Name: Zebra balığı embriyo geliştirilmesinde bir Vitro tahlil hematopoetik kök ve yaratıcı Quantitate gelişimi (HSPCs) hücreleri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-11-30T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 28 s
Description: Öğrenin zebra balığı embriyolarında hematopoietik kök ve progenitör hücreleri sayma ve farklılaşmasını inceleme yöntemini. Bu hızlı ve ekonomik teknik, ilaç taraması ve genetik mutasyonların kan gelişimi üzerindeki etkilerini değerlendirmeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından sağlanan finansman (NIH: K01-DK087814-01A1 D.L.S. için), Kaliforniya Devlet Üniversitesi programı için eğitim ve araştırma biyoteknoloji (CSUPERB: omurgalı hematopoetik niş D.L.S. için moleküler kontrolü) ve California State Üniversitesi Chico (için A.C.B.) lisansüstü ofisinden.

Chico, California eyalet Üniversitesi'nde Kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) Danışma Kurulu aşağıda açıklanan tüm yöntemleri onayladı.
1. çamaşır suyu 48 hpf Zebra balığı embriyolar
<ol><li>15 cm (w) x 15 cm (l) x 7 cm (h) plastik kaplar oluşturmak 3 yıkama istasyonları: 1) ile 1 mL % 5 çamaşır suyu 1000 mL embriyo orta (E3; bkz: Tablo 1), 2) ile steril E3 ve 3) ile steril E3. Her kapsayıcı embriyo daldırın çözeltinin 500 mL olduğundan emin olun. Not: en az 10 embriyo test her koşul için gerekli olacaktır. Bu çamaşır yordamı 200 embriyo ağırlayacak.</li>
	<li>Transfer pipet ile embriyo bir çay süzgeci yerleştirin ve 5 dk. (ile embriyo içinde) çay süzgeci kaldırmak ve yıkama istasyonu #2 5 min için içine koyun yumurta yıkama istasyonu #1 daldırın; son 5 min için yıkama istasyonu #3 için yineleyin.</li>
	<li>Son yıkama sonra durulama embriyo çay süzgeci kısıtlayarak bu baş aşağı bir temiz 10 cm Petri kabına yavaşça embriyo durulama üzerinden kapalı steril E3 ile çay süzgeci ve transfer pipet.</li>
</ol>2. Dechorionate embriyo
<ol><li>Bir aktarım pipet ile kaldırın ve Petri kabına üzerinden mümkün olduğu kadar E3 atmak ve dechorionation proteaz (10 mg/mL) 500 μL embriyolar için ekleyin. 5 dk. hafifçe dokunun için tamamen chorions kaldırmak için Petri kabına yan oda sıcaklığında kuluçkaya.</li>
	<li>Serolojik pipet ile 20 mL steril E3 proteaz sulandırmak için ekleyin. Embriyo yerleşmek izin ve bir transfer pipet ile E3 kaldırın. Bu yıkama 3 kez dechorionation proteaz bütün izlerini kaldırmak için adımları yineleyin.</li>
</ol>3. embriyo örnekleri hazırlama
<ol><li>P1000 pipet kullanarak, 10 embriyo bir tek steril 1.5 mL microcentrifuge tüp içine yerleştirin.</li>
	<li>Bir pipet ile E3 kaldırmak ve atın. Dikkat: embriyo kolayca yerinden ve yıkama aşağıdakileri sırasında atılır gibi özenle pipet.</li>
</ol>4. embriyo ayrılma için hazırlanması
<ol><li>Laminar akış Hood'a örnekleri aktarmak ve yıkama embriyo 1 mL ekleyerek steril E3. Embriyo tüp altına yerleşmek ve süpernatant P1000 pipet ile kaldırmak izin verir. Toplam 3 yıkama için işlemi yineleyin.</li>
	<li>Son yıkama sonra E3 kaldırmak ve atın. 10 mM dithiothreitol (DTT) 1 mL mukus kaplama (ve herhangi bir sporlar, mantar veya bakteri içinde sıkışmış) embriyonik Zebra balığı çevreleyen kaldırmak için E3 içinde ekleyin. Microcentrifuge tüp yatay olarak yatıyordu ve laminar akış başlıklı 25 min için oda sıcaklığında kuluçkaya.</li>
</ol>5. embriyo ayrılma
