Name: Lökosit haddeleme ve yapışma Anjiyotensin II-infüzyon farelerde görselleştirme: teknikleri ve Püf noktalar (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-04T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 16 s
Description: Öğrenin, farelerde anjiyotensin II kaynaklı hipertansiyonda koroner arterlerde lökosit haddeleme ve yapışmasını canlı görüntüleme mikroskobisi ile görselleştirmeyi. Bu yöntem damarsal disfonksiyon patolojisinde bağışıklık hücreleri davranışlarını in vivo gözlemlemeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser eğitim ve araştırma (BMBF 01EO1003 ve BMBF 01EO1503) için Almanca bakanlık tarafından desteklenmiştir.

Deneyler erkek fareler yaş 8-12 hafta yaşlı hayvan deney Rheinland-Pfalz (yetki numarası 23 177-07/G12-1-002 ve 23 177-07/G15-1-051) üzerinden etik komitesinde onayı altında yapılmıştır.
1. anestezi ve ameliyat hazırlığı fare
<ol>
	<li>Ameliyat öncesi, iyi sağlık ve hayvanların durumunu doğrulayın. Ameliyattan önce vücut ağırlığı, gıda ve su tüketimi yanı sıra hayvanlar genel durumlarını (görünüm, duruş, kendiliğinden davranış) 2-3 gün için günde bir kez izlemek.</li>
	<li>Ana mix anestezi midazolam (5 mg/kg vücut ağırlığı), medetomidine (0.5 mg/kg vücut ağırlığı) ve fentanil (0,05 mg/kg vücut ağırlığı) için intraperitoneally hazırlamak (IP) 1 mL şırınga 200 µL/30 g fare bir 26 G iğneyle enjekte.</li>
	<li>Ozmotik pompa implantasyon ve hayvan hazırlık IVM deneyler için bir çalışma alanı platformu ısınma 39 ° C ile gerçekleştirilir. Bir dezenfeksiyon banyoda tüm araçları sterilize ve dezenfekte ısınma platformu.</li>
	<li>İşlemler sırasında göz merhem ile hayvan gözleri koruyun. Kürk ozmotik pompa İmplantasyondan önce jilet ile kaldırın. Şahdamarı ve Şah kateter implantasyon IVM deneylerde yalıtım için krem epilasyon ve pamuk temizleme bezi kullanın. Hayvan deri iki cilt Dezenfektanlar kullanarak dezenfekte: dezenfektan povidone iyot ve bir içeren ve bir antiseptik cilt çözümde alkol bazlı antiseptik içeren octenidine.</li>
	<li>Anestezi ("antisedan mix") atipamezol (0,05 mg/kg vücut ağırlığı) ve flumazenil (0.01 mg/kgbody ağırlık) ile kışkırtmak için ana karışımını ve subkutan olmak 26 G iğne ile 1 mL şırınga 200 µL/fare hazırlayın (SC) enjekte.</li>
</ol>
2. ozmotik pompa hazırlık ve implantasyon
Not: ozmotik pompaları kullanarak subkutan AngII infüzyon Lu vd tarafından ayrıntılı olarak açıklanan yapıldı. 17
<ol>
	<li>AngII steril serum fizyolojik ile lyophilized toz başlamaktan tarafından hazırlamak ve konsantrasyon ile hayvan ağırlık ve pompa teslim edilme oranını ayarlamak. Sulandırılan AngII (cam tüpler kullanmayın) plastik tüplerde tutun.</li>
	<li>Pompalar 1 mg/(kg·d) 7 gün boyunca teslim için AngII solüsyonu ile doldurun. Sonra hazırlık, pompalar için 4-6 h steril serum fizyolojik 37 ° C'de en az tutun</li>
	<li>Enjeksiyon arka ile anestezi karışımı refleksleri ayak ve sıcak işlem sahaya yerleştirin sonra fare tam anestezi sınayın. Anestezi indüksiyon 10-15 dakika sürer ve karanlık bir ortamda hayvanlar girdiyseniz daha iyi çalışır.</li>
	<li>Fare arka alt tıraş ve alkollü bir cilt antiseptik ile dezenfekte.</li>
	<li>1 cm kesi makas kullanarak omurga dik olun. Boğaz bir hemostat kullanarak pompa için bir cep oluşturmak ve pompa eklemek (moderatör ilk Debi). Cep yaranın üzerine baskı ile pompa, serbest dolaşımına izin vermesi gerekir.</li>
	<li>Dikişler ve kliplerini değil, yarayla iltihap sınırlamak için kapatır; sonra cilt antiseptik ile dezenfekte edin.</li>
	<li>Anestezi antisedan Mix 200 µL SC enjeksiyon tarafından düşman ve fareyi onun kafes için dönün.</li>
	<li>Buprenorfin ile ameliyat sonrası analjezi yürütmek (0.075 mg/kg SC) ameliyattan sonra ve isteğe bağlı olarak hayvan davranışları bağlı bir kez.</li>
</ol>
3. Şah kateter implantasyon ve şahdamarı hazırlık
<ol>
	<li>Anestezi enjeksiyonu ile arka gıda refleksleri karıştırın ve sıcaklık ve merhem koymak için bir rektal sonda ile 39 ° C cerrahi plaka üzerinde dorsal recumbence imzalat hayvan yer sonra fare tam anestezi sınayın işlem sırasında onları korumak için gözler.</li>
	<li>Boyun tüyleri saç dökücü krem kullanarak. Bir pamuklu çubukla yaymak ve tüyleri dökülmeye başlayana kadar 2 min için Krem ovmak için kullanın. Bir ek 2 dakika sonra krem ve kıllar bir spatula ile kaldırın ve deriyi alkollü bir cilt antiseptik ile dezenfekte.</li>
	<li>Bir stereomicroscope altında ameliyat. 1-1.5 cm uzun kesi boyun, Trakea yanında 1 cm boyuna deride olun. Sonra ilk insizyon her iki ekstremite için dik iki kesik yapın.</li>
	<li>Dikkatle doku cilt yanında kaldırmak ve sol juguler ven ve nefes borusunu kaplayan deri parçası kaldırın.</li>
	<li>Dikkatle parotid bezi izole; dil ve submaxillary bezleri bölgesinden 2 eğri Forseps ile ilgi. Değil kesmek ya da bezleri zarar, yer onları juguler ven ve de en iyi erişime izin vermek için.</li>
	<li>Juguler ven yalıtmak için ince forseps kullanın ve yavaşça aç ve yavaşça çevreleyen doku gemiden boşaltmak için kapatın. Damarı tamamen temiz olduğunda, forseps geminin altında konumlandırmak ve iki 7-0 dikişler altındaki her 10 cm yerleştirin.</li>
	<li>Proksimal iki deniz mili ile kafasına dikiş kapatın. Diğer dikiş bir düğüm hazır olun ama yakın değil.</li>
	<li>Tek elle Forseps ile 37 ° C steril serum fizyolojik ile dolu kateter (0,28 mm iç çapı, 0,61 mm dış çap) tutun; diğer elinizle iken, ince makas veya eğri 26 G iğne ile geminin küçük bir insizyon attım olun. Sonra kateter juguler ven yerleştirin ve düğüm iki kez kapatın. Proksimal kafasına dikiş tam immobilizasyon sağlamak için kateter kapatın.</li>
	<li>Yalıtmak ve Karotid arter hazırlamak için ince kavisli forseps kullanarak Trakea kapsayan alan incelemek.</li>
	<li>Şahdamarı dokuları çevreleyen boş olduğunda, vagus siniri (beyaz çizgi için karotis bitişik gibi görünüyor) gemisinden kaldırmak (ama işlevsel değil). İnce forseps kapalı ve yavaş yavaş yavaşça sinir harekete geçirmek için açtı.</li>
	<li>Her iki damar tamamen temiz olduğunda, ilk Karotid arter altında forseps yerleştirin ve bir küçük siyah 3 mm geniş x 2.5 cm uzunluk plastik parça geminin altında yer. Gemi overstretch yok ve kan akışını gemi sahibi yerleştirilir bir kez yüklü olduğunu kontrol etmek için çok önemli. İkinci arter gemi sahibi yerleştirin. Fareyi doğrudan altında mikroskop yerleştirilmez bezleri nefes borusu koy ve 37 ° C steril serum fizyolojik bölgenin kurutma önlemek için geçerlidir.</li>
</ol>
4. haddeleme ve lökosit kalarak değerlendirmesi / LysM + hücreleri IVM ile
<ol>
	<li>Turuncu-20 ° C'de depolanan bir 2 mg/mL stok çözümden akridin hazırlamak ve 1: 4'te 1 mL şırınga steril serum (0,5 mg/mL nihai toplama) oranında seyreltin.</li></ol>Işık--dan belgili tanımlık tenkıye korumak ve bir fare başına 200 µL kullanın.<ol>
		<li>Test farklı koşullar: akridin Şah sondayla; portakal (1) enjeksiyon (2) enjeksiyon akridin turuncu doğrudan içine kuyruk lateral damar (ile bu durum) hiçbir Şah kateter implante; (3) ölçüm akridin floresan LysMCre+IRG+ kullanarak turuncu fareler (Şah yok kateter implante burada tekrar) olmadan.</li>
	</ol>
	
