Name: Ipecac düğümler arası kültür sırasında endojen Auxin ve Cytokinin miktar (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 57 s
Description: Öğrenin, ipekak bitkisinde adventif sürgün oluşumu sırasında endojen fitohormon seviyelerini LC-MS/MS ile hassas bir şekilde nasıl analiz edeceğinizi. Bu yöntem, doku rejenerasyonu mekanizmalarını anlamak için güvenilir bir yaklaşım sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Onların teknik destek için uygulanan Biosciences, Toyo Üniversitesi ve Bay Koudai Taniguchi Gunma tarım teknoloji merkezinin Anabilim Dalı için Bay Akira Murakami minnettarız. Ayrıca onların önerilerini Profesör Shosaku Kashiwada ve Dr Uma Maheswari Rajagopalan, Toyo üniversite için sana şükrediyoruz. Bu çalışmada kısmen Araştırma Merkezi tarafından desteklenmiştir yaşam ve Çevre Bilimleri, Toyo üniversite için.

Not: Bu, endojen etki analizi kolaylaştırır çünkü ipeka (C. ipecacuanha) Bu çalışmada kullanılmıştır.
1. büyüme koşulları adventif Ipecac Shoots ikna etmek için
<ol><li>Phytohormone-Alerjik B5 orta pH 5,710' a ayarlanmış hazırlamak ve % 0.2 gellan sakız ekleyin. Tarafından ısıyla sterilize.</li>
	<li>Autoclaved Orta 25 mL steril Petri kabına (90 mm × 20 mm) dökün.</li>
	<li>Ipecac Bitkicik steril bir akrilik plaka üzerinde bir bıçak No. 22 ile cerrahi neşter kullanarak 8 mm internodal parçalarını keser ve orta (şekil 1) yerleştirir.</li>
	<li>Kültür phytohormone ücretsiz B5 orta 24 ° c 15 µmol m−2 s– 1 14-h ışık/10-h karanlık döngüsü 5 hafta için ışığın altında.</li>
	<li>Bölgeleri tanımlamak (apikal) IV (her segmentte (şekil 1B) Bazal) ben. Adventif sürgünler > 0.3 mm uzunluğu bir mikroskop altında her bölgedeki haftada bir kez saymak.</li>
</ol>2. çıkarma ve arıtma etki
<ol><li>5 mm Zirkon boncuk her dört 2 mL örnek tüplerinin koymak.</li>
	<li>Segmentleri bölgelere kesmek ben cerrahi neşter steril akrilik tabağa kullanarak IV (her 2 mm içinde süre).</li>
	<li>Sekiz ayrı örnek tüpler (10-30 mg taze ağırlık) her bölgede parçalarını toplamak.</li>
	<li>Tartmak ve sıvı azot örnekleri dondurma.</li>
	<li>Donmuş numuneler boncuk tabanlı homogenizer kullanarak ezmek.</li>
	<li>Auxin iç her standart 500 pg ve CKs (d5-IAA, d5- tZ, d5- tZR, d6- IP, d6- IPR) içeren 1 mL Asetonitril içinde ezilmiş örnekleri askıya bir girdap Mikser kullanarak.</li>
	<li>1s için 4 ° C'de basılı tutun, sonra 3500 × g oda sıcaklığında 5 min için de santrifüj kapasitesi.</li>
	<li>Pelet %80 (v/v) Asetonitril (v/v) % 1 Asetik asit içeren yıkayın. Santrifüj tekrar 3500 × g de oda sıcaklığında 5 min için. (Kimden adım 2.7 ve 2.8) supernatants tek kullanımlık cam tüp içinde birleştirir.</li>
	<li>600 eklemek µL içeren %1 (v/v) Asetik asit her kombine süpernatant için su ve vakum yoğunlaştırıcı kullanarak Asetonitril buharlaşır.</li>