<ol><li>Örnek 3 kez ile 1 mL steril DPBS (Ca2 + ve Mg2 +ile) yıkayın. Sonra son yıkama DPBS 500 μL (ile Ca2 + ve Mg2 +) ekleyin ve 5 mg/mL (26 U/mL) ayrılma proteaz 5 μL ekleyin. Dikkat: Bu enzim Ca2 + ve Mg2 +ihtiyacı var, bu yüzden DPBS Bu iyonlar içerdiğinden emin olun.</li>
	<li>Örnekleri üzerinde 60 dk. yer örnekleri laminar akış Hood için bir yatay orbital Çalkalayıcı-180 rpm'de 37 ° C'de kuluçkaya ve örnekleri tam ayrışmış kadar embriyo bir P1000 ile triturate. Dikkat: embriyo düzenli olarak ne zaman onlar ayrışmış haline belirlemek için denetleyin. Embriyo çözüm bir miktar doku mevcut olmalıdır; tamamen homojen olmaması gerekir. Mümkündür (bkz. ek şekil 1) HSPCs yok edecek aşırı Özet.</li>
</ol>6. Disosiye embriyo hazırlanması
<ol><li>Ayrışmış pipet 10 embriyo 5 mL polistiren üst rezervuarı üzerine alt tüp 35 mikron hücre süzgeç kap ile yuvarlak.</li>
	<li>Bir pipet ile durulama Petri tüp (Ca2 + veya olmayan Mg2 +) steril PBS ve 5 mL polistren tüp içeren transfer çözüm adım 6.1 hücrelerden filtre. Sıvı 4 mL 5 mL polistren tüp mevcuttur kadar yineleyin. Not: Ca2 + veya Mg2 + içerdikleri değil sürece PBS, DPBS veya diğer izotonik tamponlu çözümleri bu aşamada kullanılabilir
</li>
	<li>4 ° C ve 300 x g homojenize hücre örnek cips 5 min için tüpler santrifüj kapasitesi. Bir pipet ile kaldırmak ve yuvarlak alt tüp süpernatant atın. Tüp alt kısmında pelleted hücreleri bozmak değil için dikkat ediniz. PBS 100 μL hücrelerde resuspend.</li>
</ol>7. Methylcellulose hazırlanması
<ol><li>1 x tam methylcellulose (Tablo 1) hisse senedi çözüm üretmek ve 2.5 mL steril yuvarlak alt 14 mL tüpler 3 mL şırınga ve 16 G iğne ile ekleyin. Bir tüp test her koşul için kullanın.</li>
	<li>
Sitokinler, küçük moleküller veya diğer ajanlar her örnek için soruşturma olması için ekleyin.
	<ol>
<li>Myeloid farklılaşma için uyarıcı faktör (Gcsf)34 methylcellulose orta % 1 sazan serum ve 0.3 mg/mL rekombinant Zebra balığı granülosit koloni ekleyin. Bkz: Svoboda vd. 37 sazan serum ve rekombinant sitokinler oluşturmak nasıl tam açıklama için.</li>
		<li>Erythroid farklılaşma için % 1 sazan serum ve 0.1 mg/mL rekombinant Zebra balığı Eritropoietin (Epo)38 methylcellulose Orta olarak ekleyin.</li>
		<li>Multilineage ataları incelemek için Epo ve Gcsf ekleyin. Dikkat: Orta bireysel kolonileri ayırt etmek viskoz olmayacak gibi sitokinler ve katkı maddeleri toplam hacminin % 10 daha fazla toplam değil.</li>
	</ol>
</li>
</ol>8. Methylcellulose için Disosiye embriyo eklenmesi
<ol><li>Bir pipet kullanarak 100 μL Disosiye 10 embriyoların rekombinant sitokinler ve sazan serum ile hazırlanmış methylcellulose yüzeyine ekleyin. Cap kapak ve yavaşça tam örnek homojenize girdap. Her tüp Şimdi 10 embriyo Disosiye dokusunun içermelidir.</li>
	<li>3 mL şırınga ve 16 G iğneler, aliquot 1 mL örnek içine 2 ayrı 35 mm Petri yemekler kullanarak. Örnek tamamen Petri kabına dağınık olduğunu emin olun. Her örnek için yineleyin.</li>
	<li>35 mm Petri yemekler hücreleri ile methylcellulose içinde bir 15 cm Petri kabına yerleştirin. Her 15 cm yemek için bir 35 mm Petri tabağı ile 5 mL steril su örnekleri nemlendirmek için ekleyin. 32 ° C ve % 5 CO2 ' de 7-10 gün kuluçkaya.</li>
</ol>9. görselleştirme birimleri (CFUs) oluşturan Colony HSPC elde edilen
<ol><li>7 gün sonra kuluçka, 40-100 X görselleştirme ve numaralandırma örnekleri ters bir mikroskop üzerine yerleştirin. Bu noktada, bireysel kolonileri bir pipet ile izole ve boyama ve/veya gen analize tabi.</li>
</ol>

