Name: Büyük gözlü manken coğrafi Atrofi, içine insan embriyonik kök hücre elde edilen retina Pigment epitel hücrelerinin subretinal nakli (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-22T14:30:00.000+00:00
Duration: 11 min 3 s
Description: Keşfedin, coğrafi atrofi için büyük gözlü bir model oluşturma ve insan embriyonik kök hücre kaynaklı retinal pigment epitel hücrelerinin subretinal naklini öğrenin. Optik koherens tomografi ile hücre entegrasyonunu değerlendirin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışmada hibe Karolinska Enstitüsü, görme engelliler, Edwin Jordan Vakfı Oftamolojik araştırma, İsveçli göz Vakfı, Kral Gustav V Foundation, ARMEC için Crown Princess Margareta'nın Vakfı tarafından desteklenmiştir Lindeberg Vakfı ve Cronqvist Vakfı.

Aşağıdaki iletişim kuralı Karolinska Instituet hayvan bakımı kuralları izler. Yeni Zelanda albino tavşan (Tablo reçetesi) kullanarak tüm hayvan deneyleri bölgesel hayvan Etik Komitesi (Stockholms Norra Djurförsöksetiska Nämnd) tarafından onaylanmış olan (izin: dnr 56/15). HESC (dnr 2011/745-31/3) kullanımı ve transfer ve hESC-RPE (dnr 2013/813-31/2) manipülasyon da İsveçli mevzuat ve Karolinska Institutet düzenlemelere uygun şekilde ve bölgesel insan Etik Komitesi (tarafından onaylandı Regionala Etikprövningsnämnden ben Stockholm).
1. sodyum iyodat (NaIO3) subretinal enjeksiyon büyük gözlü hayvan modeli içine
<ol><li>35 mg/kg ketamin karışımı ile uyluk kas içi yönetiminde ve tuz 30 G şırınga kullanarak 5 mg/kg xylazine hayvanları anestezi ve öğrenciler topikal göz damlası % 0.75 cyclopentolate ve % 2.5 phenylephrine bir karışımını kullanarak genişletmek. Uygun anesthetization doğruladı Eğer hayvan arka bacağını zor bir tutam tepki vermez.</li>
	<li>Cerrahi mikroskop altında tavşan ile baş cerrah (şekil 1A) karşı karşıya koyun. Bir kapak Retraktörü göz kapakları ve nictitans membran bulaşma riskini en aza indirmek için bir steril bezle kaldırmak için kullanın. Kullanımı dengeli tuz solüsyonu (BSS) altında anestezi sırasında her iki gözde kuruluk önlemek için.</li>
	<li>
Mikrocerrahi, 2 bağlantı noktasını kullan (veya isteğe bağlı 3-bağlantı noktası) için 25 G transvitreal pars plana tekniği ile mikrocerrahi aletleri (şekil 1B) ekleme için Vanalı sigara trocars. Çok işlevli vitrektomi makine bir infüzyon kanül, endoillumination, vitrector ve endolaser bağlanmak için bağlantı noktası yok. Subretinal enjeksiyonlar için sadece endoillumination 2-liman set-up yeterli kılan, zorunludur. Endoillumation üst sol trokar yerleştirebilir ve üst sağ trokar subretinal enjeksiyon kanül için kullanabilirsiniz.
	<ol>
<li>3-port kurulum için daha düşük zamansal trokar BSS infüzyon kanül için kullanın. (Örneğin vitrector) isteğe bağlı aygıtlar olup olmadığını kullanılan, bunları üst sağ trokar ekleyin.</li>
		<li>Üst 2 trocars 1-2 mm kapmak ve ekleme sitesi örten konjonktiva yerinden pençeli forseps kullanarak limbus ekleyin.</li>
		<li>Trocars eklenen transsclerally 30-45 ° limbus paralel açı ve trokar ucunu ortasına kadar devam emin olun. Sonra 90 ° trokar dönüp gözün arka kutbunda amaçlayan göz içine ilerlemek. Bu yordam sclerotomies üzerinden ameliyat sonrası kaçağı önlemek ve aynı zamanda endoftalmi (Yani, bakteriyel enfeksiyon göz) riskini azaltmak. Ayrıca şekil 2B trokar pozisyonlar için bkz.</li>
		<li>Tek kişi kullanımlı düz kontak lens kornea göz ve Kontakt lens (şekil 1A) arasında iletişim jel olarak sentetik gözyaşları ile retina görselleştirmek için koymak.</li>
		<li>Bir uzatma tüpü (yardımcı tarafından işletilen) bağlı bir 1 mL şırınga ve bir 38 G polytip kanül (cerrah tarafından işletilen) içine NaIO3 500 µL çizin.</li>