	<li>Hidrofilik lipofilik-dengeli (HLB) sütun kartuşları Asetonitril, metanol ve su (v/v) % 1 Asetik asit içeren her 1 mL uygulayarak equilibrate.</li>
	<li>Dengelenmiş HLB kartuş başına bir örnek çözümü uygulayın.</li>
	<li>Kartuşları (v/v) % 1 Asetik asit içeren 1 mL su ile yıkayın.</li>
	<li>2 mL % 80'i (v/v) Asetonitril (v/v) % 1 Asetik asit bir cam tüp içeren ile tüm hormon elute.</li>
	<li>Asetonitril özü (v/v) % 1 Asetik asit vakum yoğunlaştırıcı kullanarak içeren su elde etmek için eluate içinde buharlaşır. Not: Bu tamamen kuru değil.</li>
	<li>Karma mod, güçlü katyon değişim (MCX) sütun kartuşları 1 mL Asetonitril, 1 mL metanol, 0.5 mL uygulayarak equilibrate 0.1 M HCl ve 1 mL su %1 (v/v) Asetik asit içeren.</li>
	<li>Dengelenmiş MCX kartuş başına bir örnek çözümü uygulayın.</li>
	<li>Kartuşları (v/v) % 1 Asetik asit içeren 1 mL su ile yıkayın.</li>
	<li>IAA 2 mL % 30 (v/v) Asetonitril (v/v) % 1 Asetik asit bir cam tüp içeren ile elute.</li>
	<li>Kartuşları (v/v) % 1 Asetik asit içeren 2 mL % 80'i (v/v) Asetonitril ile yıkayın.</li>
	<li>Kartuşları 2 mL su ve %5 sulu amonyak içeren 1 mL su ile yıkayın.</li>
	<li>Bir cam tüp %5 sulu amonyak içeren 2 mL % 60'ı (v/v) Asetonitril ile CKs elute.</li>
	<li>Vakum yoğunlaştırıcı kullanarak her hormon kesir solvent buharlaşır ve −30 ° C LC-MS/MS analizi kadar saklayın.</li>
</ol>3. IAA ve CKs LC-MS/MS analizi
<ol><li>Her hormon hulâsa bir tüp ile 600 µL metanol içinde dağıtılması ve çözüm için bir vida boyun toplam kurtarma şişe aktarmak. Vakum yoğunlaştırıcı kullanarak solvent buharlaşır.</li>
	<li>20 µL % 30 (v/v) Asetonitril IAA kesir ve CK kesirler vida boyun toplam kurtarma şişeleri %1 (v/v) Asetik asit içeren 20 µL suda çözülür.</li>
	<li>Pozitif iyon modunda bir HPLC sistemi ile donatılmış bir triple quadrupole MS sistemde örnekleri analiz. Not: Tablo 1' de listelenen gibi HPLC koşulları ayarlayın.<ol>
<li>IAA elüsyon %5 - %50 çözelti B üzerinde 7 dk, ikili bir degrade kullanmak sonra % 98 çözücü B tarafından artırmak ve 1 dk. için tutun ve sonra % 5 çözücü B, 2 min için yuva iğne ile equilibrate.</li>
		<li>CK elüsyon için % 2-% 40 çözücü B üzerinde 5 dk, % 40-% 70 çözücü B 7 min, ikili bir degrade kullanmak sonra % 95 çözücü B tarafından artırmak ve 1 dk. için tutun ve sonra 2 dk az %2 çözücü B tarafından için equilibrate enjeksiyon iç içe.</li>
		<li>Electrospray iyonlaşma (ESI) ayarla-MS parametreleri Tablo 2' de listelenen İyon kaynağı.</li>
	</ol>
</li>
	<li>(MRM) geçiş Tablo 3' te listelenen her analit miktar için izleme birden çok tepki kullanın.</li>
	<li>Döteryum etiketli standartlarına etiketlenmemiş oranı standart bir eğri karşı endojen IAA ve CK seviyeleri ölçmek.</li>
</ol>

