Yazılımı kullanarak ve soğutma aygıtlarının balık Sperm değerlendirmesi

Bu prosedürün temel amacı, başarılı yapay döllenmeye katkıda bulunmak için spermatozoa motilitesine dayalı olarak balık sperm kalitesini analiz etmektir. Ben Dr.Carles Soler, Valencia Üniversitesi'nde profesör ve PROiSER R+D'nin bilimsel direktörüyüm. Ben Carina Caldeira, Impress Project'ten bir bursiyerim.

CASA teknolojisi, bilgisayar destekli bir semen analizi kullanılarak memeli türlerinin semen analizi için birkaç on yıl önce geliştirilmiştir. Balık söz konusu olduğunda, iki şeyi hesaba katmak gerekir. Birincisi, bu hayvanların normalde düşük sıcaklıklarda, yaklaşık dört derece civarında gübreleme yapıyor olmaları ve bu nedenle spermayı ev sıcaklığında analiz etmenin mümkün olmaması, ancak numunelerin soğutulması için özel araçlar geliştirmenin gerekli olmasıdır.

Diğer sorun, aktivasyondan sonra motilitenin çok hızlı bir şekilde azalmasıdır ve bu gerçeği analiz etmek, kalitenin veya semen kalitesinin analizi için iyi bir anın ne olduğunu tanımlamak için gereklidir. Bu yüzden, balık sperminin analizini göstereceğiz ve bu protokol memeli protokolünün bir modifikasyonu olacak ve kullanarak motilite analizini içerecektir. Öyleyse başlayalım. Balıklar hormon enjeksiyonu için uyuşturulur ve 24 saat sonra sperm örnekleri toplanır.

Kontaminasyonu önlemek için genital bölge temizlenir. Sperm hafif bir baskı uygulanarak toplanır. Sperm örnekleri, motilite analizleri yapılana kadar dört derecede tutulur.

Seyreltici ve aktivatör önceden hazırlanır. Numuneleri sabit bir sıcaklıkta tutmak için soğutucu bloğu dört dereceye ayarlayın. Stabilize olana kadar bekleyin.

Sperm örneklerini her tür için özel seyreltici kullanarak seyreltin. Avrupa yılan balığı için sperm, P1 ortamında 1:50 oranında seyreltilir. 500 mikrolitre seyreltilmiş sperm hazırlayın, 450 mikrolitre P1 ve 50 mikrolitre taze sperm örneği ekleyin.

İyice karıştırın. Aktivatör çözeltisinin dörtte birini alın ve soğutucu bloğa yerleştirin. Soğutucu aşamasını dört dereceye ayarlayın.

Stabilize olana kadar bekleyin. Motilite modülünü seçin ve gerekirse bir ad ve şifre kullanın. Özellikler'i seçin.

Türlere tıklayın ve balıkları seçin. Saniyedeki kare sayısını ve kullanmak istediğiniz görüntü sayısını seçin. Negatif kontrast kullanmak zorunludur.

İlgili sayma haznesini ve ölçeği seçin. Her tür için parçacık alanını ve bağlanabilirliği uyarlayın. Avrupa yılan balığı için minimum parçacık alanı iki ve bağlantı yedi olmalıdır.

Yapılandırmayı kaydedin. Yakalamayı açın. Dört mikrolitre aktivatör çözeltisi alın ve hazneye yerleştirin.

Seyreltilmiş spermi iyice homojenize edin. 5 mikrolitre sperm alın ve aktivatör ile karıştırın. Kapağı yerleştirin.

Örneğe odaklanın ve en iyi görsel alanı bulun. Hıza göre ayrılmış spermatazoa izlerini elde etmek için video yakala'yı seçin. Daha fazla alan yakalanabilir.

Yakala'yı seçin ve daha önce olduğu gibi devam edin. Tüm alanların genel bir görünümünü elde etmek için çıkışa tıklayın. Sperm yakalamaları aktivasyon sonrası belirli zaman aralıklarında alındı.

Bununla birlikte, her bir zaman aralığı tekrarı için sperm analizi yapıldı. Her zaman aralığı için kısmi rapor, alanlar seçilerek ve kısmi üzerine tıklanarak elde edilebilir. Excel sayfası, kısmi verilerin, çizelgelerin ve spermatozoa izlerinin görüntülerinin ortalama değerlerini sağlar.

Aynı işlemi diğer alanlar için de tekrarlayın. Diğer seçenek ise genel verilerdir. Bu veriler, tüm alanların bireysel spermatozoaları için kinetik değerler sağlar.

Kısmi raporla, farklı zamanlar için yüzde motilite ve ilerleme, pasta grafikler kullanılarak hemen karşılaştırılabilir. Genel veriler, kinetik parametreleri kullanarak çeşitli istatistiksel analizler elde etme seçeneği sunar. Spermatozoa izleri üç parametre verir.

VCL, eğri hızı, VSL, ilerleyici hız ve VAP, yol hızı. VCL en önemli parametredir ve saniyedeki kare sayısına göre değişir. Kare sayısını artırarak, VCL de artar ve mükemmele yakın bir iz analizine olanak tanır.

En iyi kare hızı türlere göre değişebilir. Amaç, VCL'nin en yüksek değerini bulmaktır, bundan sonra sayma odaları gibi diğer araçlarla herhangi bir potansiyel fark gözlemlenebilir. Alt popülasyonlar şu anda sperm örneği hakkında daha fazla bilgi veren önemli bir istatistiksel analizdir.

Bu, Atlantik somonu sperm örneklerine bir örnektir. Esaret altında üretilen farklı nesillerde farklı spermatozoa alt popülasyonları gözlemlenebilir. Balık sperm analizi için bir bilgisayar sisteminin nasıl kullanılacağını ve ayrıca sayma odası, sıcaklık ve kare hızları gibi teknik ve metodolojik yönlerin nasıl optimize edileceğini gösterdik.

Dolayısıyla, bu verilerle, sadece su ürünleri yetiştiriciliği için değil, aynı zamanda koruma programları, filogenetik çalışmalar veya spermatozoa popülasyonu hakkındaki bilgileri artırmak için balık yetiştiriciliği gibi farklı alanlarda çok sayıda analiz yapabiliriz. Bu nedenle, bu protokolün çalışmalarınızda size yardımcı olacağını umuyorum.