Name: Kök hücre tedavileri Sıçanlarda bir ikili Patellar Tendon yaralanma modelinde değerlendirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-30T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 31 s
Description: Öğrenin, sıçanlarda ikili patellar tendon yaralanma modeliyle kök hücre tedavilerinin etkinliğini değerlendirme yöntemini. Bu model, bireyler arası varyasyonu kontrol ederek daha güvenilir ortopedik araştırma sonuçları sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar Dr Su, doktora, verileri onun istatistiksel analiz için kabul etmek istiyorum. Yazarlar ayrıca Dr. McClure, DVM, doktora DACLAM, anestezi onu tavsiye için teşekkür ederiz ve ağrı yönetimi protokolleri çalışmada kullanılan. Bu proje araştırma (12678v) ve USDA bölüm 1433 fonları (2090) için Western Üniversitesi Sağlık Bilimleri dairesi Başkan Yardımcısı gelen hibe tarafından desteklenmiştir.

Tüm yöntem tanımlamak burada kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) Western Üniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü tarafından onaylanmıştır.
1. izolasyon ve MSCs at göbek kordonu matris genişlemesi
<ol><li>Plasenta foaling gözlenen sonra yetişkin bir kısrak (hamile) elde etmek ve aseptik göbek kordonu plasenta den yalıtır. Göbek kordonu fosfat tamponlu tuz (PBS) % 1 penisilin-streptomisin (P/S) ile 4 ° C'de aktarım sırasında işleme kadar tutun.</li>
	<li>Göbek kordonu oda sıcaklığında %1 PBS ile iki kez yıkayın P/S 50 mL tüp içinde. Bölüm 150 mm plaka ve yıkama PBS oda sıcaklığında 1 P/S bir 50 mL tüp iki veya üç kez, kanın çoğu, kadar durulanır dışarı % 2 inç uzun parçalara göbek kordonu.</li>
	<li>Boyuna gemiler ortaya çıkarmak için göbek bağını kestim. Gemiler, 2 damar, damar ve forseps ve makas kullanarak kablosu allantoic bir SAP gibi kaldırın. Bir neşter ile kazıma tarafından 150 mm plaka üzerine jöle benzeri matris çevresindeki damarları göbek kordonu matris (Wharton'ın Jelly), toplamak ve ince parçalar halinde jöle kıyma.</li>
	<li>2-3 göbek kordonu parçaları (yaklaşık 12-15 g) 15 mL %0,1 (w/v) collagenase türü IA çözümde PBS ile 50 mL tüp içinde yer Wharton'ın jöle. 37 ° C'de 3-4 eriyene kadar h için nazik sallayarak ile kuluçkaya.</li>
	<li>300 x g 15dk için de sindirilir doku santrifüj kapasitesi ve süpernatant Aspire edin. Oda sıcaklığında PBS % 1 ile 15 ml sindirilir doku resuspend P/S, karıştırmak pipetting tarafından santrifüj kapasitesi 150 x g 5 min için de ve (yıkama) süpernatant Aspire edin. İki kez daha fazla yıkama yineleyin.</li>
	<li>Oda sıcaklığında PBS % 1 ile 15 mL hücrelerde yıkanmış resuspend P/S, karıştırmak pipetting tarafından tarafından 100 µm hücre süzgeç, 5 min için 150 x g, santrifüj ile süzün ve süpernatant Aspire edin.</li>
	<li>Kültür orta (CM) düşük glikoz Dulbecco'nın karıştırılarak hazırlamak fetal sığır serum (FBS) ve %1 P ile modifiye kartal orta (LG-DMEM) / S. Sterilize orta filtrasyon tarafından.</li>
	<li>37 ° C için önceden ısınmış cm 10 mL gergin hücrelerde resuspend, pipetting tarafından mix, bir 25 cm2 doku kültürü şişesi aktarmak ve % 5 CO%2 90 nem ve 37,0 ° C. kuluçkaya Değişiklik CM 3 Kültür passaged zaman 70-%80 izdiham, kültür ulaşıncaya kadar günde.</li>
	<li>Kültür geçiş için şişesi CM Aspire edin, oda sıcaklığında PBS ile 5 mL iki kez yıkayın ve % 0.25 tripsin/ethylenediaminetetraacetic asit (EDTA) 5 min için 37 ° C'de 3 mL ile bağlantısını kesin.</li>
	<li>Tripsin/EDTA için 37,0 ° C önceden ısınmış cm 6 mL ile nötralize, pipetting tarafından mix, bir 15 mL tüp, 5 min için 150 x g, santrifüj içine aktarmak ve süpernatant Aspire edin. Müstakil cm 1 mL hücrelerde resuspend, pipetting tarafından mix. Trypan mavi ve hemasitometre kullanarak canlı hücreleri saymak. 5. 000 hücre/cm225 cm2 doku kültürü şişesi içine yeniden tohum ve % 5 CO%2 90 nem ve 37,0 ° C. kuluçkaya</li>
</ol>2. pulcuklarının UCM MSCs kitosan Filmler kültürlü ile hazırlanması
<ol><li>100 mL %1 (w/v) kitosan çözeltisi hazırlamak için kitosan 1 g 99 mL distile su (dH2O) ekleyin ve iyi bir manyetik karıştırıcı ile karıştırın.</li>
	<li>Buzul asetik asitin 670 µL ekleyin ve kitosan çözülür ve viskoz hale kadar karıştırma devam edin. Bu genellikle 3-4 saat sürer.</li>
	<li>Kitosan çözeltinin 500 µL 12-iyi doku kültürü plaka her kuyunun içine ekleyin ve kitosan çözüm eşit dağıtmak ve tüm alt yüzeyi kapsayacak için plaka girdap.</li>
	<li>Kitosan kaplama-çözüm plaka laminar akış için 24 saat bir kapak gece kabin altında kuru. Bir kez kuru, ince film kurdu ve plakasına yapıştırılır.</li>
	<li>Kitosan filmi 1 mL 0.5 N sodyum hidroksit (NaOH) çözeltisi her kuyuya ekleyerek nötralize ve oda sıcaklığında 2 h için kuluçkaya. NaOH her kuyudan Aspire edin ve her yıkama dH2O 1 mL ile üç kez iyi. Her yıkama 1 mL % 70 etanol (alkol) ile bir kez de.</li>
	<li>Kitosan film sterilize etmek için 1 mL % 70 alkol her şey ve kuluçkaya gecede laminar akış dolapta ekleyin. Her kuyudan kalan alkol içinde ertesi gün Aspire edin. Her yıkama 1 mL steril PBS ile üç kez iyi. Kitosan film ultraviyole ışık altında laminar akış gecede bir kapak kabine ile sterilize.</li>