<ol><li>Haberlandt, G. Kulturversuche mit isolierten Pflanzenzellen. Sitzungsber. Math.-Naturwiss. Kl. Akad. Wiss. Wien. 111, 69-92 (1902).</li>
<li>Skoog, F., Miller, C. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+regulation+of+growth+and+organ+formation+in+plant+tissues+cultured+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Symp+Soc+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">Chemical regulation of growth and organ formation in plant tissues cultured in vitro.</a> Symp Soc Exp Biol. 11, 118-130 (1957).</li>
<li>Ganeshan, S., Caswell, K. L., Kartha, K. K., Chibbar, R. N. <a target="_blank" href="NULL">Transgenic plants and crops</a>. Khachatourians, G. G., McHughen, A., Scorza, R., Nip, W. K. , CRC Press. Ch. 4 69-84 (2002).</li>
<li>Teshima, D., Ikeda, K., Satake, M., Aoyama, T., Shimomura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+emetic+alkaloid+by+in+vitro+culture+of+Cephaelis+ipecacuanha%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Production of emetic alkaloid by in vitro culture of Cephaelis ipecacuanha.</a> Plant Cell Rep. 7 (4), 278-280 (1988).</li>
<li>Chatterjee, S. K., Nandi, R. P., Ghosh, N. C. Cultivation and utilixzation of medicinal plants. <a target="_blank" href="https://www.amazon.com/Cultivation-Utilization-Medicinal-Plants-Kapur/dp/B001I6AQI6">Regional Research Laboratory, Council of Scientific and Industrial Research</a>. Atal, C. K., Kapur, B. M. , Jammu-Tawi, India. 295-301 (1982).</li>
<li>Bajaj, Y. P. S. <a target="_blank" href="http://www.cell.com/trends/biotechnology/abstract/0167-7799(94)90092-2">Biotechnology in Agriculture and Forestry 21, Medicinal and Aromatic Plants IV</a>. , Springer-Verlag. Berlin Heidelberg. 87-103 (1993).</li>
<li>Ideda, K., Teshima, D., Aoyama, T., Satake, M., Shimomura, K. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24241769">Clonal propagation of Cephaelis ipecacuanha.</a> Plant Cell Rep. 7 (4), 288-291 (1988).</li>
<li>Yoshimatsu, K., Shimomura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+shoot+formation+on+internodal+segments+and+alkaloid+formation+in+the+regenerates+of+Cephaelis+ipecacuanha+A.+Richard%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Efficient shoot formation on internodal segments and alkaloid formation in the regenerates of Cephaelis ipecacuanha A. Richard.</a> Plant Cell Rep. 9 (10), 567-570 (1991).</li>
<li>Koike, I., Taniguchi, K., Shimomura, K., Umehara, M. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s00344-017-9684-8">Dynamics of endogenous indole-3-acetic acid and cytokinins during adventitious shoot formation in ipecac.</a> J. Plant Growth Regul. , (2017).</li>
<li>Gamborg, O. L., Miller, R. A., Ojima, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nutrient+requirements+of+suspension+cultures+of+soybean+root+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Nutrient requirements of suspension cultures of soybean root cells.</a> Exp. Cell Res. 50 (1), 151-158 (1968).</li>
<li>Watad, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/0304423896008746">Adventitious shoot formation from carnation stem segments: a comparison of different culture procedures.</a> Scientia Hortic. 65 (4), 313-320 (1996).</li>
<li>Ajithkumar, D., Seeni, S. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s002990050418">Rapid clonal multiplication through in vitro axillary shoot proliferation of Aegle marmelos (L.) Corr., a medicinal tree.</a> Plant Cell Rep. 17 (5), 422-426 (1998).</li>
<li>Tiwari, V., Tiwari, K. N., Singh, B. D. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1023/A:1010652006417">Comparative studies of cytokinins on in vitro propagation of Bacopa monniera.</a> Plant Cell Tiss. Org. Cult. 66 (1), 9-16 (2001).</li>
<li>Rao, M. S., Purohit, S. D. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s10535-006-0079-0">In vitro shoot bud differentiation and plantlet regeneration in Celastrus paniculatus Willd.</a> Biol. Plant. 50 (4), 501-506 (2006).</li>
<li>Sanikhani, M., Frello, S., Serek, M. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/s11240-005-9050-6">TDZ induces shoot regeneration in various Kalanchoë blossfeldiana Poelln cultivars in the absence of auxin.</a> Plant Cell Tiss. Org. Cult. 85 (1), 75-82 (2006).</li>
<li>Yoshimoto, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autophagy+negatively+regulates+cell+death+by+controlling+NPR1-dependent+salicylic+acid+signaling+during+senescence+and+the+innate+immune+response+in+Arabidopsis%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Autophagy negatively regulates cell death by controlling NPR1-dependent salicylic acid signaling during senescence and the innate immune response in Arabidopsis.</a> Plant Cell. 21 (9), 2914-2927 (2009).</li>
<li>Schaller, G. E., Bishopp, A., Kieber, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+yin-yang+of+hormones%3A+cytokinin+and+auxin+interactions+in+plant+development%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">The yin-yang of hormones: cytokinin and auxin interactions in plant development.</a> Plant Cell. 27 (1), 44-63 (2015).</li>
</ol>

Yazarlar onlar hiçbir çıkar çatışması var bildirin.