		<li>Endoillumination sonda aracılığıyla üst sol trokar ve enjeksiyon kanül aracılığıyla üst sağ trokar yerleştirin ve optik sinir başı altındaki alanda yönelik retina doğru vitreus uzayda kanül ilerlemek.</li>
		<li>Odak bir beyazlatma görünene kadar yavaş yavaş retina dokunmak kanül ucu izin. Enjeksiyon kendisi subretinal teslimat için izin retina, nüfuz. Bu kanama neden olabilir beri retina, nüfuz kanül izin vermeyin.</li>
		<li>50 µL NaIO3 subretinally 5 s dönemde enjekte et. Doğal göğüs arası uçak retina ve alttaki koroid arasında olduğundan, açıkça görülebilen bir yarı saydam bleb enjeksiyon sırasında yavaş yavaş oluşturmalıdır.</li>
		<li>Enjeksiyon sırasında yavaş yavaş iğne geri çek, ama belgili tanımlık uç reflü en aza indirmek için bleb içinde korunur emin olun.</li>
		<li>Sonra endoillumation ve enjeksiyon kanül kaldırılması, pençeli forseps kullanarak trocars kaldırın ve 30 için hafif basınç uygulamak için belgili tanımlık uç veya künt sonuna forseps kullanarak kendinden contalı dikiş daha az sclerotomies s.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Post-surgically 10 mL subkutan su kaybı önlemek için tuz verin. Ameliyat sonrası topikal steroid veya antibiyotik vermek değil. Ağrı kesici için ameliyattan sonra 0.5 mL buprenorfin 0.3 mg/ml subkutan sonra cerrahi, hem de gün ver.</li>
	<li>Onları birkaç saniye için öncelikle % 70 etanol, ikincisi % 45 etanol içinde çeker tarafından tüm aletleri kullanımdan sonra yıkama ve son olarak içinde distile su. Onları düzgün bir kağıt havlu ile kurulayın.</li>
	<li>Onlar yeterli kendine gelmek ve onları tek tek encaged yere kadar hayvan katılmak. (Örneğin, immünhistokimya amaçlar için) gerekirse, hayvanlar 100 mg/kg Fentobarbital intravenöz enjeksiyon tarafından ötenazi ( Tablo malzemelerigörmek).</li>
	<li>HESC-RPE hücrelerinin nakli ile devam etmek için 7 gün bekleyin.</li>
</ol>2. subretinal nakli hayvanlarda tedavi hESC-RPE hücrelerinin
<ol><li>1-2 mm den daha düşük zamansal kadranda limbus hESC-RPE nakli önce 1 hafta eklenen 30 g enjeksiyon iğne kullanarak imzalat hayvanlarda intravitreal triamsinolon, 2 mg (100 µL) yönetmek ve 3 ayda yeniden yönetmek. İpucu bir objektif dokunmatik önlemek için göz arka direğe doğru işaret etmek emin olun.</li>
	<li>1daha önce açıklandığı gibi bir hESC-RPE monolayer kültür.</li>
	<li>24-şey Konfluent hESC-RPE monolayer hücre farklılaşması medya (bkz. Tablo reçetesi) kaldırın ve her yıkama PBS 500 µL Ca2 + ve Mg2 +olmadan ile iyi. Bir kez daha, bu eylem 2 yıkama toplam için yineleyin.</li>
	<li>Süpernatant atmak, tripsin iyi başına 500 µL eklemek ve 37 ° C'de 12 dk için kuluçkaya</li>
	<li>Plaka eğilme ve tripsin (hücreleri plakasına bağlı kalmalıdır) dikkatli bir şekilde çıkarın. Taze 37 ° C prewarmed farklılaşma medya 800 µL hücrelerde nazik pipetting veya hatta bir tek hücre süspansiyon elde etmek için gerekirse, kazıma toplamak. Not: Hücre kümeleri gözlenen bir 40 µm hücre süzgeç kullanın.</li>
	<li>% 0,2 kullanarak hemasitometre odasında hücreleri hesaplama Trypan mavi, üreticinin yönergelerine göre.</li>
	<li>Farklılaşma medya ve santrifüj hücreleri, oda sıcaklığında, 300 x g 5 min için 5 mL ekleyin.</li>
	<li>Süpernatant atın ve Pelet taze filtre sterilize PBS 1000 hücre/µL son bir konsantrasyon (bir 25 mm şırınga filtreden geçirilen) içinde resuspend.</li>
	<li>Aliquot önceki hücre süspansiyon 600 µL aliquots ve buz kadar ve ameliyat sırasında üzerinde tutun.</li>