	<li>Kateter yer ve iki de izole sonra mikroskop altında fare yerleştirin. Uzun mesafeli bir kondansatör ve 10 X kullanarak yüksek hızlı geniş alanlı floresan mikroskop ile ölçümleri gerçekleştirmek (NA 0,3) su daldırma amacı bir monokromatör, bir ışın ayırıcı ve bir şarj kuplajlı cihaz kamera ile. Resim alma ve gerçek zamanlı görüntüleme sistemi ile analizi gerçekleştirin.</li>
	<li>Karotid arter endotel yüzeyinde ortasında mikroskop objektif odak. Yavaş yavaş, akridin turuncu 50 µL (0,5 mg/mL) (ilk enjeksiyon için kateter ölü hacmi dikkate almak) enjekte et. Resim başına 120 milisaniye bir çekim hızı ile 100 adet fotoğraf kaydetmek için yazılım ayarlayın.</li>
	<li>Her video için arter üzerinde farklı yerlerde Karotid arter (sol ve sağ) başına dört videoları olun. Floresans sinyal azalırsa, akridin turuncu başka bir 50 µL enjekte et.</li>
	<li>Tüm videoları kayıt sonra hayvan tarafından servikal çıkığı ötenazi.</li>
	<li>Video hızı saniyede 10 kare ayarlamak ve her video için gemi ortasında yerleştirilen 200 µm x 250 µm dikdörtgen görünümü'nde çalışırken ve yapışık hücreleri ölçmek. Haddeleme ve yapışık hücreleri saymak; yapışık hücreleri taşımayın veya 10 s video içinde endotel dan ayırmak hücreleri olarak tanımlanır. Miktar kolaylaştırmak için kanal ile kırmızı Floresans kaldırmak ve sadece yeşil Floresans haddeleme ve yapışan hücreleri saymak için kullanın.</li>
	<li>Akridin turuncu kullanarak deneyler için Floresans manuel bir eşiği endotel hücreleri tarafından yapılan arka plan çıkarmak için olun.</li>