	<li>İçin UCM MSCs formu pulcuklarının, tohum genişletilmiş ve 5. 000 hücre/cm2her kuyuya pasajlı hücreleri ve % 5 CO%2 90 nem ve 37,0 ° C. kuluçkaya Not: Hücreleri hipoksi veya normoxia, araştırmacı'nın faiz bağlı olarak altına inkübe.</li>
</ol>3. ifade yüzey işaretlerinin Akış Sitometresi ile analiz
<ol><li>
Bir tek hücre süspansiyon hazırlanması
	<ol>
<li>Çift plaka<ol>
<li>Orta her kuyudan çıkarın ve iki kere oda sıcaklığında PBS ile yıkayın.</li>
			<li>Bir hücre ayrılma reaktif 500 µL hücrelerle oda sıcaklığında 5-10 dk 12-şey plaka her kuyuya bağlantısını kesin.</li>
			<li>Kuluçka sonra arabellek (% 0.5 BSA içeren PBS) Boyama 1 ml her kuyuya ve hücreleri ayırmak için pipetting karıştırın.</li>
			<li>Hücre süspansiyon 15 mL konik tüp ve 5 min için 150 x g, santrifüj içine aktarın.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Kitosan plaka<ol>
<li>Tüm pulcuklarının alıyorum orta bir pipet 1000 µL uç ile kullanarak toplamak. Toplanan orta 15 mL konik tüp içine aktarın. Orta toplama sonra PBS 1 mL de ekleyerek yıkayın ve yıkanmış PBS aynı 15 mL konik tüp içine aktarın.</li>
			<li>150 x g 5 min için de pulcuklarının santrifüj kapasitesi ve süpernatant kaldırın.</li>
			<li>500 µL hücre ayrılma reaktif (örneğin, accutase) ekleyin ve oda sıcaklığında 5-10 dk için kuluçkaya. Pulcuklarının ayırmak ve artık görünür değildir kadar pipetting 1 mL ipucu kullanarak karıştırın.</li>
			<li>Boyama arabellek 1 mL tek hücre süspansiyon ve 5 min için 150 x g, santrifüj içine ekleyin.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Hücreleri yıkama
	<ol>
<li>Süpernatant konik tüp sizden kaldırmak ve soğuk arabellek boyama 3 mL hücrelerde yeniden askıya alma. Deney boyunca buzda hücreler bu adıma tutmak.</li>
		<li>300 x g 5 min (çamaşır) için de santrifüj kapasitesi.</li>
		<li>İki kez yıkayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Hücre boyama
	<ol>
<li>300 x g 5 min için de santrifüj kapasitesi ve süpernatant kaldırın.</li>
		<li>Bir trypan mavi ve hemasitometre kullanarak hücrelerin saymak. 1 x 106 hücre yeniden askıya 50 µL kapatmaktır (PBS içeren % 10 at serum) tampon ve buz üzerinde 30 dk için kuluçkaya.</li>
		<li>10 µL floresein Birleşik isothiocyanate (FITC) antikorları (CD44, CD90, CD105, CD34, MHC kompleksi (MHC) Sınıf II veya izotip kontrol her antikor için) ve tampon boyama 40 µL ekleyin, sonra ışık buz üzerinde 1 h için korumalı kuluçkaya.</li>
		<li>3 mL soğuk arabellek boyama ekleyin ve karıştırın, 300 x g 5 min için de santrifüj kapasitesi ve (çamaşır) süpernatant Aspire edin.</li>
		<li>İki kez yıkama yineleyin.</li>
		<li>Hücre Pelet arabellek boyama 0.5 mL içinde yeniden askıya alma</li>
		<li>7-AAD (canlılığı boya) 5 µL ekleyin ve buz üzerinde 30 dk için kuluçkaya</li>
		<li>Lekeli hücre örnekleri Akış Sitometresi tarafından analiz. Enkaz onların küçük SSC ve FSC tarafından dışlamak ve hücrelerin 7-AAD alt alımını belirlemek. Y - ve x-eksen üzerinde sırasıyla FL1 ve FL2 arsa. İzotip kontrol çapraz çizgi yukarıda bir kapı oluşturmak için kullanın. Alandaki olumlu lekeli hücrelerin yüzdesi ölçmek. Sayısı en az 20.000 olayları/örnek (ek şekil 1).</li>
		<li>Hücrelerin ve otomatik Floresans çoğunluğuna tarafından antikorlar ile lekeli hücre yüzdesi ölçmek ve yüzde izotip kontrol ile lekeli hücre çıkarma.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. ikili Patellar Tendon kusur sıçan modelinde
<ol><li>Sprague-Dawley Rat (yetişkin erkek, 4 – 5 ay yaşlı, vücut ağırlığı 350 – 375 g) seçin. Bu model için kullanılan sıçan nispeten büyük boyutuna dikkat edin.</li>
	<li>Anestezi ve çimdik-ayak refleks indüksiyon odasında kaybolması kadar maske % 8 sevoflurane 2 L/dk % 100 oksijen fareyle teslim yapay göz yağ uygulayın.</li>
	<li>Meloksikam (1 mg/kg) bir kas içi enjeksiyon preemptive analjezi olarak yönetmek.</li>
	<li>Yer fare iki 0,5 L su şişeleri arasında sıcak su ve vücut ısısı ve pozisyon, Cilt yaralanma engelleyen sırasında korumak için bir bezle kaplı. Tablo her ekstremite teyp. Hipotermi riskini azaltmak için kabarcık şal (şekil 1) ile vücudunu örtecek.</li>
	<li>Anestezi % 5 sevoflurane 1 L % 100 oksijen karışımı ile su ısıtma yastık üzerinde dorsal recumbency hayvan ile burun konisi, sürekli akış ile koruyun.</li>
	<li>Cilt travma önlemek için cerrahi siteleri küçük değil. Bunun yerine, her iki stifles üzerinde saç çıkarıcı krem uygulayın. Bir dil depressor kremi ve saç kaldırmak için kullanın.</li>
	<li>Cerrahi sitesi klorheksidin digluconate Maki ile fırçalayın ve % 70 etanol ile 3 kez yıkayın.</li>
	<li>Steril neşter #15 bıçak bastırmak craniomedial yönü üzerinde bir proksimal için distal yönde ile cilt deşmek. Belgili tanımlık kesme yaklaşık 1 cm patella seviyeye proksimal başlatın ve yaklaşık 5 mm için tibial tubercle distal genişletmek.</li>
