini ve bitişik dokuları görsel olarak gözlemleyin.
Daha sonra dermal zımba kullanarak cildi kapatın. Son olarak, sıvı replasmanı için her fareye deri altından 37 santigrat derecede bir mililitre önceden ısıtılmış normal salin enjekte edin. Fareleri temiz bir ev kafesine geri koymadan önce iyileşmeleri için ısıtılmış pedlerin üzerine yerleştirin.
Fareleri günlük olarak topallık, enfeksiyon veya kanama belirtileri açısından kontrol edin. Orta şaft kırıklı tibia radyografileri, genç farelerin kırık nasırlarında yaşlı farelerin kırık nasırlarına göre daha fazla doku birikimi olduğunu gösterdi. Ayrıca, genç farelerin kırık nasırları, yaşlı farelerden alınan kırık nasırlarından daha fazla kemik ve daha az fibrotik doku içeriyordu.
Tibia kırığı cerrahisi, 20 aylık farelerde dört aylık farelere kıyasla daha fazla hipokampal nöroinflamasyona neden oldu. Ek olarak, ameliyattan sonra fareler, örneğin korku koşullandırma davranışsal değerlendirmesini kullanarak, hipokampal bağımlı hafıza fonksiyonunda da bozukluklar gösterir. Genç bir dolaşıma maruz kalma, daha erken kaynama, artmış kemik birikimi ve azalmış fibroz ile kemik onarımını artırdı.
Kemik rejenerasyonunun bu gençleşmesi, endojen osteokalsin pozitif osteoblastlardan bağımsız olarak meydana geldi, ancak daha ziyade genç parabionttan göç eden CD45 pozitif hücrelere dayanıyordu. Bir kez ustalaştıktan sonra, parabiyoz tekniği 1-1 / 2 saat içinde gerçekleştirilebilir ve tibial kırık modeli 15 dakika içinde gerçekleştirilebilir. Gerekirse, iki prosedür birbirinden bağımsız olarak da gerçekleştirilebilir.
Tibia kırığı prosedürünü denerken, sterilize edilmiş bir cerrahi alanı korumak ve pimin uygun şekilde yerleştirilmesini ve uygun osteotomiyi sağlamak önemlidir. Son olarak, çalışmanın ömrü boyunca fareleri dikkatlice izlemeyi unutmayın. Bu videoyu izledikten sonra parabiyoz modeli ve tibia kırığı ameliyatının nasıl yapılacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.
Bu protokol, postoperatif nöroinflamasyon ve davranışsal değişiklikleri incelemek için bir ortopedik cerrahi fare modelini tanımlar. Ayrıca, parabiyoz yoluyla yaşlanma sırasında doku yenilenmesini araştırır.