	<li>Tuz 30 G şırınga kullanarak 35 mg/kg ketamin ve 5 mg/kg xylazine karışımı ile uyluk kas içi yönetim tarafından hayvanların anestezi. Öğrenciler topikal göz damlası % 0.75 cyclopentolate ve % 2.5 phenylephrine amix kullanarak genişletmek. Uygun anesthetization doğruladı Eğer hayvan arka bacağını zor bir tutam tepki vermez.</li>
	<li>Tavşan ile baş cerrah bakacak şekilde yerleştirin. Bir kapak Retraktörü göz kapakları ve nictitans membran bulaşma riskini en aza indirmek için bir steril bezle kaldırmak için kullanın. BSS kuruluk anestezi sırasında her iki gözde altında engellemek için kullanın.</li>
	<li>
Mikrocerrahi, 2 bağlantı noktasını kullan (veya isteğe bağlı 3-bağlantı noktası) için 25 G transvitreal pars plana tekniği ile trocars adım 1.3 ve Şekil 2' de açıklandığı gibi aynı pozisyonda yerleştirilir. Önceki sclerotomies görünür durumdaysa, trokar ekleme sadece bitişik gerçekleştirmek ancak ameliyat sonrası kaçak riskini en aza indirmek için bunlar aracılığıyla.
	<ol>
<li>Tek kişi kullanımlı düz kontak lens kornea göz ve Kontakt lens (şekil 1A) arasında iletişim jel olarak sentetik gözyaşları ile retina görselleştirmek için koymak.</li>
		<li>(Bkz: adım 1.3.5 ve 1.3.6) konumlandırma uygun ucu sonra hafifçe karışık hESC-RPE süspansiyon (50.000 hücreleri), 50 µL subretinally enjekte. Karakteristik "metal" endo-aydınlatma refleks tarafından seçkin NaIO ön işleme3 alanının için amaç. Neurosensory retina kolayca açıkça görünür bleb oluşturma ayrı olmalıdır. Tavşan/sonra steril H2O arada iğneyle kullanın iğne nedeniyle hücre tıkanmasını önlemek için floş kümeler. Değişikliği ne zaman tıkanma iğneyi fark ettim.</li>
		<li>Enjeksiyon sırasında yavaş iğne geri çek ama ucu reflü en aza indirmek için bleb içinde korunur emin olun.</li>
		<li>Sonra endoillumation ve enjeksiyon kanül kaldırılması, pençeli forseps kullanarak trocars kaldırın ve 30 için hafif basınç uygulamak için belgili tanımlık uç veya künt sonuna forseps kullanarak kendinden contalı dikiş daha az sclerotomies s.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Post-surgically 10 mL subkutan su kaybı önlemek için tuz verin. Ameliyat sonrası topikal steroid veya antibiyotik vermek değil. Ağrı kesici için ameliyattan sonra 0.5 mL buprenorfin 0.3 mg/ml subkutan sonra cerrahi, hem de gün ver.</li>
	<li>Onları birkaç saniye, öncelikle % 70 etanol, ikincisi % 45 etanol içinde çeker tarafından tüm aletleri kullanımdan sonra yıkama ve son olarak içinde distile su. Onları düzgün bir kağıt havlu ile kurulayın.</li>
	<li>Onlar yeterli kendine gelmek ve onları tek tek encaged yere kadar hayvan katılmak. (Örneğin immünhistokimya amaçlar için), gerekirse 100 mg/kg Fentobarbital intravenöz enjeksiyon tarafından hayvanlara ötenazi.</li>
</ol>3. in Vivo retina ve Subretinal görüntüleme
<ol><li>
Spektral etki alanı optik Koherens tomografi (SD-Ekim) aygıt ile birlikte verilen yazılımı kullanın (kesitsel b-taranmasını üreticinin yönergelerine uygun tedavi hayvanlar elde etmek için malzemeler tablo bkz:). Görüntü bulanık önlemek için her 30-60 s topikal serum temizlenerek kornea nemli tutmak emin olun.
	<ol>
<li>Engelsiz bir yol enstrüman ışık kaynağından tavşan retina elde etmek için ayarlanabilir bir Mount (bkz. Adım 1.1 ve 2.10) imzalat ve öğrenci büyümüş hayvanlar koyun.</li>
		<li>En az 3 OCT taramaları ile eşzamanlı kızılötesi confocal tarama lazer ophthalmoscopy enjekte alanının üst, orta ve alt kısmını temsil eden (IR-cSLO) yansıma referans görüntü elde.</li>
		<li>Tr-yüz cSLO mavi, yeşil, kızılötesi ve çok renkli yansıma (Yani, birden çok eşzamanlı lazer renk), sırasıyla lazer ile fundus görüntü elde.</li>