	<li>Patellar tendon bir #15 neşter bıçakla temel subkutan doku boşaltarak ortaya çıkarmak için cilt yansıtır.</li>
	<li>
#15 neşter bıçak kullanarak, her patellar tendon (1 mm) Merkezi üçüncü tibial yumrunun patella distal açıdan tüketim.
	<ol>
<li>0,99 mm çaplı Kirschner teli tendon karşı her ekstremite (Şekil 2) üründe boyutunu standartlaştırmak için şablon olarak hizalayın.</li>
		<li>2 tam-kalınlık insizyon Kirschner teli her tarafında tendon (şekil 3) merkez bölümünü yalıtmak için #15 neşter bıçak ile yapmak. Merkezi bölümde uzağından ve klemple iyi Iris makasla (şekil 4) çıkarabileceğim.</li>
		<li>Bastırmak fasya kapatmadan önce (karma hücre süspansiyon ve ACP) pıhtı 5.5 açıklandığı gibi uygun tedavi grupları ekleyin. Şerit çapraz bir desen ile hem 5-0 polyglactin 910 dikiş (şekil 5) kullanarak bir intradermal desen deri kapatın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Kontralateral bastırmak yordamı yineleyin. Not: Bir kusur rasgele bir tedavi (kök üzerinde kitosan şartına veya standart Tabaklarda kültürlü hücreleri) atanır. Kontralateral kusur iç denetimi hizmet için boş bırakılır.</li>
	<li>Ameliyattan sonra 4 tablet Enrofloksasin yönetmek (2 mg/tablet, sözlü olarak, bir kez her gün) ve bir tablet Meloksikam (2 mg/tablet, sözlü olarak, bir kez günlük) 7 gün için. Bu doz bir laboratuvar hayvan veteriner tarafından önerilen ve IACUC protokolünde onayladı.</li>
</ol>5. teslim MSCs Patellar Tendon kusur içinde
<ol><li>%8 sevoflurane 2 L/dk % 100 oksijen maskesi ile çimdik-ayak refleks indüksiyon odasında kaybolması kadar teslim ile patellar tendon kusur oluşturmak için kullanılan değil sağlıklı bir sıçan anestezi.</li>
	<li>5 mL kan tarafından kalp ponksiyon imzalat Sprague-Dawley rat (yetişkin erkek, 4 – 5 ay yaşlı, vücut ağırlığı 350 – 375 g), bir 5 mL şırınga asit-sitrat-dekstroz (5:1 v/v) 1 mL içeren bir 20 G iğne ile toplamak.</li>
	<li>Fare Fentobarbital (100 mg/kg), süre aynı anestezi altında intracardial enjeksiyonla kardiyak ponksiyon ve kan toplama, sonra ötenazi.</li>
	<li>350 x g için oda sıcaklığında 15 dk da örneğine santrifüj kapasitesi. Süpernatant aktarın ve aliquots (120 her µL)-20 ° c kadar kullanmak depolayın.</li>
	<li>Vivo implantasyonu, hemen önce yukarıdaki aliquot çözülme ve 0.5 x 10 ile 20 µL tripsin/EDTA kullanarak standart plakalar müstakil6 MSCs (veya'den alınan 1.9 3.1.2.1) mix veya (PBS/orta) temizlenerek kitosan plakalar toplamak.</li>
	<li>Çözdürülen plazma plazma etkinleştirmek ve pıhtı oluşumu teşvik için 96-şey plaka bir kuyu içinde kalan 100 µL % 10 Kalsiyum klorür (CaCl2) 6 µL eklemek (şartına plazma aktif: ACP).</li>
	<li>Mix hücre süspansiyon (20 µL) ve ACP (100 µL pıhtı (şekil 6) oluşturmak için). Bastırmak fasya kapatmadan önce oluşturulan patellar tendon kusur içinde pıhtı yerleştirin (bkz. Adım 4.10.3).</li>
</ol>6. fonksiyonel sonuç
<ol><li>Fareler üzerinde fare yüz buruşturma ölçek (RGS)37,38 dayalı ve implantasyon siteleri üzerinde şişlik ağrı belirtileri için günde iki kez izlemek. Not: Puanlama sistemi (0-6) ayaktan işlevin (0-3) 3 faaliyetleri, desteklenen ön ayakları ile zamanlanmış arka bacak ayakta dahil olmak üzere temel geliştirilmiştir, desteksiz hind bacak ayakta (0-2) ve yeteneği bir 17 cm plastik kafes duvar (0-1) (tırmanmak için zaman aşımına uğradı Tablo 1).</li>
	<li>Fareler iki arka bacak ayakta faaliyetleri için sabah ve akşam ortalama puan hesaplamak için her zaman noktasının değerlendirin.</li>
	<li>Fareler için başarıyla bir 17 cm plastik kafes üst ulaşan her iki arka bacaklarda ile tırmanma yeteneği değerlendirmek.</li>
</ol>7. görünüm ve Patellar Tendon histopatoloji Brüt
<ol><li>Fareler (iltihap değerlendirmek için) 7 gün ötenazi veya (doku şifa değerlendirmek için) 28 gün Fentobarbital (100 mg/kg) % 8 sevoflurane ve 2 L % 100 oksijen maskesi ile teslim ile anestezi altında intracardial iğne ile tedavi sonrası.</li>
	<li>Diz kapağı-tendon-tibia yumrunun birimlerle neşter ve makas ötenazi sonra hasat. Yumuşak doku ve kasları patellar tendon dışında bastırmak çevresinde kaldırın.</li>
	<li>Her numune brüt görünüm ve tendon (Şekil 7) kalinlasma inceleyin.</li>
	<li>Numune tendon proksimal ve yanal yönü üzerinde bir cerrah 's düğüm 5.0 Polydioxanone yerleştirerek gelecek şekilde yönlendirin. Her numune % 10 tarafsız tampon formalin çözümde düzeltmek ve enine bölümler (5 mikron) her tendon orta kısmından elde etmek.</li>
	<li>Hematoksilen Eozin ve standart protokolleri takip boyama Masson'ın Trichrome kullanarak bölümleri leke.</li>
	<li>Hematom iltihabı gibi patolojik değişikliklerin yanı sıra kusur içinde olup olmadığını belirlemek için bölümünü inceleyin.</li>
	<li>Kollajen sınıfa, anjiogenez ve kıkırdak oluşumu (Tablo 2)39derece alınarak daha önce yayımlanmış puanlama sistemi kullanma bölümlerine histolojik Puan değerlendirmek.</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir ifşa etmek çıkar çatışması var.