<ol><li>Lewington, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-specific+relevance+of+usual+blood+pressure+to+vascular+mortality%3A+a+meta-analysis+of+individual+data+for+one+million+adults+in+61+prospective+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Age-specific relevance of usual blood pressure to vascular mortality: a meta-analysis of individual data for one million adults in 61 prospective studies.</a> Lancet. 360, 1903-1913 (2002).</li>
<li>Harrison, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mosaic+theory+revisited%3A+common+molecular+mechanisms+coordinating+diverse+organ+and+cellular+events+in+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Hypertens%22%5BJournal%5D)">The mosaic theory revisited: common molecular mechanisms coordinating diverse organ and cellular events in hypertension.</a> J Am Soc Hypertens. 7, 68-74 (2013).</li>
<li>Guzik, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+T+cell+in+the+genesis+of+angiotensin+II+induced+hypertension+and+vascular+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Role of the T cell in the genesis of angiotensin II induced hypertension and vascular dysfunction.</a> J Exp Med. 204, 2449-2460 (2007).</li>
<li>De Ciuceis, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+vascular+remodeling%2C+endothelial+dysfunction%2C+and+oxidative+stress+in+resistance+arteries+of+angiotensin+II-infused+macrophage+colony-stimulating+factor-deficient+mice%3A+evidence+for+a+role+in+inflammation+in+angiotensin-induced+vascular+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Reduced vascular remodeling, endothelial dysfunction, and oxidative stress in resistance arteries of angiotensin II-infused macrophage colony-stimulating factor-deficient mice: evidence for a role in inflammation in angiotensin-induced vascular injury.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 25, 2106-2113 (2005).</li>
<li>Wenzel, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysozyme+M-positive+monocytes+mediate+angiotensin+II-induced+arterial+hypertension+and+vascular+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Lysozyme M-positive monocytes mediate angiotensin II-induced arterial hypertension and vascular dysfunction.</a> Circulation. 124, 1370-1381 (2011).</li>
<li>Kossmann, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet-localized+FXI+promotes+a+vascular+coagulation-inflammatory+circuit+in+arterial+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Platelet-localized FXI promotes a vascular coagulation-inflammatory circuit in arterial hypertension.</a> Sci Transl Med. 9, (2017).</li>
<li>Rodriguez-Iturbe, B., Pons, H., Johnson, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+Immune+System+in+Hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Role of the Immune System in Hypertension.</a> Physiol Rev. 97, 1127-1164 (2017).</li>
<li>Masedunskas, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+microscopy%3A+a+practical+guide+on+imaging+intracellular+structures+in+live+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Bioarchitecture%22%5BJournal%5D)">Intravital microscopy: a practical guide on imaging intracellular structures in live animals.</a> Bioarchitecture. 2, 143-157 (2012).</li>
<li>Weigert, R., Sramkova, M., Parente, L., Amornphimoltham, P., Masedunskas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravital+microscopy%3A+a+novel+tool+to+study+cell+biology+in+living+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Intravital microscopy: a novel tool to study cell biology in living animals.</a> Histochem Cell Biol. 133, 481-491 (2010).</li>
<li>Wenzel, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heme+oxygenase-1+suppresses+a+pro-inflammatory+phenotype+in+monocytes+and+determines+endothelial+function+and+arterial+hypertension+in+mice+and+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Heart+J%22%5BJournal%5D)">Heme oxygenase-1 suppresses a pro-inflammatory phenotype in monocytes and determines endothelial function and arterial hypertension in mice and humans.</a> Eur Heart J. 36, 3437-3446 (2015).</li>
<li>Pawelski, H., Lang, D., Reuter, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+of+monocytes+and+platelets%3A+implication+for+life%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Biosci+%28Schol+Ed%29%22%5BJournal%5D)">Interactions of monocytes and platelets: implication for life.</a> Front Biosci (Schol Ed). 6, 75-91 (2014).</li>
<li>Hinsbergh, V. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelium--role+in+regulation+of+coagulation+and+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Immunopathol%22%5BJournal%5D)">Endothelium--role in regulation of coagulation and inflammation.</a> Semin Immunopathol. 34, 93-106 (2012).</li>
<li>Njock, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cells+suppress+monocyte+activation+through+secretion+of+extracellular+vesicles+containing+antiinflammatory+microRNAs%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Endothelial cells suppress monocyte activation through secretion of extracellular vesicles containing antiinflammatory microRNAs.</a> Blood. 125, 3202-3212 (2015).</li>
<li>Colognato, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+expression+and+regulation+of+protease-activated+receptors+in+human+peripheral+monocytes+and+monocyte-derived+antigen-presenting+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Differential expression and regulation of protease-activated receptors in human peripheral monocytes and monocyte-derived antigen-presenting cells.</a> Blood. 102, 2645-2652 (2003).</li>
<li>Schaffner, A., Rhyn, P., Schoedon, G., Schaer, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulated+expression+of+platelet+factor+4+in+human+monocytes--role+of+PARs+as+a+quantitatively+important+monocyte+activation+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">Regulated expression of platelet factor 4 in human monocytes--role of PARs as a quantitatively important monocyte activation pathway.</a> J Leukoc Biol. 78, 202-209 (2005).</li>
<li>Muzumdar, M. D., Tasic, B., Miyamichi, K., Li, L., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+global+double-fluorescent+Cre+reporter+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">A global double-fluorescent Cre reporter mouse.</a> Genesis. 45, 593-605 (2007).</li>
<li>Lu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subcutaneous+Angiotensin+II+Infusion+using+Osmotic+Pumps+Induces+Aortic+Aneurysms+in+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Subcutaneous Angiotensin II Infusion using Osmotic Pumps Induces Aortic Aneurysms in Mice.</a> J Vis Exp. , (2015).</li>
<li>Koh, T. J., DiPietro, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammation+and+wound+healing%3A+the+role+of+the+macrophage%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Inflammation and wound healing: the role of the macrophage.</a> Expert Rev Mol Med. 13, e23(2011).</li>
<li>Dargaud, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proposal+for+standardized+preanalytical+and+analytical+conditions+for+measuring+thrombin+generation+in+hemophilia%3A+communication+from+the+SSC+of+the+ISTH%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Proposal for standardized preanalytical and analytical conditions for measuring thrombin generation in hemophilia: communication from the SSC of the ISTH.</a> J Thromb Haemost. , (2017).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa yoktur

