Name: En iyi duruma getirilmiş bir Evans mavi Mouse vasküler sızıntı değerlendirmek için iletişim kuralı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-12T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 39 s
Description: Öğrenin, Evans mavi boya yöntemiyle farelerde plazma ekstravazasyonunu değerlendirmek için optimize edilmiş bir kateterizasyon protokolü. Bu yöntem damar geçirgenliği araştırmalarında güvenilir ve tekrarlanabilir sonuçlar sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar Andy Poczobutt ve Dr. Jori Leszczynski onların değerli yardım ve düzenlemeleri için bu el yazması için teşekkür etmek istiyorum.  Ulusal Kalp, akciğer ve kan Enstitüsü (NHLBI RO1 HL078929, PPG HL014985 ve RO3 HL095439) ve gazileri departmanı işleri (Merit Review) alınan hibe tarafından desteklenen.

Tüm ilgili uluslararası, ulusal ve/veya kurumsal yönergeleri bakım ve hayvanlar (fare) kullanımı için bu el yazması açıklanan deneylerde takip edildi.
Bu yöntem FVBN yetişkin fareler, 16-20 hafta, bu çalışmanın amaçları için en uygun olduğu tespit yaşlı kullanır. 2 gün 6 ile 7 (Şekil 1) içerir ve adım 1-5 gün 1 içerir.
1. ekipman hazırlık
<ol><li>Ketamin/xylazine anestezik olarak (önerilen) kullanılıyorsa, steril, tek kullanımlık şırınga ve iğne, yeterli kaynağımız tutun. İsoflurane anestezik kullanılırsa, oksijen tüpü ve isoflurane başlamadan önce deney için yeterli malzeme olduğundan emin olmak için sıvı seviyesi kontrol edin. De, devreler nefes nosecone montajı ve indüksiyon kutusuna ekleyebilirsiniz; Yeni kömür kutu nefes devreler ekleyin. İndüksiyon kutusu üzerinde oksijen dönüm ve ikinci aşamada yaklaşık 50 psi okur ascertaining hazırlayın.</li>
	<li>37 ° c ısıtma yastığını açmak</li>
	<li>Rektal sıcaklık probu ameliyat için hazırlayın.</li>
</ol>2. fare hazırlık
Bu adım, anestezi, epilasyon ve konumlandırma (yetişkin FVBN fareler-yaş 16-20 hafta) içerir.
<ol><li>Fareler tartmak ve ağırlıkları kaydedin.</li>
	<li>Fareler anestezi.<ol>
<li>Ketamin ve xylazine IP yönetmek (80-100 mg/kg ve 7,5-16 mg/kg, sırasıyla). Ancak, ketamin ve xylazine daha düşük doz ile başlamak tavsiye edilir (30 mg/kg ve 6 mg/kg, sırasıyla).</li>
		<li>Anestezi ile yaklaşık 0.1 korumak - ketamin/xylazine ameliyat boyunca doz 0.25 kez ilk. Ketamin ve xylazine daha fazla tekrarlanabilirlik ve Beka gözlendi olarak anestezik temsilcisi belirli bu çalışmada tercih edildi. Anestezik temsilcisi seçim diğer çalışmalarda farklı olduğu tespit.  İsoflurane kullandıysanız, fare bir indüksiyon odasında koymak ve isoflurane %5 için fareyi tam bilincini kaybeder kadar açmak. Daha sonra 1,5-%2,5 isoflurane yordamı kalanı boyunca ayarlamak bir burun nosecone kullanın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Fareler her 2-3 dk uygun anestezi derinliği için kontrol etmek için ayak çimdik tarafından izlemek.</li>
	<li>Fare ventral boyun bölgesi tıraş.</li>
	<li>Önceden ısıtılmış panelindeki sırtüstü pozisyonda fareyi getirin. Pençeleri ve ayak bandı ile cerrahi yüzeye fare güvenli.</li>
	<li>Suni gözyaşı merhem ameliyat sırasında kurumasını önlemek için gözlerinin üzerine yerleştirin.</li>
</ol>3. cerrahi ayrıntıları
<ol><li>1 cm kesi şu ventral boynundan juguler ven içinde olun.</li>
	<li>Lidocaine (% 1-2) bir veya iki damla ağrı yönetimi için ve vazodilatasyon tanıtmak için kesi bölgeye uygulanır. Lidokain etkili olması için 2 dk. bekleyin.</li>
	<li>Ortaya çıkarmak ve künt diseksiyon ile Şu iç juguler ven yalıtır. Ven 4-0 sütür ile bağlayın ve yavaşça bir hemostat ile gemi rostral sonu geri çek. Bir delik, ince makas, yaklaşık 3 mm aşağıda veya kaudal bağlamak için damar çapı yaklaşık olarak yarısına kullanarak.</li>
	<li>Bir PV-1 Polivinil kateter sonundan itibaren 1.5 cm işaretlemek ve juguler ven bir gemi dilatör kullanarak delikten takın ve kateter gemi, yaklaşık olarak 1.5 cm kaudal sonuna doğru iplik.</li>
	<li>Kaudal bölümü (aşağıda kesim), geminin içinde güvenli bir şekilde kateter ile 4-0 ipek. Kateter dışarıya adım 3.3 rostral juguler ven bağlamaya kullanılan dikiş gevşek uçları ile gemi rostral parçası bağla.</li>
	<li>Tack cilt gevşek geri birlikte vücut ısı kaybı ve kurutulma dokuların önlemeye yardımcı olmak için 4-0 ipek sondayla çevresinde.</li>