Biz sonunda at doğal tendinopathies yönetiminde aday yaklaşımlar test niyetinde çünkü at hücreleri bu proje için seçildi. Nitekim, tendon yaralanmalarının at at yüzeysel dijital fleksör ve Aşil tendonu insanlar41yılında arasındaki biyolojik benzerliği nedeniyle tendinopathy adam doğal modelleri olarak çekici bulunmaktadır. Hücre yüzey işaretleyicileri CD44, CD90, CD105, CD34 ve MHC II immunophenotyping hücrelerinin hücresel tedavi42için uluslararası toplum tarafından öneril...

Tendon hasarı önemli ağrı ve kas atrofi en yaygın nedenlerinden biri arasında tür1' dir. Veteriner tıpta, tendon ve bağ yaralanmaları atlar, özel ilgi ve yarış atları tüm yaralanmaları % 82 kas-iskelet sistemi dahil olanların % 46'sı tendon ve bağ2,3etkiler şunlardır. Skar dokusu oluşumu iyileşmiş tendonları biyomekanik özellikleri etkiler ve atletik kullanmak dönmek için korunan prognoz fleksör tendon yaralanmalarının sonra açıklar; Re-yaralanma 2 yıl içinde ilâ % 67'atların konservatif4ele meydana gelmektedir. Rejeneratif tıp geleneksel tedaviler zorluklar bir koşul yeni alternatifler sağlar. Otolog kök hücre tedavisi biraz cesaret verici sonuçlar5,6 üretti ama doku koleksiyonu, hücre işleme/yeniden programlama nedeniyle gecikmiş yönetim ve etkisi ile ilişkili morbidite ile sınırlıdır hastanın sağlık durumu (örneğin, yaş) özelliklerinde kök,7,8hücreleri. Bu sınırlamalar kapalı alternatif olarak Allojeneik Kök hücre araştırma için bir gerekçe sağlamak. Çünkü onlar etik kaygılar ve embriyonik kök hücreleri ile ilişkili teratoma oluşumu riskini engelleyecek fetal adnexa elde edilen hücreleri çekici adaylardır. Fetal adnexa arasında adı da Wharton'ın Jelly, göbek kordonu matrix (UCM), bol ve basit-e doğru toplamak var.
Hücre kaynağı ne olursa olsun, stemness artırılması allojenik rejeneratif tıp için bir hücre banka kurmak için önemlidir. Bir fonksiyonel açıdan stemness kendini yenileme ve çoklu soy farklılaşması9için potansiyel olarak tanımlanabilir. Stemness kanıtı yayılması ve farklılaşma deneyleri, gene işaretleri Oct4, Sox2 ve MicroRNAs9ifade ile birlikte kullanır. Geçersiz dolgu maddeleri ve yayılmasını önleme ve UCM MSCs farklılaşma geliştirme taşıyıcıları hizmet etmek için Biyomalzeme kullanımı stemness geliştirmek için bir strateji kullanır. Bu yaklaşım işleme transkripsiyon faktörlerin İndüklenmiş pluripotent hücreler Olgun Hücreler yeniden programlamak için ilgili endişeleri ortadan kaldırır. Kök hücre için potansiyel taşıyıcıları olarak kabul Biyomalzeme arasında kitosan Biyouyumluluk ve çözünebilirlik10için itiraz ediyor. Bu doğal aminopolysaccharide öncelikle kabuklu deniz ürünleri10subproduct elde edilen kitin, ikinci en bol doğal polisakkarit alkalin deasetilasyonu tarafından oluşturulur. Biz daha önce MSCs ve kitosan iskele arasındaki etkileşimler araştırıldı ve pulcuklarının11,12,13,14,15, oluşumu gözlenen 16. biz de kitosan matrisler12,13,14,15,16,17, chondrogenesis üstünlüğünü bildirdi 18. Daha yakın zamanlarda, iki bağımsız çalışmalar pulcuklarının oluşumu yağ dokusu tarafından açıklanan ve plasenta doku kitosan film19,için20kültürlü MSCs türetilmiş. Pulcuklarının Bu oluşumu sadece stemness gelişmiş, ama aynı zamanda kök hücre saklama vivo içinde implantasyon20sonra geliştirilmiş.
Yaygınlık ve morbidite tendinopathy türlerin karşıdan karşıya tendinopathies Patofizyoloji çalışma ve kök hücre Enjeksiyonlar gibi yeni terapiler test modeller geliştirilmesi istenir. Atları, collagenase kaynaklı tendinit MSCs tendon onarım21' kullanarak etkinliğini göstermek için yaygın bir modeldir. Klinik tendinopathies genellikle kronik gelen neden ise22,23overstrain, akut enflamatuar degisimler enjeksiyonları neden bu yaklaşım alaka sınırlıdır. Buna ek olarak, kimyasal indüksiyon tendon hastalığın şifa bir yanıt neden olmaktadır ve Engelli iyileşme süreci klinik durumlarda22,23' mevcut çoğaltmaz. Eksizyon, yüzeysel dijital fleksör tendon bir kesim tendinit atları24içinde cerrahi bir model olarak tarif edilmiştir. Daha yakın zamanlarda, minimal invaziv bir yaklaşım travmatik hasar yüzeysel dijital fleksör tendon25Merkezi çekirdeğe sınırlandırmak için kullanılır. Cerrahi modeller doğal tendon hastalığa yol ve meyletmek-e doğru25oluşturulan hasar ölçüde tekrarlanabilirlik eksikliği yorgunluk mekanizma taklit değil. Model, morbidite ve tendon at modelleri ile ilişkili maliyeti ne olursa olsun yeni tedaviler vivo değerlendirilmesi için bir ilk adım olarak bir ilgi kemirgen modelleri haklı ek sınırlamalar hastalıklardır.