LysM+ monosit daha önce hipertansiyon5gelişiminde karıştığı gösterilmiştir. İşte LysM+ bağışıklık hücreleri rulo ve yanıt AngII infüzyon olarak endotel katmanı uygun göstermektedir. Bu bulgu LysMCre+IRG+ kullanarak elde edildi fareler hipertansiyon vivo içinde bağışıklık hücrelerinin rolü lökosit enjeksiyon akridin turuncu6,10ile görselleştirme tarafından keşfetmek bizim önceki çalışmalar. Böylece, ayrımcılık kalarak için endotel hücre tiplerinin mümkün değildi.
IVM damar çalışmalar ve in vivo gözlemler damarlara doğrudan hücre için çok yararlı bir araçtır, ancak hipertansiyon inflamatuar bağlamında cerrahi olarak eklenen bir kateter yardımıyla boya enjekte etkisi bilinmeyen kalır. Kateter ve akridin turuncu potansiyel etkisini değerlendirmek için enjeksiyon biz IRG+ fareler LysMCre+avantajı aldı. AngII infüzyon sayısı arttı LysM+ hücreler endotel için inişli çıkışlı. Bir kateter juguler ven içine ekleme etkisi güçlendirilmiş ve daha haddeleme ve yapışan lökosit kateter implantlar olmadan fareler karşılaştırıldığında bir kateter ile Enstrümante AngII-infüzyon farelerde tespit edildi. Bu o implantasyonu bağlamında, sistemik inflamatuar reaksiyon kaplayan hipertansiyon18' görülen bağışıklık reaksiyonu ile yaranın Karotid kateter nedenleri gösterir. Buna ek olarak, juguler ven şahdamarını için yakınlık nedeniyle ek bir bağışıklık etkinleştirme juguler ven etkileyen tarafından oluşmuş olabilir. Bu etkinin ne zaman iğne kuyruğu damar içine yapılan mevcut değildi beri biz etkisi nedeniyle varsayabiliriz boya ama kateter ekleme yordamı değil. Biz burada in vivo işlemlerle deneme sırasında karışmaması için floresan proteinler ifade transgenik muhabir fareler önemini gösterdi. Ayrıca, kuyruk ven enjeksiyon floresan izleyiciler Şah kateter enjeksiyonları olası bir alternatif olabilir.
Bir kritik yordam AngII infüzyon adımdır. Kuyruk manşet değerlendirme kan basıncı AngII teslim etkinliğini denetlemek için pompa tarafından yapılabilir. Kan basıncı infüzyon 2−3 gün sonra artırmalıdır. LysM+ hücreleri harekete geçirmek etkileyen enflamasyon sınırlamak için nerede pompa implante kesi kapatılması dikiş yerine klipleri ile yapılmalıdır. Bir sınırlama kuyruk ven enjeksiyon hakkında kaydetti: en iyi olası veri toplama yapmak için 4 video genellikle her şahdamarı için alınır. Floresan sinyal azalırsa, akridin Orange 50 µL enjekte ama kuyruk enjeksiyon ile birkaç iğne yapmak ve şahdamarı mikroskop objektif altında sabit tutmak için daha zor. Juguler ven bir kateter varlığı süresi 4 saat sonra kateter implantasyon19hazırlanan trombosit açısından zengin plazma koagülasyon aktivasyonu etkiliyor bu yana, bağışıklık hücreleri harekete geçirmek de modüle. Kateter implantasyon bu yönünü daha fazla araştırma gerekiyor.
Bile LysM+ hücre aktivasyonu AngII infüzyon sonra Şah kateter Uygulanılmasından etkisini takdir ediyoruz, son olarak, biz tam olarak hazırlık, cilt temizleme ve potansiyel bir LysM+ hücre üzerinde karotis yalıtım rolü tahmin olamaz harekete geçirmek. Biz Floresans muhabir fare kullanımı böyle sonucuna LysMCre+IRG+ fare gemi bütünlük bozulma vivo içinde görüntüleme için hayvan hazırlık sırasında önlemek için tavsiye edilir.

Arteriyel hipertansiyon kardiyovasküler hastalık ve ölüm riskini artırır ve ateroskleroz, koroner kalp hastalığı ve atardamar veya toplardamar thromboembolisms1gelişimini teşvik etmektedir. Hipertansiyon gelişimini çevresel, genetik, endokrin ve hemodinamik faktörlerin etkileşimi üzerinde bağlıdır. Şu anda, bağışıklık ve ilgili iltihap hipertansiyon2etyoloji içinde önemli bir rol oynamak için takdir edilmektedir.
Bağışıklık hücreleri arasında T lenfositler yanı sıra monosit ve makrofajlar AngII kaynaklı damar iltihabı ve hipertansiyon, kısmen Reaktif oksijen türleri3tetiklemek için yeteneklerini ilgili nedensel dahil olmak bulundu. Makrofaj koloni uyarıcı faktör eksik fareler kan basıncı artışı ve damar iltihabı4ile ilgili AngII için azaltılmış tepki gösterdi. Bir önceki çalışmada, LysM + monosit vasküler disfonksiyon ve iltihap AngII kaynaklı hipertansiyon5' te sürücü gösterebilirim. Daha yakın zamanlarda, açıkladığımız bir roman yol hangi koagülasyon faktör XI trombosit ve Trombin bağlı damar iltihabı6ikna etmek için damar duvarı ile işbirliği yapmaktadır. Hipertansiyon bağışıklık sisteminde rol hakkında güncel bilgi son zamanlarda özetledi ve Rodriguez-Iturbe ve arktarafından incelendi. 7
Bağışıklık hücreleri hipertansiyon gelişiminde katılımı oldu beri modelleri ve teknikleri gemi ve bağışıklık hücreleri arasındaki etkileşimi incelemek için gerekli oldu. Epifluorescence IVM kan damarlarının dolaşan kan hücreleri ve endotel8,9,10arasında vivo içinde etkileşim gözlemlemek için yararlı bir araçtır. Bu teknik ile DNA'sını (akridin turuncu gibi) enterkalasyon boyalar enjeksiyon çekirdekli hücreler (dolaşımdaki yanı sıra endotel) görselleştirebilirsiniz. İzole trombosit ex vivo ile rhodamin - 6 G lekeli veya dichlorofluorescein (DCF) trombosit açısından zengin trombüsü atardamar veya toplardamar yaralanma modellerinde görselleştirmek için enjekte edilebilir.
Genellikle, juguler ven kateteri izleyiciler enjekte için kullanılan veya işaretli trombosit. Endotel İLETİMLERİNİZE ve koagülasyon cascade, sonraki harekete geçirmek her ikisi de bilinmektedir monosit etkinleştirme üzerinde etkiler. Endotel hasarı hemen trombosit harekete geçirmek subendothelial matris molekülleri takip eden monosit cazibe ve harekete geçirmek11ile doku mühür yol açar. Aksine, bir sağlam endotel antikoagülan özellikleri (Örneğin, doku faktörü yolu inhibitörü veya thrombomodulin yoluyla)12 ve monosit, örneğin, üzerinden salgılanmasını üzerinde doğrudan inhibitör etkileri olduğu bilinmektedir hücre dışı veziküller mikroRNA'lar13içeren. Monosit bir doku faktörü, koagülasyon cascade ve Trombin tarafından etkinleştirilebilir ve monosit harekete geçirmek14' te,15 katılmak hızlı proteaz aktif reseptörleri (PARs) dışsal aktivatör üretmek bilinmektedir . Bu nedenle, herhangi bir etkinleştirme trombosit veya vasküler yaralanma nedeniyle koagülasyon cascade olabilir monosit etkinleştirme üzerinde beklenmeyen etkileri ve gözlenen fenomen ile müdahale. LysM+ bir kateter ve alternatif yöntemleri ile enjeksiyonlar etkisi ayrıntılı olarak incelemek önerdiğimiz IRG transgenik LysM Cre transgenik fareler, bir çift-floresan Cre muhabir fare (LysMCre+IRG+) sayesinde, myelomonocytic hücreleri, arteriyel hipertansiyon16bir fare modeli.