	<li>Kateter heparinized serum fizyolojik (10 U/mL) içeren bir şırınga bağlanmak ve kateter floş.</li>
</ol>4. enjeksiyonları
<ol><li>Evans mavi çözüm (% 0,9 normal, unheparinized serum fizyolojik veya yaklaşık 50 mg/kg 30 mg/mL solüsyon 50 μL) çizgi temizlemek için heparinized serum küçük bir birim tarafından takip juguler ven kateteri içine enjekte.</li>
	<li>2 dk sonra madde satırı temizlemek için heparinized serum küçük bir birim tarafından takip P (0.3 mikron çözüm % 0,9 normal, unheparinized serum fizyolojik veya 1 nmol/kg 100 μL), enjekte et. Madde P endotel katmanı üzerinden proteinler plazma ekstravazasyonu zenginleştirerek; Bu protokol için rutin olarak plazma ekstravazasyonu değerleri ölçmek daha kolay hale bir büyütme plazma ekstravazasyonu değerleri arasında yaklaşık 1.5-fold neden olmaktadır.</li>
	<li>Madde P enjekte sonra 18 dk bekleyin. Bu süre boyunca, Evans mavi boya equilibrate ve dolaşımda.</li>
	<li>Deney 18 dk madde P (20 dk sonra Evans mavi enjeksiyon) enjeksiyon sonra fare ile servikal çıkığı feda ederek sona erdirmek. Fareyi doğrudan cervically olabilir muhtemelen çıkık, anestezi, aşırı dozda vermeden faredir muhtemelen hala iyi imzalat ameliyattan. Eğer gerekirse, ancak, aşırı doz anestezikler ketamin/xylazine, isoflurane veya Fentobarbital, servikal çıkığı tarafından takip verilebilir.</li>
</ol>5. yalıtım organları
<ol><li>Göğüs boşluğu fare derini yüzüp, kalp ve kan damarlarının 50 mL 50 mM sodyum sitrat, pH 3.5 ile (bir yükseklikten 51 cm veya 20") yerçekimi sıvı. pH 3.5 muhtemelen Evans mavi bağlayıcı albumin için korur.</li>
	<li>1-5 ilgili organları (mendil) (Örneğin idrar kesesi, böbrek, mide, karaciğer, pankreas, distal veya proksimal kolon, ileum, oniki parmak bağırsağı, gögüs deri, kulaklar, kuyruk, kalp, ve/veya akciğer) parçalanmış bir neşter ile tüketim ve eğer herhangi bir kalıntı içeriği kaldırmak mevcut.</li>
	<li>Oda sıcaklığında (RT) fosfat tamponlu tuz (PBS; Na2HPO4, KH2PO4, 8.0 g 0,24 g NaCl 1.44 g ve 1 L, pH 7.4 KCl 0.20 g) organları durulayın.</li>
	<li>Doku organlarla leke, her organ yarıya ve her yarı ağırlığında (ıslak ağırlıkları, g).</li>
	<li>Bir kuru bir kurutma fırın 48 h için folyo üzerinde 150 ° C'de dokusunda yarısı.</li>
	<li>Formamide bir microfuge içinde tutarlı hacmi (en fazla 200 µL) ikiye tüp 48 h için (ve en fazla 72 s) diğer doku yerleştirmek mavi Evans ayıklamak için.</li>
</ol>6. ölçüm doku OD
<ol><li>Evans mavi-infüzyon formamide (48-72 h RT kuluçka sonra) 50 µL microfuge tüp ve yer 96-şey polistiren tabakta bir kuyunun içine çıkarın. Doku parçaları ile birlikte formamide aktarmak için dikkatli olun.</li>
	<li>Yeni, saf formamide her iki boş Wells 96-şey plaka boşlukları için yer 50 µL.</li>
	<li>Ölçü ve kaydı 96-şey plaka üzerinde bir absorbans plaka okuyucu her şey OD620 . 620 nm olduğunu absorbans max Evans mavi.</li>
</ol>7. plazma ekstravazasyonu hesaplanması
<ol><li>Kuru doku tartmak yarısı 48 h fırında olmuştur.</li>
	<li>Bu aynı doku kuru ağırlığının tarafından yarı bölünmüş belirli organ dan bireysel her fare (içinde elde edilen adım 5,4), yarı başlayan bu doku ıslak ağırlık ile ilgi (içinde elde edilen adım 7.1) ıslak ağırlık/Kuru ağırlık oranını hesaplamak.</li>
	<li>Kuru ağırlık (g) dokusunun formamide ikiye yarısı daha önce yerleştirilir (5.4. adımda elde) formamide tarafından ıslak mendil ıslak ağırlığına bölünerek hesaplamak: Kuru ağırlık oranı (7,2 adımda hesaplanır) ilgi belirli organ için.</li>
	<li>OD620 düzeltilmiş değerleri hesaplar. İle OD620 başlangıç değeri (Evans formamide 6,3. adımda elde her dokusundan mavi-infüzyon içeren) 96-şey plaka deneysel her kuyudan çıkarmak boş iyi OD620 değeri (ortalama OD620 değeri saf formamide, 6.2, adımda hazırlanan içeren iki kuyu 6.3. adımda elde620 değerleri OD) deneysel her değerinden.</li>
	<li>Plazma ekstravazasyonu değer doku kuru ağırlığının tarafından düzeltilen OD620 (içinde hesaplanan adım 7,4) bölerek formamide (içinde hesaplanan adım 7.3) ikiye hesaplayın. Plazma ekstravazasyonu birim OD620/g kuru ağırlık olacaktır.</li>
	<li>Verileri çözümlemek ve SEM istatistiksel ortalama ± karşılaştırmak gibi gruplar t testi veya tek yönlü varyans analizi ve Scheffé'ın çoklu karşılaştırma testi (lycofs01.lycoming.edu), uygun olarak ifade eder.</li>
</ol>