Rodents deneysel modeller ana avantajlarından biri maliyet ve arası bireysel farklılıklarına kontrol yeteneği oluşur. Kemirgenler çeşitli fizyolojik faktörler nedeniyle onların hızlı büyüme oranları ile ilgili standart ve nispeten kısa ömürleri, varyasyon kaynakları sınırlama ve bu nedenle hayvanların farklılıkları algılamak için gerekli sayısını azaltarak. Tendon hastalıkları Rodents ikna etmek için stratejiler kimyasal indüksiyon, aynı zamanda cerrahi kısmi tendon kusurları21oluşturulması yararlanmıştır. Cerrahi modeller doğal tendinopathies kimyasal modeller daha iyi taklit, ancak daha yüksek morbidite ve hasarlı tendon geri dönülemez hata yol açabilir. Onların boyutu daha büyük kusurları, böylece doku şifa değerlendirme kolaylaştırmak oluşturulmasına izin verir gibi bu bakımdan sıçanlar fareler bu modeller için daha iyi adaylar gibi görünüyor. Sprague-Dawley Rat tendinopathies dört büyük tendon gruplar halinde deneysel çalışmalarda kullanılmıştır: rotator manşet, fleksör, Achilles ve patellar tendon26. Bunlar arasında patellar tendon içeren bu tendon daha büyük boyutunu ve27erişim kolaylığı nedeniyle özellikle çekici modeller. Patellar tendon kuadriseps kas için tibial yumrunun ekler. İçindeki bu ekstansiyon mekanizmasını, patella kuadriseps eylem yönlendirir ve patellar tendon proksimal ölçüde delineates sesamoid bir kemiktir. Patellar tendon proksimal ve distal kapsamlarını, kemikli çapa varlığı biyomekanik testleri kolaylaştırır. Patellar tendon genellikle içeren modelleri tek taraflı cerrahi kusurları üzerinde bir denetim28,29hizmet veren bir kontralateral sağlam tendon ile güveniyor. En yaygın patellar tendon kusur model kontralateral patellar tendon değişmeden kalır iken diz kapağı, distal tepe üzerinden patellar tendon tibial yumrunun ekleme Merkezi bölümü (1 mm genişliğinde) bilincin içerir. Sonuçlar ölçü Histoloji, tahribatsız biyomekanik test veya biyomekanik başarısızlık, ultrason görüntüleme, ex vivo floresan görüntü, brüt gözlem ve işlevsel testleri28,30 test dahil ettik ,31. Tek taraflı modeller aynı hayvan içinde benzer bir yaralanma muhafazakar yönetimi ile önerilen tedavinin karşılaştırma izin vermez. Benzer şekilde, çeşitli tedaviler arasında karşılaştırma ayrı hayvanlar gerektirir. İkili bir model arası bireysel farklılıklar ortadan kaldırmak ve hayvanlar için bir çalışma32gerekli sayısını azaltın. Ancak, ikili yaralanmaları morbidite artırabilir ve ikili topallık tedavi değerlendirme sekteye uğrayabilir. Birkaç çalışmalar kısaca peri-operatif yönetimi yerine tedavi etkileri ve morbidite modeli33,34üzerinde ikili patellar tendon kusurları fareler ama odak kullanımı rapor.
Bu çalışmanın uzun vadeli hedef UCM MSCs allojenik nakli için mukadder stemness ve in vivo yaşam geliştirmek için bir strateji geliştirmek etmektir. Bu hedefe ulaşmak için biz son zamanlarda UCM MSCs geliştirilmiş stemness pulcuklarının oluşumu tarafından kitosan film ve kuluçka hipoksik ortam35altında bildirdi. Bu vitro özellikleri geliştirilmiş biyomekanik özellikleri patellar tendon kusurların şartına UCM ile tedavi ile ilişkili bulunmuştur-MSCs. bu sonuçlara göre fare ikili patellar tendon kusur modeli aday test etmek uygun görünüyor tendon yaralanmaları36tedavisi. İşte yalıtım ve UCM-MSCs, kök hücre, oluşturma ve ikili diz kapağı tendon kusur ve post operatif tedavi için biyolojik bir iletim sistemi hazırlanması karakterizasyonu için detaylı iletişim kuralları sağlamak için çalışmada bildirdi Kurtarma ve doku içinde kusurları şifa değerlendirilmesi.

