Temporal LOB epilepsi ve EEG farelerde Radiotelemetry sistemini kullanarak izleme Pilokarpin modeli

Bu el yazması sistemik Pilokarpin enjeksiyonu ile durum Epileptikus inducing ve canlı hayvan bir radyo telemetri video ve electroencephalogram sistemi kullanarak tekrarlayan spontan ele geçirme vakaları izleme yöntemi açıklanır. Bu iletişim kuralı kronik epilepsi, epileptogenesis ve akut nöbetleri Etyopatogenezi mekanizmaları eğitim için yararlı olabilir.

Bu prosedürün genel amacı, pilokarpin kullanarak status epileptikusu indüklemek ve farelerde bir radyotelemetri sistemi kullanarak spontan tekrarlayan nöbetleri izlemektir. Bu protokol akut nöbetler, epileptogenez ve kronik epilepsinin patofizyoloji mekanizmalarını incelemek için kullanılabilir. Bu tekniğin en önemli avantajı, akut nöbetler sonrası yüksek sağkalım oranı ile spontan tekrarlayan nöbetler gösteren bir kronik epilepsi fare modeli sunmasıdır.

Prosedürü göstermek, laboratuvarımda doktora sonrası araştırmacı olan Dr.Ji-Eun Kim olacak. Her sekiz haftalık erkek fareyi tartarak başlayın. Bir kilogram skopolamin ve terbutalin başına iki miligram ve ayrıca bir kilogram pilokarpin çözeltisi başına 280 miligram yapın.

Daha sonra, çözeltiyi her fareye intraperitoneal olarak enjekte edin ve fareleri kafeslerine geri koyun. Skopolamin ve terbutalin uygulamasından 30 dakika sonra, her fareye pilokarpin çözeltisi enjekte edin. Pilokarpin enjeksiyonundan hemen sonra, fareleri gözlem için 28 ila 30 santigrat derece olan bir inkübatöre yerleştirin.

Daha sonra, status epileptikus veya SE indüklenene kadar farelerin davranışını izleyin. Racine ölçeğine göre üçüncü aşamaya veya daha yüksek aşamaya karşılık gelen limbik motor nöbetleri tespit edilirse, zamanı kaydedin ve fareleri izleyin. Sürekli motor nöbetleri iki dakikadan fazla sürdüğünde, fareyi oda sıcaklığında yeni bir kafese yerleştirin ve konvülsif nöbetlerinin devam edip etmediğini ve SE'nin indüklenip indüklenmediğini belirlemek için üç saat boyunca izlemeye devam edin.

Daha sonra, kilogram diazepam çözeltisi başına 10 miligram enjekte ederek SE başlangıcından üç saat sonra davranışsal akut nöbetleri sonlandırın. Diazepam enjeksiyonundan sonra, iyileşmeye yardımcı olmak için her bir fare başına bir mililitre% 5 dekstroz uygulayın. SE indüksiyonundan sonraki birinci günde, fareleri tartın ve bir gün daha inkübatörde tutun.

SE indüksiyonundan sonraki ikinci günde, fareleri tartın ve onları ev kafeslerine geri koyun. İyileşmeyi kolaylaştırmak için nemli yiyecekler sağlayın. Son olarak, pilokarpinden yedi gün sonrasına kadar hayvanların günlük vücut ağırlığını ölçün.

Vücut ağırlığı artmadıysa, farelere% 5 dekstroz enjekte edin. EEG izlemesi için telemetri implantasyonu yapmak üzere SE indüksiyonundan dört hafta sonra 12 haftalık fareleri hazırlayın. Fareyi kulak çubukları ve ısırma plakası olan stereotaksik bir çerçeveye yerleştirin ve körlüğü önlemek için her iki göze de veteriner merhemi sürün.

Ardından, ameliyat sırasında steril koşulları korumak için, cerrahi bölgeleri bir tıraş bıçağı kullanarak tıraş edin ve cerrahi alanın kürk kontaminasyonunu önlemek için dikkatli olun. Tıraştan sonra cildi% 70 etanol ve iyot çözeltisi ile dezenfekte edin. Ardından, cildi PBS ile ıslatılmış pamuklu çubuklarla, ardından% 70 etanol ve iyot çözeltisiyle silin.

Lambda, bregma ve hedef konumu ortaya çıkarmak için başın ortasında makasla uzunlamasına bir kesi yapın. Ardından, matkap ucunu bregma'ya yerleştirin ve vidaların koordinatlarını hesaplamak için bu nokta için X, Y koordinatlarını not edin. Ardından, kafatasının inceldiği noktada matkap ucunu çok uzağa sokmamaya dikkat ederek bir çapak deliği açmak için matkap ucunu yavaşça indirin.