		<li>Mavi ışık autofluorescence (BAF) SD-Ekim cihazın mavi ışık lazer özelliği kullanarak çekim.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Plaza Reyes, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xeno-Free+and+Defined+Human+Embryonic+Stem+Cell-Derived+Retinal+Pigment+Epithelial+Cells+Functionally+Integrate+in+a+Large-Eyed+Preclinical+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Xeno-Free and Defined Human Embryonic Stem Cell-Derived Retinal Pigment Epithelial Cells Functionally Integrate in a Large-Eyed Preclinical Model.</a> Stem Cell Rep. 6 (1), 9-17 (2016).</li>
<li>Bartuma, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vivo+Imaging+of+Subretinal+Bleb-Induced+Outer+Retinal+Degeneration+in+the+Rabbit%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">In Vivo Imaging of Subretinal Bleb-Induced Outer Retinal Degeneration in the Rabbit.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 56 (4), 2423-2430 (2015).</li>
<li>Petrus-Reurer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integration+of+Subretinal+Suspension+Transplants+of+Human+Embryonic+Stem+Cell-Derived+Retinal+Pigment+Epithelial+Cells+in+a+Large-Eyed+Model+of+Geographic+Atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Integration of Subretinal Suspension Transplants of Human Embryonic Stem Cell-Derived Retinal Pigment Epithelial Cells in a Large-Eyed Model of Geographic Atrophy.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 58 (2), 1314-1322 (2017).</li>
<li>Carido, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+mouse+model+with+complete+RPE+loss+and+its+use+for+RPE+cell+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Characterization of a mouse model with complete RPE loss and its use for RPE cell transplantation.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 55 (8), 5431-5444 (2014).</li>
<li>Lund, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+embryonic+stem+cell-derived+cells+rescue+visual+function+in+dystrophic+RCS+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Cloning+Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Human embryonic stem cell-derived cells rescue visual function in dystrophic RCS rats.</a> Cloning Stem Cells. 8 (3), 189-199 (2006).</li>
<li>Vugler, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elucidating+the+phenomenon+of+HESC-derived+RPE%3A+anatomy+of+cell+genesis%2C+expansion+and+retinal+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Elucidating the phenomenon of HESC-derived RPE: anatomy of cell genesis, expansion and retinal transplantation.</a> Exp Neurol. 214 (2), 347-361 (2008).</li>
<li>Schwartz, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+stem+cell+trials+for+macular+degeneration%3A+a+preliminary+report%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Embryonic stem cell trials for macular degeneration: a preliminary report.</a> Lancet. 379 (9817), 713-720 (2012).</li>
<li>Hughes, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+schematic+eye+for+the+rabbit%5BTitle%5D)+AND+%22Vision+Res%22%5BJournal%5D)">A schematic eye for the rabbit.</a> Vision Res. 12 (1), 123-138 (1972).</li>
<li>Blanch, R. J., Ahmed, Z., Berry, M., Scott, R. A., Logan, A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22603978">Animal models of retinal injury.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 53 (6), 2913-2920 (2012).</li>
<li>Nork, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+and+anatomic+consequences+of+subretinal+dosing+in+the+cynomolgus+macaque%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Functional and anatomic consequences of subretinal dosing in the cynomolgus macaque.</a> Arch Ophthalmol. 130 (1), 65-75 (2012).</li>
</ol>