<ol><li>Snijdelaar, D. G., Dirksen, R., Slappendel, R., Crul, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Substance+P%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pain%22%5BJournal%5D)">Substance P.</a> Eur J Pain. 4 (2), 121-135 (2000).</li>
<li>Rubinstein, I., Iwamoto, I., Ueki, I. F., Borson, D. B., Nadel, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recombinant+neutral+endopeptidase+attenuates+substance+P-induced+plasma+extravasation+in+the+guinea+pig+skin%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Arch+Allergy+Appl+Immunol%22%5BJournal%5D)">Recombinant neutral endopeptidase attenuates substance P-induced plasma extravasation in the guinea pig skin.</a> Int Arch Allergy Appl Immunol. 91 (3), 232-238 (1990).</li>
<li>Szabo, A., Menger, M. D., Boros, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microvascular+and+epithelial+permeability+measurements+in+laboratory+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Microvascular and epithelial permeability measurements in laboratory animals.</a> Microsurgery. 26 (1), 50-53 (2006).</li>
<li>Radu, M., Chernoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vivo+assay+to+test+blood+vessel+permeability%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">An in vivo assay to test blood vessel permeability.</a> J Vis Exp. (73), e50062(2013).</li>
<li>Moitra, J., Sammani, S., Garcia, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Re-evaluation+of+Evans+Blue+dye+as+a+marker+of+albumin+clearance+in+murine+models+of+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Res%22%5BJournal%5D)">Re-evaluation of Evans Blue dye as a marker of albumin clearance in murine models of acute lung injury.</a> Transl Res. 150 (4), 253-265 (2007).</li>
<li>Figini, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Substance+P+and+bradykinin+stimulate+plasma+extravasation+in+the+mouse+gastrointestinal+tract+and+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Substance P and bradykinin stimulate plasma extravasation in the mouse gastrointestinal tract and pancreas.</a> Am J Physiol. 272 (4), Pt 1 785-793 (1997).</li>
<li>Awad, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+sphingosine+1-phosphate+1+receptor+activation+reduces+ischemia-reperfusion+injury+in+mouse+kidney%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Selective sphingosine 1-phosphate 1 receptor activation reduces ischemia-reperfusion injury in mouse kidney.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 290 (6), 1516-1524 (2006).</li>
<li>Lu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+control+of+microvascular+permeability+and+blood+pressure+by+neutral+endopeptidase%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">The control of microvascular permeability and blood pressure by neutral endopeptidase.</a> Nat Med. 3 (8), 904-907 (1997).</li>
<li>Gendron, G., Simard, B., Gobeil, F., Sirois, P., D'Orleans-Juste, P., Regoli, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+urotensin-II+enhances+plasma+extravasation+in+specific+vascular+districts+in+Wistar+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Can+J+Physiol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Human urotensin-II enhances plasma extravasation in specific vascular districts in Wistar rats.</a> Can J Physiol Pharmacol. 82 (1), 16-21 (2004).</li>
<li>Xu, Q., Qaum, T., Adamis, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitive+blood-retinal+barrier+breakdown+quantitation+using+Evans+blue%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Sensitive blood-retinal barrier breakdown quantitation using Evans blue.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 42 (3), 789-794 (2001).</li>
<li>Saria, A., Lundberg, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evans+blue+fluorescence%3A+quantitative+and+morphological+evaluation+of+vascular+permeability+in+animal+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Evans blue fluorescence: quantitative and morphological evaluation of vascular permeability in animal tissues.</a> J Neurosci Methods. 8 (1), 41-49 (1983).</li>
<li>Fricke, I. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+bioluminescence+imaging+of+neurogenesis+-+the+role+of+the+blood+brain+barrier+in+an+experimental+model+of+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">In vivo bioluminescence imaging of neurogenesis - the role of the blood brain barrier in an experimental model of Parkinson's disease.</a> Eur J Neurosci. 45 (7), 975-986 (2017).</li>
<li>Pink, D. B., Schulte, W., Parseghian, M. H., Zijlstra, A., Lewis, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+visualization+and+quantitation+of+vascular+permeability+in+vivo%3A+implications+for+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Real-time visualization and quantitation of vascular permeability in vivo: implications for drug delivery.</a> PLoS One. 7 (3), 33760(2012).</li>
<li>Jain, R. K., Munn, L. L., Fukumura, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissecting+tumour+pathophysiology+using+intravital+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Dissecting tumour pathophysiology using intravital microscopy.</a> Nat Rev Cancer. 2 (4), 266-276 (2002).</li>
<li>Vandoorne, K., Addadi, Y., Neeman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+vascular+permeability+and+lymphatic+drainage+using+labeled+serum+albumin%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">Visualizing vascular permeability and lymphatic drainage using labeled serum albumin.</a> Angiogenesis. 13 (2), 75-85 (2010).</li>
<li>Turner, A. J., Nalivaeva, N. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteinase+dysbalance+in+pathology%3A+the+neprilysin+%28NEP%29+and+angiotensin-converting+enzyme+%28ACE%29+families%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Biol+%28Noisy-le-grand%29%22%5BJournal%5D)">Proteinase dysbalance in pathology: the neprilysin (NEP) and angiotensin-converting enzyme (ACE) families.</a> Cell Mol Biol (Noisy-le-grand). 52 (4), 40-48 (2006).</li>
<li>Lu, B., Gerard, N. P., Kolakowski, L. F., Finco, O., Carroll, M. C., Gerard, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutral+endopeptidase+modulates+septic+shock%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Neutral endopeptidase modulates septic shock.</a> Ann N Y Acad Sci. 780, Mar 22 156-163 (1996).</li>
<li>Dempsey, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neprilysin+null+mice+develop+exaggerated+pulmonary+vascular+remodeling+in+response+to+chronic+hypoxia%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Neprilysin null mice develop exaggerated pulmonary vascular remodeling in response to chronic hypoxia.</a> Am J Pathol. 174 (3), 782-796 (2009).</li>
<li>Karoor, V., Oka, M., Walchak, S. J., Hersh, L. B., Miller, Y. E., Dempsey, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neprilysin+regulates+pulmonary+artery+smooth+muscle+cell+phenotype+through+a+platelet-derived+growth+factor+receptor-dependent+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Neprilysin regulates pulmonary artery smooth muscle cell phenotype through a platelet-derived growth factor receptor-dependent mechanism.</a> Hypertension. 61 (4), 921-930 (2013).</li>
<li>Chu, P., Arber, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paraffin-section+detection+of+CD10+in+505+nonhematopoietic+neoplasms.+Frequent+expression+in+renal+cell+carcinoma+and+endometrial+stromal+sarcoma%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Clin+Pathol%22%5BJournal%5D)">Paraffin-section detection of CD10 in 505 nonhematopoietic neoplasms. Frequent expression in renal cell carcinoma and endometrial stromal sarcoma.</a> Am J Clin Pathol. 113 (3), 374-382 (2000).</li>
<li>Bircan, S., Candir, O., Kapucuoglu, N., Serel, T. A., Ciris, M., Karahan, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD10+expression+in+urothelial+bladder+carcinomas%3A+a+pilot+study%5BTitle%5D)+AND+%22Urol+Int%22%5BJournal%5D)">CD10 expression in urothelial bladder carcinomas: a pilot study.</a> Urol Int. 77 (2), 107-113 (2006).</li>
<li>Koiso, K., Akaza, H., Ohtani, M., Miyanaga, N., Aoyagi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+tumor+marker+for+bladder+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Urol%22%5BJournal%5D)">A new tumor marker for bladder cancer.</a> Int J Urol. 1 (1), 33-36 (1994).</li>
<li>Wick, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protection+against+vascular+leak+in+neprilysin+transgenic+mice+with+complex+overexpression+pattern%5BTitle%5D)+AND+%22Transgenic+Res%22%5BJournal%5D)">Protection against vascular leak in neprilysin transgenic mice with complex overexpression pattern.</a> Transgenic Res. 25 (6), 773-784 (2016).</li>
<li>Natah, S. S., Srinivasan, S., Pittman, Q., Zhao, Z., Dunn, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+acute+hypoxia+and+hyperthermia+on+the+permeability+of+the+blood-brain+barrier+in+adult+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Effects of acute hypoxia and hyperthermia on the permeability of the blood-brain barrier in adult rats.</a> J Appl Physiol. 107 (4), (1985) 1348-1356 (2009).</li>
<li>Scholzen, T. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutral+endopeptidase+terminates+substance+P-induced+inflammation+in+allergic+contact+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Neutral endopeptidase terminates substance P-induced inflammation in allergic contact dermatitis.</a> J Immunol. 166 (2), 1285-1291 (2001).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Yukarıda da açıklandığı gibi plazma ekstravazasyonu çalışmanın sonuçta nedenleri ile ilgili yeni bilgi ya da inhibe veya plazma ekstravazasyonu tedavi etmek için yeni yollar açabilir. Başarılı kullanımı, plazma ekstravazasyonu Protokolü (üstte), Evans mavi boya, kullanarak geçerli el yazması kanıtlanmıştır. Her ne kadar gösterilen verileri NEP damarlara korusun hipotez plazma ekstravazasyonu karşı bu bir ikincil halen, kolayca ortalama laboratuvar için kullanılabilir en iyi duruma getirilmiş bir iletişim kuralı sunmak iç...