<table><tbody><tr><td>Midazolam</td><td>Ratiopharm GmbH</td><td></td><td>Anestezi karışımı</td></tr><tr><td>Medetomidine</td><td>Pfizer Deutschland GmbH</td><td></td><td>Anestezi karışımı</td></tr><tr><td>Fentanyl</td><td>Janssen-Cilag GmbH</td><td></td><td>Anestezi karışımı</td></tr><tr><td>Alzane</td><td>Zoetis</td><td></td><td>Antisedan karışımı</td></tr><tr><td>Flumazenil</td><td>Hikma ilaç</td><td></td><td>Antisedan karışımı</td></tr><tr><td>Braunol</td><td>B Braun</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Octeniderm</td><td>Sch&uuml; lke</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ozmotik pompalar</td><td>Alzet</td><td>1007D</td><td>Ozmotik pompa implantasyonu</td></tr><tr><td>Anjiyotensin II</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>Ozmotik pompa implantasyonu</td></tr><tr><td>7-0 prolen sütür</td><td>Ethicon</td><td></td><td>Osmotik pompa implantasyonu</td></tr><tr><td>Akridin turuncu</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kateter</td><td>Smiths Medical Deutschland GmbH</td><td></td><td>İç çap, 0,28 mm; dış çap, 0,61 mm</td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Olympus</td><td>BX51WI floresan mikroskobu</td><td></td></tr><tr><td>Işın Ayırıcı Fotometri</td><td></td><td>CMR-DV2-SYS - DualView2 MicroImager</td><td></td></tr><tr><td>Objektif</td><td>Olympus</td><td></td><td>UMPLFLN10X Monokromatör ile suya daldırma objektifi</td></tr><tr><td>Kamera</td><td>Hamamatsu Fotonik</td><td>ORCA-R2</td><td></td></tr><tr><td>Görüntü elde etme ve analiz yazılım</td><td>Olympus</td><td>Gerçek Zamanlı Görüntüleme Sistemi eXcellence RT</td><td></td></tr><tr><td>Fareler</td><td>Jackson Laboratuvarı</td><td>Jax 008705</td><td>B6. Cg-Tg(CAG-DsRed,-EGFP)5Gae/J</td></tr><tr><td>Fareler</td><td>Jackson Laboratuvarı</td><td>Jax 004781</td><td>LysM Cre (B6.129P2-Lyz2tm1(cre)Ifo/J)</td></tr></tbody></table>

lökosit haddeleme ve yapışma anjiyotensin ii-infüzyon farelerde görselleştirme: teknikleri ve püf noktalar

Visualizing Leukocyte Rolling and Adhesion in Angiotensin II-Infused Mice: Techniques and Pitfalls

Epifluorescence intravital video mikroskobu (IVM) kan damarlarının bağışıklık hücrelerinin aktivasyonu ve rol için yeteneklerini değerlendirmek ve endotel katmana bağlı kurulan bir yöntemdir. Hücreleri floresan boyalar veya fluorophore birleştiğinde antikorlar enjeksiyonu ile dolaşan görselleştirme yaygın olarak kullanılır. Alternatif olarak, floresan muhabir fare-ebilmek var olmak kullanılmış. + (LysM+) etkileşimleri lökositlerin, belirli lizozim M monosit, gemi duvar ile vasküler disfonksiyon ve arteriyel hipertansiyon desteklenmesinde önemli rolleri oynamak. Burada görselleştirmek ve haddeleme lökosit ve Anjiyotensin II (AngII) karotis arterlerde yapışma ölçmek için teknik mevcut-hipertansiyon farelerde IVM tarafından indüklenen.
Bir kateter implantasyonu vasküler duvar zarar ve değiştirilmiş kan hücresi yanıt-e doğru yol açar. Biz farklı enjeksiyon teknikleri ve bir LysMCre+IRG+ lökosit görselleştirmek için yönetim yolları göre fare ile kırmızı floresan protein yaygın ifade ve LysM yeşil flüoresan proteinin koşullu ifade + hücreleri. LysM+ hücre aktivasyonu, biz AngII fareler infüzyon çalışırdım içinde inişli çıkışlı ve yapışma lökositlerin endotel artar. Biz de akridin bir Şah kullanarak turuncu kateter enjekte veya doğrudan kuyruk damar ve miktarını karşılaştırıldığında haddeleme ve kalarak hücreleri. Şah kateter implantasyon başına haddeleme sayısı arttı ve yapışan LysM+ hücrelerde sham infüzyon-LysMCre+kontrollere göre IRG+ fare bulduk. Bu harekete geçirmek AngII-infüzyon farelerde artar. İlginçtir, akridin doğrudan kuyruk damar artış LysM+ turuncu hücre adezyon enjekte veya sahte-infüzyon farelerde haddeleme. Böylece vivo işlemlerle deneme sırasında karışmaması için floresan proteinler ifade transgenik muhabir fareler önemini gösterdi. Ayrıca, kuyruk ven enjeksiyon floresan izleyiciler Şah kateter enjeksiyonları olası bir alternatif olabilir.