<table><tbody><tr><td>PBS 10x</td><td>Hyclone</td><td>SH30258.01</td><td>Tüketilebilir</td></tr><tr><td>Kollajenaz tip IA</td><td>Worthington</td><td>LS004197</td><td>Sarf Malzemesi</td></tr><tr><td>DMEM düşük glikozlu</td><td>Hyclone</td><td>SH30021. FS</td><td>Tüketilebilir</td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu</td><td>Hiklonu</td><td>SH30910.03</td><td>Tüketilebilir</td></tr><tr><td>Penisilin / Streptomisin 100x</td><td>Hidroklon</td><td>SV30010</td><td></td></tr><tr><td>Tüketilebilir Tripsin% 0.25</td> <td>Hidroksin</td><td>SH30042.01</td><td>Tüketilebilir</td></tr><tr><td>Akaktaz</td><td>Yenilikçi Hücre Teknolojileri</td><td>AT104</td><td></td></tr><tr><td>Tüketilebilir Tripan mavisi</td><td>Hyclone</td><td>SV30084.01</td><td>Sarf Malzemesi</td></tr><tr><td>Dimetil Sülfoksit</td><td>Sigma</td><td>D2650</td><td>Sarf Malzemesi</td></tr><tr><td>Kitosan</td><td>Sigma</td><td>C3646</td><td>Sarf Malzemesi</td></tr><tr><td>Sodyum Hidroksit</td><td>Sigma</td><td>S8045</td><td>Sarf Malzemesi</td></tr><tr><td>Sığır Serumu Albümin Klonu</td><td></td><td>SH30574.01</td><td>Sarf</td></tr><tr><td>Malzemesi Yuvarlak alt polistiren tüp</td><td>Corning</td><td>149591A</td><td>Sarf Malzemesi</td></tr><tr><td>Fare anti-at CD44 (FITC)</td><td>AbD serotec</td><td>MCA1082F</td><td></td></tr><tr><td>Sarf Malzemesi Fare anti-sıçan CD90 (FITC)</td><td>AbD serotec</td><td>MCA47FT</td><td></td></tr><tr><td>Sarf Malzemesi Fare anti-at MHC-II (FITC)</td><td>AbD serotec</td><td>MCA1085F</td><td>Sarf</td></tr><tr><td>Malzemesi Fare IgG1 (FITC) - İzotip Kontrolü</td><td>AbD serotec</td><td>MCA928F</td><td>Sarf</td></tr><tr><td>Malzemesi Fare monoklonal [SN6] - CD105 (FITC)</td><td>abcam</td><td>ab11415</td><td>Tüketilebilir</td></tr><tr><td>Fare IgG1 (FITC) - İzotip Kontrolü</td><td>abcam</td><td>ab91356</td><td>Tüketilebilir</td></tr><tr><td>Fare anti-insan CD34 (FITC)</td><td>BD</td><td>BDB560942</td><td></td></tr><tr><td>Tüketilebilir Fare IdG1 kappa (FITC)</td><td>BD</td><td>BDB555748</td><td>Sarf Malzemesi</td></tr><tr><td>7-AAD</td><td>BD</td><td>BDB559925</td><td>Sarf Malzemesi</td></tr><tr><td>BD Accuri C6 Akış Sitometresi</td><td>BD</td><td></td><td>Ekipman</td></tr><tr><td>Vacutainer 5 mL</td><td>Med Vet International</td><td>RED5.0</td><td>Tüketilebilir</td></tr><tr><td>Asit-sitrat-dekstroz</td><td>Sigma</td><td>C3821</td><td>Tüketilebilir</td></tr><tr><td>Kalsiyum Klorür</td><td>Sigma</td><td>C5670</td><td>Tüketilebilir</td></tr><tr><td>Sevofluran</td><td>JD Medical</td><td>60307-320-25</td><td>Tüketilebilir</td></tr><tr><td>Sıçanlar</td><td>Charles Nehri</td><td>Suş kodu: 400</td><td>Deney hayvanı</td></tr><tr><td>Sıçan cerrahi kiti</td><td>Harvard aparatı</td><td>728942</td><td>Ekipmanları</td></tr><tr><td>Cerrahi Bıçak #15</td><td>MEDLINE</td><td>MDS15115</td><td>Sarf Malzemesi</td></tr><tr><td>Sıçan MD's Baytril (2 mg / Tablet), Rimadyl (2 mg / Tablet)</td> <td>Bio Serv</td><td>F06801</td><td>Tüketilebilir</td></tr><tr><td>Poliglaktin 910, 5-0</td><td>Ethicon</td><td>J436G</td><td>Sarf Malzemesi</td></tr><tr><td>Eosin alchol shandon</td><td>Thermo Bilimsel</td><td>6766007</td><td>Sarf Malzemesi</td></tr><tr><td>Harris Hematoksilen</td><td>Termo bilimsel</td><td>143907</td><td>Sarf Malzemesi</td></tr></tbody></table>

