Name: Burun membran Transepithelial potansiyel farkının (NPD) standart ölçüm (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-13T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 47 s
Description: Öğrenin burun epitelinde CFTR ve ENaC kanallarının koordineli aktivitesini değerlendiren standart NPD ölçüm protokolünü. Bu yöntem kistik fibrozis ve diğer epitel sodyum kanalı bozukluklarında iyon taşınımını incelemeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu araştırma CFTR fonksiyonu için Standardizasyon Komitesi (klinik denemeler ağ, Avrupa kistik fibrozis toplum) ve ulusal kaynakları merkezi çalışma grubu (Therapeutics kalkınma ağı, kistik fibrozis çalışma grubu tarafından desteklenmiştir Vakfı). Ek destek CF Vakfı tarafından sağlanan (GMS için Clancy FY09) ve NIH (SMR ve GMS için DK072482).

İnsan denekler içeren iletişim kuralı tüm katılımcı kurumları Araştırma Komitesi tarafından kabul edildi. Teknik uygulama her merkezi onun kurumsal insan Araştırma Etik Kurulu onayı için uygulamaya sorumludur.
1. çözüm hazırlık
<ol><li>
Çözümler #1, #2 ve #3, temel çözümler, önce yordamı ve saklı yerinde (Tablo 1) 1 L gruplar halinde hazırlayın. Not: Amiloride ışığa duyarlı ve karanlıkta depolanması gerekir (bkz. Tablo 1 için çözüm kompozisyon) (SOP için ayrıntılı çözüm hazırlık11bakınız).<ol>
<li>Tüm çözümler pH 7,4 ve 0,22 µm şişe-ilk filtre ile filtre tampon.</li>
		<li>Çözüm #3, fosfat içeren tuzları önce ekleyin, kristalizasyon (bkz: Tablo 2 için çözüm kompozisyon) önlemek için iyonize kurmalarına izin. Not: karıştırma sırası çözüm #3 için önemlidir.</li>
		<li>Bu çözümler 4 ° c (3 ay boyunca istikrarlı) veya (6 ay boyunca istikrarlı)-20 ° C'de depolayın.</li>
		<li>#4 ve #5 çözümleri NPD test gününde aracıları ekleyerek hazırlayın. Isoproterenol ışık ve oksidasyon hassas ve faaliyete (%4 çürüme 4 h 4-8 ° C'de gösteren) Oda sıcaklığında kaybeder. 4 ° C'de mağaza Not: ATP ışık ve oksidasyon hassas değil (bkz. Tablo 3).</li>
	</ol>
</li>
</ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Bileşik</td>
			<td>Molekül ağırlığı</td>
			<td>Konsantrasyonu (mM)</td>
			<td>Kompozisyon (g/L)</td>
		</tr>
<tr>
<td>NaCl</td>
			<td>58</td>
			<td>148</td>
			<td>8.58</td>
		</tr>
<tr>
<td>CaCl2 2 H2O</td>
			<td>147</td>
			<td>2.25</td>
			<td>0,33</td>
		</tr>
<tr>
<td>KCl</td>
			<td>75</td>
			<td>4.05</td>
			<td>0,3</td>
		</tr>
<tr>
<td>K2HPO4
</td>
			<td>174</td>
			<td>2.4</td>
			<td>0,42</td>
		</tr>
<tr>
<td>KH2 PO4
</td>
			<td>136</td>
			<td>0,4</td>
			<td>0,05</td>
		</tr>
<tr>
<td>MgCl2 6 H2O</td>
			<td>203</td>
			<td>1.2</td>
			<td>0,24</td>
		</tr>
</tbody></table>Tablo 1: Çözüm kompozisyon.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Bileşik</td>
			<td>Molekül ağırlığı</td>
			<td>Konsantrasyonu (mM)</td>
			<td>Kompozisyon (g/L)</td>
		</tr>
<tr>
<td>Na glukonat</td>
			<td>218</td>
			<td>148</td>
			<td>33.26</td>
		</tr>
<tr>
<td>CA glukonat</td>
			<td>430</td>
			<td>2.25</td>
			<td>0,97</td>
		</tr>
<tr>
<td>K glukonat</td>
			<td>234</td>
			<td>4.05</td>
			<td>0,95</td>
		</tr>
<tr>
<td>K2 HPO4
</td>
			<td>174</td>
			<td>2.4</td>
			<td>0,42</td>
		</tr>
<tr>
<td>KH2 PO4
</td>
			<td>136</td>
			<td>0,4</td>
			<td>0,05</td>
		</tr>
<tr>
<td>MgSO4 7 H2O</td>
			<td>246</td>
			<td>1.2</td>
			<td>0,24</td>
		</tr>
</tbody></table>Tablo 2: Çözüm kompozisyon.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Çözüm</td>
			<td>Çözüm numarası</td>
			<td>İçindekiler</td>
			<td>EDC işareti</td>
		</tr>
<tr>
<td>Zilleri enjeksiyon</td>
			<td>Çözüm 1/A</td>
			<td>Enjeksiyon için arabelleğe alınan zil sesleri</td>
			<td>ZİLLERİ</td>
		</tr>
<tr>
<td>Zilleri + amiloride</td>
			<td>Çözüm #2/B</td>
			<td>Tamponlu zilleri + 100 mikron amiloride</td>
			<td>AMİL'İN</td>
		</tr>
<tr>
<td>Sıfır Cl- + amiloride</td>
			<td>Çözüm #3/C</td>
			<td>Arabelleğe alınan sıfır Cl- + 100 mikron amiloride</td>
			<td>OCL</td>
		</tr>
<tr>
<td>Sıfır Cl- + amiloride + isoproterenol</td>
			<td>Çözüm #4/D</td>
			<td>Arabelleğe alınan sıfır Cl- + 100 mikron amiloride + 10 mikron isoproterenol</td>
			<td>ISO</td>
		</tr>
<tr>
<td>Sıfır Cl-+ amiloride + isoproterenol + ATP</td>
			<td>Çözüm #5/E</td>
			<td>Arabelleğe alınan sıfır Cl- + 100 mikron amiloride + 10 mikron isoproterenol + 100 mikron ATP</td>
			<td>ATP</td>
		</tr>
</tbody></table>Tablo 3: Çözüm listesi.
2. kateter
<ol><li>
Bir PVC, steril, tek kullanım, 2 lümen (0.7 mm iç çapı Ø) kateter NPD için özel olarak tasarlanmış bir yuvarlak ve yumuşak ekstremite (2.5 mm dış çapı Ø,) kullanın.
	<ol>
<li>Bir tarafında delik, 2 mm ile bir delik perfüzyon için belgili tanımlık uç, uç için uzak tarafından mukoza ile temas yapmak (bkz. adım 10.1).</li>
		<li>Kateterin iki radarı-kilit bağlantı birini ölçüm elektrot ve perfüzyon pompa diğer birine bağlayın. Ölçüm lumen olarak mavi lekeli kanal kullanın. 10 cm için her 0,5 cm aralıklarla kateter etiketleyin. Not: Dead space 0.3 mL oyundur. Bu mümkün değilse kateter hazırlanması takip için sonraki iki adımı yukarıdaki yordamı kullanmak için tercih edilir.</li>
		<li>PE50 ve PE90 kateter boru uzunlukları eşittir (~ 76 cm) kesti.</li>
		<li>Bunlar silikon kauçuk boru 1 cm parçası içinde birlikte yapıştırmayın. 25 G künt ucu iğne kuytu ucunu PE-90 Boru yerleştirin. 25 gr kelebek iğne kuytu yer alıyor gibi tüp delik değil emin PE50 boru karşı tarafındaki diğer ucuna yerleştirin.</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Çift lümenli kateter diyagramı; etiketli boyutlar; Tıbbi sıvı uygulaması için kullanılır." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57006/57006fig4.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 4"> Şekil 4: kateter kullanılan NPD ölçülerini. İç metin kutusu kateter ucu ile ölçüm delik gösterir.
3. Agar cilt Köprüsü (kelebek iğne) ve kateter hazırlanması
Not: Erimiş agar manipülasyon yanıklara neden ve bu dikkatli bir şekilde yapılmalıdır.
<ol><li>
%3 agar agar 3 g çözüm #1 geniş ağız şişe 100 mL ile karıştırarak hazırlayın. Agar çözünür kadar mikrodalgada eritin (saydam).
	<ol>
<li>10 mL şırınga ile sıcak agar doldurun.</li>
		<li>Şırınga daha sonra kelebek iğne (23 G) ve kateterin işaretli lümen bağlayın. Ucunda görünene kadar agar enjekte et.</li>
		<li>En az 10 dakika soğumasını bekleyin.</li>
		<li>Cilt Köprüsü ve kateter tam dolu ve hava kabarcıkları özgür olmak görüntülenir emin olun.</li>
		<li>#1 4 ° C'de çözümde toplu deri köprüleri depolamak ve 1 hafta sonra kullanmayın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. Eğer kullanma ECG krem
<ol><li>
ECG krem (1:1, v/v zil) ile çözüm #1 oranında seyreltin. Ücretsiz olarak hava kabarcıkları kadar rahat bırak.
	<ol>
<li>10 mL şırınga seyreltilmiş ECG krema ile doldurun.</li>
		<li>Şırınga için kateterin lümen işaretli bağlamak ve alt tarafı Hole'da görünene kadar yavaş yavaş ECG krem enjekte.</li>
		<li>Kateter tam dolu ve hava kabarcıkları serbest olduğundan emin olun.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. veri toplama sistemi
Not: Veri koordinat belirleme sistemi genel kurulum Şekil 5' te gösterilmiştir.
<img alt="Nöral sinyal analizi için biyoamplifikatör, elektrotlar ve veri toplama ile elektrofizyoloji kurulumu." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57006/57006fig5.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 5"> Şekil 5: kurulum veri toplama sistemi. Bioamplifier ve headstage bilgisayar arayüzü için bağlantı yanı sıra headstage11Elektrot bağlantıları gösteren. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57006/57006fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<ol><li>
Bağlantıları
	<ol>
<li>Bilgisayar veri koordinat belirleme sistemi (Tablo reçetesi) bir USB kablosu ile bağlayın.</li>
		<li>Veri toplama sistemi bioamplifier için bağlanmak için giriş veri koordinat belirleme sistemi (açık) bioamplifier (geri) çıkışta için Kanal 1 BNC kablo bağlayın.</li>
		<li>Bioamplifier headstage için headstage vida bioamplifier önünde giriş bölümü içine önceden bağlı özel kablo ile bağlayın.</li>
		<li>Headstage elektrotlar ve zemin elektrot bağlayın. Standart 2 mm Erkek-Diși konektörler için elektrotlar headstage önü bağlamak için kullanın. Not: Bağlantı noktası gömme ve yalnızca bir yönde 2 mm kablo uyuyor: kırmızı ölçme elektrot hasta burnuna (yolu ile burun kateter); Siyah-referans elektrot hasta cilt Köprüsü; Beyaz ECG elektrot için ilgilinin cilde cezalı.</li>
		<li>Bioamplifier açıklandığı gibi ayarla: Ofset: ayarlamak, düzeltmeden sonra; çekti konumda bırak dönüp etkinleştirmek için çekme Voltaj: DC; 1 mV cal: nötr pozisyon; Güç: Üzerinde veri toplamak için pil şarj etmek için kapalı; Kazanç: 10 olarak ayarlayın; Bant geçiren: LoFreq (dış kolu): DC; Bant geçiren: HighFreq (iç topuzu): 1kHz; Birim: kapalı.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. kafa-sahne mahsup hesabı ayarlama
<ol><li>
Belgili tanımlık laptop ve sıra amplifikatör SOP11' de gösterildiği gibi bağlayın. Veri koordinat belirleme sistemi (sıra yazılımın veri toplama için kullanılan cihazlar tanımak önemlidir) laptop ve o zaman geçin.
	<ol>
<li>Kafa-sahne ofset SOP sıra göre ayarlayın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>7. uzaklıklar
Not: Elektrik ölçme sisteminin istikrarı sağlamak için test için birkaç uzaklıklar vardır. (bkz. Şekil 6)
<ol><li>