Etki dağıtım tanımlamak için fiş boşaltmaya karışan organogenesis, bu ne zaman etki exogenously explants inducing için uygulanan organogenesis phytohormone ücretsiz ortamda, gözlenen bitki malzemeler kullanmak önemlidir sürgünler veya kökleri, onlar hücre farklılaşma ve organogenesis fabrikaları doğasında plastisite değerlendirmek üzere bütün explant etkiler. Kültür medyada phytohormone ücretsiz Dianthus caryophyllus L.11, Aegle marmelos (L.) Corrêa12, <em...

Gottlieb Haberlandt (1854-1945) kavramı, "totipotency" hangi bitki tarafından hücreleri bölmek, ayırmak ve düz-den sonra onların önceki farklılaşma belirli hücre tipleri olgun bitkiler1içine tüm bitkiler yeniden, evlenme teklif etti. Doku kültürü içinde olup bitki rejenerasyonu veya değil bağlı olmak kombinasyonu ve exogenously uygulanan etki büyüme orta yoğunlukta tarafından belirlenir. Skoog ve Miller adventif kökleri bir düşük oran2içeren ortamda indüklenen Oysa adventif sürgünler tütün Kallus kültürü CKs yüksek bir oranı için auxins, içeren ortamda gelen indüklenen bulundu. Bu bulgu beri doku kültürü yaygın transgenik bitkiler3yenilenme ve ekonomik açıdan önemli bitkileri yayılması için kullanılmıştır. Adventif çekimleri dışında yapraklar, kökler ve internodes gibi sürgün apikal meristem doku üzerinden bağlı olmak. Phytohormone tedavi indüksiyon adventif sürgünlerin birçok bitki türü için gereklidir. Ancak, optimum konsantrasyonları ve kombinasyonları türler tarafından ve explants kullanılan dokular arasında farklı. Böylece, çok çaba optimum konsantrasyonları ve deneyler için etki kombinasyonları belirlenmesinde gider.
Carapichea ipecacuanha (Brot.) L. Andersson (Ipecac) emetine ve cephaeline, başta olmak üzere4kökleri gibi alkaloidler içeren tıbbi bir bitkidir. Kök özleri bir balgam söktürücü, kusturucu ve bir amoebicide5kullanılır. Ipecac doğal olarak Brezilya tropikal yağmur ormanları içinde büyür rağmen tohum kültüründe ayarlamak isteksiz ve Japonya, onun soğuk iklim6ile tohum depolama sırasında çimlenme oranı azalır. Bunun yerine, doku kültürü tarafından yayılır, hangi adventif ateş internodes oluşumu en verimli yöntem7,8. İlginçtir, adventif çekimleri bu tür phytohormone tedavi8olmadan bağlı olmak.
Epidermis callusing olmadan internodal ventrikül apikal bölgede, ancak Bazal Bölge9üzerinde adventif sürgünler oluşur. Bu fark, muhtemelen phytohormonal yönetmelik altında doku polarite internodal segmentleri, ın gösterir. Ipecac kültür sistemi değişiklikleri endojen phytohormone düzeylerinde adventif ateş oluşumu sırasında analiz etmek eşsiz bir fırsat sağlar. Burada bizim yöntem ve endojen düzeyde bir auxin (indol-3-Asetik asit (IAA)) ve dört CKs analizi için tanıtmak (isopentenyl adenin (IP), isopentenyl adenin riboside (IPR), trans-zeatin (tZ) ve trans-zeatin riboside (tZR)) LC-MS/MS kullanımı ile internodal segmentlerinde.