Organlarda vasküler sızıntı ekstravazasyonu için başvurur veya kan plazma arasındaki endotel üretilen geçitlerden kaçağı sonrası kapiller venüller organlarda. Bu plazma ekstravazasyonu veya bazı tip bir enflamatuar yanıt ortaya çıkabilecek, artmış vasküler geçirgenliği ciddi sonuçlara yol açabilir. Bu nedenle, bu fenomen, nedenleri, modülatörler ve sonuçları, okudu ve anlaşılır, aynı şekilde, müfettişler kadrini ve araçları protokol önemli ve onları çalışma kullanılacak. Endotel boşluklar uyaran bir dizi üretilen ama genellikle peptid nörotransmitter ve/veya tachykinins endothelia üzerinde eylem tarafından üretilmektedir. Artmış plazma ekstravazasyonu oluşur, bu sürecin önemli doğal olarak meydana gelen arabulucular biridir undecapeptide tachykinin peptit, madde P1.
Evans mavi boya albümin-bağlama özelliği kullanmak, araştırmak ve vasküler geçirgenliği veya plazma ekstravazasyonu, ölçmek için yöntemler geliştirilmiştir ve genellikle onların doğruluğu, basitlik, ekonomi, güvenlik ve izin yeteneği için bilinen Hemen, plazma ekstravazasyonu birkaç doku üzerinden belirlenmesi Eğer öyleyse istenen2,3,4,5,6,7,8,9 . Plazma ekstravazasyonu organlarda FVBN farelerin değerlendirmek için bu Evans mavi iletişim kuralı tüm bunlar kullanır, ancak genellikle yararlı ve gelecekteki araştırmalar yapar veya olacak ortalama laboratuvar içeren, uyarlanabilir olsun bazı önemli değişiklikler ekler plazma ekstravazasyonu veya vasküler geçirgenliği ile ilişkili faktörler önemli çalışmalar yapmak. Bu protokol için madde P 1 nmol/kg, hangi 1.5-fold tarafından plazma ekstravazasyonu zenginleştirerek fareler için verilir. Bu daha kolay gözlemlenebilir ve elde edilebilecek sonuçlarında ortaya çıkan protokolü, hassasiyeti artırır. Geçirgenliği gibi çeşitli diğer peptidler, kimyasal madde veya toksik yaralanma, bazı türlerinin etkileyen diğer faktörler kullanılan ya da istediğiniz gibi diğer laboratuvarlar tarafından okudu. Juguler ven enjeksiyonları terminal ameliyat gerektiren Evans mavi ve madde P sistemik, tanıtmak için bu protokol için kullanılır. Ancak, juguler ven enjeksiyonları5,7,10, hatta gerekli terminal cerrahi teknikleri, dikkate sonra daha kolay usta ve diğerinden daha tutarlı sonuçlar üretim yol venöz enjeksiyonu, kuyruk dahil olmak üzere enjeksiyonları4,9damar. Retro-orbital venöz sinüs enjeksiyonları tarafından teslim edilmek üzere mavi Evans için mümkün olabilir, ancak hiçbir başvuru literatürde teslimat Evans mavi bu yöntemi kullanan tespit edilmiştir. Ancak, kuyruk ven enjeksiyon gelince, yüksek seviyede uzmanlık ve büyük ölçüde bu tekniği tekrarlanarak master için pratik kullanımı başarılı Evans mavi enjeksiyonlar için sınırlar. Buna ek olarak, alternatif juguler ven enjeksiyon yöntemi bizim iletişim kuralında, açıklandığı gibi teknik olarak elde edilebilecek bir çözüm sunar. Bir çok önemli fare damar, perfüzyon için müdahalede sonra sadece mavi periosteum Evans fare kurban aşırı Evans mavi boya kaldırır ve bu protokol için standart. Perfüzyon, önceden açıklanan yöntemleri dikkatle inceledi ve mevcut prosedür elde etmek için değiştirilebilir. Burada açıklanan diğer değişiklikler tüm en iyi duruma getirilmiş, basit ve ucuz.
Evans mavi boya yönteminin önemli bazı sınırlamalar vardır. Örneğin, bazen bu yöntemle ilişkili düşük duyarlılık Evans mavi enjekte hayvanlardan dokuların bazı ek brüt patolojik ve histolojik muayene engelleyebilir. Ancak, bu ve diğer sınırlamalar alternatif yöntemler ve yine de, hala Evans mavi kullanan modelleri gelişmesine yol açmıştır. Evans mavi ölçümü Floresan (yerine göre görsel menzilli) spektroskopisi yönteminin duyarlılığını artabilir. Ayrıca, floresans mikroskobu Evans mavi lekeli dokuların daha farklı yerlerde11vasküler sızıntı gözlenmesi için izin vermek için geliştirilmiştir. Ayrıca, tüm vücut görüntüleme ve yaşayan bir hayvan tarama daha önce mavi12 Evans mavi konsantrasyonları incelenmesi için sürekli bir şekilde sağlar Evans ile enjekte yerine bir belirli zaman seçilmiş deneme üzerine gelin. Ancak, bu yöntem uygun görüntüleme özellikleri gerektirir ve çok pahalı olabilir. Değişiklikler, Evans mavi ve gerçekleştirilen bir vitro tür modeli içeren gibi bir hücreye kültür ya da piliç chorioallantoic modeli13 (CAM) Ayrıca tarif edilmiştir. Bu modeller floresans ve intravital14 mikroskobu, tarafından izlenir ve vasküler permeabilite değişiklikleri miktar, zaman içinde izin ama doğru modelleme ile ilgili sorular vivo durumlardan artırabilir ve de kullanabilirsiniz pahalı.
Evans mavi yönetim içermeyen diğer yöntemleri belirlemek ve vasküler sızıntı veya geçirgenliği, ölçmek için geliştirilmiş oldu. Bu Yöntemler (örneğin, albümin veya fluoresein) uygun bir floresan molekül veya canlı hayvanlar için bir isotopically etiketli veya başka bir şekilde etiketlenmiş molekül istihdam (veya modelleri13non-invaziv tarafından takip, kültür veya chorioallantoic (CAM) hücre için görüntüleme (PET tarama, MRI, intravital mikroskobu, tüm vücut tarama) veya invaziv görüntüleme (Floresan Mikroskobu)3,12,15. Her ne kadar bu teknikler mavi yöntemleri bir dizi diğer Evans avantajlar sunabilir, aynı zamanda onların önemli karmaşıklığı, gerekli uzmanlık, kaynak ve yüksek parasal maliyeti içerebilir dezavantajları var.
Neprilysin16 (peptidaz enzim NEP, olarak da bilinen CD10, MME veya Enkephalinase) plazma ekstravazasyonu, en azından bölümünde, enzimatik metabolizma ve endojen madde p. inactivation inhibe içinde dahil olmak için önerilen Böylece, hücre yüzey peptidaz NEP oluşmasına neden olan dokularda olabilir bir zayıflama etkisinin bir madde P, muhtemelen NEP. peptidaz etkinliği tarafından
Başlangıçta, madde P kaynaklı plazma ekstravazasyonu bu değiştirilmiş Evans mavi iletişim kuralı, FVBN vahşi türü (WT) ve NEP nakavt (KO) fare ile kullanmak için test ettik. Madde P artar plazma ekstravazasyonu NEP katılımı bu ilk çalışmalardan şüphelenildi ve bunlar tarif ve daha fazla plazma ekstravazasyonu içeren NEP'ın rolü deneyler. Ancak, bu yazının odak NEP veya plazma ekstravazasyonu rolü değil, ama oldukça plazma ekstravazasyonu kendilerini deneyler. Değiştirilmiş bu iletişim kuralı kullanımı ile elde edilen sonuçlar tür temsilcisi NEP sonuçlarıdır. Evans mavi yöntem plazma ekstravazasyonu ölçmek için en iyi duruma getirilmiş ve FVBN fareler için ayrıntılı olarak açıklandığı gibi değiştirilebilir.