Elektrot Ofset için başvuru (negatif) elektrot ve ölçüm (pozitif) elektrot birlikte seyreltilmiş ECG krem veya elektrotlar arasında okuma potansiyel farkı headstage sıfıra yakın olan 3 M KCl. sağlamak yerleştirin.
	<ol>
<li>Kateter ve/veya cilt Köprüsü uzaklığı ayarlamak için burun kateter radarı-kilit sonu veya cilt Köprüsü radarı-kilit sonu ölçme (pozitif) elektrot ile banyo içine koyun. Kateter diğer ucunu ECG krem banyosu veya 3 M KCL başvuru (negatif) elektrot potansiyel farkı headstage üzerinde sıfıra yakın olduğunu kontrol ettikten içeren yerleştirin.</li>
		<li>Bir kapalı devre uzaklığı ayarlamak için devre elektrot banyoda burun kateter değiştirirken kapalı olduğundan emin olun. Kapalı devre okuma 0 yakınındaki ofset kontrol mV ('ofset'; = ±2.5 mV). Uzaklık 0'a getirmek için headstage mahsup topuzu ayarlamak mV. Not: Bu devre içinde tüm bağlantıları eksiksiz olduğunu doğrular. Yoksa, burun kateter sağlam olmayabilir (hava kabarcıkları agar veya ECG krem). Agar köprüyü değiştirmek veya ECG krem kurulumunda itin. Elektrot Ofset ilk, kapalı tarafından takip gerçekleştirilmelidir sistemiyle (kapalı devre ofset), elektrot ve köprü (Şekil 6).</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="KCl veya EKG banyosu için elektrot kurulum şeması; referans ve ölçüm elektrotları; burun kateteri." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57006/57006fig6.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 6"> Şekil 6: (A)elektrot ofset, (B) kateter (veya köprü) uzaklığı, (C) kapalı devre ofset.
8. şırınga Set-up
Not: Önerilen kurulum aşağıdadır.
<ol><li>
#1, #2 ve #3 çözümleri çözülme yaklaşık 1 saat önce ölçüm.
	<ol>
<li>Dahili hatta kateter için en yakın stopcock bağlayın.</li>
		<li>Tüm pompalar üzerinde geçiş ve Kesme muslukları baloncuklar berraklaşana kadar tamamen kateter temizlemek için çözüm #1 sondayla floş.</li>
	</ol>
</li>
</ol>9. başvuru ve ölçüm elektrot yerleştirme
<img alt="Deri altı köprüsü olan bir denekte ölçüm elektrodu kurulumu; nörofizyoloji deneyi." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57006/57006fig7.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 7"> Şekil 7: konu ile ölçme elektrot ve subkutan köprü ölçümleri için hazır.
<ol><li>
NPD operatör karşı karşıya oturarak bir pozisyon almak çalışma konu var. Daha fazla konfor için ayak isteğe bağlı Anti-statik mat ve Ortoptik çene kalanı kafasına üzerine koyun.
	<ol>
<li>Zemin kurşun elektrot ilgilinin kol (Şekil 7) yerleştirilen ECG rampasına bağlayın.</li>
		<li>Derialtı iğne dorsal önkol (agar sistemi) yerleştirin veya referans elektrot üzerindeki önkol'lik daha önce en az aşınır EKG'nin krem uygulayın (bkz. aşağıdaki 10 üzerinden 7 puan).</li>
		<li>Cilt (parmak PD) ile potansiyel farkı ölçme ve kateter ucunu başparmak ve işaret parmağı arasında pinching tarafından "ölçüm delik" kapatmak için konu sorarak subkutan alanı bağlantısını denetleyin.</li>
		<li>Parmak PD -30 değilse mV veya daha fazla negatif, kelebek iğne ekleme kontrol edin. Aşınma (ECG krem kurulum için) yineleyin ve köprüleri denetleyin.</li>
		<li>Çözüm #1 enjektör pompa 80 mL/h. başlangıç itibariyle doğru burun deliği ile başlayın.</li>
		<li>Parmak PD olarak sabit bir negatif gerilim ölçmek (tipik Aralık--80 için 40 mV).</li>
		<li>EKG krem sistemi kullanıyorsanız: ECG krema 1:1 oranında seyreltin ve kateter sonra tam bir floş için Agar daha önce görmüş sonda delikten dolgu kapalı.</li>
		<li>Yarım kaplı elektrot elektrot uzaklık ve küme köprüden kontrolünü sağlayan, yıkanmak için ECG Krem 50 mL şırınga kateter takın.</li>
		<li>Başvuru Ag/Cl elektrot subkutan uzayına hafif önceki en az aşınma cilt tarafından bağlanmak, deri-ecek gözükmek ne zaman 'pembe ve parlak' dermis düzeyine ulaştı.</li>
		<li>ECG krem, aşındırmak deri kaplı ölçüm elektrot getirin. Parmak Agar sistemi için daha önce gösterilen PD denetleyin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>10. bazal PD ölçümü
<ol><li>
Burun kateter bir aydınlatıcı rhinoscope (veya eşdeğeri) alt konka görselleştirmek için kullanarak doğru burun yerleştirin. Ön ucu bir dönüm noktası kullanarak, alt solunum mukoza konka alt site hedefleme kateter ilerlemek. Alternatif olarak, yerleşim zor ise, sonda delik burun yere temas yerleştirilebilir. Not: Kateter burun operatör tarafından gösterilmesini istiyorsanız katı. Yerleştirme kolaylaştırmak için bir kanal kateterin mavi renkli ve alt konka ile temas halinde soruşturma tarafı delik içerir. Bu kateter döndürme engeller. 1 kateter ile 10 cm belirtildiği işaretleri kolay başvuru noktası sağlar.<ol>
<li>PD, alt konka ölçmek. Bu amaçla, kateter ölçüm delik alt konka (mark) sağ bazal, mukoza karşı onun yerleşim tarafından kapalı olduğundan emin olun.</li>
		<li>PD, 3.0, 2.0 1.5 1.0 ve 0.5 cm (konka aşağı aşağı verin mesafesinde) ölçmek: sağ bazal PDs işaretlemek.</li>
		<li>Her ölçüm için yaklaşık 5 belirtilen uzaklık korumak s her sürekli okuma (± 1 mV), bazal PD değerleri doğru yorumlanmasını kolaylaştırmak üzere.</li>
		<li>İşlev tuşu sol bazal PDs (3 cm, 2 cm, vb) ve sol bazal adlı işaretlemek için kullanarak sol burun deliği olarak yukarıdaki adımları yineleyin.</li>
		<li>Bazal PD önlemler bir kılavuz olarak kullanarak, en olumsuz sinyal sitesine burun kateter probe Ekle (ilâ 3 cm aşağı burun konka ön ucu) ve bant burun (veya eşdeğeri) ucunda küçük bir parça ile güvenli.</li>
	</ol>
</li>
</ol>11. NPD sıralı Perfusions izleme
<ol><li>
Sağ burun deliği için
	<ol>
<li>Çözüm hastanın burun damlıyor doğrulayın. Aşağı onların kafası rahat bir pozisyonda varsayalım konu (genellikle kafalarını ellerindeki başlatmak veya bir chinrest veya diğer bir immobilizing aygıtı konu alarak yardım) var. Hareketi en aza indirmek ve burun veya tüp dokunmaktan kaçının ve konuşmaktan kaçmak için konuyu hatırlatmak.</li>
		<li>Çözüm #1 açmak (Ringers) pompa (5 mL/dak veya 300 mL/saat). İstikrarlı bir değer elde edilir kadar kaydı (&lt; 1 mV Değiştir/30 s). Not: Bu istikrar elde etmek için yaklaşık 3 dakika sürer.</li>
		<li>Çözüm #1 ile perfüzyon kapatın.</li>
		<li>Perfüzyon çözüm #2 (Amiloride) ile başlatın. En az 3 dk için kayıt NPD (Plato gerilim içinde-den kuşkulanmak, 5 dakikaya kadar toplam kayıt devam).</li>
		<li>Perfüzyon çözüm #3 (sıfır klorür) ile başlatın. En az 3 dk için NPD kayıt (kayıt için 5 dakikaya kadar toplam Yaylası gerilim istikrarlı değilse, devam).</li>
		<li>Perfüzyon çözüm #4 (Isoproterenol) ile başlatın. Kayıt NPD en az 3 dk için [Yaylası gerilim istikrarlı değilse (sabit voltaj izleme için en az 30 s &lt; 1 mV drift), 5 dakikaya kadar toplam kayıt devam].</li>
		<li>Perfüzyon çözüm #5 (ATP) ile başlatın. Kayıt NPD en az 1 dk kadar yanıt hyperpolarizing bir tepe elde edilir.</li>
		<li>#1 (Ringers) çözüm ile perfüzyon açmak ve 30 izin s kateter temizlemek için.</li>
		<li>Çözüm #1 perfüzyon dön.</li>
		<li>Sol burun deliği için yordamı yineleyin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>12. Test sonu
<ol><li>
Yeniden denetleyin ve istikrarlı parmak PD ("yazı parmak") kayıt için 5 s.
	<ol>
<li>Konunun kutanöz Köprüsü ve bandaj cilt üzerinde ekleme sitesinden kaldırın. AgCl/ECG krem sistemi için elektrot kol kaldırın.</li>
		<li>İlk kapalı devre uzaklığı ölçmek için açıklandığı gibi "Son kapalı döngü ofset" gerilim kaydedin (bkz. Adım 7.1.3).</li>
		<li>İşlev tuşu, Mark son uzaklık.</li>
		<li>Veri toplama durdurmak (basın "Start"). Not: Geçerli SOP test için pozitif kontrol olarak hizmet vermeye purinergic kalsiyum bağımlı Cl- salgılanması, harekete geçirmek 100 µM ATP kullanmanızı önerir; Ancak, bu isteğe bağlı bir denemedir.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Rosenstein, B. <a target="_blank" href="http://www.chestmed.theclinics.com/article/S0272-5231(05)70091-5/abstract">What is a Cystic Fibrosis Diagnosis?</a> Clinics in Chest Medicine. 19, 423-441 (1998).</li>
<li>Rosenstein, B., Cutting, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Diagnosis+of+Cystic+Fibrosis%3A+A+Consensus+Statement%3A+Cystic+Fibrosis+Foundation+Consensus+Panel%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Pediatrics%22%5BJournal%5D)">The Diagnosis of Cystic Fibrosis: A Consensus Statement: Cystic Fibrosis Foundation Consensus Panel.</a> The Journal of Pediatrics. 132, 589-595 (1998).</li>
<li>Farrell, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+of+Cystic+Fibrosis%3A+Consensus+Guidelines+from+the+Cystic+Fibrosis+Foundation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Diagnosis of Cystic Fibrosis: Consensus Guidelines from the Cystic Fibrosis Foundation.</a> The Journal of Pediatrics. 181, S4-S15 (2017).</li>
<li>Mesbahi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+of+CFTR+functional+measurements+and+clinical+improvements+in+cystic+fibrosis+patients+with+non-p.Gly551Asp+gating+mutations+treated+with+ivacaftor%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cystic+Fibrosis%22%5BJournal%5D)">Changes of CFTR functional measurements and clinical improvements in cystic fibrosis patients with non-p.Gly551Asp gating mutations treated with ivacaftor.</a> Journal of Cystic Fibrosis. 16, 45-48 (2017).</li>
<li>Accurso, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sweat+chloride+as+a+biomarker+of+CFTR+activity%3A+proof+of+concept+and+ivacaftor+clinical+trial+data%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cystic+Fibrosis%22%5BJournal%5D)">Sweat chloride as a biomarker of CFTR activity: proof of concept and ivacaftor clinical trial data.</a> Journal of Cystic Fibrosis. 13 (2), 139-147 (2014).</li>