<ol><li>Kondo, M., Weissman, I. L., Akashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+clonogenic+common+lymphoid+progenitors+in+mouse+bone+marrow%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Identification of clonogenic common lymphoid progenitors in mouse bone marrow.</a> Cell. 91, 661-672 (1997).</li>
<li>Akashi, K., Traver, D., Miyamoto, T., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+clonogenic+common+myeloid+progenitor+that+gives+rise+to+all+myeloid+lineages%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A clonogenic common myeloid progenitor that gives rise to all myeloid lineages.</a> Nature. 404, 193-197 (2000).</li>
<li>Bertrand, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Haematopoietic+stem+cells+derive+directly+from+aortic+endothelium+during+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Haematopoietic stem cells derive directly from aortic endothelium during development.</a> Nature. 464, 108-111 (2010).</li>
<li>Kissa, K., Herbomel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+stem+cells+emerge+from+aortic+endothelium+by+a+novel+type+of+cell+transition%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Blood stem cells emerge from aortic endothelium by a novel type of cell transition.</a> Nature. 464, 112-115 (2010).</li>
<li>Bertrand, J. Y., Kim, A. D., Teng, S., Traver, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD41%2B+cmyb%2B+precursors+colonize+the+zebrafish+pronephros+by+a+novel+migration+route+to+initiate+adult+hematopoiesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">CD41+ cmyb+ precursors colonize the zebrafish pronephros by a novel migration route to initiate adult hematopoiesis.</a> Development. 135, 1853-1862 (2008).</li>
<li>Bertrand, J. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Definitive+hematopoiesis+initiates+through+a+committed+erythromyeloid+progenitor+in+the+zebrafish+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Definitive hematopoiesis initiates through a committed erythromyeloid progenitor in the zebrafish embryo.</a> Development. 134, 4147-4156 (2007).</li>
<li>Ma, D., Zhang, J., Lin, H. F., Italiano, J., Handin, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+identification+and+characterization+of+zebrafish+hematopoietic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">The identification and characterization of zebrafish hematopoietic stem cells.</a> Blood. 118, 289-297 (2011).</li>
<li>Lam, E. Y., Hall, C. J., Crosier, P. S., Crosier, K. E., Flores, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+imaging+of+Runx1+expression+in+the+dorsal+aorta+tracks+the+emergence+of+blood+progenitors+from+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Live imaging of Runx1 expression in the dorsal aorta tracks the emergence of blood progenitors from endothelial cells.</a> Blood. 116, 909-914 (2010).</li>
<li>Lam, E. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+runx1+promoter-EGFP+transgenics+mark+discrete+sites+of+definitive+blood+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Zebrafish runx1 promoter-EGFP transgenics mark discrete sites of definitive blood progenitors.</a> Blood. 113, 1241-1249 (2009).</li>
<li>Lin, H. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+thrombocyte+development+in+CD41-GFP+transgenic+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Analysis of thrombocyte development in CD41-GFP transgenic zebrafish.</a> Blood. 106, 3803-3810 (2005).</li>
<li>Driever, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+genetic+screen+for+mutations+affecting+embryogenesis+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">A genetic screen for mutations affecting embryogenesis in zebrafish.</a> Development. 123, 37-46 (1996).</li>
<li>Weinstein, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematopoietic+mutations+in+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Hematopoietic mutations in the zebrafish.</a> Development. 123, 303-309 (1996).</li>
<li>Ransom, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+zebrafish+mutants+with+defects+in+embryonic+hematopoiesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Characterization of zebrafish mutants with defects in embryonic hematopoiesis.</a> Development. 123, 311-319 (1996).</li>
<li>Amsterdam, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+large-scale+insertional+mutagenesis+screen+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">A large-scale insertional mutagenesis screen in zebrafish.</a> Genes Dev. 13, 2713-2724 (1999).</li>
<li>Gaiano, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insertional+mutagenesis+and+rapid+cloning+of+essential+genes+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Insertional mutagenesis and rapid cloning of essential genes in zebrafish.</a> Nature. 383, 829-832 (1996).</li>
<li>Yeh, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discovering+chemical+modifiers+of+oncogene-regulated+hematopoietic+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Discovering chemical modifiers of oncogene-regulated hematopoietic differentiation.</a> Nat Chem Biol. 5, 236-243 (2009).</li>
<li>Paik, E. J., de Jong, J. L., Pugach, E., Opara, P., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+chemical+genetic+screen+in+zebrafish+for+pathways+interacting+with+cdx4+in+primitive+hematopoiesis%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">A chemical genetic screen in zebrafish for pathways interacting with cdx4 in primitive hematopoiesis.</a> Zebrafish. 7, 61-68 (2010).</li>
<li>Ridges, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+screen+identifies+novel+compound+with+selective+toxicity+against+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Zebrafish screen identifies novel compound with selective toxicity against leukemia.</a> Blood. 119, 5621-5631 (2012).</li>
<li>North, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prostaglandin+E2+regulates+vertebrate+haematopoietic+stem+cell+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Prostaglandin E2 regulates vertebrate haematopoietic stem cell homeostasis.</a> Nature. 447, 1007-1011 (2007).</li>
<li>Astuti, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Functional+Bioluminescent+Zebrafish+Screen+for+Enhancing+Hematopoietic+Cell+Homing%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">A Functional Bioluminescent Zebrafish Screen for Enhancing Hematopoietic Cell Homing.</a> Stem Cell Reports. 8, 177-190 (2017).</li>
<li>Kiel, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SLAM+family+receptors+distinguish+hematopoietic+stem+and+progenitor+cells+and+reveal+endothelial+niches+for+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">SLAM family receptors distinguish hematopoietic stem and progenitor cells and reveal endothelial niches for stem cells.</a> Cell. 121, 1109-1121 (2005).</li>
<li>Spangrude, G. J., Heimfeld, S., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification+and+characterization+of+mouse+hematopoietic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Purification and characterization of mouse hematopoietic stem cells.</a> Science. 241, 58-62 (1988).</li>
<li>Morrison, S. J., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+long-term+repopulating+subset+of+hematopoietic+stem+cells+is+deterministic+and+isolatable+by+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">The long-term repopulating subset of hematopoietic stem cells is deterministic and isolatable by phenotype.</a> Immunity. 1, 661-673 (1994).</li>