Şahdamarı LysMCre+IRG+ AngII ile infüzyon fareler IVM kullanarak gözlendi. Akridin turuncu Şah bir kateter kullanarak enjekte ettiler. LysM+ hücreleri ile temas (açık bir ayrımcılık teknesi ile etkileşim hücre türü kaldı bu yana hangi Ayrıca gemi ile etkileşim tüm çekirdekli dolaşımdaki hücrelere kıyasla vasküler duvar oranının bakmak amaçlanmıştır soru--dan bizim önceki iş). Temel Şah bir kateter varlığı (şekil 2A, D) LysM+ hücrelerinin yapışma neden olur. Akridin turuncu enjeksiyon sonra aynı hücreleri Floresan, ama aynı zamanda endotel hücreleri floresan idi (şekil 2B, E). Endotel sınırlamak için arka plan azalma Floresans ilgili sonra verileri tüm çekirdekli yapışan hücreleri LysM+ (şekil 2C, F); olduğunu gösteriyor Bu sonuçlar bizim önceki sonuçları onaylamak ve+IRG+ LysMCre AngII LysM+ hücre aktivasyonu üzerindeki etkisini gözlemlemek için iyi bir model olduğunu gösteren AngII infüzyon sonra doğru tutun.
Biz rol akridin portakal LysM+ hücre aktivasyonu LysMCre+IRG+AngII infüzyon sonra üzerinde yönetim yollarının değerlendirildi. AngII infüzyon, lökosit endotel etkileşimleri, bir hafta sonra LysMCre+IRG+ Karotid arterler fareler görüntüsü ve ile ya da ezelî akridin turuncu enjeksiyon Şah bir kateter veya kuyruk ven yoluyla IVM tarafından görüntülenmiştir. AngII infüzyon tedavi edilmezse fareler ve yapışma göre (şekil 3) artış gösterdi sonra herhangi bir kateter veya iğne olmadan LysM+ hücrelerinin haddeleme önemli ölçüde arttı. Enjeksiyon akridin Şah kateter arttı yapışma ve AngII içinde haddeleme ile turuncu fareler fare olmadan bir kateter (şekil 3) ile karşılaştırıldığında büyük ölçüde tedavi. Akridin kuyruk damarda turuncu enjeksiyon benzer yapışma sağlar yol açar ve haddeleme akridin turuncu (şekil 3) enjeksiyon almadı fareler karşılaştırıldığında.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56948/56948fig1.jpg"> 
Şekil 1. Düzeni Anjiyotensin II infüzyon ve LysM+ değerlendirilmesi için haddeleme ve yapışma farelerde hücreleri. LysMCre+IRG+ fare AngII ile 7 gün infüzyon ve kalarak hem de LysM+ haddeleme şahdamarı hücreye veya enjeksiyon akridin turuncu Şah bir kateter ile mi yoksa kuyruk ven olmadan sayısal enjeksiyon. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56948/56948fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56948/56948fig2.jpg"> 
Şekil 2. LysM+ hücre adezyon ve LysMCre+Karotid arterler IRG+ fare haddeleme değerlendirilmesi. LysM yapışma+ hücreleri LysMCre+IRG+ fareler (A, D) önce ve sonra (B, E) akridin enjeksiyon yolu ile Şah bir kateter. Kırmızı ve yeşil Floresans kaydedildi, LysM+ hücrelerinde (yeşil) ve düz kas hücrelerinde (kırmızı) görünür. Enjeksiyon akridin Orange sonra endotel hücreleri de yeşil görülebilir ama arka plan Floresans tek dolaşan hücre görselleştirme (C, F) parçalanmayabilir mümkün kılar. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56948/56948fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56948/56948fig3.jpg"> 
Şekil 3. Anjiyotensin II floresan boyalar olarak yönetim yolları değerlendirilmesi IRG+ fareler LysMCre+infüzyon. Miktar haddeleme(a)ve (B) LysM+ kalarak hücreleri ve işletilen sahte veya AngII-infüzyon hayvanlar veya enjeksiyon akridin Orange Şah bir kateter kullanarak veya kuyruk ven enjeksiyonla olmadan. Farklı koşullarda (C) temsilcisi resimleri. Ortalama ± standart hata ortalamaya sonuçlarıdır. 2 yönlü ANOVA gerçekleştirilen ve Bonferroni'nın post hoc testi, n = 3-12/gruplar; p &lt; 0,05. <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56948/56948fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Bu el yazması transgenik muhabir fare kullanımı ve bağışıklık hücrelerinin aktivasyonu değerlendirmek için kan damarlarının intravital video mikroskobu kullanılarak Anjiyotensin II kaynaklı hipertansiyonda floresan boyalar farklı yönetim yollarını açıklar ve onların yetenek rulo ve endotel için uygun.

Lökosit haddeleme ve yapışma Anjiyotensin II-infüzyon farelerde görselleştirme: teknikleri ve Püf noktalar

Epifluorescence intravital video microscopy (IVM) of blood vessels is an established method to evaluate the activation of immune cells and their ability ...