<li>Accurso, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+VX-770+in+Persons+with+Cystic+Fibrosis+and+the+G551D-CFTR+Mutation%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Effect of VX-770 in Persons with Cystic Fibrosis and the G551D-CFTR Mutation.</a> New England Journal of Medicine. 363, 1991-2003 (2010).</li>
<li>Sermet, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+nasal+potential+difference+in+young+children+with+an+equivocal+sweat+test+following+newborn+screening+for+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Thorax%22%5BJournal%5D)">Measurement of nasal potential difference in young children with an equivocal sweat test following newborn screening for cystic fibrosis.</a> Thorax. 65 (6), 539-544 (2010).</li>
<li>Wilschanski, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutations+in+the+Cystic+Fibrosis+Transmembrane+Regulator+Gene+and+In+vivo+Transepithelial+Potentials%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Mutations in the Cystic Fibrosis Transmembrane Regulator Gene and In vivo Transepithelial Potentials.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 174 (7), 787794(2006).</li>
<li>Sermet-Gaudelus, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+Phenotype+and+Genotype+of+Children+with+Borderline+Sweat+Test+and+Abnormal+Nasal+Epithelial+Chloride+Transport%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Clinical Phenotype and Genotype of Children with Borderline Sweat Test and Abnormal Nasal Epithelial Chloride Transport.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 182 (7), 929-936 (2010).</li>
<li>De Boeck, K., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22878883">CFTR biomarkers: time for promotion to surrogate endpoint?</a> European Respiratory Journal. 14, 38(2013).</li>
<li>US CFF-TDN (Cystic Fibrosis Foundation-Therapeutics Development Network) and the ECFS-CTN (European Cystic Fibrosis Society- Clinical Trials Network). Standard Operating Procedure 528.01. Standardized Measurement of Nasal Membrane Transepithelial Potential Difference (NPD). , (2014).</li>
<li>Knowles, M., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/7300874">Increased bioelectric potential difference across respiratory epithelia in CF.</a> New England Journal of Medicine. 305 (25), 1489-1493 (1981).</li>
<li>Solomon, G. M., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2951758/">An international Randomised Multicentre Comparison of NPD Techniques.</a> Chest. 138, 919-928 (2010).</li>
<li>Sermet, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chloride+Transport+in+Nasal+Ciliated+Cells+of+Cystic+Fibrosis+Heterozygotes%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Chloride Transport in Nasal Ciliated Cells of Cystic Fibrosis Heterozygotes.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 171, 1026-1031 (2005).</li>
<li>Naehrlich, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nasal+potential+difference+measurements+in+diagnosis+of+cystic+fibrosis%3A+an+international+survey%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cystic+Fibrosis%22%5BJournal%5D)">Nasal potential difference measurements in diagnosis of cystic fibrosis: an international survey.</a> Journal of Cystic Fibrosis. 13 (1), 24-28 (2014).</li>
<li>Vermeulen, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nasal+potential+measurements+on+the+nasal+floor+and+under+the+inferior+turbinate%3A+Does+it+matter%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Pulmonology%22%5BJournal%5D)">Nasal potential measurements on the nasal floor and under the inferior turbinate: Does it matter?</a> Pediatric Pulmonology. 46 (2), 145-152 (2011).</li>
<li>Bronsveld, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+perfusate+temperature+on+nasal+potential+difference%5BTitle%5D)+AND+%22European+Respiratory+Journal%22%5BJournal%5D)">Influence of perfusate temperature on nasal potential difference.</a> European Respiratory Journal. 42, 389-393 (2013).</li>
<li>Boyle, M., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12907532">A multi-center study on the effect of solution temperature on nasal potential difference measurements.</a> Chest. 124 (2), 482-489 (2003).</li>
<li>Solomon, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Multiple+Reader+Scoring+System+for+Nasal+Potential+Difference+Parameters%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cystic+Fibrosis%22%5BJournal%5D)">A Multiple Reader Scoring System for Nasal Potential Difference Parameters.</a> Journal of Cystic Fibrosis. 16 (5), 573-578 (2017).</li>
<li>Beekman, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CFTR+functional+measurements+in+human+models+for+diagnosis%2C+prognosis+and+personalized+therapy%3A+Report+on+the+pre-conference+meeting+to+the+11th+ECFS+Basic+Science+Conference%2C+Malta%2C+26-29+March+2014%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cystic+Fibrosis%22%5BJournal%5D)">CFTR functional measurements in human models for diagnosis, prognosis and personalized therapy: Report on the pre-conference meeting to the 11th ECFS Basic Science Conference, Malta, 26-29 March 2014.</a> Journal of Cystic Fibrosis. 13, 363-372 (2014).</li>
<li>Accurso, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+VX-770+in+persons+with+cystic+fibrosis+and+the+G551D-CFTR+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Effect of VX-770 in persons with cystic fibrosis and the G551D-CFTR mutation.</a> New England Journal of Medicine. 363, 1991-2003 (2010).</li>
<li>Wilschanski, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+ataluren+%28PTC124%29+treatment+of+nonsense+mutation+cystic+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22European+Respiratory+Journal%22%5BJournal%5D)">Chronic ataluren (PTC124) treatment of nonsense mutation cystic fibrosis.</a> European Respiratory Journal. 38, 59-69 (2011).</li>
<li>Accurso, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sweat+Chloride+as+a+biomarker+of+CFTR+activity%3A+proof+of+concept+and+Ivacaftor+clinical+trial+data%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cystic+Fibrosis%22%5BJournal%5D)">Sweat Chloride as a biomarker of CFTR activity: proof of concept and Ivacaftor clinical trial data.</a> Journal of Cystic Fibrosis. 13 (2), 139-147 (2014).</li>
<li>Rowe, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+Mechanism+of+the+Cystic+Fibrosis+Transmembrane+Conductance+Regulator+Potentiator+Ivacaftor+in+G551D-mediated+Cystic+Fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Clinical Mechanism of the Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Potentiator Ivacaftor in G551D-mediated Cystic Fibrosis.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 190 (2), 175-184 (2014).</li>
<li>Boyle, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+CFTR+corrector+lumacaftor+and+a+CFTR+potentiator+%28ivacaftor%29+for+treatment+of+patients+with+cystic+fibrosis+who+have+a+phe508del+CFTR+mutation%3A+a+phase+2+randomised+controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Respiratory+Medicine%22%5BJournal%5D)">A CFTR corrector lumacaftor and a CFTR potentiator (ivacaftor) for treatment of patients with cystic fibrosis who have a phe508del CFTR mutation: a phase 2 randomised controlled trial.</a> The Lancet Respiratory Medicine. 2 (7), 527-538 (2014).</li>
<li>Schulz, A., Tummler, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-allergic+asthma+as+a+CFTR-related+disorder%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cystic+Fibrosis%22%5BJournal%5D)">Non-allergic asthma as a CFTR-related disorder.</a> Journal of Cystic Fibrosis. 15 (5), 641-644 (2016).</li>
<li>Sloane, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+pharmacologic+approach+to+acquired+cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator+dysfunction+in+smoking+related+lung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A pharmacologic approach to acquired cystic fibrosis transmembrane conductance regulator dysfunction in smoking related lung disease.</a> PLoS One. 7 (6), e39809(2012).</li>
<li>Bienvenu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cystic+Fibrosis+Transmembrane+Conductance+Regulator+Channel+Dysfunction+in+Non-Cystic+Fibrosis+Bronchiectasis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Channel Dysfunction in Non-Cystic Fibrosis Bronchiectasis.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 181 (10), 1078-1083 (2010).</li>
<li>Werlin, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+and+electrophysiological+characteristics+of+recurrent+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pediatric+Gastroenterology+and+Nutrition%22%5BJournal%5D)">Genetic and electrophysiological characteristics of recurrent acute pancreatitis.</a> Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition. 60 (5), 675-679 (2015).</li>
<li>Dransfield, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acquired+Cystic+Fibrosis+Transmembrane+Conductance+Regulator+Dysfunction+in+the+Lower+Airways+in+COPD%5BTitle%5D)+AND+%22Chest%22%5BJournal%5D)">Acquired Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator Dysfunction in the Lower Airways in COPD.</a> Chest. 144 (2), 498-506 (2013).</li>
</ol>