<li>Osawa, M., Hanada, K., Hamada, H., Nakauchi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+lymphohematopoietic+reconstitution+by+a+single+CD34-low%2Fnegative+hematopoietic+stem+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Long-term lymphohematopoietic reconstitution by a single CD34-low/negative hematopoietic stem cell.</a> Science. 273, 242-245 (1996).</li>
<li>Goodell, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dye+efflux+studies+suggest+that+hematopoietic+stem+cells+expressing+low+or+undetectable+levels+of+CD34+antigen+exist+in+multiple+species%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Dye efflux studies suggest that hematopoietic stem cells expressing low or undetectable levels of CD34 antigen exist in multiple species.</a> Nat Med. 3, 1337-1345 (1997).</li>
<li>Goodell, M. A., Brose, K., Paradis, G., Conner, A. S., Mulligan, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+functional+properties+of+murine+hematopoietic+stem+cells+that+are+replicating+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Isolation and functional properties of murine hematopoietic stem cells that are replicating in vivo.</a> J Exp Med. 183, 1797-1806 (1996).</li>
<li>Gansner, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sorting+zebrafish+thrombocyte+lineage+cells+with+a+Cd41+monoclonal+antibody+enriches+hematopoietic+stem+cell+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Sorting zebrafish thrombocyte lineage cells with a Cd41 monoclonal antibody enriches hematopoietic stem cell activity.</a> Blood. 129, 1394-1397 (2017).</li>
<li>Smith, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+cell+transplantation+establishes+that+tumor-initiating+cells+are+abundant+in+zebrafish+T-cell+acute+lymphoblastic+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">High-throughput cell transplantation establishes that tumor-initiating cells are abundant in zebrafish T-cell acute lymphoblastic leukemia.</a> Blood. 115, 3296-3303 (2010).</li>
<li>Mizgirev, I., Revskoy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+clonal+zebrafish+lines+and+transplantable+hepatic+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Generation of clonal zebrafish lines and transplantable hepatic tumors.</a> Nat Protoc. 5, 383-394 (2010).</li>
<li>de Jong, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+immune-matched+hematopoietic+transplantation+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Characterization of immune-matched hematopoietic transplantation in zebrafish.</a> Blood. 117, 4234-4242 (2011).</li>
<li>Wolf, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+Caudal+Haematopoietic+Embryonic+Stromal+Tissue+%28CHEST%29+Cells+Support+Haematopoiesis%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Zebrafish Caudal Haematopoietic Embryonic Stromal Tissue (CHEST) Cells Support Haematopoiesis.</a> Sci Rep. 7, 44644(2017).</li>
<li>Campbell, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+embryonic+stromal+trunk+%28ZEST%29+cells+support+hematopoietic+stem+and+progenitor+cell+%28HSPC%29+proliferation%2C+survival%2C+and+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Hematol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish embryonic stromal trunk (ZEST) cells support hematopoietic stem and progenitor cell (HSPC) proliferation, survival, and differentiation.</a> Exp Hematol. 43, 1047-1061 (2015).</li>
<li>Svoboda, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissection+of+vertebrate+hematopoiesis+using+zebrafish+thrombopoietin%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Dissection of vertebrate hematopoiesis using zebrafish thrombopoietin.</a> Blood. 124, 220-228 (2014).</li>
<li>Stachura, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+granulocyte+colony-stimulating+factors+%28Gcsfs%29%3A+2+paralogous+cytokines+and+their+roles+in+hematopoietic+development+and+maintenance%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">The zebrafish granulocyte colony-stimulating factors (Gcsfs): 2 paralogous cytokines and their roles in hematopoietic development and maintenance.</a> Blood. 122, 3918-3928 (2013).</li>
<li>Stachura, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonal+analysis+of+hematopoietic+progenitor+cells+in+the+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Clonal analysis of hematopoietic progenitor cells in the zebrafish.</a> Blood. 118, 1274-1282 (2011).</li>
<li>Stachura, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+kidney+stromal+cell+lines+support+multilineage+hematopoiesis%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Zebrafish kidney stromal cell lines support multilineage hematopoiesis.</a> Blood. 114, 279-289 (2009).</li>
<li>Svoboda, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ex+vivo+tools+for+the+clonal+analysis+of+zebrafish+hematopoiesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Ex vivo tools for the clonal analysis of zebrafish hematopoiesis.</a> Nat Protoc. 11, 1007-1020 (2016).</li>
<li>Paffett-Lugassy, N., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17579187">Functional conservation of erythropoietin signaling in zebrafish.</a> Blood. 110, 2718-2726 (2007).</li>
<li>Stachura, D. L., Traver, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+dissection+of+zebrafish+hematopoiesis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Cellular dissection of zebrafish hematopoiesis.</a> Methods Cell Biol. 133, 11-53 (2016).</li>
<li>Traver, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+and+in+vivo+imaging+of+multilineage+engraftment+in+zebrafish+bloodless+mutants%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Transplantation and in vivo imaging of multilineage engraftment in zebrafish bloodless mutants.</a> Nat Immunol. 4, 1238-1246 (2003).</li>
<li>Kobayashi, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+and+localization+of+side+population+%28SP%29+cells+in+zebrafish+kidney+hematopoietic+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Characterization and localization of side population (SP) cells in zebrafish kidney hematopoietic tissue.</a> Blood. 111, 1131-1137 (2008).</li>
<li>Henninger, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonal+fate+mapping+quantifies+the+number+of+haematopoietic+stem+cells+that+arise+during+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Clonal fate mapping quantifies the number of haematopoietic stem cells that arise during development.</a> Nat Cell Biol. 19, 17-27 (2017).</li>
<li>Tamplin, O. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hematopoietic+stem+cell+arrival+triggers+dynamic+remodeling+of+the+perivascular+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Hematopoietic stem cell arrival triggers dynamic remodeling of the perivascular niche.</a> Cell. 160, 241-252 (2015).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Zebra balığı modeli sistemi ilkel ve kesin omurgalı hematopoiesis çalışmak için verimli, etkili ve ucuz bir model haline gelmiştir. Hızlı, ucuz ve az teknik zorluklar deneyleri nesil küçük moleküller testi, mutant embriyo çözümlemek ve moleküler pathways HSPC Biyoloji için önemli elucidating için yararlı olabilir. HSPCs in vitro kaplama--dan yetişkin Zebra balığı mutagenesis, sitokinler ve hematopoetik hataları incelemek için etkili bir yöntemdir. Bu iletişim kuralı bu çalışmalar kurar ama embriyonik Zebra balığ...