Bu epifloresan intravital video mikroskobunun veya kan damarlarının IVM protokolünün genel amacı, farelerde Anjiyotensin II'nin neden olduğu hipertansiyonda aşınmış arterlerde lökosit yuvarlanmasını ve yapışmasını görselleştirmek ve ölçmektir. Bu yöntem, vasküler disfonksiyon ve arteriyel hipertansiyon patolojisinde, lökositler ve özellikle lizozomlar ve pozitif hücreler arasındaki etkileşim mekanizması ve damar çalışması gibi temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, dolaşımdaki kan hücreleri ile vasküler anlayış arasındaki in vivo etkileşimleri görebilmemizdir.Metin protolüne göre, yedi günlük anjiyotensin iki tedavisinden sonra osmatik bir pompa ile ameliyat için bir erkek fare hazırlayın. İşlem sırasında onları korumak için gözlerin üzerine oftalmik merhem sürün. Anestezi uygulanmış hayvanı 39 santigrat derecelik bir cerrahi plaka üzerine sırt yaslanma pozisyonuna yerleştirin ve sıcaklığı korumak için bir rektal prob yerleştirin.Tüyler dökülmeye başlayana kadar tüy dökücü kremi boynunuza yaymak ve ovalamak için pamuklu çubuk kullanın. Ardından, 2 dakika daha sonra, tüyleri ve kremayı çıkarmak için bir spatula kullanın. Ardından, alkollü bir cilt antiseptiği kullanarak cildi dezenfekte edin.Daha sonra, bir stereo mikroskop altında, boynun derisinde, trakeadan 1 cm uzakta, 1 ila 1.5 cm uzunlamasına bir kesi yapın. Ardından, ilk insizyonun her iki ucunda 2 dikey kesi yapın. Derinin hemen altındaki dokuyu dikkatlice çıkarın ve sol juguler ven ve soluk borusunu kaplayan deri parçasını çıkarın.Daha sonra, dil altı ve submaksiller aşınmış bezleri ilgilenilen bölgeden dikkatlice izole etmek için iki kavisli forseps kullanın. Bezleri kesmemeye veya zarar vermemeye özen gösterirken, bunları şah damarına ve kordonlara en iyi şekilde erişecek şekilde konumlandırın. Daha sonra, juguler veni izole etmek için, damar ile çevresindeki doku arasına ince forseps yerleştirin ve damarı dokudan nazikçe serbest bırakmak için aleti yavaşça açıp kapatın.Şah damarı tamamen temizlendikten sonra, forsepsleri damarın altına yerleştirin ve altına iki adet 10 cm uzunluğunda 7-0 dikiş yerleştirin. Dikişi başın proksimalini kapatmak için iki düğüm atın ve ikinci dikişle bir düğüm hazırlayın, ancak kapatmayın. Şimdi, bir elinizde forseps ile, 37 santigrat derece steril salin ile doldurulmuş kateteri tutun, ardından diğer elinizle damar içine küçük bir kesi yapmak için makas veya kavisli 26 gauge iğne kullanın.Kateteri juguler ven içine yerleştirin ve düğümü iki kez kapatın. Ardından, tam immobilizasyonu sağlamak için sütürü kateterin üzerinden başa yakın bir yere kapatın. Korozyona uğramış arterleri izole etmek ve hazırlamak için, trakeayı kaplayan alanı incelemek için ince kavisli forseps kullanın.Daha sonra, aşınmışlar çevre dokulardan serbest kaldığında, siniri nazikçe harekete geçirmek için gerekirse ince forsepsleri yavaşça kapatıp açarak vegas sinirini kesmeden damardan çıkarın. Her iki arter de tamamen temizlendikten sonra, forsepsleri ilk aşınmış arterin altına yerleştirin ve damarı aşırı germemeye dikkat ederken, damarın altına küçük, siyah, 3 mm x 2,5 cm plastik bir damar tutucu yerleştirin. Damar tutucu yerine oturduktan sonra kan akışının mevcut olduğundan emin olun.Damarın gerilmesini önlemek için, operatörün eli, aşınmış arteri izole etmek için birinci forsepsin tek bir hareketi ve damarın altında bir delik açmak için ikinci forsepsin yardımıyla mümkün olduğunca az hareket etmelidir. Damar tutucu doğru şekilde yerleştirildiğinde, ikinci arteri cihazın üzerine yerleştirin. Fare doğrudan mikroskobun altına yerleştirilmezse, bezleri trakeanın üzerine geri yerleştirin ve bölgenin kurumasını önlemek için 37 santigrat derece steril salin uygulayın.1 mL'lik bir şırıngada, steril salin içinde 1-4 seyreltme, mL çözülmüş akridin portakal stok çözeltisi başına 2 mg hazırlayın. Şırıngayı ışıktan koruyun. Ölçümleri yapmak için, fareyi uzun mesafeli bir kondansatör ve bir monokromatör, bir ışın ayırıcı ve bir CCD kamera ile 10x suya daldırma objektifi kullanarak yüksek hızlı, geniş alanlı bir floresan mikroskobu altına yerleştirin.Hedefi endotel yüzeyindeki aşınmış arterin ortasına odaklayarak gerçek zamanlı olarak görüntüler elde edin. Yavaşça 50 mL akridin portakalı enjekte edin. Ardından, yazılımı, resim başına 120 milisaniye pozlama süresiyle 100 görüntü kaydedecek şekilde ayarlayın.Her video için arter üzerinde farklı yerlerde aşınmış arter başına dört video kaydedin. Floresan sinyali azalırsa, 50 mL daha akridin portakalı enjekte edin. Farklı koşulları test etmek için, bir juguler kateter yerleştirilmemişse, akridin portakalını doğrudan lateral kuyruk venine enjekte edin ve aynı görüntü alımını gerçekleştirin.Kontrol olarak, enjekte edilmemiş lys-Mcre-pozitif, IRG-pozitif farelerden floresan ölçümlerini kaydedin. Saniyede 10 görüntü hızında görüntülenen her video için kabın ortasına yerleştirilmiş 200 mikron x 250 mikron dikdörtgen görünümde yuvarlanma ve yapışma hücrelerini ölçün. Yuvarlanma ve yapışma hücrelerini sayın.Yapışıklık hücreleri, 10 saniyelik video içinde endotelden hareket etmeyen veya ayrılmayan hücreler olarak tanımlanır. Kantitasyonu basitleştirmek için, kırmızı floresan içeren kanalı çıkarın ve yuvarlanan ve yapışan hücreleri saymak için yalnızca yeşil floresansı kullanın. Bu çalışmada, anjiyotensin 2 ile infüze edilen lys-mCre pozitif, IRG pozitif farelerin aşınmış halleri IVM kullanılarak gözlendi.Burada başlangıçta görüldüğü gibi, bir juguler kateterin varlığı, lys-M-pozitif floresan hücrelerin yapışması ile sonuçlandı. Akridin portakal enjeksiyonundan sonra, endotel hücreleri de floresan idi. Daha sonra, endotel ile ilişkili floresansı sınırlamak için arka planın azaltılması, tüm çekirdekli yapışan hücrelerin lys-M pozitif olduğunu ortaya çıkardı.Bu deneyde, bir haftalık anjiyotensin 2 infüzyonundan sonra, lys-M Cre pozitif IRG pozitif farelerin aşınmış arterlerindeki lökosit endotel etkileşimleri, akridin portakal enjeksiyonu olsun veya olmasın, juguler kateter yoluyla veya kuyruk damarı yoluyla IVM ile görüntülendi ve görselleştirildi. Herhangi bir kateter veya enjeksiyon olmadan, lys-M pozitif hücrelerin yuvarlanması, anjiyotensin 2 infüzyonundan sonra, tedavi edilmeyen farelere kıyasla önemli ölçüde artmıştır. Ve yapışma da arttı.Juguler kateter ile akridin portakal enjeksiyonu, anjiyotensin 2 ile tedavi edilen farelerde, kateteri olmayan farelere kıyasla daha büyük ölçüde yapışmayı ve yuvarlanmayı arttırdı. Son olarak, bu panellerde görüldüğü gibi, kuyruk damarına akridin portakalı enjeksiyonu, akridin portakal enjeksiyonu yapılmayan farelere kıyasla benzer yapışma ve yuvarlanmaya yol açar. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik düzgün bir şekilde uygulanırsa otuz dakika içinde yapılabilir.Bu prosedürü denerken, damarları çevreleyen dokulara zarar vermemeyi unutmamak önemlidir. Geliştirildikten sonra, bu teknik, kardiyovasküler ve hemostatik alanlardaki araştırmacıların in vivo olarak lökositleri ve trombositlerin vasküler duvara yapışmasını keşfetmelerinin yolunu açmaktadır. Bu videoyu izledikten sonra, IVM'de boya enjeksiyonu ve ameliyatın etkisini nasıl sınırlayacağınızı iyi anlamış olmalısınız.Enterkalasyon yapan floresan boyalarla çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve eldiven gibi uygun malzemelerle boya ile cilt temasından kaçınılması gerektiğini unutmayın.