Yazarlar onlar rakip hiçbir mali çıkarları var bildirin.

Vivo, NPD art arda bir boyuna olarak gerçekleştirilebilir benzersiz bir ölçüm sağlar ve tekrarlanan ölçümleri ile bir group-wise ve bireysel olarak14tarihindebenzer boyuna sonuçlar gözlenmektedir gösterir, 15. NPD CF sigara-CF ayırt için mükemmel ayrımcılık geçerliliği yoktur güçlü kanıtlar var. 25 çalışmalar sürekli olarak Cl- istatistiksel olarak anlamlı bir fark ve Na+ gürültülerinden CF hastalarda ve sağlıklı kontrol10arasında gösterdi. Birkaç daha önce Gelişmiş endeksi bu kapasite göstermek iken, biz son standardizasyon yöntemi7,8verilen yeni güncelleştirmelerin gerekli olduğunu tahmin.
Değişiklikler ve sorun giderme
Bu test doğru ölçümler sağlamak için birkaç önemli adımlar gerektirir. Bu sistem için önerilen standartları çalıştığından emin olmak için elektrotlar ve kateterler kapalı devre uzaklığı içerir. Hasta hala kalır ve bu eserler ve kateter dislodgement en aza indirir gibi konuşmasını kaçınmak gerekir. Bu test kooperatif olmayan hastalarda zor yapar ve bu teknik sadece bir çalışmada çocuklarda 6 yaş7yıllık aşağıda bildirilmiştir.
Nazal epitel öncesi muayene yok kabuklar veya mukus ölçümleri etkileyebilir epitel üzerinde olduğundan emin olmak gereklidir.
En önemlisi, bu kateter yerleştirme konumunu tartışma konusu gerekir dikkat çekti. Burada sunulan SOP ölçüm (BT) alt konka altında kullanır. Altında belgili tanımlık o kateter yerleştirme standart ve kadınlarında denemeler yapılmıştır ve bu nedenle, bu önerilen yöntemdir. Ölçüm BT altında nazal mukoza ile sıkı temas halinde iken çözümleri ile temas halinde olma sürdürmek zor olabilir yan delikli kateter ile gerçekleştirilir. Teknik olarak daha kolaydır burun yerde PD ölçü diğer grupları. Önemlisi, Vermeulen (2011) 2 Yöntem karşılaştırılabilir16olduğunu gösterdi.
Çözümleri ısınma tartışılır Avrupa ve ABD merkezleri17,18arasında kalır. Bu gözlenen toplam klorür yanıt artırır yerine 22 ° C 37 ° C'de çözümleri kullanarak yaklaşık % 25 ve isoproterenol bağımlı klorür yanıt tarafından yaklaşık % 95'i18tarafından savunduğu. Ancak, ısınma değişkenliği, daha büyük standart sapması tarafından toplam klorür yanıt17değerlendirildi artar. Bu nedenle, çözümler ısınma değişkenlik ek bir faktör olduğu gibi çözümler bir çalışma olarak gerekli olmadıkça sıcak değil için tavsiye edilir.
Daha önce her iki elektrot teknikleri ile karşılaştırıldığında ve AgCl ve kalomel elektrot sistemleri benzer şekilde normal konular13' te bazal ve uyarılmış akıntılardaki işletilen bulundu.
Teknik sınırlamaları
Bu önemli konu içinde değişkenlik tabi testidir. Puanlama değişkenlik özellikle belirsiz tracings olan hastalarda yaygındır ve bu için tanılama uygulaması19' muhasebesi. Değişkenlik faktörler akut üst solunum yolu enfeksiyonu, geniş burun polip, önceki sinüs cerrahisi ve CF ile ilgili inflamasyon, özgüllük ve duyarlılık20,10azaltmak. Ayrıca, her ne kadar uzman okuyucular nicel Puanlama ve interpretability CF ve sigara-CF tracings, mükemmel anlaşma önemli bir değişkenliği ile zıt göstermek tracings yorumlanması okuyucular arasında farklı olabilir güven izleme19.
Önemli eşikleri karşı içsel değişkenlik
En önemlisi, ölçüm fizyolojik değişkenliğine farklı çalışmalar10, klorür toplam taşıma değişiklikler önemli ölçüde değişkenlik gösterdi CFTR gen terapisi denemeler gibi gösterildiği gibi önemli, ve amiloride21,22Aralık. Kesitsel değerlendirme öneriyor Cl- -7 -5 eşiğin isoproterenol yanıt artı sıfır mV olan CF ve sigara-CF konular10arasında kesme.
Biz yine de Aşama II çalışmalarda etkili bir CFTR Düzeltme değiştirme tedaviler hastalığı ile temsil eden bu parametrenin değişikliğin büyüklüğünü hakkında açık bilgi eksikliği. Bireysel tepki değerlendirmek için tekrarlanan testleri bir müdahale yanıtı izleme önemli değişiklikler iç değişkenlik ayırt etmek gerekebilir. En önemlisi, uyuşturucu değiştirme hastalığı olan gelecekteki uzun vadeli çalışmalar CFTR işlevi düzelme CF klinik sonuçlar veya vekil istenmeyen sonuçlara (FEV1düzelme) iyileşme ile ilişkisi göstermek gerekir hastalık. Nitekim, son bir aşama II Ivacaftor çalışma gösterdi klorür salgı23küçük bir iyileşme rağmen klinik yararı işaretlenmiş.
Bu tür çalışmalar trans-epitel Cl-gürültülerinden düzelme cut-off değeri klinik yararı için bir vekil parametre olabilir Eğer kurmak için yardımcı olacaktır. Bu terapiler değiştirme CFTR gelişimi rehberlik için önemli bir parametre.
Önemi ile ilgili mevcut Yöntemler: ter testi ve bağırsak geçerli ölçümler (ICM)
'' Şüpheli '' kistik fibrozis olan hastalarda, Cl- konsantrasyonu 30 ve 60 mM, NPD kompozit Skorlar hastalar '' CF-muhtemel '' teşhis etmek için son derece hassas bir araç ve '' CF-olası ''10 arasında bir ara ter tarafından olarak değerlendirildi . CFTR son derece olarak ifade edilir çünkü bir ex vivo ölçüm net CL- Cereyanlar karşısında rektal epitel sağlayan geçerli bağırsak ölçüm (ICM), kalan CFTR işlevi belirlenmesi ile yüksek bir hassasiyet de sağlar. Bu epitel.
Değişiklik CFTR işlev CFTR modülatörler tarafından bu farklı CFTR biyomarker değişiklikler arasındaki ilişki göz önüne alındığında bu mevcut belirsiz. Her ne kadar son iş dayalı Ivacaftor belirlenen NPD ve ter testi vardır ilişkili4, solunum yolu bir ölçüm solunum sonucu daha iyi bir tahmin daha, örneğin ise bu henüz oluşturulmadı, ter testi24 , 25 veya ICM değişimi. Ayrıca, değiştirici uyuşturucu Ayrıca onların organ belirli efficacies farklı olabilir. NPD açısından, bazal PD ve amiloride yanıt değişimler 0 Cl- ve isoproterenol yanıt değişiklikler Cl- taşıma hızlı iken Na+ taşıma, hızlı unutmamak gerekir. Bu hastalığın iyileşme için daha önemli olduğu kurulacak olduğunu.
Bu tekniğin yönelik uygulama
Bu tekniğin kullanımı dışında CF alan bekleniyor. Bu teknik benzersiz olarak Na+ ve Cl- iyon kanal, göstermek için uygundur bu yana bu astım26, kronik bronşit27, Sigara-CF bronşiektazi28 de dahil olmak üzere airways hastalıkları disfonksiyonu göstermek için uygulanabilir ve tekrarlayan pankreatit29. Buna ek olarak, bu teknik değişiklikler alt solunum yolları (Los Angeles) kronik bronşit30kronik obstrüktif akciğer hastalığı (KOAH) hastalarda daha düşük airways odaklı CFTR disfonksiyon göstermek için kullanılmıştır.
NPD hassas vivo içinde biyomarker CFTR işlevinin her iki tanı için kullanılabilir ve ayrıca, aktivite translasyonel araştırma CFTR ve ENaC doğru amaçlayan kanıtı-of-concept çalışmaları için kanal sağlar. Bu trans-epitel işlevi boyuna değerlendirmesini sağlar ve CF ile her hasta için en verimli düzeltici terzi için kişiselleştirilmiş ilaç için bir strateji olarak söz sahibidir.