<table><tbody><tr><td>isofluran</td><td>Vet One</td><td>200-070</td><td>inhale anestezik</td></tr><tr><td>ketamin</td><td>Vet One</td><td>200-055</td><td>enjekte edilebilir anestezik</td></tr><tr><td>ksilazin</td><td>Lloyd Laboratories</td><td>139-236</td><td>enjekte edilebilir anestezik</td></tr><tr><td>şırınga (10,3 & 1 cc)</td><td>Becton Dickinson</td><td>309604, 309657, 309659</td><td></td></tr><tr><td>iğneleri (20G1,23G1 & 26G1/2)</td><td>Becton Dickinson</td><td>305178, 305193, 305111</td><td></td></tr><tr><td>izofluran indüksiyon odası</td><td>VetEquip</td><td>941443</td><td>1 Litre</td></tr><tr><td>nosekon solunum devreleri&nbsp;</td><td>VetEquip</td><td>RC2</td><td>Kemirgen Devre Kontrol Cihazı 2</td></tr><tr><td>oksijen tankı</td><td>Airgas</td><td>UN 1072</td><td>%100 tıbbi</td></tr><tr><td>ısıtma yastığı</td><td>CWE Inc.</td><td>TC-1000</td><td>sıcaklık kontrol cihazı</td></tr><tr><td>rektal sıcaklık probu</td><td>CWE Inc.</td><td>10-09012</td><td>fare</td></tr><tr><td>terazisi (kemirgenler için)</td><td>Ohaus</td><td>CS 2000</td><td></td></tr><tr><td>cerrahi aletler-makas</td><td>Güzel Bilim aletleri</td><td>15000-00</td><td>Vannas Yaylı makas 3mm düz bıçak (kesme kapları)&nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>cerrahi aletler-forseps</td><td>Güzel Bilim aletleri</td><td>11151-10</td><td>Graefe ekstra ince forseps (fare damarlarını izole etme)</td></tr><tr><td>cerrahi aletler-hemostatlar</td><td>Güzel Bilim aletleri</td><td>13009-12</td><td>Halstead-sivrisinek kanama durdurucular (künt diseksiyon, tutma dokusu)</td></tr><tr><td>cerrahi aletler -sütür sürücüleri</td><td>Güzel Bilim araçları</td><td>12502-12</td><td>Olsen-Hegar sütür sürücüleri (dikiş)</td></tr><tr><td>cerrahi aletler-forseps</td><td>İnce Bilim araçları</td><td>11627-12</td><td>Adson-Brown timsah forseps (doku kavrama, dikiş, sıçan)</td></tr><tr><td>cerrahi aletler-makas</td><td>Güzel Bilim aletleri</td><td>14110-15</td><td>Mayo sert kesim makas 15 cm (cerrahi, diseksiyon, kemikler, sıçan)</td></tr><tr><td>cerrahi aletler-forseps</td><td>Güzel Bilim aletleri</td><td>18025-10</td><td>sütür bağlama forseps (Millar kateter için kullanılır)</td></tr><tr><td>cerrahi aletler-makas</td><td>Güzel Bilim araçları</td><td>14078-10</td><td>Lexer Baby makas düz (cerrahi, fare)</td></tr><tr><td>cerrahi aletler-forseps</td><td>Güzel Bilim aletleri</td><td>11254-20</td><td>Dumont #5 ince uçlu forseps (sıçan damarları, diseksiyon)</td></tr><tr><td>cerrahi aletler-makas</td><td>Güzel Bilim araçları</td><td>14082-09</td><td>Dissektör makası 12 mm (cerrahi, sıçan fare)</td></tr><tr><td>cerrahi aletler-forseps</td><td>Güzel Bilim aletleri</td><td>11051-10</td><td>10 cm Graefe forseps (doku kavrama, sıçan faresi)</td></tr><tr><td>cerrahi aletler-forseps</td><td>Güzel Bilim aletleri</td><td>11251-35</td><td>Dumont 5/45 forseps (damarlar için tanıtıcı)</td></tr><tr><td>cerrahi aletler-ekartörler</td><td>Güzel Bilim aletleri</td><td>17012-11</td><td>Weitlaner ekartörleri 2/3 diş (sıçan cerrahi)</td></tr><tr><td>cerrahi aletler-forseps</td><td>Güzel Bilim araçları</td><td>11294-00</td><td>Dumont #4 forseps (damar izolasyon sıçanları, fareler)</td></tr><tr><td>cerrahi aletler-forseps</td><td>İnce Bilim aletleri</td><td>11297-00</td><td>Dumont #7 forseps (doku kavrama, diseksiyon)</td></tr><tr><td>cerrahi aletler-makas</td><td>Güzel Bilim aletleri</td><td>14058-11</td><td>sert kesim iris makası (fare diseksiyonu, kemikler)</td></tr><tr><td>cerrahi aletler-forseps</td><td>Güzel Bilim araçları</td><td>11009-13</td><td>tırtıklı, kavisli Semken forseps (doku kavrama, fare faresi)</td></tr><tr><td>cerrahi aletler-hemostatlar</td><td>Güzel Bilim araçları</td><td>13003-10</td><td>Hartman kavisli hemostatlar (künt diseksiyon, doku tutma)</td></tr> <tr><td>cerrahi aletler-forseps</td><td>Güzel Bilim araçları</td><td>11006-12</td><td>Adson tırtıklı forseps (doku kavrama)</td></tr> <tr><td>makası</td><td>Oster</td><td>A5</td><td></td></tr><tr><td>bant</td><td>Fisherbrand</td><td>159015G</td><td></td></tr><tr><td>yapay gözyaşı merhemi</td><td>Akorn Inc</td><td>13985-600-03</td><td></td></tr><tr><td>lidokain</td><td>Hospira</td><td>0409-4277-01</td><td>%2 enjekte edilebilir</td></tr><tr><td>polivinil kateterler</td><td>Tygon</td><td>PV-1</td><td></td></tr><tr><td>Evans mavi</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E2129</td><td></td></tr><tr><td>Madde P</td><td>Bachem&nbsp;</td><td>H-1890</td><td></td></tr><tr><td>heparin</td><td>Sagent İlaç</td><td>25201-400-10</td><td>1000 U / ml</td></tr><tr><td>tuzlu su çözeltisi</td><td>Hospira</td><td>0409-7138-09</td>% <td>0.9 sodyum klorür</td></tr><tr><td>fenobarbital ve nbsp;</td><td>Vortech</td><td>0298-9373-68</td><td></td></tr><tr><td>sodyum sitrat</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP327-1</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P4417-50TAB&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Kurutma için Kimwipes</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-666A</td><td></td></tr><tr><td>formamid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>47670</td><td></td></tr><tr><td>mikroterazi</td><td>Denver Enstrüman</td><td>APX-60</td><td></td></tr><tr><td>mikrofüj tüpleri</td><td>Fisher Scientific</td><td>07-200-534</td><td></td></tr><tr><td>polistiren 96 kuyulu plaka</td><td>Becton Dickenson</td><td>351172</td><td></td></tr><tr><td>emicilik plakası okuyucu</td><td>BioTek</td><td>Synergy 2</td><td></td></tr><tr><td>poliakrilamid jeller</td><td>Bio-Rad</td><td>3450014&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>protein moleküler ağırlık standardı</td><td>Bio-Rad</td><td>1610374</td><td></td></tr><tr><td>Protran destekli nitroselüloz</td><td>Amersham (GE)</td><td>10600015</td><td></td></tr><tr><td>jel kutusu</td><td>Bio-Rad</td><td>1658005</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP152-1</td><td></td></tr><tr><td>Tween20</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P-1379</td><td></td></tr><tr><td>sodyum klorür</td><td>Fisher Bilimsel</td><td>S271-1</td><td></td></tr><tr><td>primer NEP poliklonal antikoru&nbsp;</td><td>Ar-Ge D Sistemleri</td><td>AF1182</td><td></td></tr><tr><td>doksisiklin chow</td><td>Teklad (HARLAN)</td> <td>TD.130750&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>FVB / NJ vahşi tip fareler</td><td>Jackson</td><td>001800</td><td></td></tr><tr><td>ikincil antikor (keçi anti-tavşanı)</td> <td>ZyMed</td><td>81-6120</td><td></td></tr><tr><td>ECL çözeltisi-Western Lightening Plus</td><td>PerkinElmer</td><td>NEL104001EA</td><td></td></tr><tr><td>filmi</td><td>Pierce</td><td>34091</td><td></td></tr></tbody></table>