visualizing-leukocyte-rolling-adhesion-angiotensin-ii-infused-mice

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Burada, fare Kapkaççı lökosit homing çalışmada non-invaziv bir iki foton (2P) mikroskopi yaklaşımı açıklar. Biz, bizim doku görüntüleme hazırlık teknik yönlerini tartışmak ve yürütme ve veri toplama için kurulmuş ilk tipik bir deney yoluyla okuyucu yürümek.

Lökosit Homing Göç ve non-invaziv Görüntüleme In vivo</em

Bu hasat basınçlı kaplar endotele lökosit yapışma görselleştirmek için bir yöntemdir. Bu teknik, bu nedenle yüksek kan basıncı fizyopatolojik koşullardaki taklit-200 mmHg intralüminal basınca kadar farklı kayma akışı altında vasküler yapışma eğitimi sağlar.

Vasküler Endotel Yüksek Lumen Basıncı Görüntüleme Lökosit Adezyon

Bu videoda, intraperitoneal olarak lipopolisakkarit enjekte edilen bir fare modelinin mezenterial damarlarındaki kan hücresi-endotel etkileşimlerinin gerçek zamanlı görselleştirmesini gösteriyoruz.

Bir Enflamasyon Fare Modelinde Kan Hücresi-Endotel Etkileşimlerini Analiz Etmek için İntravital Mikroskopi

Karaciğer lökosit işe özgü karaciğer sinüzoidal endotel hücreleri ile kaplı olan hepatik sinüzoidler özel kanallar içinde gerçekleşir. Fizyolojik kesme stresi koşulları altında, insan karaciğer sinüzoidal endotelyumda lökosit işe faz kontrast mikroskopisi bu işlemi altında yatan moleküler mekanizmaların açıklanması kolaylaştırabilir.

Kayma Stres İnsan Karaciğer Sinüzoidal Endoteline altında Koşullarına Lökositer İşe Alım Eğitim için Bir Akış Adezyon Deneyi

Lökositler paraselüler veya transselüler yolu kullanarak endotel tek tabaka çapraz. Biz endojen junctional dağıtım VE-kaderin ve PECAM-1 lökosit transendotelyal göç sırasında fizyolojik akış altında iki âlemden yolları arasında ayrım için takip basit bir deney geliştirildi.

Nötrofil Hicret altında Fizyolojik Akış sırasında endotel hücre-hücre Eklemlerinin Gerçek zamanlı Görüntüleme

Burada, biz araştırmacı bir fare dolaşım sistemine endotel kaynaklı yapışma molekülleri ile kaplanmış bir odayı bağlayarak lökosit işe dinamikleri ex vivo değerlendirmek için izin veren bir protokol mevcut. Göreceli biyolojik şartlar altında lökosit değerlendirme sağlar, bu yöntem önemli avantajlar sunar.

Bir Flow Koşullarında lökosit-endotel Etkileşimleri değerlendirilmesi Ex vivo Autoperfused Microflow Odası Deneyi

Farelerde mezenter damarlarının intravital mikroskopisinin bu basitleştirilmiş uygulaması, lökosit-endotel ve trombosit-lökosit etkileşimlerini gözlemlemek için farklı inflamasyon modellerinde kullanılabilir.

Farelerde mesenteriumda Damarlardaki intravital Mikroskopi Lökosit-endotelyal ve Trombosit-lökosit Etkileşimleri

Lökosit heyecanla damar hücreleri ve trombositlerin damar duvar yaralanma sonra veya enflamasyon sırasında etkileşim. Burada, lökosit ve hücresel eşleri arasındaki etkileşimler altında yatan moleküler mekanizmaları karakterize etmek için basit bir laminar akış tabanlı tahlil açıklayın.

Lökosit işe kültürlü damar hücreleri ve yapışık trombositler üzerinde araştırmak için Laminar akış tabanlı deneyleri

Burada, fare cremaster kasının post-kılcal venüzlerinde intravital mikroskopinin nasıl yapılacağını gösteriyoruz. Yaygın olarak farklı inflamasyon ve sepsis modellerine, özellikle kemokinler ve sitokinler tarafından indüklenenlere uygulanan, abartılı kas lökosit infiltrasyonu içeren muscolopatilerin çalışmasında önemini vurguluyoruz.

İntravital Mikroskopi Ile Değerlendirilen Farelerde Cremaster Kasın Lökosit İnfiltrasyonu

Bu protokol, hızlı hücre yuvarlaması yapışması sırasında yapışma olaylarını görüntüleyene kadar yapışma ayak izi testini gerçekleştirmek için deneysel prosedürleri sunar.

Yapışma Ayak İzi Tahlili ile Hücre Yuvarlanmasında Görüntüleme Moleküler Yapışması

Eklemlerin in vivo görüntülemesi, iltihaplı eklemler içindeki lökositlerin göç davranışını ve moleküler dinamiklerini ortaya çıkarmak için değerli bir tekniktir. Burada, tip II kollajen kaynaklı artritin (CIA) fare modeli kullanılarak eklemlerin in vivo görüntülemesi için ayrıntılı bir protokol sunuyoruz.

In Vivo'da Görüntüleme, eklemlerdeki lökositlerin göç davranışını ortaya çıkarıyor

Öğrenin, farelerde anjiyotensin II kaynaklı hipertansiyonda koroner arterlerde lökosit haddeleme ve yapışmasını canlı görüntüleme mikroskobisi ile görselleştirmeyi. Bu yöntem damarsal disfonksiyon patolojisinde bağışıklık hücreleri davranışlarını in vivo gözlemlemeyi sağlar.

Lökosit haddeleme ve yapışma Anjiyotensin II-infüzyon farelerde görselleştirme: teknikleri ve Püf noktalar

Daha fazla video keşfet