<table><tbody><tr><td>[2H5] indol-3-asetik asit</td><td>Olchemlm Ltd</td><td>031 1531</td><td>LC-MS/MS [</td></tr><tr><td>2H5] trans-zeatin</td><td>Olchemlm Ltd</td> için dahili standart <td>030 0301</td><td>LC-MS/MS [</td></tr><tr><td>2H5] trans-zeatin ribozit</td> için dahili standart <td>Olchemlm Ltd</td><td>030 0311</td><td>LC-MS/MS için dahili standart</td></tr> <tr><td>[2H6] N6-izopentenil adenin</td><td>Olchemlm Ltd</td><td>030 0161</td><td>için iç standart LC-MS/MS</td></tr><tr><td>[2H6]N6-izopentenil adenozin</td><td>Olchemlm Ltd</td><td>030 0171</td><td>LC-MS/MS</td></tr><tr><td>indol-3-asetik asit</td> için dahili standart <td>Wako</td><td>098 00181</td><td>LC-MS/MS</td></tr><tr><td>trans-zeatin</td><td>için standart SIGMA-ALDRICH</td><td>Z0876 5MG</td><td>LC-MS/MS</td></tr><tr><td>trans-zeatin ribozit</td><td>Wako</td><td>262 01081</td><td>LC-MS/MS</td></tr><tr><td>N6-izopentenil için standart </td><td>LC-MS/MS</td>N6-izopentenil adenosin ACROS ORGANICS 22648 1000 LC-MS/MS asetonitril hipergrade için adenin <td>SIGMA-ALDRICH</td><td>D7674</td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>standardı</td></tr><tr><td>LC-MS/MS için LiChrosolv</td><td>MERCK</td><td>1.00029.1000</td><td>çözücü LC-MS/MS için</td></tr><tr><td>su Kromatografi için LiChrosolv</td><td>MERCK</td><td>1.15333.1000</td><td>çözücü LC-MS/MS</td></tr><tr><td>HPLC</td> <td>içinSHIMADZU</td><td>Prominence</td><td></td></tr><tr><td>MS</td><td>Sciex</td><td>3200QTRAP</td><td></td></tr><tr><td>Oasis HLB 30 mg/1 cc</td><td>Sular</td><td>WAT094225</td><td>kartuş sütunu</td></tr><tr><td>Oasis MCX 30 mg/1 cc</td><td>Waters</td><td>186000252</td><td>kartuş sütunu</td></tr><tr><td>vida boyunlu toplam geri kazanım şişesi</td><td>Sular</td><td>186002805</td><td></td></tr><tr><td>mavi, 12 x 32 mm vidalı boyunlu kapak ve PTFE/silikon septum</td><td>Suları</td><td></td><td></td>186000274</tr><tr><td>Beraat UPLC BEH C18, 2.1x100 mm</td><td>Sular</td><td>186002350</td><td>UPLC sütunu</td></tr><tr><td>Proshell 120 EC-C18, 2.1x50 mm</td><td>Agilent</td><td>699775-902</td><td>UPLC sütunu</td></tr><tr><td>Dijital mikroskop</td><td>Leica</td><td>DHS1000</td><td></td></tr><tr><td>TissueLyser II</td><td>QIAGEN</td><td>85300</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi bıçak</td><td>Tüy</td><td>No. 22</td><td></td></tr><tr><td>Neşter sapı</td><td>Tüy</td><td>No. 4</td><td></td></tr><tr><td>Savant SpeedVac/Refregerated buhar kapanı</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>SPD111/RVT4104</td><td>vakum konsantratörü</td></tr><tr><td>Tek kullanımlık cam askı (13x100 mm)</td><td>IWAKI</td><td>9832-1310</td><td></td></tr><tr><td>Steril petri kabı</td><td>INA OPTICA</td><td>I-90-20</td><td></td></tr></tbody></table>

ipecac düğümler arası kültür sırasında endojen auxin ve cytokinin miktar

Quantification of Endogenous Auxin and Cytokinin During Internode Culture of Ipecac

Adventif ateş oluşumu, transgenik bitkiler yenilenme ve ekonomik açıdan önemli bitkileri yayılması için önemli bir tekniktir. Phytohormone tedavi çoğu türler adventif sürgünler indüksiyon için gereklidir. Olup olmadığı sürgünler adventif bağlı olmak auxin ve cytokinin (CK) arasındaki dengeyi belirlenir düzeyleri. Çok çaba optimum konsantrasyonları ve etki explants kullanılan her doku ve her bitki türü birleşimlerini belirlenmesinde gider. Ipecac içinde ancak, adventif sürgünler kültür orta phytohormone tedavi olmadan internodal kesimlerindeki indüklenen. Bu Ipecac değerlendirilmek üzere hücre farklılaşması için doğal plastisite sağlar. Ipecac adventif sürgünler ikna etmek için phytohormone ücretsiz B5 Orta % 0,2 gellan sakız ile 5 hafta boyunca katılaşmış bir 14-h ışık/10-h karanlık döngüsü 15 µmol m−2 s– 1 ışık altında 24 ° C'de internodal kesimleri kültürlü. Phytohormone dynamics adventif ateş oluşumu sırasında araştırmak için endojen indol-3-Asetik asit ve CKs segmentlerinde sıvı Kromatografi-tandem kütle spektrometresi tarafından LC-MS/MS şiddetindeydi. Bu yöntem basit bir şekilde analiz endojen indol-3-Asetik asit ve CKs düzeyleri sağlar. Organogenesis diğer bitki türleri içinde sırasında endojen auxin ve CK dinamiklerini araştırmak için uygulanabilir.