Tek kanallı kablosuz EEG vericisinin gövdesini deri altından ense arkasına yerleştirin ve esnek uçları kafatasının yanına yerleştirin. Ardından, cımbızla her çapak deliğine paslanmaz çelik bir vida yerleştirin ve bir tornavida kullanarak saat yönünde çevirerek sıkın. Dura veya beyin dokularına zarar vermemek için vidanın çok derine yerleştirilmediğinden emin olun.

Yalıtım kaplamasını kabloların ucundan iki milimetre sıyırın ve tel ile vida arasında iyi bir bağlantı için teli vida milini dolayacak kadar uzun süre gerin. Referans ucunu ön vidaya ve kayıt ucunu parietal korteksteki vidaya bağlayın. Ardından, metal parçaları açığa çıkarmadan tüm tertibatı yerine sabitlemek için diş çimentosu uygulayın.

Son olarak, diş çimentosu kuruduktan sonra cildi dikin ve topikal mupirosin merhem uygulayın. Fareyi ameliyattan iyileşene kadar tek başına 30 derecelik bir inkübatöre yerleştirin. Ardından, fareyi ev kafesine geri koyun.

Bilgisayar, AC hatları ve bitişik alıcılar dahil olmak üzere herhangi bir kaynaktan gelen elektrik sinyallerinin kesilmesini önlemek için fareyi ayrı bir kafese yerleştirerek ve kafesi Faraday kafesinin kurulu olduğu kablosuz alıcı plakalarının üzerine yerleştirerek başlayın. Ardından, kablosuz video-EEG telemetri sistemini kullanarak elektriksel aktiviteyi kaydedin. İki hafta boyunca tespit edilen toplam SRS vaka sayısını, her bir hayvan için toplam kayıt günü sayısına bölerek nöbet sıklığını belirleyin.

Daha sonra, nöbet süresini analiz etmek için, epileptiform spiking aktivitelerinin başlangıcından sonuna kadar geçen süreyi ölçün. Video-EEG kaydının tamamlanmasından ve beynin sabitlenmesinden sonra, temizleyiciden sonra tekrar kullanmak üzere vericiyi fareden alın. Bunu yapmak için, forseps kullanarak uçların etrafındaki diş çimentosunu çıkarın.

Ardından, kabloların ucunu diş çimentosu eriyene kadar %100 asetonda diş çimentosu ile ıslatın. Ardından, vericinin etrafındaki doku kirleticilerini damıtılmış suyla durulayarak çıkarın. Son olarak, vericiyi üç saat boyunca %70 etanol ile durulayın ve saklamak için havayla kurutun.

SE'den yedi gün sonra, dentat girusun hiler bölgelerinde ve hipokampusun CA3 alt alanının piramidal hücre tabakasında piknotik hücreler tespit edildi. SE'den altı hafta sonra, hiler hücrelerin sayısında belirgin bir azalma gözlendi. Ayrıca CA1 ve CA3 bölgelerinde nöronal kayıp gözlenmiştir.

Ek olarak, fizyolojik elektriksel aktivite gösteren sham grubu ile karşılaştırıldığında, SE grubu zaman zaman konvülsif davranışlarla birlikte epileptiform deşarjlar gösterdi. İmplantasyon cerrahisi sırasında epidural vidaların aşırı derine yerleştirilmesi, sahte manipüle edilmiş hayvanlarda bile spontan nöbetlere neden olabilen kortikal yaralanmalara neden olabilir. Bir kez ustalaştıktan sonra, status epileptikus indüksiyonu ve vida implantasyonu, uygun şekilde yapılırsa bir saat içinde yapılabilir.

Bu prosedürü denerken, pilokarpin enjeksiyonu sonrası davranışsal tezahürünü hatırlamak ve implantasyon cerrahisi sırasında beyin dokularına zarar vermemek önemlidir. Bu prosedürü takiben, epilepsi ile ilişkili devre sorunları gibi ek soruları yanıtlamak için kronik epilepside hafıza ve motor problemler için davranış testi gibi diğer yöntemler de gerçekleştirilebilir. Bu videoyu izledikten sonra, farelerde status epileptikusun nasıl indükleneceğini ve kronik nöbetlerin nasıl izleneceğini iyi anlamış olmalısınız.