en iyi duruma getirilmiş bir evans mavi mouse vasküler sızıntı değerlendirmek için iletişim kuralı

An Optimized Evans Blue Protocol to Assess Vascular Leak in the Mouse

Vasküler sızıntı veya plazma ekstravazasyonu, bir nedeni vardır ve ciddi sonucu veya bir enflamatuar yanıt belirtisi olabilir. Bu çalışmada sonuçta nedenleri ile ilgili yeni bilgi ya da inhibe veya plazma ekstravazasyonu tedavi etmek için yeni yollar açabilir. Araştırmacılar plazma ekstravazasyonu çalışmak için en iyi yöntemler kullanılabilir, dahil olmak üzere uygun araçlara sahip önemlidir. Bu makalede, biz FVBN farelerin organlarda plazma ekstravazasyonu değerlendirmek için Evans mavi boya yöntemini kullanarak bir protokol tanımlamak. Bu iletişim kuralı kasten basittir, için iyi bir derece, mümkün olduğunca ama sağlar yüksek kalitede veri. Evans mavi boya öncelikle çünkü kullanmak ortalama laboratuvar için kolay seçildi. Enzim neprilysin plazma ekstravazasyonu karşı damarlara korusun hipotez için kanıt ve destek sağlamak için bu protokolü kullanmış. Ancak, bu iletişim kuralını deneysel olarak kullanılan olabilir ve kolayca anlama, önlenmesi ve tedavisinde önemli diğer faktörler içerebilir çalışmaları için diğer suşların fareler veya diğer türler, birçok farklı organ veya doku, kullanılacak adapte plazma ekstravazasyonu. Bu iletişim kuralı kapsamlı bir şekilde optimize edilmiş ve kullanımı, ekonomi ve genel availability-in malzeme ve ekipman, bu iletişim kuralını kullanmak ortalama laboratuvar için üstün yapım kolaylığı varolan iletişim kuralları ve birleştiren güvenilirlik modifiye, plazma ekstravazasyonu düşük organlarını miktarının.