Hematopoiesis olgun kan hücreleri bir canlının hayatta kalmak için gerekli sayıda yapma işlemidir. Bu farklılaşma hematopoetik kök hücre (HSCs) içeren bir anahtar gelişimsel olgun kan oluşturan gelişimsel olarak sınırlı hücre tipleri çeşitli içine süreçtir. Bu HSCs böylece sistem asla yorgun ve onlar ölene kadar erken embriyonik gelişme ısrar gerekir kendini yenilemesi gerekir. Omurgalılar, sürekli farklılaşma ve hematopoetik kök ve progenitör hücrelerin (HSPCs) çoğalması yeterince sonrası Mitotik kan hücrelerinin çoğunluğu doldurmak için gerekli olan ve her gün geri dönüşümlü. HSCs ilk kısıtlı progenitör hücre alt kümeleri ayırt tarafından olgun kan hücreleri üretirler; sonunda T, B ve NK hücreleri üretmek, ortak lenfoid ataları (CLPs)1ve granülosit, eritrositler, makrofajlar ve megakaryocytes ortak Miyeloid ataları (CMPs)2 . Bu ataları belirli hücre soy oluşturmak için kararlı olan ve daha fazla daha fazla gelişim kısıtlı progenitör hücreler eritrositler ve trombosit veya granülosit oluşturmak myeloid erythroid ataları (milletvekilleri) gibi içine ayırt etmek bazofil, eozinofil, nötrofiller ve makrofajlar2üreten makrofaj ataları (GMPs). Belirlenmesi ve bu ataları yalıtma önemli moleküler yolları tanımlaması hematopoetik ayrımında yer sağlar ve lösemi gibi birçok hematopoetik hastalığın ortaya bu progenitör hücrelerin düzgün başarısız ayırt etmek.
Son birkaç on yıl içinde Zebra balığı (Danio rerio) modeli sistemi embriyonik ve yetişkin hematopoetik çalışmaları için bir anahtar araştırma aracı haline gelmiştir. Zebra balığı için genetik analiz mükellef bulunmaktadır ve bir benzer damarlara ve insanlara hematopoetik sistem filogenetik en düşük omurgalı modeli türü bulunmaktadır. Zebra balığı embriyolar rahim geliştirmek ve 48 saat sonrası içinde fertilizasyon (hpf) oluşturmak HSPCs3,4,5,6,7,8. Zebra balığı da çok bereketli, tek bir debriyaj 100 yumurta üzerinde döşeme kadın ile büyük ve deneysel çoğaltma için izin. Zebra balığı embriyo optik şeffaf, hematopoetik sistem mikroskobik görselleştirme için izin vardır. Zebra balığı HSCs runx1gibi işaretleme birkaç floresan transgenik satırlık: EGFP balık9, cd41: EGFP10, Balık ve kdrl:mCherry; cmyb: GFP3 çift pozitif hayvanlar, HSC ortaya çıkması ve genişleme vivo içinde3,4,7,8, canlı, gerçek zamanlı görselleştirme için izin 9. Zebra balığı'nın hızlı nesil zaman ve geliştirme rahim mutagenesis çalışmalar11,12,13,14,15 ve uyuşturucu kullanımı yol açmıştır insan kanı bozuklukları için tedavi edici sözü tutun bileşikler için16,17,18,19,20 eleme. Genel olarak, koruma, varlığı ve kolay geliştirebilme imkanı transgenik hatları ve hızlı yenilenme zamanı hematopoetik sistem Zebra balığı hematopoetik çalışmaları için ucuz, hızlı, esnek ve ideal bir model haline getirdi.
İzole ve HSCs test birçok yöntem içinde memeli hematopoetik sistem geliştirdik. Müfettişler bir arada hücre yüzey reseptörlerinin yanı sıra HSCs21,22,23,24işaretlemek sızma boya25,26HSCs yeteneği yararlanmak için kullanabilir. Sonra onlar etiketlenir, Floresans aktif hücre (FACS) sıralama fiziksel ayırma sağlar. Bir hücreyi bir HSC kanıtlayan sözde HSCs dikim ve uzun vadeli, çok lineage sulandırma kan hücre tipleri olgun her şeyden gözlemleyerek endojen HSPCs yok etmek için bir ev sahibi hayvan irradiating gerektirir. Çok sayıda hücre yüzeyine antikorlar hematopoetik hücreler ve bağışıklık ekimi için eşleşen kolaylaştırmak doğuştan fare suşları karşı olduğundan bu deneyleri de farelerde, iş. Ancak, birkaç Zebra balığı hematopoietik hücre yüzeyine antikorlar oluşturulan kimlik ve HSCs yalıtım engelleyen27, olmuştur. Mark ve Zebra balığı HSCs yalıtmak için en yaygın bir hücre özgü organizatörü sıra floresan protein ifade sayede sürüş Transjenik hayvanlar ile yoludur. Çalışmalar görüntülenir ve HSCs dorsal aort ventral duvar bu tekniği3,4,8,9kullanan mikroskobu ile numaralandırılan. Ultraviyole Zebra balığı28,29 klonal suşları üretilip ve MHC eşlemeli hayvanlar30' u başarılı nakli gerçekleştirdik. Ancak, bu teknikler maliyet birçok laboratuvarları engelleyici vardır, teknik olarak zor ve zaman alıcı vardır. Bu sorunlara yönelik olarak laboratuvarları varlığı, nükleer silahların yayılmasına karşı oranları ve HSPCs31,32,33ayırt etme kapasitesi için test etmek için birkaç vitro deneyleri üretilip, 34,35,36. Bu deneyleri yayılması ve HSPCs vitro31,32,33,34,35,36, kurtarma farklılaşma göster hematopoetik kusurları36ve keşfetmek ve sitokinler33,34,35test için verimli bir yöntem. Onlar da HSPC Biyoloji31,32için sorumlu genlerin tanımlamak için kullanılmıştır. Bu çalışmada, bu deneyleri bir adım daha ileri, HSPCs Nefelometri gelişmekte olan bir Zebra balığı embriyo içinde izin alıyoruz. Bu deneyleri de mutant hayvanlar HSPCs sayısında quantitate için kullanılması gereken ve hayvanlar yıkıcı hematopoetik ilaçlar ile tedavi. Aslında, bu deneyleri hızlı, mevcut birkaç teknik sorunlar ve HSPC numaraları quantitate, onların yayılması incelemek ve blok ayrımında araştırmak için ucuz yolu vardır.