Yazarlar rakip çıkarları ya da çakışan ilgi alanları yok.

Bu protokol için hESC-RPE Tümleştirme vivo içinde değerlendirmek için büyük gözlü manken GA ve preklinik kullanımı nesil açıklanmıştır.
Rejeneratif terapileri için çeviri GA ve ilgili hastalıklar için klinik7içine, geliştirmek ve sadakatle nakli ve görüntüleme için klinik yöntemleri yakalama yöntemleri optimize etmek önemlidir. Tavşan bu açıdan çekici olduğunu: göz içi cerrahi ve kullanımını standart görüntüleme izni nispeten büyük bir göz vardır ve diğer büyük...

Bu iletişim kuralı bir transplante hESC-RPE subretinal uzayda entegrasyonunu değerlendirilmesi sağlar coğrafi Atrofi (GA) büyük gözlü preklinik model nesil açıklar. HESC1, yanı sıra dış retina hasar ve GA benzeri fenotip RPE hücrelerinin zenginleştirilmiş, saf ve fonksiyonel bir nüfusun üretim göstermek 3 son yayınlarda ayrıntılı olarak açıklanan yöntemleri kullanılmıştır fizyolojik tuzlu Çözümleri (Yani, BSS ve PBS) veya tavşan göz2,3NaIO3 subretinal enjeksiyonla indüklenen. Biz daha fazla alt retinal süspansiyon nakli hESC-RPE, kapsamlı işlevsel monolayers photoreceptor kurtarma kapasitesi2formu gösterdi.
Çeşitli yararları GA manken hastalığı nesil tavşan göz kullanımına eşlik. İlk olarak, boyutu tavşan göz hangi yetişkin bir insan gözü hacmi % 70 's, klinik olarak anlamlı nakli rutin olarak küçük kemirgen gözler (1000 hücre/µL vs 50.000 hücre/µL)4 ' te kullanılan çok daha bir hücre yoğunluğu kullanarak verir , 5. ikinci olarak, kemirgenler genellikle transscleral retina bariyeri ödün vermez ve potansiyel bir enflamatuar yanıt ve mümkün ret6tetikler koroid aracılığıyla ameliyatta. İki faktör birlikte multilayering ve Transplante hücrelerinin ve kesintiye yerli retina mendil transplante hücrelerde genel zayıf bir entegrasyon topaklanma neden olabilir. Ancak, büyük gözlü tavşan modeli bir cerrahi teknik klinik bir ayarı için aynı araçları ile performans sağlar. Üçüncü olarak, büyük gözlü manken de görüntüleme ve Transplante hücrelerin ve üstteki retina ile zaman1,2,3izleme yüksek çözünürlüklü vivo içinde verir. Böylece, kemirgenler normal ve hastalıklı retina ve alt retinal uzay araştırma ilgi olan herkes için cazip bir alternatif olması gereken bir klinik olarak ilgili ve maliyet-etkin preklinik modeli açıklar.