Şekil 1' de, bir şematik yordam, hangi FVBN farelerin organları en güvenilir ve tutarlı madde P kaynaklı plazma ekstravazasyonu değerleri neden tespit edilmiştir gösterilir. Bu yordam genellikle iş, bekleme süresi en az 48 saat tarafından ayrılmış iki gün sürer. Bu karşılaştırılmak üzere tüm deneylerin tutarlı bir şekilde yapılırsa daha, yaymak mümkündür. Organları üzerinde gün 1 izole sonra Örneğin, organları sıvı azot içinde donmuş ve-80 ° C'de depolanan fl...

Bu makalede, ekonomik, en iyi duruma getirilmiş ve basit bir protokol bu Evans mavi boya yöntemi diğer suşları, türler ve diğer organ veya doku kullanmak için adapte edilebilir FVBN farelerin organlarda plazma ekstravazasyonu değerlendirmek için kullandığı açıklanmıştır.

En iyi duruma getirilmiş bir Evans mavi Mouse vasküler sızıntı değerlendirmek için iletişim kuralı

Vascular leak, or plasma extravasation, has a number of causes, and may be a serious consequence or symptom of an inflammatory response. This study may ...

Bu protokolün genel amacı, modifiye edilmiş bir Evans Blue Dye yöntemi kullanarak farelerin veya diğer küçük hayvan türlerinin organlarındaki plazma ekstravazasyonunu veya sızıntısını değerlendirmek ve nispeten niceliksel hale getirmektir. Bu yöntem, vasküler alandaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir, örneğin, hangi endojen veya eksojen faktörler, belirli bir tür veya ilgilenilen organda plazma ekstravazasyonunu değiştirir? Bu tekniğin temel avantajı, kateterizasyonun mütevazı bir cerrahi yeterlilik gerektirmesine rağmen, yöntemin dayanıklı venöz erişim sağlaması ve fareden fareye tekrarlanabilir olmasıdır.Genel olarak, bu yönteme yeni başlayan kişiler, kateter yerleştirmenin mütevazı cerrahi zorluğu nedeniyle mücadele edebilir. 16 ila 20 haftalık yetişkin bir FVB NJ faresini tarttıktan sonra, ayak parmağını sıkıştırmaya yanıt vermediğini onaylayın ve hayvanın ventral boyun bölgesini tıraş edin. Fareyi önceden ısıtılmış bir ped üzerine sırtüstü pozisyonda yerleştirin ve dört pençeyi de cerrahi yüzeye bantlayın.Kurumayı önlemek için hayvanın gözlerine merhem sürün. Sağ ventral boynunda juguler ven üzerinde bir santimetre kesi yapın. Ağrı yönetimi ve vazodilatasyonu teşvik etmek için insizyon bölgesine bir veya iki damla %1-2 lidokain uygulayın.Sağ internal juguler veni künt diseksiyon ile izole edin. Damarı 4-0 dikişle bağlayın ve damarın rostral ucunu nazikçe geri çekmek için bir hemostat kullanın. İnce makas kullanarak, dikişe yaklaşık üç milimetre kaudal ve damar çapının yaklaşık yarısına kadar bir delik açın.Daha sonra, delikten juguler ven içine bir PV1 polivinil kateter yerleştirin ve kateteri damarın kaudal ucuna doğru yaklaşık 1,5 santimetre geçirin. Kateteri damarın kaudal bölümüne güvenli bir şekilde bağlamak için yeni bir 4-0 sütür kullanın ve damarın rostral kısmını, orijinal olarak rostral juguler veni bağlamak için kullanılan dikişin gevşek uçları ile kateterin dışına bağlayın. Dehidrasyon, vücut ısısı kaybı ve doku kurumasını önlemek için cildi başka bir 4-0 sütür parçasıyla kateterin etrafında gevşek bir şekilde bir araya getirin.Daha sonra kateteri heparinize salin içeren bir şırıngaya bağlayın ve kateteri salin solüsyonu ile yıkayın. İlgilenilen organdan ekstravazasyon ve sızıntıyı değerlendirmek için, önce juguler ven kateterine 50 mikrolitre Evans Blue solüsyonu enjekte edin, ardından hattı yıkamak için küçük bir hacimde heparinize salin uygulayın. İki dakika sonra, katetere 100 mikrolitre P maddesi enjekte edin, ardından ikinci bir heparinize salin yıkayın.Madde P enjeksiyonundan on sekiz dakika sonra, hayvanın göğüs boşluğunu açın ve yerçekimi, fazla Evans Blue'yu kan damarlarından çıkarmak için kalbi ve kan damarlarını 50 mililitre 50 milimolar sodyum sitrat çözeltisi ile perfüze edin. İlgilenilen organları ve dokuları hasat edin ve gerektiğinde her doku için kalan içeriği çıkarın. Organları oda sıcaklığında PBS'de durulayın, organları bir laboratuvar mendiliyle kurulayın ve her organı ikiye bölün.Her organın ıslak ağırlıklarını yarıya kadar bir terazide elde edin ve her organın 1/2'sini bir folyo parçası üzerinde 150 santigrat derecede bir kurutma fırınında 48 saat kurutun. Ardından, her organın diğer yarısını, Evans Blue Dye ekstraksiyonu için 48 ila 72 saat boyunca bir mikrofüj tüpünde 200 mikrolitreye kadar formamid içine yerleştirin. Neprilizin nakavt fareleri, vahşi tip hayvanlara kıyasla idrar kesesinden Madde P'nin neden olduğu plazma ekstravazasyonunun arttığını gösterir, bu da mesaneden Madde P'nin neden olduğu plazma ekstravazasyonunun negatif regülasyonunda Neprilizin için bir rol olduğunu düşündürür.Neprilizin aşırı ekspresyonu için bir hafta boyunca Neprilysin'in aşırı ekspresyonu için transgenik farelerin doksisiklin tedavisi, doksisiklin ile muamele edilen transgenik hayvanların, duodenumdan önemli ölçüde azalmış bir Madde P'nin neden olduğu plazma ekstravazasyonu göstermesi nedeniyle, duodenumdan Madde P'nin neden olduğu plazma ekstravazasyonu gösterir vahşi tip veya nakavt hayvanların doksisiklin tedavisinden sonra gözlenmeyen üç hayvan grubuna kıyasla. Bir kez ustalaştıktan sonra, kateterizasyon, enjeksiyon ve organ izolasyonu adımları, uygun şekilde yapılırsa 45 ila 55 dakika içinde tamamlanabilir. Protokolün geri kalanı için iki ila üç gün daha bekleyin.Bu tekniği ilk öğrenirken, bir deney yapmadan önce prosedürü en az 10-20 pratik hayvanda tekrarlamak önemlidir. Bu videoyu izledikten sonra, bu modifiye Evans Blue Dye yöntemini kullanarak farelerin veya diğer küçük hayvan türlerinin organlarındaki plazma ekstravazasyonunu veya sızıntısını nasıl değerlendireceğinizi ve nispeten niceliksel olarak nasıl değerlendireceğinizi iyi anlamış olmalısınız.