<table><tbody><tr><td>Iscove'un MDM Kök Hücre Teknolojilerinde %10 Sığır Serumu Albümini</td><td>&nbsp;</td>Kalsiyum2+ ve Magnezyum2+Life Technologies ile <td>9300</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td></td> (<td>14080-055</td><td></td></tr><tr><td>HyClone PBS (1x)</td><td>GE Healthcare Yaşam Bilimleri</td><td>sh30256.01</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; DMEM 500 mL</td><td>Corning CellGrow</td><td>10-017-CV&</td><td></td></tr><tr><td>nbsp; Jambon F12 500 mL</td><td>Corning CellGrow</td><td>10-080-CV</td><td></td></tr><tr><td>FBS 500 mL</td><td>İkizler Biyo-Ürünler</td><td>100-108</td><td></td></tr><tr><td>HEPES 100 mL (1 M)</td><td>Gibco yaşam teknolojileri</td><td>15-630-080</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin / streptomisin (5000 U / mL ve 5000 mg / mL) L-Glutamin (200 mM) ile</td> <td>Corning Mediatech</td><td>30-009-CI</td><td></td></tr><tr><td>Gentamisin Sülfat 10 mL (50 mg / mL)</td> <td>Corning Mediatech</td><td>30-005-CR</td><td></td></tr><tr><td>1.5 mL MCF tüp</td><td>FisherBrand</td><td>05-408-129</td><td></td></tr><tr><td>Luer kilitli 3 mL 23gx1 enjeksiyon iğnesi</td><td>BD Safety Glide</td><td>305905</td><td></td></tr><tr><td>5 mL polistiren hücre süzgeç kapaklı yuvarlak tabanlı tüp</td><td>Corning Falcon</td><td>352235</td><td></td></tr><tr><td>Methocel MC</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>64630</td><td></td></tr><tr><td>14 mL Polistiren yuvarlak tabanlı tüp</td><td>Corning Falcon</td><td>352057</td><td></td></tr><tr><td>10 mm polistiren easygrip Petri kabı Corning</td><td>Falcon</td><td>351008</td><td></td></tr><tr><td>Librease TM</td><td>Roche Sigma-Aldrich</td><td>5401119001</td><td>ayrışma proteazı</td></tr><tr><td>Pronase</td><td>Roche Sigma-Aldrich</td><td>11459643001</td><td>dekoryonasyon proteazı</td></tr><tr><td>15 cm Petri kabı</td><td>Corning Falcon</td><td>351058</td><td></td></tr><tr><td>AB</td><td>Zebra Balığı Uluslararası Kaynak Merkezi (ZIRC)</td><td>ZL1</td><td>zebra balığı türü</td></tr><tr><td>kullanılan Dithiolthreitol (DTT)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>646563</td><td></td></tr></tbody></table>