Bu yöntem genel amacı trans-epitel iyon taşıma vivo içinde1araştırmak için amaçlayan burun potansiyel farkı (NPD) ölçmek etmektir. Bu teknik ölçüm sodyum (Na+) ve klorür (Cl-) ulaşım sağlar. NPD bir araştırma aracı olarak geç 1980'lerden beri kullanılan ve 2017 ise kistik fibrozis Vakfı (CFF) fikir birliği tanılama yönergeleri ve kistik fibrozis Vakfı (CFF) fikir birliği deyim2 tarafından 1998 yılında tanılama bir prosedür olarak kabul edildi 3. Nitekim, CF nedeni, biyolojik CFTR disfonksiyon bir artan Cl- salgılanması Na+ emme apikal membran ve bir kusur kanıtladığı. Genetik belirsiz ara ter testi sonuçları3olan hastalarda kesin olmayan olduğunda bu fonksiyonel test bir ek tanı aracı avantajı sağlar. Her ne kadar bu bilgiler aynı zamanda bağırsak geçerli ölçüm biyopsiler (ICM) tarafından elde, ICM olduğunu, ancak, genel olarak kullanılabilir birkaç merkezleri sadece ve standardizasyon ihtiyacı daha fazla. NPD yaklaşık 60 Genel merkezlerinde daha mevcuttur ve ayrıca, hastalığın ana alanıdır solunum epitel hedefler.
CFTR faaliyeti üzerindeki sağlar bilgi göz önüne alındığında, modülatör tedaviler4,5,6,7tarafındande fonksiyonel CFTR proteini restorasyonu değerlendirmek amaçlayan kanıtı-of-concept çalışmalarda kullanılır, 8. Nitekim çalışmalar CFTR mRNA/genetik düzenleme, CFTR güçlendiricisini ve düzeltici terapiler, verileri vurgulamak Cl- önemli değişiklikler ve Na+ taşıma tedavi6,9 ile ve NPD olabilir onaylar bir Klinik çalışmalarda yanıt veren bitiş noktası. Biz hassas klinik bitiş noktaları ince bir değişiklik bulmak içinde hastanın klinik durum kısa vadede mümkün bulunmadığından, bu preklinik biyomarker son derece bilgilendirici olabilir. CFTR modülatör terapiler alanında hızla genişletiyor ve hızlı bir şekilde büyük faz 3 denemeler10' a gitmeden önce aktif bileşikler deşifre edebiliyoruz testleri vivo içinde acilen ihtiyacımız var.
Teknik fizyolojik mantığı burun hava yolu epitel ve subkutan yuvası arasındaki potansiyel farkı ölçümü temel alır. İyon kanal faaliyetleri istikrarlı maksimal temel potansiyel farkı (PD), Na+ emme ENaC engelleme ile ilgili sonra değişiklikleri ölçme ve Cl- salgılanması farklı apikal Cl- taşıyıcılar ile sürüş tarafından incelenmiştir CFTR dahil olmak üzere. CFTR disfonksiyon tarafından en az bir değişiklik Cl- salgılanması bir kamp bağımlı yol aracılığıyla uyarılması üzerine potansiyel farkı gösterilir ve artan bir ENaC tarafından daha olumsuz bir temel potansiyel farkı algıladı gibi Na+ emme aracılı ve amiloride için geliştirilmiş bir tepki. Normal PD karşı CF için mekanik olarak Şekil 1' de özetlenmiştir.
<img alt="Elektrokimyasal gradyan diyagramı, CFTR/ENaC aktivitesi, epitel transportu, KF patoloji analizi." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57006/57006fig1.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> Şekil 1: iyon kanal faaliyet Özet şekil. Solunum epitel gösteren etkinliğini dengeli ENaC ve CFTR normal bireylerde aktivite ve sonuçlanan CFTR aktivite kaybı (B)(a)iyon aracılı ENaC sodyum taşıma arttı ve CFTR bağımlı klorür azaltılmış taşıma. ENaC: epitel sodyum kanalı, Na+: sodyum, CFTR: Kistik Fibrozis Transmembran regülatörü, CL-: klorür, mV: millivolts, PD: potansiyel farkı, min: dakika/s <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57006/57006fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
Ancak, bu test bir ölçüde değişkenlik hem tekrarlanan ölçüler içinde aynı hasta ve aynı genotip olan hastalarda, gösterir. Bu değişikliklerin yorumlanması modülatör tedavi sonrasında kolaylaştırmak için son derece önemlidir. Ayrıca, biz hala doğrulanmış eşikleri CF ve sağlıklı konular arasında ayrımcılık eksikliği. Bu kısmen klinik özellikleri kullanılabilirliği ve istihdam teknikleri arasındaki farklar nedeniyle olabilir. Bu nedenle, test standardizasyon amaçlayan önemli bir uluslararası çaba devam ediyor. Bize CFF-TDN (kistik fibrozis Vakfı-Therapeutics kalkınma ağı) ve ECFS-CTN (Avrupa kistik fibrozis toplum klinik denemeler ağ) kullanımı için NPD standart işletim prosedürü (SOP) multicenter ve araştırma çalışmalarda oluşturdu. Bu son ortak çalışma CTN ve TDN içinde kombine bir uluslararası CTN ve TDN uzmanlık bir araya getiren SOP, sonuçlandı (2014)11. Bu kağıt NPD CF tanı için veya araştırmacı tarafından başlatılan kanıtı-of-concept denemeler için istihdam için protokol ve test teknikleri sunar. Teknik uygulama her merkezi onun kurumsal insan Araştırma Etik Kurulu onayı için uygulamaya sorumludur.
<img alt="Sinirbilim diyagramı; şırınga pompaları, elektrotlar, bilgisayar arayüzü; sinir potansiyeli ölçümü." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57006/57006fig2.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 2"> Şekil 2: tüm şematik önerilen NPD Kur. Önerilen kurulum, sıralı perfüzyon pompalar ve 4-dur-horoz serisi kurulumu dahil olmak üzere görüntülenir unutmayın. Belirli bağlantıları ve bileşenlerine örnek olarak SOP içinde gösterilir. (Solomon, G.M. göğüs, 201013iznine sahip değiştirilme diyagramı) <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/57006/57006fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
Şekil 2. mademki NPD subkutan uzayda, elektrotlar ve yüksek empedanslı bağlı her ikisi de yerleştirilen epitel yüzeyi ve referans Köprüsü üzerinde konumlandırılmış keşfetmek Köprüsü arasında ölçülür, genel deneysel akışı özetlenen Voltmetre.
Bu 2 farklı sistemleri tarafından sağlanmaktadır: 2 kabul edilebilir referans elektrot kurulumları vardır: (i) Ag/AgCl elektrotlar dengeli ve kremalı bir elektrokardiyogram (EKG) Köprüsü tarafından hafif aşınma subkutan uzayına bağlı veya (ii) doymuş kalomel Half-Cells ve bir agar 22 - 24 gauge iğne subkutan tanıttı dolu. Nazal mukoza kişiye bir çift lümen kateteri tarafından etkinleştirilir. Bir lümen agar veya ECG krem ile dolu ve ölçüm elektrot bağlı, diğer nazal mukoza üzerine perfüzyon farklı çözümleri sağlar.
Keşfetmek hortumunun ucu aşağı burun konka (Şekil 3) altında solunum mukoza üzerine yerleştirilir.
<img alt="Kateter yerleştirme işlemi; Alt ve orta konka kurulumunu gösteren nazal endoskopi diyagramı." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57006/57006fig3.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 3"> Şekil 3: boru solunum mukoza üzerine keşfetmek yerleştirme. (A)dış görünümü gösteren yerleşim. (B) Rhinoscopic görünümü yerleşim gösteren. (C) kateter yerleştirme için anatomik yerini gösteren diyagram. PD: potansiyel farkı
PD yanıt olarak bazı ilaçlar çalışma superfusion çözümleri ile kateterin lümen ikinci uygulanır. Hazırlama ve veri analizi için ilk hazırlık üzerinden iletişim kuralındaki aşağıda ayrıntılı olarak NPD ölçümleri yürütülmesi ile ilgili birkaç temel adım vardır.
Sonra çözümleri ve elektrotlar hazırlanması, elektrotlar ve kateterler yeterli kalite test test için temel kuralları sağlar. Bazal ölçümleri yapılan ölçüm için en iyi yer seçimi sağlayan aşağı konka, en olumsuz ölçüm genellikle bununla. Sonra sıralı perfusions Na+ (ENaC) ve Cl- (CFTR bağlıdır) iyon akı nazal epitel arasında voltaj değişikliği yoluyla belirler.