<table><tbody><tr><td>NutriStem hESC XF farklılaşma ortamı &ndash; bFGF ve &ndash; TGFb</td><td>Biyolojik Endüstriler</td><td>06-5100-01-1A</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE Select 1x</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific Corp</td><td>12563-011</td><td></td></tr><tr><td>PBS, Ca2+ ve Mg2+</td><td>Gibco, ThermoFisher Scientific Corp</td><td>14190-094</td><td></td></tr><tr><td>Hücre süzgeci 40 & mu; m Naylon</td><td>VWR</td><td>732-2757</td><td></td></tr><tr><td>İğne 30 G 0.5' &rsquo;; 0,3 mm x 13 mm</td><td>BD Microlance</td><td>304827</td><td></td></tr><tr><td>Acrodisc 25 mm Şırınga Filtresi</td><td>Acrodisc</td><td>PN4612</td><td></td></tr><tr><td>%0,4 tripan mavisi</td><td>ThermoFisher Scientific Corp</td><td>15250061</td><td>%0,2</td></tr> <tr><td>NaIO3</td><td>Sigma-Aldrich Corp</td><td>S4007</td><td></td></tr><tr><td>BSS</td><td>Alcon Nordic A/S</td><td>65079550</td><td></td></tr><tr><td>%70 Etanol</td><td>Solveco'da kullanın AB</td><td>1047</td><td></td></tr><tr><td>Ketaminol, 100 mg / mL</td><td>Intervet, Boxmeer</td><td>511519</td><td>Kullanımı 35 mg / kg ketamin</td></tr><tr><td>Rompun vet, 20 mg / mL</td><td>Bayer Hayvan Sağlığı</td><td>22545</td><td>5 mg / kg ksilazin</td></tr><tr><td>Triescence, 40 mg / mL</td><td>Alcon Nordic A / S</td><td>412915</td><td>2 mg intraviterial</td></tr><tr><td>Siklopentalat-fenilefrin,% 0.75 +% 2.5</td> <td>APL</td><td>321968</td><td>Her göze</td></tr> <tr>1 damla kullanın<td>Viscotears</td><td>Laboratoires Th&eacute; a</td><td>597562</td><td></td></tr><tr><td>Topikal</td><td>salin Apotea AB</td><td>7053249369080</td><td></td></tr><tr><td>Allfatal vet. 100 mg / mL</td><td>Omnidea</td><td>77168</td><td>100 mg / mL pentobarbital</td></tr><tr><td>kullanın Uzatma tüpü (Çekiç)</td> <td>MedOne Surgical Inc</td><td>3223</td><td></td></tr><tr><td>25 G / 38 G politip subretinal kanül</td><td>MedOne Surgical Inc</td><td>3219</td><td>25 G / 38 G</td></tr><tr><td>Tek Kullanımlık Düz Lens</td><td>Volk</td><td></td><td></td>#VWFD10</tr><tr><td>Barraquer Colibri kapak ekartörü</td><td>AgnTho'nun AB</td><td>42-020-030</td><td></td></tr><tr><td>Valfsiz trokarlar</td><td>Alcon Nordic A/S</td><td>8065751448</td><td></td></tr><tr><td>Pençeli forseps</td><td>Bausch & Lomb Nordic AB</td><td>ET1811</td><td></td></tr><tr><td>Alcon Accurus 400VS Vitrektomi makinesi</td><td>Alcon Nordic A/S</td><td>8065740238</td><td></td></tr><tr><td>Accurus 25+ Ölçer Vitrektomi TotalL Plus Pak</td><td>Alcon Nordic A/S</td><td>8065751493</td><td></td></tr><tr><td>SD-OCT cihazı</td><td>Heidelberg Engineering</td><td>Spectralis HRA+OCT</td><td>Heidelberg Eye Explorer sürüm 1.9.10.0'ı kullanın</td></tr><tr><td>24 kuyulu plakalar</td><td>Sarstedt</td><td>83.3922</td><td></td></tr><tr><td>Neubauer hemositometre</td><td>VWR</td><td>631-0925</td><td></td></tr><tr><td>Yeni Zelanda albino tavşanları</td><td>Lidk&ouml; pings Tavşan Çiftliği, İsveç</td><td></td><td></td></tr><tr><td>hESC-RPE hücreleri</td><td></td><td></td><td>Referans numarasına bakın 1</td></tr><tr><td>Buprenodale Vet, 0.3 mg/ml</td><td>Dechra</td><td>660500</td><td>Deri altından 0.5 mL buprenorfin kullanın</td></tr></tbody></table>

büyük gözlü manken coğrafi atrofi, içine insan embriyonik kök hücre elde edilen retina pigment epitel hücrelerinin subretinal nakli

Subretinal Transplantation of Human Embryonic Stem Cell Derived-retinal Pigment Epithelial Cells into a Large-eyed Model of Geographic Atrophy