zebra balığı embriyo geliştirilmesinde bir vitro tahlil hematopoetik kök ve yaratıcı quantitate gelişimi (hspcs) hücreleri

Development of an In Vitro Assay to Quantitate Hematopoietic Stem and Progenitor Cells (HSPCs) in Developing Zebrafish Embryos

Hematopoiesis, hematopoetik kök ve progenitör hücre (HSPCs) olgun kan oluşturan farklı hücre soy çok sayıda ayırmak önemli bir hücresel işlemidir. Yalıtım ve bu HSPCs tanımlaması zor çünkü onlar tanımlanmış ex post facto; Onlar sadece kendi farklılaşma belirli hücre soy içine sonra tanımlanabilir. Son birkaç on yıl içinde Zebra balığı (Danio rerio) hematopoiesis eğitim için bir model organizma haline gelmiştir. Zebra balığı embriyolar rahimgeliştirmek ve 48 saat sonrası döllenme (hpf) tarafından HSPC farklılaşma değerlendirmek için kesin HSPCs. deneyleri üretilip ve nükleer silahların yayılmasına karşı yetenekleri geliştirilmiştir, nakli kullanan ve sonraki sulandırma hematopoetik sisteminin yanı sıra özel transgenik hatları confocal mikroskobu ile görüntülenmesi. Ancak, bu deneyleri maliyet engelleyici, teknik olarak zor ve zaman alıcı birçok laboratuarlar için vardır. HSPCs değerlendirmek için bir vitro modeli geliştirilmesi olacak maliyet etkin, daha hızlı ve daha önce karşılaştırıldığında daha az mevcut zorluklar HSPC Biyoloji etkileyen mutagenesis ve uyuşturucu ekranlar hızlı bir şekilde değerlendirmek laboratuvarlar sağlayan yöntemlerini açıklanan. HSPCs değerlendirmek için bu roman vitro tahlil ayrışmış kaplama bütün Zebra balığı embriyo ve sadece HSPC farklılaşma ve nükleer silahların yayılmasına karşı teşvik ekleyerek eksojen faktörler tarafından gerçekleştirilir. Embriyolar tek hücrelere ayrışmış ve onları bir tek progenitör hücre ortaya koloni oluşturan birimler (CFUs) oluşturmak neden HSPC destekleyici koloni uyarıcı faktör ile kaplama. Bu deneyleri moleküler yolları daha dikkatli incelenmesi HSPC yayılması, farklılaşma ve araştırmacılar omurgalı hematopoiesis temelleri ve onun bozukluk anlamak sağlayacak yönetmelik sorumlu izin vermelidir hastalık sırasında.

Embriyonik Zebra balığı HSPC sayıları değerlendirmek için 48 hpf embriyo sindirilir, methylcellulose içinde eksojen destekleyici hematopoetik büyüme faktörleri ile kaplama ve 7 gün (şekil 1A) inkübe. 7 gün sonra koloni oluşturan birimler (CFUs) numaralandırılmış (şekil 1B) ve Görüntülü (şekil 1C) olduğunu. Eklenen farklı sitokinler kontrol ederek, bi...

Burada, hematopoetik kök ve progenitör hücreler (HSPCs) embriyonik Zebra balığı quantitate için basit bir yöntem mevcut. Disosiye Zebra balığı HSPCs methylcellulose içinde içine olgun kan ayırt destekleyici faktörler ile kaplama. Bu kan algılama kusurları ve kolayca yapılacak eleme uyuşturucu sağlar sağlar.

Zebra balığı embriyo geliştirilmesinde bir Vitro tahlil hematopoetik kök ve yaratıcı Quantitate gelişimi (HSPCs) hücreleri

Hematopoiesis is an essential cellular process in which hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) differentiate into the multitude of different cell ...

Bu testin genel amacı, gelişmekte olan zebra balığı embriyosundaki hematopoietik progenitör hücrelerin farklılaşmasını numaralandırmak ve incelemektir. Bu yöntem, gelişmekte olan bir zebra balığı embriyosunda gerçekte kaç tane kök ve progenitör hücre olduğu gibi hematopoetik alandaki bazı gerçekten önemli soruların cevaplanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, hızlı olması, nispeten ucuz olması ve gerçekleştirilmesinin kolay olmasıdır.Bu yöntem, gelişmekte olan zebra balığında bulunan progenitörlerin sayısı hakkında fikir verebilse de, araştırmacıların bir ilacın veya genetik mutasyonun kan progenitör oluşumu üzerindeki fonksiyonel etkisini ölçmelerine de olanak tanır. Bu yöntem için fikrimiz, kan gelişimi için çok önemli olduğunu varsaydığımız genleri yıktığımızda aklımıza geldi. Bu tahlil ile normal gelişen embriyolar ile morfant olan embriyolar arasındaki farkı ölçebileceğimizi öngördük.Zebra balığı embriyolarını ağartmak için, biri bir litre E3 başına bir mililitre yüzde beş çamaşır suyu içeren ve ikisi steril E3 içeren üç yıkama istasyonu oluşturmak için plastik kaplar kullanın. Bir transfer pipeti ile embriyoları bir çay süzgecine yerleştirin ve beş dakika boy

development-an-vitro-assay-to-quantitate-hematopoietic-stem

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Biz zebrafish transgenik embriyolar multiwell plakaları otomatik olarak görüntüleme ve analiz için bir sistem geliştirme raporu. Fibroblast Büyüme Faktörü muhabiri gen ekspresyonu üzerine küçük bir molekül, BCI, doza bağımlı etkileri ölçmek ve yüksek verimli zebrafish kimyasal ekranlar kurulması için teknoloji yeteneğini göstermektedir.

Zebrafish kimyasal ekranlar için otomatik görüntüleme ve analiz geliştirilmesi.

Zebra balığı, küçük tropikal balık, omurgalı geliştirme ve hastalık sırasında gen fonksiyonu çalışmak için popüler bir model haline gelmiştir. Hedef genlerin uzaysal ve zamansal ifade ile tespit...