an-optimized-evans-blue-protocol-to-assess-vascular-leak-in-the-mouse

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu video, bir fare modelinde ommaya aracılı intraserebroventriküler enjeksiyonu göstermektedir. Yöntem, potansiyel ilaç adaylarının lokalize olarak verilmesini sağlar ve kan-beyin bariyerinden kaçar.

Farede İntraserebroventriküler Enjeksiyon: Fare Beyninin Serebral Ventriküllerine İlaç Vermek İçin Ommaya Aracılı Doğrudan İlaç Uygulama Yöntemi

An<em&gt; In vivo</emKan Gemi Geçirgenlik Test&gt; Test

Mast hücreleri ve bazofillerin aktivasyonuyla karakterize alerjik tepkiler, IgE çapraz bağlanması ve proenflamatuar aracıların salınması ile tahrik edilmektedir. Alerjik tepkilerin bir kantitatif olarak değerlendirilmesi allerjen vasküler geçirgenlikte değişiklikleri izlemek için Evans mavisinin kullanılması sureti ile elde edilebilir.

Farelerde Yerel Anafilaksi Ölçme

Retina hastalığının hayvan modellerinde kan-retina bariyeri geçirgenliğini ve iç sınırlayıcı membran bütünlüğünü araştırmak için, retinal nöronları ve gliaları etiketlemek için araç olarak birkaç adeno-ilişkili virüs (AAV) varyantı kullandık. Virüs aracılı raportör gen ekspresyonu daha sonra retinal bariyer geçirgenliğinin bir göstergesi olarak kullanılır.

Aracı Olarak Adeno-ilişkili virüs kullanarak Hastalığında Retina Engelleri Eğitim için

Bu protokol mıknatıs sıkma kullanarak fare kulak cilt üzerinde bir iskemi-reperfüzyon (İR) modeli indüksiyon açıklar. Özel bir dahili Intravital görüntüleme modeli kullanarak, in vivo inflamatuvar yanıt sonrası reperfüzyon eğitim. Bu tekniğin gelişiminin arkasındaki mantık lökosit cilt IR hasarı nasıl cevap anlayışı yaygınlaştırmaktır.

Bağışıklık Yanıtları intravital multiphoton Görüntüleme Fare Kulak Skin uyaran İskemi-reperfüzyon yaralanması

Bu yordamı genel amacı fare modelleri iskemik inme kan - beyin bariyerini bozulma vivo içinde değerlendirmesi için son derece tekrarlanabilir bir teknik sağlamaktır.

Kan - beyin bariyerini bozulma iskemik inme, bir fare modeli Vivo içinde değerlendirilmesi

Burada, fare deri içine geçirgenliği teşvik ajanların intradermal yönetimi tarafından indüklenen vasküler sızıntı ölçmek için bir iletişim kuralı mevcut. Bu teknik yeteneği teşvik veya vasküler sızıntı engelleyen veya vasküler geçirgenliği düzenleyen moleküler mekanizmaları incelemek için moleküllerin belirlemek için kullanılabilir.

Vasküler Hyperpermeability indükleyici ajanlar cilt mil tahlil ile değerlendirilmesi

Bu protokol, aynı kemirgen beyin örnekleri kümesinde iskemik beyin hasarının en önemli üç parametresini ölçmenin yeni bir tekniğini açıklar. Sadece bir beyin örneği kullanmak etik ve ekonomik maliyetler açısından oldukça avantajlıdır.

Tek Bir Kemirgen Beyin Örneklerinde İnme Sonrası Serebral Ödem, Enfarktüs Bölgesi ve Kan-Beyin Bariyeri Kırılımının Ölçülmesi

Burada, gül bengal kullanarak retinal ven tıkanıklığı için optimize edilmiş bir protokol ve genetiği değiştirilmiş suşlarda tekrarlanabilirliğini en üst düzeye çıkarmak için önerilerle lazer rehberliğinde retinal görüntüleme mikroskop sistemi açıklanmaktadır.

Değişkenliği Sınırlamak için Retinal Ven Tıkanıklığı Fare Modelinin Optimizasyonu

Hipoksik koşullar altında kültürlenen plasental eksplantlardan izole edilen küçük EV'lerin (sEV'ler) (preeklampsinin bir yönünü modelleme) hamile olmayan yetişkin dişi farelerde kan-beyin bariyerini bozup bozmadığını değerlendirmek için bir protokol sunulmaktadır.

Hipoksik İnsan Plasentalarından Küçük Hücre Dışı Veziküller Tarafından Fare Kan-Beyin Bariyerinin Bozulması

Farelere farklı zaman noktalarında iki floresan boya uygulanarak kan-beyin bariyeri (BBB) bozulmasına bağlı boya ekstravazasyonunu görselleştirmek için bir yöntem geliştirilmiştir. Gliserolün kriyoprotektan olarak kullanılması, aynı numune üzerinde immünohistokimyayı kolaylaştırdı.

Hafif Travmatik Beyin Hasarı Olan Bir Fare Modelinde Kan-Beyin Bariyeri Bozulmasının Değerlendirilmesi

Öğrenin, Evans mavi boya yöntemiyle farelerde plazma ekstravazasyonunu değerlendirmek için optimize edilmiş bir kateterizasyon protokolü. Bu yöntem damar geçirgenliği araştırmalarında güvenilir ve tekrarlanabilir sonuçlar sağlar.

En iyi duruma getirilmiş bir Evans mavi Mouse vasküler sızıntı değerlendirmek için iletişim kuralı

Daha fazla video keşfet