1st hafta hiçbir adventif sürgünler oluşmuş. 2nd hafta küçük sürgünler ortaya çıktı. 3rd ve 4th hafta, sayısı çoğunlukla apikal bölgede (ı ve II) artan vurur (Şekil 2A). 5inci hafta, sayı sürgünler yapıldı yaklaşık 7 içinde bölge ı ve II (Şekil 2B) bölgesinde 5. Buna ek olarak, sadece birkaç sürgünler bölgelerde III ve IV kuruldu.
<p clas...

Adventif sürgünler Ipecac phytohormone tedavi olmadan internodal kesimlerindeki bağlı olmak. Phytohormone dynamics adventif ateş oluşumu sırasında değerlendirmek için endojen auxin ve cytokinin LC-MS/MS tarafından internodal kesimleri içinde ölçülür.

Ipecac düğümler arası kültür sırasında endojen Auxin ve Cytokinin miktar

Adventitious shoot formation is an important technique for the propagation of economically important crops and for the regeneration of transgenic plants. ...

Bu prosedürün genel amacı, ipecac'ta adventif sürgün oluşumu sırasında endojen fitohormon seviyelerinin nasıl değiştiğini tanımlamaktır. Bu yöntem, bitki doku kültürü çarkındaki doku rejenerasyonu ile ilgili temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, endojen İndol-3-asetik asit seviyesidir ve sitokininler yüksek hassasiyetle basitçe analiz edilebilir.Bu tekniğin anlamı, bitki dokusu dejenerasyonunun oluşumu boyunca uzanır, çünkü endojen fitohormon seviyesindeki değişiklikler adventif sürgün oluşumunu tetikler. Başlamak için, fitohormon içermeyen bir B5 ortamı hazırlayın ve yüzde 0,2 gellan sakızı ekleyin. Ardından, sterilize etmek için ortamı otoklavlayın.Steril bir akrilik plaka üzerinde cerrahi bir neşter kullanarak, ipecac bitkiciklerinin sekiz milimetrelik internodal segmentlerini dilimleyin ve bunları ortama yerleştirin. Daha sonra, ipecac segmentlerini beş hafta boyunca 14 saatlik ışık, 10 saatlik karanlık döngüde metrekare başına 15 mikromol saniye altında 24 santigrat derecede kültürleyin. İpecac segmentlerini kültürledikten sonra, her segmentte bir ila dört arasındaki bölgeleri belirleyin.Haftada bir kez, her bölgedeki maceracı sürgünleri

quantification-endogenous-auxin-cytokinin-during-internode-culture

Research

JoVE Journal

Environment

Çevre

Bu video, Arabidopsis thaliana bitkisindeki fide büyüme inhibisyonu testini göstermektedir. Artan immün peptit elisitör konsantrasyonunun fide büyümesi üzerindeki etkisi belirlenir.

Fide büyümesinin bağışıklık kaynaklı inhibisyonunun ölçülmesi

Lateral Kök İndüklenebilir Sistemi (LRIS), lateral köklerin senkron indüksiyonuna izin verir ve Arabidopsis thaliana ve mısır için sunulmuştur.

Lateral Kök İndüklenebilir Sistemi<em&gt; Arabidopsis</em&gt; Ve Mısır

Bu makalede, tropik yanıtı sırasında plasmodesmal geçirgenliği ve oksin gradyanı kontrol eden genlerin taranması için yöntemler açıklanmaktadır. Bu hipokotil içinde tropik yanıtın derecesi ölçümü içerir   Arabidopsis thaliana ve 8-hydroxypyrene-1,3,6-trifülfonik asit (HPTS) yükleme ve nihayet kaloz seviye değerlendirme ile plasmodesmal geçirgenliği kontrol edilmesi.