Yüksek Çözünürlüklü Tüm Dağı<em&gt; Yerinde</emGen İfade ve Fonksiyon Eğitim için Zebra balığı Embriyolar içinde&gt; Hibridizasyon

Zebra balığı, daha yüksek omurgalılarla genetik benzerlikleri nedeniyle gelişimsel biyoloji ve insan hastalıkları araştırmaları için güçlü bir model sistemdir. Bu protokol, erken embriyogenez için gerekli olan genlerdeki resesif mutasyonları tanımlamak için ileri tarama stratejileri için kullanılabilecek haploid zebra balığı embriyoları oluşturmak için bir metodolojiyi açıklar.

Haploit Zebra balığı Embriyolar üretimi ile<em&gt; In Vitro</em&gt; Gübreleme

Bu protokol, zebra balığı embriyolarından tek hücreleri izole etmek, ilgilenilen hücreleri zenginleştirmek, mikroakışkan tabanlı tek hücreli multipleks sistemlerde zebra balığı hücrelerini yakalamak ve tek hücrelerden gen ekspresyonunu değerlendirmek için bir yöntemi tanımlar.

İzolasyon ve Zebra balığı Embriyolar gelen Tek Hücre Karakterizasyonu

Hematopoetik kök ve progenitör hücreler (HSPC) henüz küçük bazı endotel hücreleri kan yapıcı olmaya belirtmek hangi işlemi hakkında bilinen, gelişim sırasında uzman (hemogenic) endotel hücreleri kaynaklanıyor. Bu fare embriyonik dokulardan hemogenic endotel hücreleri ve HSPC eşzamanlı izolasyonu sağlayan bir akış-sitometri göre bir yöntem ortaya koymaktadır.

Fare Embriyonik Hemogenic endotel hücrelerinin izolasyonu

Bu protokol, farklı genetik geçmişlere sahip parabiyotik zebra balığı embriyolarının nasıl oluşturulacağına dair adım adım talimat sağlar. Zebra balığı embriyosunun benzersiz görüntüleme yetenekleriyle birleştirildiğinde, bu yöntem, ilgilenilen aday genler için hücre özerk ve hücre özerk olmayan işlevleri araştırmak için benzersiz derecede güçlü bir araç sağlar.

Blastulae Gelişmekte Cerrahi Fusion tarafından Parabiyotik balığı Embriyolar Üretimi

Burada sunulan zebra balığı ve tüp oluşumu tahlil de hasta kaynaklı pluripotent kök hücre kaynaklı endotel hücrelerinde tam montaj in situ RNA hibridizasyon analizi için bir protokol vasküler oluşumunda endoglin rolünü incelemektir.

Zebrabalığı Embriyolarında Situ Hibridizasyon ve IPSC-EC'lerde Tüp Oluşumu Nda Endoglin'in Vasküler Gelişimdeki Rolünü İncelemek İçin Tam Montaj

Bu çalışma, uygun maruzkalma yöntemlerinden embriyo işleme ve etanol analizine kadar kafa uzayı gaz kromatografisi kullanarak zebra balığı embriyosundaki etanol düzeylerini ölçmek için bir protokol tanımlamaktadır.

Kafa Uzayı Gaz Kromatografisi Kullanan ZebraBalığı Embriyolarında Etanol Düzeylerinin Ölçülmesi

Bu tahlil, embriyonik zebra balığı geliştirmede hematopoetik hücreleri miktarlandırmak için basit bir yöntemdir. Ayrışmış zebra balıklarından alınan kan hücreleri akış sitometrisi analizine tabi tutulur. Bu, mutant hayvanlarda ve genetik modifikasyondan sonra kan kusurlarının tespit edilmesine izin verir.

Gelişmekte Olan Zebra Balıklarında Değiştirilmiş Kan Oluşumunu Tespit Etmek ve Nicel hale Getirmek için Akış Sitometrisini Kullanma

Burada, iki zebra balığı (Danio rerio) hücre hattının sferoidlerinin oluşumu için etkili, kolay ve hızlı bir 3D kültür protokolü sunuyoruz: ZEM2S (embriyo) ve ZFL (normal hepatosit).

Embriyonik ve Karaciğer Zebra Balığı Hücre Hatlarının Sferoidlerinin 3D Kültür Yöntemi

Bu protokol, zebra balığı embriyolarında kardiyak morfolojiyi ve işlevi değerlendirmek için düşük maliyetli bir ışık mikroskobu yöntemini açıklar ve gelişmiş görüntüleme sistemlerine ihtiyaç duymadan gelişimsel kardiyotoksisitenin tekrarlanabilir değerlendirmesini sağlar.

Zebra Balığı Embriyolarında Standart Mikroskopi ve Video Analizi Kullanılarak Fonksiyonel Kardiyak Görüntüleme: Çevresel ve Biyomedikal Araştırmalarda Uygulamalar

Öğrenin zebra balığı embriyolarında hematopoietik kök ve progenitör hücreleri sayma ve farklılaşmasını inceleme yöntemini. Bu hızlı ve ekonomik teknik, ilaç taraması ve genetik mutasyonların kan gelişimi üzerindeki etkilerini değerlendirmeyi sağlar.

Zebra balığı embriyo geliştirilmesinde bir Vitro tahlil hematopoetik kök ve yaratıcı Quantitate gelişimi (HSPCs) hücreleri

Daha fazla video keşfet