kök hücre tedavileri sıçanlarda bir ikili patellar tendon yaralanma modelinde değerlendirilmesi

Evaluation of Stem Cell Therapies in a Bilateral Patellar Tendon Injury Model in Rats

Rejeneratif tıp geleneksel tedaviler meydan koşullar yeni alternatifler sağlar. Yaygınlık ve morbidite tendinopathy türlerin, karşıdan karşıya bu doku sınırlı iyileştirici özellikleri ile birlikte, hücresel tedaviler için arama istenir ve onların etkinliğini incelemek için deneysel modelleri geliştirilmesi tahrikli. Göbek kordonu matris elde edilen Mezenkimal Kök hücre (UCM-MSC) adaylardır çekici oldukları için bol, basit-e doğru toplamak, etik kaygılar ve teratoma oluşumu riskini engelleyecek, henüz ilkel embriyonik kök hücreleri daha yakından benzer daha Yetişkin doku kaynaklı MSCs. önemli ilgi kitosan üzerinde MSCs özellikleri kullanılarak küresel oluşumu geliştirmek için bir strateji olarak odaklanmıştır. UCM-MSCs, izole etmek için bu kağıt ayrıntıları teknikleri pulcuklarının kitosan film hazırlamak ve küresel oluşumu yüzey marker ifade üzerinde etkisini analiz. Sonuç olarak, bir ikili patellar tendon yaralanma modelinde fareler oluşturulması kitosan filmde oluşan UCM-MSC pulcuklarının vivo içinde implantasyonu için tanımlanır. Komplikasyon gözlenmedi morbidite ile ilgili olarak çalışmada, efektleri veya doku enfeksiyonu stres. Toplam fonksiyonel puanı 7 gün itibariyle işletilen Rats'in normal fareler daha düşük ama ameliyattan sonra 28 gün içinde normale döndü. Histolojik dokusu şifa puanları pıhtı yabancı cisim reaksiyonu ve 28 gün şifa ilerliyor tedavi Defektlerde 7 gün değerlendirildi varlığına doğruladı. Bu iki taraflı diz kapağı tendon kusur model arası bireysel değişim her fare iç denetimde oluşturulması yoluyla denetler, kabul edilebilir morbidite ile ilişkili ve tedavi edilmezse tendon ve tedaviler arasındaki farklar tespiti izin.

Mevcut çalışmada, ± SD (Standart sapma) demek gibi sonuçları sunulmuştur. Hücreleri 6 kısraklarda göbek bağları izole ve her hücre yüzey işaretçisine standart veya kitosan Klima altında ifade izole hücre satırlarının yüzdesi karşılaştırıldığında Friedman testi ile parametrik olmayan bir Varyans analizi ile olarak tekrarlanan önlemler. Tendon kusur modeli oluşturmak için 8 sıçan 7 gün ameliyat sonrası değerlendirme için kullanıldı ve 12 fareler 28 gün değerlendirmesi için kullanılmıştır. F...

Bu kağıt hazırlık ve göbek kordonu matris elde edilen Mezenkimal Kök hücre pulcuklarının bir ikili patellar tendon kusur modelinde bir fare ile değerlendirilmesi açıklanmaktadır. Bu model ile kabul edilebilir bir hastalık ilişkili ve tedavi edilmezse ve tedavi tendon arasındaki farklılıkları algılamak için bulundu ve iki tedaviler arasında test.

Kök hücre tedavileri Sıçanlarda bir ikili Patellar Tendon yaralanma modelinde değerlendirilmesi

Regenerative medicine provides novel alternatives to conditions that challenge traditional treatments. The prevalence and morbidity of tendinopathy across ...

Bu iki taraflı sıçan modelinin genel hedefleri, hayvanların kullanımını optimize etmek ve tendon defektleri için tedavi adaylarını değerlendirmektir. Bu yöntem, ortopedik alandaki tüm önemli soruları yanıtlamaya yardımcı olabilir. Tendinopati üzerine hücresel tedavinin değerlendirilmesi gibi.Bu modelin temel avantajı, bireyler arası varyasyonu kontrol etmesi ve böylece tedaviler arasındaki farkları tespit etmek için gereken hayvan sayısını azaltmasıdır. Modelin görsel gösterimi kritiktir, çünkü sıçanlarda bilateral standardize patella tendon defektlerinin yaratılmasının öğrenilmesi zordur. Model, küçük yapılar üzerinde çalışırken yerel anatomi hakkında iyi bir bilgi, güçlü temel cerrahi beceriler ve hassasiyet gerektirir.Başlamak için, hasat edilmiş bir at göbek kordonunu antibiyotik içeren oda sıcaklığında PBS kullanarak 50 mililitrelik bir tüpte iki kez yıkayın. Daha sonra, dokuyu 150 milimetrelik bir plakaya aktarın ve iki inç uzunluğunda parçalara ayırın. Daha sonra parçaları 50 mililitrelik bir tüpe aktarın ve kanı çıkarmak için antibiyotik içeren PBS ile yıkayın.Bunu oda sıcaklığında iki veya üç kez yapın. Daha sonra, göbek kordonunun parçalanmış kısımlarını, uzunluğu boyunca

evaluation-stem-cell-therapies-bilateral-patellar-tendon-injury-model

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Tavşan diz eklemi osteokondral defektlerinin tedavisi için bir deney tekniği tarif edilmektedir. Osteokondral kusurları içine allojenik mezenkimal kök hücrelerin implantasyon doku mühendisliği alanında umut verici bir gelişme sağlar. Fibrin pıhtısı hücre...