<table><tbody><tr><td>KD Scientific infüzyon pompası (veya eşdeğeri &ndash; kurum/hastane tarafından sağlanan programlanabilir infüzyon pompaları gibi)</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Powerlab 4/30</td><td>AD Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BMA-200 AC/DC taşınabilir biyoamplifikatör</td><td>AD Instruments</td> BMA-200 AD Instruments <td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>için IS0-Z izolasyon başlığıstageWindows uyumlu PC - Windows XP veya üstü için minimum gereksinimler</td><td>Çeşitli</td><td></td><td></td></tr><tr><td>AD Instruments yazılımları: GLP Client V6 (Windows) veya üstü</td><td>AD Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>EKG elektrodu (çalışma konusu için toprak)</td><td>Hastane standardı</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2 mini kalomel referans elektrodu</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-620-79</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum Klorür KCl, Granül & USP, formül ağırlığı 76, adet: 500 gm</td><td>Spektrum</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Steril kap (numune toplama kabı veya benzeri gibi), KCl kalomel banyosu için kullanılacak, elektrotları yerinde tutmak için kapakta delikler açılmıştır. (Elektrot üreticisi tarafından sağlanmamışsa.)</td><td>Hastane standardı</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2 elektrot: Ag/AgCl 8 mm TP elektrot</td><td>BIOPAC Sistemleri</td><td>UNSHLD-EL258</td><td></td></tr><tr><td>2 Ag/AgCl elektrot, B0194, fiş 4 mm</td><td>SLE Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Signacreme&reg; İletken Elektrot Kremi</td><td>Fisher Scientific</td><td>Parker Labs ref # 17-05</td><td></td></tr><tr><td>Cilt aşındırma cihazı</td><td>PROMED Duygu</td><td>Ref 374901</td><td></td></tr><tr><td>Hi Di 541 M, Elmas uçlu diş çapakları</td><td>Kül Aletleri</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Becton Dickinson PE 50 boru</td><td>Fisher Scientific</td><td>427411</td><td></td></tr><tr><td>Becton Dickinson PE 90 boru</td><td>Fisher Scientific</td><td>427421</td><td></td></tr><tr><td>Silastik boru, 0.062" Kimlik, 0.095" OD</td><td>Fisher Scientific</td><td>508-007</td><td></td></tr><tr><td>Mikro Gözenekli Cerrahi Bant Kağıdı (25 mm x 9,1 m)</td><td>3M</td><td>1530-1</td><td></td></tr><tr><td>Marquat çift lümenli kateter Uzunluk: 80 cm; Dış çap: 2,5 mm; Kanalların iç çapı: 0,8 mm; Yan deliklerin uca olan mesafesi: 2 mm. NPD için AB etiketi Anlaşması: I0202US</td><td>Marquat</td><td>I0202US</td><td></td></tr><tr><td>1" X 10 yarda ipek bant</td><td>3M Durapore</td><td>1538-1</td><td></td></tr><tr><td>IV uzatma borusu (30", 50/kutu)</td><td>International Limited</td><td>IMN30</td><td></td></tr><tr><td>Üç musluk (50/kutu)</td><td>Medex</td><td>MX5311L</td><td></td></tr><tr><td>Steril şırınga filtreleri (ANOTOP 25 steril 50 pk; 0.22-&mu; m veya daha küçük filtreler; veya eşdeğeri)</td><td>Fisher Scientific</td><td>09-926-7</td><td></td></tr><tr><td>Becton Dickinson Intramedic Luer saplama adaptörü (20 G, çalışma sahasında üretilen nazal kateter kullanılıyorsa PE90'a bağlantı için)</td><td>Fisher Scientific</td><td>427564</td><td></td></tr><tr><td>Becton Dickinson 23 G, 0.75" Vacutainer (" kelebek") iğneler (0,6 mm x 19 mm; 50 U/kutu) (PE50'ye bağlantı için) çalışma yerinde üretilen nazal kateter kullanılıyorsa)</td><td>Fisher Scientific</td><td>367283</td><td></td></tr><tr><td>Becton Dickinson Şırınga 60 mL iğnesiz Luer-Lok ucu (40/Kutu)</td><td>Fisher Scientific</td><td>309653</td><td></td></tr><tr><td>Becton Dickinson Şırınga 10 mL iğnesiz Luer-Lok ucu (100/Kutu)</td><td>Fisher Scientific</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>Tek kullanımlık steril mendiller (kurumsal kullanılabilirliğe göre)</td><td>Hastane standardı</td><td></td><td></td></tr><tr><td>%70 EtOH (1 pint), Aaper Alcohol and Chemical Co. katalog numarası NC9274019 (veya eşdeğeri)</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Corning tek kullanımlık steril şişe üstü filtreler, 0,22 & m gözenek boyutu (0,15 &ndash; 1,0 L hacim kabul edilebilir)</td><td>Fisher Scientific</td><td>430624</td><td></td></tr><tr><td>Buffer Cert Ph 10.00 (1 L Sn04332) &ndash; pH metre kalibrasyonu için</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buffer Cert Ph 4.00 (1 L Sn04327) &ndash; pH metre kalibrasyonu için</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buffer Cert Ph 7.00 (500 mL Sn04328) &ndash; pH metre kalibrasyonu için</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tek kullanımlık alt pedler (Mavi Pedler; 23" x 36" 150/Kutu; veya hastane standardına göre eşdeğeri)</td><td>SureCare</td><td></td><td></td></tr><tr><td>23 G, 0,75" Vacutainer " kelebek" iğneler (0,6 mm x 19 mm; 50 U/kutu)</td><td>Becton Dickinson</td><td>367283</td><td></td></tr><tr><td>Difco Laboratories Agar (Noble 100 g 0142-15-2; veya eşdeğeri)</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Welch Allyn Rhinoscope 71000-C (veya eşdeğeri)</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Welch Allyn Dönüştürülebilir Saplı Pil 72300 (veya eşdeğeri) VEYA Pilli Otoskop</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Baş ve çene desteği (veya eşdeğeri; isteğe bağlı)</td><td>Richmond Products, Inc</td><td>629R</td><td></td></tr><tr><td>Statik Dağıtıcı Yorgunluk Önleyici Mat&nbsp; (veya eşdeğeri)</td><td>Fisher Scientific</td><td>No. 791</td><td></td></tr><tr><td><YERINDE KARIŞTIRILAN ÇÖZELTİLER İÇİN GÜÇLÜ >REAKTİFLER< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Sodyum Klorür, Granül ve ndash; USP NaCl</td><td>Spektrum</td><td></td><td>Formülü Ağırlığı: 58; Boyut: 500 gm</td></tr><tr><td>Kalsiyum Klorür CaCl 2 ve boğa; 2H<alt>2</alt>O &ndash; USP</td><td>Spektrum Formülü</td><td></td><td>Ağırlığı: 147; Boyut: 500 gm</td></tr><tr><td>Magnezyum Klorür Heksahidrat Kristali, MgCl 2 ve boğa; 6H<alt>2</alt>O &ndash; USP</td><td>Spektrum Formülü</td><td></td><td>Ağırlığı: 203; Boyut: 500 gm</td></tr><tr><td>Potasyum Fosfat Dibazik, Susuz, Granül, KH2PO4 &ndash; USP</td><td>Spektrum Formülü</td><td></td><td>Ağırlığı: 174; Boyut: 500 gm</td></tr><tr><td>Potasyum Fosfat Monobazik Kristaller &ndash; NF (KH2PO4)</td> <td>Spektrum</td><td></td><td>Formülü Ağırlığı: 136; Boyut: 500 gm</td></tr><tr><td>Sodyum Glukonat- USP (monosodyum tuzu)</td> <td>Spektrum</td><td></td><td>Formülü Ağırlık: 218; Boyut: 500 gm</td></tr><tr><td>Kalsiyum Glukonat &ndash; USP (Susuz Toz)</td> <td>Spektrum</td><td></td><td>Formülü Ağırlığı: 430; Boyut: 500 gm</td></tr><tr><td>Potasyum Glukonat- USP (Susuz)</td> <td>Spektrum</td><td></td><td>Formülü Ağırlık: 234; Boyut: 500 gm</td></tr><tr><td>Magnezyum Sülfat Heptahidrat &ndash; USP MgSO<alt>4</alt> boğa; 7H2O</td><td>Spektrum</td><td></td><td>Formülü Ağırlığı: 246; Boyut: 500 gm</td></tr><tr><td>Amiloride HCl &ndash; USP</td><td>Spektrum Formülü</td><td></td><td>Ağırlığı: 302; Boyut: 5gm</td></tr><tr><td>Adenozin 5'-Trifosfat (ATP) (Disodyum tuzu)</td> <td>Spektrum</td><td></td><td>Formülü Ağırlık: 551; Boyut: 5 gm</td></tr><tr><td>Magnezyum Klorür, Hekzahidrat, Kristal & USP MgCl<alt>2</alt> boğa; 6H2O</td><td>Spektrum</td><td></td><td>Formülü Ağırlığı: 203; Boyut: 500 gm</td></tr><tr><td>Çift damıtılmış su (ddH 2 O)</td> <td>Hastane Eczanesi</td><td></td><td>Formül Ağırlığı: NA; Boyut: 1 L</td></tr><tr><td>İzoproterenol HCL Enjeksiyonu - USP 1 mg / 5 mL ampul</td><td>Hastane Eczanesi</td><td></td><td>Formül Ağırlığı: 248; Boyut: tek kullanımlık</td></tr><tr><td>Zil Enjeksiyonu, USP veya Zil Sulama Hastanesi</td><td>Eczanesi</td><td></td><td>Formül Ağırlığı: NA; Birim: 5 L</td></tr></tbody></table>