Coğrafi Atrofi (GA), Kuru yaşa bağlı makula dejenerasyonu geç aşamasında kaybı hayati retina yapıları (örneğin, photoreceptors) sonraki dejenerasyonu uzaklaşan retina pigment epitel (RPE) katmanın, karakterize neden şiddetli bozukluğu. Benzer şekilde, RPE kaybı ve görme keskinliği azalma görülür uzun süreli takip kadar intravitreal Anti-vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF) tedavi gören hastaların gelişmiş ıslak yaşa bağlı makula dejenerasyonu (AMD) ile. Bu nedenle, bir yandan, bu verimli bir şekilde RPE hücrelerinin replasman tedavisi hizmet verebilir bir sınırsız kaynak türetmek için esastır. Öte yandan, davranış ve entegrasyon-in hastalık gerektiren bir modeli türetilmiş hücrelerde cerrahi değerlendirmek önemlidir ve görüntüleme yöntemleri olarak bu insanlarda uygulanan mümkün olduğunca yakın. İnsan embriyonik kök hücre değerlendirilmesi retina pigment epitel hücreleri (hESC-RPE) türetilmiş için burada, GA preklinik bir model nesil açıklayan önceki yayınlarımızı dayalı ayrıntılı bir protokol albino tavşan göz kullanarak içinde sağlamak bir Klinik ayarı. Farklılaşmış hESC-RPE nakledilen saf gözler veya gözleri NaIO3-GA gibi retina dejenerasyonu 25 G transvitreal pars plana tekniği kullanarak indüklenen. Değerlendirme dejenere ve Transplante bölgelerinden multimodal yüksek çözünürlüklü non-invaziv gerçek zamanlı görüntüleme tarafından gerçekleştirilir.

BAF, IR-cSLO ve SD-Ekim normal albino tavşan retinanın temsilcisi vivo içinde görüntülerini Şekil 2' de gösterilmiştir. SD-Ekim enstrüman tarafından yakalanan ışık yansıması farklı düzeylerinin farklı retina katmanlarla unutmayın.
Şekil 1A ve şekil 1Balt retinal blebs oluşturmak için kurulum resimli: 3 trocars (<strong class="xfig"...

Retina pigment epitel hücreleri hücre-replasman tedavisi için Kuru yaşa bağlı makula dejenerasyonu gelişmiş form olarak hizmet verebilir. Bu iletişim kuralı coğrafi Atrofi büyük gözlü modeli ve hastalık bu modeline insan embriyonik kök hücre kaynaklı retina pigment epitel hücrelerinin nakli subretinal nesil açıklar.

Büyük gözlü manken coğrafi Atrofi, içine insan embriyonik kök hücre elde edilen retina Pigment epitel hücrelerinin subretinal nakli

Geographic atrophy (GA), the late stage of dry age-related macular degeneration is characterized by loss of the retinal pigment epithelial (RPE) layer, ...

Bu prosedürün genel amacı, insan embriyonik türevli retinal pigment epitel hücrelerini göze nakletmek ve optik koherens tomografi kullanarak donör hücre entegrasyonunu değerlendirmek için büyük gözlü bir coğrafi atrofi hayvan modeli oluşturmaktır. Bu yöntem, dejeneratif hastalıklar için kök hücre bazlı tedavi gibi rejeneratif tıp alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu cerrahi ortamın ana avantajı, sınırsız sağlıklı hücre kaynağı ve hastaya yönelik bir prosedürle birçok benzerliği olan subretinal enjeksiyon için cerrahi ortamdır.Bu tekniğin etkileri, insan embriyonik kök hücrelerinden türetilen retinal pigment epitel hücrelerinin gösterişli olması yoluyla yaşa bağlı makula dejenerasyonunun tedavisine kadar uzanır. Hayvan teknisyenimiz Monica Aronsson, optik koherens tomografi ile retinayı görselleştirebilmemiz ve görüntüleyebilmemiz için tavşanı pozisyonda tutuyor. Metin protokolüne göre bir tavşanı uyuşturduktan sonra, tavşanı başı cerraha bakacak şekilde cerrahi mikroskobun altına yerleştirin.Ardından, göz kapaklarını çıkarmak için bir kapak ekartörü ve nictitans zarını çıkarmak için steril bir bez kullanın. Mikrocerrahi için, mikrocerrahi aletlerin yerleş

subretinal-transplantation-human-embryonic-stem-cell-derived-retinal

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Hücre nakli fotoreceptör kaybı ile karakterize retina dejenerasyonu tedavisi için bir stratejiyi temsil eder. Burada, nakledilebilir fotoreceptörlerin zenginleştirilmesi ve yetişkin farelere alt deri nakli için bir yöntem açıklıyoruz.

MACS Saflaştırılmış Fotoreceptör Öncü Hücrelerinin Yetişkin Fare Retinasına Subretinal Transplantasyonu

Burada, sıçanlarda ve farelerde bir RPE hücresi bolusunu subretinal olarak enjekte etmek için multimedya formatında topluluk tarafından kabul edilen bir protokol sunuyoruz. Bu yaklaşım, retinal dejenerasyonun hayvan modellerinde implantasyon üzerine aşılanmış RPE hücrelerinin kurtarma potansiyellerini, güvenlik profillerini ve hayatta kalma kapasitelerini belirlemek için kullanılabilir.