Bir Strateji Tropic Tepkisi kaloz aracılı Plasmodesmal Gating Rolü doğrulamak için

Burada özetlenen protokoller, 2-kloroetilfosfonik asit (CEPA) kullanarak bakteriyel etilen yanıtlarının uygun şekilde araştırılmasını kolaylaştırır.  Etilen, CEPA'nın sulu bir bakteri üreme ortamında ayrışması yoluyla yerinde üretilir ve saf etilen gazı gereksinimini ortadan kaldırır.

Aracı Olarak Etilen serbest Bileşik, 2-chloroethylphosphonic acid, kullanan Bakterilerin Etilen Yanıtı Eğitim için

Tarif edilen hidrofobik kokültivasyon sistemi, metal örgülü elekler ile bozulmamış bitkileri destekler ve bunları bakteriler ile birlikte yetiştirir. Bitki dokuları, bakteriler ve salgılanan moleküller daha sonra aşağı akış analizleri için ayrıca hasat edilebilmekte, aynı anda her iki bitki barınağının ve etkileşen mikropların veya mikrobiyolojilerin moleküler tepkileri araştırılabilmektedir.

Bitki / Mikrop Moleküler Etkileşimlerinin ve Sinyalizasyonunun Eşzamanlı ve Sistematik Analizi için Hidroponik Birlikte Yetiştirme Sistemi

Burada açıklanan protokol endoreduplication yumrular patates (Solanum tuberosum) içinde ölçmek için bir yöntemdir. Gürültü ve enkaz aşağı akım akış sitometrik analizinde azaltmak için plasmolysis ve işgal ayıklama adımları içerir.

Endoreduplication izole yumru önceki Akış Sitometresi tarafından ölçme

Giberellin algı sensör 1 (GPS1) Giberellin etki kronolojik zamanmekansal yüksek çözünürlüğe hücresel düzeyde ölçmek için ilk Förster rezonans enerji transferi tabanlı biyoalgılayıcı olduğunu. Bu iletişim kuralı yöntemi görselleştirmek ve genetik olarak kodlanmış nlsGPS1 biyoalgılayıcı Arabidopsis hypocotyls ve kök ipuçlarını kullanarak hücresel Giberellin düzeyleri ölçmek için raporlar.

NlsGPS1 Förster rezonans enerji kullanarak görüntülenmesi hücresel Giberellin düzeyleri (FRET) biyoalgılayıcı aktarma

Burada bitkilerdeki inositol polifosfatları tespit etmek ve ölçmek için son derece hassas bir yöntem olan[3H]-myo-inositol etiketli fidelerin güçlü aniyon değişimi yüksek performanslı sıvı kromatografisini tanımlıyoruz.

SAX-HPLC kullanılarak Farklı Bitki Türlerinden Çözünür, Radiolabeled Inositol Polifosfatların Ekstraksiyonu ve Niceliği

Bu yazıda stoma gelişimini kontrol eden genleri karakterize etmek için epidermal peeling kullanılmadan iki fenotipleme yöntemi anlatılmaktadır. İlk yöntem, toluidin mavisi O-boyalı bitki epidermisi kullanılarak stoma fenotipinin nasıl analiz edileceğini göstermektedir. İkinci yöntem, stoma ligandlarının nasıl tanımlanacağını ve biyolojik aktivitelerinin nasıl izleneceğini açıklar.

Stomatal Gelişimde Rol Oynayan Genlerin Epidermal Fenotip Skorlaması ile Tanımlanması

Burada, Arabidopsis fide de-etiolasyonunun erken aşamalarında klorofil biyosentezinin izlenmesi için tasarlanmış gelişmiş bir aracı açıklıyoruz. Yeni metodoloji, yüksek uzamsal ve zamansal çözünürlükte non-invaziv gerçek zamanlı klorofil floresan görüntüleme sağlar.

Arabidopsis De-etiolasyonunun Erken Aşamalarında Klorofil Biyosentez Kinetiğinin Belirlenmesi için Non-İnvaziv Test

Öğrenin, ipekak bitkisinde adventif sürgün oluşumu sırasında endojen fitohormon seviyelerini LC-MS/MS ile hassas bir şekilde nasıl analiz edeceğinizi. Bu yöntem, doku rejenerasyonu mekanizmalarını anlamak için güvenilir bir yaklaşım sunar.

Ipecac düğümler arası kültür sırasında endojen Auxin ve Cytokinin miktar

Daha fazla video keşfet