burun membran transepithelial potansiyel farkının (npd) standart ölçüm

Standardized Measurement of Nasal Membrane Transepithelial Potential Difference (NPD)

Biz burun potansiyel farkı (NPD) standart bir ölçü tanımlar. Bu teknikte, kistik fibrozis transmembran gürültülerinden regülatörü (CFTR) ve epitel sodyum kanal (ENaC) işlevi tarafından voltaj değişikliği arasında nazal epitel iyon kanal değiştirmek çözümler superfusion sonra izlenir etkinlik. Bu bir kateter ile temas aşağı burun konka kullanan burun deliği, subkutan bölme ve hava yolu epitel arasında potansiyel farkı ölçümü olarak etkinleştirilir.
Test ölçüm istikrarlı temel gerilim ve art arda gelen net voltaj değişiklikleri sonra 100 µM amiloride, Na+ emiliminin zil'ın çözümde bir inhibitörü perfüzyon sağlar; amiloride için sürücü klorür salgı ve siklik adenozin monofosfattır (kampı) uyarmak için amiloride ile klorür-Alerjik bir çözümde 10 µM isoproterenol içeren bir klorür ücretsiz çözüm-bağımlı klorür gürültülerinden ilgili CFTR için.
Bu teknik hava yolu yüzey sıvı solunum epitel, ENaC ve CFTR hidrasyon kuran iki anahtar bileşenlerini elektrofizyolojik özellikleri gösteren bir avantaja sahiptir. Bu nedenle, bu faz 2 ve CFTR ve ENaC etkinlik kistik fibrozis (CF) akciğer hastalığının tedavisi için hedef ajanlar denemelerin kavram kanıtı için yararlı araştırma aracı. Bu da genetik testi ve ter testi belirsiz olduğunda CFTR disfonksiyon kurmak için bir anahtar takip işlemdir. Ter klorür, nispeten daha zaman alıcı ve pahalı testidir. Ayrıca etkili testini gerçekleştirmek için operatör eğitimi ve uzmanlık gerektirir. Inter - ve Intra-net - subject değişkenlik genç ya da işbirliği yapmayan bireylerde özellikle bu teknikte bildirilmiştir. Bu endişe ile yardımcı olmak için son zamanlarda doğrulanmış bir algoritma yorumu geliştirilmiştir.