Süspansiyon Retina pigment epiteli Hücreleri sunun Kemirgenler Subretinal Enjeksiyonları Sahne

Retina pigment epiteli (RPE) yedek stratejileri ve gen temelli tedavi birkaç retinal dejeneratif koşulları için kabul edilir. Klinik çeviri için, büyük göz hayvan modelleri hastalarda uygulanabilir cerrahi teknikleri incelemek gerekmektedir. Burada çok yönlü ve maliyet-etkin bir RPE transplantasyon, yönelikse subretinal cerrahi için bir tavşan modeli sunuyoruz.

Tavşanlarda Subretinal Cerrahi Adım Protokolle Bir Adım

Subretinal enjeksiyon kök hücre replasman tedavisi için yaşa bağlı makula dejenerasyonu preklinik çalışmalarda yaygın olarak uygulanmıştır. Görüntülenmeyecektir bu makalede, biz daha az riskli, tekrarlanabilir ve tam olarak değiştirilmiş subretinal enjeksiyon tekniğini hücrelerin sıçan gözlerinin içine sunmak için trans-scleral yaklaşım yoluyla tanımlamak.

Sıçan gözlerinin içine insan retina Pigment epitel hücrelerinin Trans-scleral Subretinal nakli için rafine bir protokol geliştirilmesi

Retina pigment epitel hücrelerinin insan amniyotik membran ve hayvan modellerinde aşılama için hazırlık üstüne kültürlü insan pluripotent kök hücreler elde oluşan bir retina doku mühendisi bir yöntem açıklanmaktadır.

Transplantasyonu uygun Retina Pigment epitel doku mühendisliği insan embriyonik kök hücrelerden türetilmiş

Burada, insan pluripotent kök hücresi (hPSC) kaynaklı retinal dokunun büyük bir hayvan modelinin subretinal boşluğuna nakledilmesi için cerrahi bir teknik sunulmaktadır.

Bir Kedi Büyük Hayvan Modelinde İnsan Embriyonik Kök Hücre Kaynaklı Retinal Dokunun Subretinal Transplantasyonu

İnsan olmayan primat (NHP), anatomik ve genetik benzerlikler nedeniyle insan retina hücresel terapötiklerini incelemek için ideal bir modeldir. Bu makalede, NHP gözündeki retina pigment epitel hücrelerinin submaküler nakli için bir yöntem ve makula manipülasyonu ile ilişkili intraoperatif komplikasyonları önleme stratejileri açıklanmaktadır.

Dejeneratif Retina Hastalıkları için İnsan Dışı Primat Modelinde Retina Pigment Epitel Transplantasyonu

Bu protokol, retina dejenerasyonu olan veya olmayan fare alıcılarında düşük cerrahi komplikasyon oranıyla subretinal hücresel greftleri güvenli ve hassas bir şekilde vermek için transpupiller görme kılavuzluğunda trans-skleral bir yaklaşım sunar.

Retinal Dejenerasyon Fare Modelinde Subretinal Greftlerin Transpupiller Kılavuzluğunda Transskleral Transplantasyonu

Kriyoprezervasyon sonrası hESC kaynaklı fotoreseptör progenitör hücrelerin hazırlanması ve bu hücrelerin rd10 farelerde retina altı verilmesi için ayrıntılı bir protokol tanımladık.

Rd10 Farelerde İnsan Embriyonik Kök Hücre Kaynaklı Fotoreseptör Progenitörlerinin Sub-Retinal Verilmesi

İnsan Embriyonik Kök Hücre (ES) yayılması

Keşfedin, coğrafi atrofi için büyük gözlü bir model oluşturma ve insan embriyonik kök hücre kaynaklı retinal pigment epitel hücrelerinin subretinal naklini öğrenin. Optik koherens tomografi ile hücre entegrasyonunu değerlendirin.

Büyük gözlü manken coğrafi Atrofi, içine insan embriyonik kök hücre elde edilen retina Pigment epitel hücrelerinin subretinal nakli (Video) | JoVE Journal

Büyük gözlü manken coğrafi Atrofi, içine insan embriyonik kök hücre elde edilen retina Pigment epitel hücrelerinin subretinal nakli

Daha fazla video keşfet