Fibrin pıhtısı içinde allojenik Mezenkimal Kök Hücre implantasyonu ile Tavşan Diz Eklemi içinde Osteokondral Kusur tedavisi

Bu protokol, gama sintigrafisi kullanarak hücre sağkalımını ve doku dağılımını belirlemek için at mezenkimal kök hücrelerinin radyo-etiketlenmesini ve bunların attaki tendon yaralanmalarına implantasyonunu açıklar.

Atçılık tendinopatisinde Kemik İliği Mezenkimal Kök Hücreler Etiketli Teknesyum- 99m Vivo Görüntüleme ve Takip

Hayvan modelleri, doku mühendisliği yapılmış greftlerin değerlendirilmesi için önemli araçlardır. Bu makale, ön çapraz bağ dokusu mühendisliğinde kullanılmak üzere elektroeğrilmiş biyobozunur polimer greft hazırlama protokolünün yanı sıra bir sıçan modelinde implantasyon için bir cerrahi protokol sunmaktadır.

Engineered Ön Çapraz Bağ Greftlerinin Değerlendirme Atimik Rat Modeli

Peroneal sinirin uyarılmasını ve sıçan arka ayağının anterior krural kompartmanının kasılmasını takiben ayağın dorsifleksiyonunu ölçmek için bir in vivo protokol tarif ediyoruz. Bu tür ölçümler, iskelet kası patolojisini ve kas onarımı ve rejenerasyonuna yönelik doku mühendisliği yaklaşımlarını değerlendirmek için vazgeçilmez bir translasyonel araçtır.

Uygulamaları<em&gt; İn Vivo</em&gt; Doku değerlendirilmesi için Rat Tibialis Anterior Fonksiyonel Test İskelet Kası Onarım Engineered

Bu iletişim kuralı tendon allojeneik trombosit zengin plazma (PRP) ya da tuzlu Çözümle Aşil tendonu parçası çıkardıktan sonra enjekte edilmiş Sıçanlarda şifa değerlendirme işlemini açıklar. Tendon şifa ilerlemesini analizleri farklı türleri kullanarak birkaç saat noktalarda değerlendirilir.

Allojeneik trombosit açısından zengin plazma (PRP) kesitli Aşil tendon sıçan iyileşme süreci üzerine etkileri: metodolojik bir açıklama

Üç boyutlu tek boyutlu tek eksenli mekanik stimülasyon biyoreaktör sistemi tendon kaynaklı kök hücrelerin tenojenik spesifik farklılaşması ve neo-tendon oluşumu için ideal bir biyoreaktördür.

Tendon Türevi Kök Hücrelerin Tenojenik Farklılaşmasını İndüklemek Için Üç Boyutlu Tek Eksenel Mekanik Stimülasyon Biyoreaktör Sistemi Uygulama

Bu protokol, sıçanların femoral troklear oluğunda delikler açarak ve sonraki ağrı davranışını ve histopatolojik değişiklikleri ölçerek tam kat kıkırdak defektleri (FTCD) modeli oluşturur.

Tam Kat Kıkırdak Defektlerinin Sıçan Modelinin Geliştirilmesi ve Değerlendirilmesi

Bu çalışma, kronik benzeri bir tavşan rotator manşet (RC) yaralanması oluşturma prosedürlerini detaylandırmaktadır. Spesifik olarak, yaralanma, şiddetli kas yağ dejenerasyonu (FD) dahil olmak üzere insan RC anatomisini ve patofizyolojisini taklit etmek için subskapularis (SSC) kas-tendon/miyotendinöz ünitede oluşturulur. Bu protokol, RC yaralanmalarını incelemek ve rejeneratif tedavileri değerlendirmek için uygulanabilir.

Fibrozis ve Kas Yağ Dejenerasyonunun İncelenmesi için Tavşan Kronik Benzeri Rotator Manşet Yaralanma Modelinin Geliştirilmesi

Burada, yük taşıyan tendon çekirdek dokusu ile hastalık ve yaralanma ile aktive olan hücre popülasyonlarını içeren bir dışsal bölme arasındaki tendon hücresel karışmasını taklit etmek için bir asambloid model sistemi sunuyoruz. Önemli bir kullanım durumu olarak, sistemin dışsal endotel hücrelerinin hastalıkla ilgili aktivasyonunu araştırmak için nasıl konuşlandırılabileceğini gösteriyoruz.

Hastalık ve Onarımda Hücresel Karışmayı Araştırmak için Mühendislik Tendon Toplulukları

Bir Fare Modeli Utero Organ Nakli

Öğrenin, sıçanlarda ikili patellar tendon yaralanma modeliyle kök hücre tedavilerinin etkinliğini değerlendirme yöntemini. Bu model, bireyler arası varyasyonu kontrol ederek daha güvenilir ortopedik araştırma sonuçları sağlar.

Kök hücre tedavileri Sıçanlarda bir ikili Patellar Tendon yaralanma modelinde değerlendirilmesi

Daha fazla video keşfet