Normal hava yolu epiteli, Na+ emme birincil iyon taşıma faaliyettir. Bu interstitium ile ilgili olumsuz hava yolu yüzey potansiyel farkı olur. ENaC kanal bloker amiloride perfüzyon için daha az negatif potansiyel fark yol açar. Sonra superfusion CL--özgür eriyik için Cl-, daha olumsuz bir potansiyel farkı oluşturan ve CFTR dahil olmak üzere tüm Cl- taşıyıcılar etkinleştirir kimyasal degrade oluşturur. Hücre içi kampı artar, Isoproterenol daha fazla özellikle CFTR etkinleştirerek Cl- salgısı artar ve potansiyel farkı oluşur.
Buna karşılık, CF bireylerde yok ya da işlevsel olmayan Na+ emme12artan bir ENaC sonuçlarında CFTR aracılık. Sonuç olarak, temel potansiyel farkı daha negatif olur. Çok az ise amiloride uygulaması ile gözlenen depolarizasyon büyüktür veya Cl- salgılanması CFTR bağımlı yollar aracılığıyla uyarılması üzerine potansiyel farkı bir değişiklik yok. Bu Şekil 8'sağlıklı' vs 'CF' tracings gösterilen temsilcisi tracings görülebilir.
<img alt="Elektrofizyoloji tablosu, sağlıklı PD değişimi, F508del; amilorid, Cl / Iso aşamaları, araştırma analizi." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57006/57006fig8.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 8"> Şekil 8: 'sağlıklı' konu ve konu ile CF. temsilcisi tracings PD: potansiyel farkı, ΔAmiloride: delta amiloride, 0 Cl-/Iso-: düşük klorür: PD değişikliği arasında çözüm #2 tamamlanması ve çözüm #4 perfüzyon, S1-S4: aşamaları 1-4, yeşil çizgi grafikler A ve B üzerinde gösterir NPD izleme ve siyah oklar, potansiyel farkı farkı gösterir

Burada, burun potansiyel farkı (NPD) ölçmek için standart bir protokol mevcut. Kistik Fibrozis Transmembran gürültülerinden regülatörü (CFTR) ve epitel sodyum kanal (ENaC) işlevi değerlendirilir voltaj değişikliği tarafından arasında nazal epitel iyon kanal etkinlik, değiştirmek çözümler superfusion sonra sağlayan bir Sonuç ölçü.

Burun membran Transepithelial potansiyel farkının (NPD) standart ölçüm

We describe a standardized measurement of nasal potential difference (NPD). In this technique, cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) ...

Bu yöntem, KF ve iyon taşıma alanlarında, KF hastalarının CFTR fonksiyonunun aktivasyonuna veya restorasyonuna anlamlı bir yanıt verip veremeyeceği ile ilgili temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin en büyük avantajı, hava yolu epitelinde CFTR ve epitelyal sodyum kanalının koordineli aktivitesini ölçmesidir. Bu yöntem kistik fibroz hakkında bilgi verebilse de, hiperaktif epitelyal sodyum kanal fonksiyonunun genetik bozuklukları gibi diğer hastalık sistemlerine de uygulanabilir. Prosedürü gösteren biyolog Thao Nguyen ve Aur olacak

standardized-measurement-nasal-membrane-transepithelial-potential

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Dış elektrik alan bir hücre zarı üzerinde bir gerilim indükler kaynaklı membran gerilimi (ΔΦ) olarak adlandırılır. Potansiyometrik boya di-8-ANEPPS kullanarak, noninvaziv ΔΦ ölçmek mümkündür. Bu video ölçmek için protokol gösterir ΔΦ di-8-ANEPPS kullanarak.

Di-8-ANEPPS ile İndüklenmiş Membran Gerilim Ölçme

Bu el yazması burun ve bronş emme teknikleri, özellikle alt ve üst hava yolu Mukozal astar sıvı (MLF) örnek için sentetik dinsel matrisler (SAM) kullanarak açıklar. Bu yöntemleri daha iyi standardizasyon ve tolerabilite mevcut solunum örnekleme teknikleri daha sağlar.

Burun ve bronş sıvıları emilimini: hassas örnekleme insan solunum mukoza ve laboratuvar işleme örnekleri

Burada, farelerde burun potansiyel farkı ölçmek için bir iletişim kuralı mevcut. Test transmembran iyon taşıyıcılar Kistik Fibrozis Transmembran gürültülerinden regülatör ve epitel sodyum kanalı gibi işlev quantifies. Kistik fibrozis için roman tedavilerin etkinliğini değerlendirmek için değerlidir.

Trans-epitel iyon taşıma farelerde ölçmek için burun potansiyel fark

Bu protokol, hücresel bir ortamda reseptörlere gerçek zamanlı olarak adenin nükleotid bağlanmasını ölçmek için bir yöntem sunar. Bağlanma, trinitrofenil nükleotid türevleri ile kanonik olmayan, floresan amino asit ile etiketlenmiş protein arasındaki Förster rezonans enerji transferi (FRET) olarak ölçülür.

Sağlam, fonksiyonel membran proteinlerine bağlanan nükleotidin gerçek zamanlı olarak ölçülmesi

Bağırsak epiteli sadece besin emilimini değil, aynı zamanda zararlı maddelere karşı koruma sağlar. Apikal-en epitelyal hücreler arası bileşke, yani sıkı bileşke, parasellüler çözünen ve iyon geçirgenliğini düzenler. Burada, mukozal tabakaların hazırlanması ve Ussing oda tekniği kullanılarak sıkı bağlantıların iyon seçiciliğinin değerlendirilmesi için bir protokol açıklanmaktadır.

Doğal Dokuda İntestinal Sıkı Bileşke Bariyeri ve İyon Geçirgenliğinin Ussing Oda Tekniği ile Fonksiyonel Olarak Değerlendirilmesi

Bu protokol, hücre ekzositozu ve endositoz döngüsü sırasında lipid membran trafiğini izlemek için pH'a duyarlı lipid florofor sınıfı kullanan bir floresan görüntüleme yöntemi sunar.

pH'a duyarlı Floresan Lipid Analog ND6 ile Membran Lipid Devir Hızının Ölçülmesi

Burada, hava-sıvı arayüzünde primer insan nazal epitel (HNE) hücrelerinin izolasyonu, amplifikasyonu ve farklılaşması ve güçlendirilmiş HNE'nin başarılı bir şekilde dondurulmasına ve daha sonra çözülmesine izin veren bir biyobankacılık protokolü açıklanmaktadır. Protokol, farklılaşmış HNE hücrelerinin elektrofizyolojik özelliklerini ve farklı modülatör tedavileri üzerine CFTR ile ilişkili klorür sekresyon düzeltmesini analiz eder.

Primer İnsan Burun Epitel Hücreleri: Hassas Tıp Bağlamında Biyobankacılık

Nazal epitel, tüm solunum yolu patojenlerinin karşılaştığı birincil bariyer bölgesidir. Burada, fizyolojik olarak ilgili bir sistemde insan koronavirüs-konakçı etkileşimlerini karakterize etmek için hava-sıvı arayüz (ALI) kültürleri olarak büyütülen birincil nazal epitel hücrelerini kullanma yöntemlerini özetliyoruz.

İnsan Koronavirüs-Konakçı Etkileşimlerini Karakterize Etmek için Hava-Sıvı Arayüzünde Büyütülen Primer Nazal Epitel Hücrelerinin Enfeksiyonu

Gözenekli substrat elektroporasyonu (PSEP), tutarlı, yüksek verimli iletimi yüksek hücre canlılığı ile eşleştirir. Transepitelyal elektrik empedans (TEEI) ölçümlerinin tanıtılması, PSEP'in ara süreçleri hakkında bilgi sağlar ve etiketsiz teslimata olanak tanır. Bu makalede, PSEP dağıtım deneylerini ve TEEI ölçüm analizini aynı anda gerçekleştirmek için bir yöntem tartışılmaktadır.

Transepitelyal Elektriksel Empedans İzleme ile Gözenekli Substrat Bazlı Elektroporasyon

Hava-sıvı arayüz kültürü, akciğer hava yolunun apikal tarafını taklit eden primer normal insan bronşiyal epitel hücrelerini farklılaştırarak psödostratifiye hava yolu epiteli geliştirmek için yaygın olarak kullanılır. Burada, siliyer fonksiyon ve membran bütünlüğü gibi biyofiziksel özelliklerini izleyerek kalitesini belirlemek için kolay bir protokol açıklıyoruz.

Psödostratifiye Akciğer Hava Yolu Epitelinin Siliyer Fonksiyonunun ve Membran Geçirimsizliğinin Belirlenmesi

Gramicidin A-doped damlacık arayüz çift katmanlarını bir yere toplamak, elektriksel olarak uyarmak ve analiz etmek için deneysel bir protokol sunulur. Lipid-protein yapı-fonksiyon ilişkileri, membran alanı, iyonik akı ve tek kanal iletkenliğindeki değişiklikler ölçülerek ve bu yanıtların, elektriksel sinapslardan ilham alan bir membran modelinde iyonik iletkenlikteki plastisite benzeri değişikliklerle ilişkilendirilmesiyle nicelendirilir.

Damlacık Arayüz Bilayerları Kullanarak Lipid-Protein Zar Yapı-Fonksiyon Karakterizasyonu

Öğrenin burun epitelinde CFTR ve ENaC kanallarının koordineli aktivitesini değerlendiren standart NPD ölçüm protokolünü. Bu yöntem kistik fibrozis ve diğer epitel sodyum kanalı bozukluklarında iyon taşınımını incelemeye yardımcı olur.

Burun membran Transepithelial potansiyel farkının (NPD) standart ölçüm

Daha fazla video keşfet