Name: Kekik esans uygulama etkisi et kurutma sırasında mikrobiyal yükü (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-14T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 7 s
Description: Keşfedin, et kurutma sırasında kekik esansiyel yağının buhar fazında uygulanmasıyla mikrobiyal yükü nasıl azaltabileceğinizi. Bu doğal koruyucu yöntem, gıda güvenliğini artırır ve sentetik koruyuculara alternatif sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser tropikal AgriSciences Fakültesi iç Grant ajansı tarafından desteklenmiştir (proje sayısı: 20175013) ve her ikisi de verir, Çek Yaşam Bilimleri Üniversitesi CIGA 20182023.

1. et hazırlık
<ol><li>Yerel bir kasaplık sığır eti ( pazı kemiğitaze Dana) kısa bir bel edinmek ve laboratuara aktar. Not: Bu, ortam sıcaklığında (20-25 ° C), sığır fileto taşımak için değil bir hermetik mühürlü torba 20 dk daha uzun bir süre için tavsiye edilir.</li>
	<li>Sığır eti kas, Laminer Emanet dolabı, dış yüzeyi sterilize etmek için kas 70 (v/v) etanol ile püskürtülerek yıkama s 500 mL sıkmak şişe kullanarak. 0.025 g etanol 1 cm2 kas yüzeyi başına uygulanır.</li>
	<li>Et dış yüzeyine aseptik kas iç kalan etanol önlemek için bir bıçakla çıkarın. Yaklaşık 3 mm kas'ın yüzey düzgünlüğü tutmak için kas iç kaldırın.</li>
	<li>Bir plastik mühürlü torba kas paketi ve bir dondurucu transfer.</li>
	<li>Kas-18 ° C'de 1 gün için saklayın. Sonra 6 h için 4 ° C'de donmuş kas çözülme. Not: çözdürme için bu kas dondurucudan buzdolabına taşımak için tavsiye edilir.</li>
	<li>Bir laminar Emanet dolabı, bir kasap ile 0,5 cm kalınlığında dilimler halinde her kas dilim. Sonra bir bıçak ile bu2 dikdörtgen örnekleri küçük 5 × 2,5 cm kesmek.</li>
	<li>Dikdörtgen et örnekleri plastik torbalarda paket ve daha sonra kullanmak için-18 ° C'de dondurucuda depolayabilirsiniz.</li>
</ol>2. standart Inoculum ve laminer güvenlik kabini yordamda aşılama hazırlanması
<ol><li>Standart inoculum (1,5 × 108 CFU/mL) E. coli et örnekleri aşılamak için ATCC 25922 hazırlayın.<ol>
<li>Hisse senedi inoculum hazırlanması için ilk 10 mL, steril arabelleğe alınmış Mueller Hinton suyu (BMHB) ile önceden doldurulmuş bir 15 mL steril tüp içine lyophilized bakteri kültürü (tedarikçi tarafından teslim) dağıtmak. Bu süspansiyon 37 ° C'de 24 h için yetiştirmek<ol>
<li>Bakteriyel hisse senedi çözüm aşağıdaki gibi hazırlamak: almak yaklaşık 0.1 - 0.2 mL bakteriyel süspansiyon ve seyreltik 20 mL şişe içine kapalı kauçuk tıpa ile önceden 15 mL steril BMHB ile dolu bir alüminyum kapaklı. Bu süspansiyon 37 ° C'de 24 h için yetiştirmek</li>
			<li>Standart inoculum hazırlanması için 4 ° C'de buzdolabı içinde saklayın.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Hisse senedi çözümden (bkz. Adım 2.1.1) E coli almak yaklaşık 0.1 - 0.2 mL bakteriyel süspansiyon ve seyreltik 15 mL plastik steril tüp 10 mL, steril arabelleğe alınmış Mueller Hinton suyu (BMHB) ile önceden dolu. Tüp 24 h 37 ° C'de kuluçkaya.</li>
		<li>Standart inoculum (1,5 × 108 CFU/mL) hazırlanması için bir 15 mL steril tüp 10 mL steril BMHB ile önceden dolu bu süspansiyon küçük miktarda ekleyebilirsiniz.</li>
		<li>İyice girdap karışımı ve ölçü 600 optik yoğunluk (OD) tarafından Densitometre32nm.</li>
		<li>2.1.3 - 2.1.4 temiz BMHB değerine göre 0,5 tarafından McFarland değeri arttıkça ifade OD kadar yineleyin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Aşılama işlemi için iki farklı alüminyum folyo (20 cm x 30 cm), bir kontrol örnekleri ve aşı et örnekleri ikinci dikdörtgen et örnekleri yerleştirin.<ol>
<li>İkinci alüminyum folyo üzerinde 800 µL bakteri süspansiyon (Bu 1,2 × 108 CFU et örnek başına karşılık gelir) seçilen baskı çiğ dikdörtgen et örnekleriyle inoculum yüzeyinde eşit dağıtarak aşılamak.<ol>
<li>Örnek bir tarafındaki 400 µL pipet ve yüzeyde bir steril hücre ayırıcı kullanarak yavaşça yayıldı. Koyup 10 dk. için tekrar diğer tarafta süspansiyon geri kalanı için aynı yordamı örnek kuruyuncaya kadar bırakın.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. kurutma ve TEO uygulama
<ol><li>Laminer Emanet dolabı kurutma dikdörtgen et örnekleri içeren her iki alüminyum folyo transfer: her alüminyum folyo ile kapak ve örnekleri kurutucu içine yerleştirin.</li>
	<li>Standart laboratuvar kurutma makinesi kurumasını taşırlar. Not: İlk olarak, 55 ° c fırında Bu yordam için 20 dk sürebilir.<ol>
<li>Kontrol örnekleri için 6 h 55 ° C'de 30-E arasında değişen hava bağıl nem değerleri kurutma ile kuru. Not: Bağlı olarak buharlaşma eti sıvı oranı zaman kurutma hava bağıl nem değerleri değişir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Uygulanan TEO hacmi hesaplamak ve uçucu yağ konsantrasyonu TEO bir birim başına kurutma makinesi hacmi (mL/L hava) olarak ifade. Örneğin, 53 M (kurutucu hacmi) TEO 1,5 mL doz 0,028 mL/L hava bir konsantrasyon sonuçlanır. TEO mikrofon E. coliiçin belirlemek için doz 1,5 mL (0,028 mL/L hava), 1 mL (0,019 mL/L hava) ve 0.75 mL (0,014 mL/L hava) kullanın.</li>
	<li>Kurutma önce TEO uygulama için buharlar (ile thymol ana madde y olarak), emmek TEO ve yer 1,5 mL doz ile bir filtre kağıdı (12 cm x 20 cm) içine kurutucu fan önünde.</li>
	<li>Kontrol örnekleri (Adım 3.1 ve 3.2) gelince aynı yordam kullanılarak tedavi TEO et örnekleri kuru. Not: kurutma işlemi sona erer ve örnekleri kaldırıldıktan sonra fırın 80 ° C'de 3 h için geçiş ve hava Vana gösterge % 100 hava kanalı için fırından uçucu yağ artıkları temizlemek için ayarlayın.</li>
</ol>4. mikrobiyal analiz
<ol><li>Bakteri ile et aşı daha önce herhangi bir katıştırma için et örnekleri inceleyin. Sümük görünümünü ve herhangi bir güçlü ve keskin koku algılama et bozulma gösterge. Dokusu yapış yapış hissederse, bakteri et yüzeyinde çoğalmaya başlamış olabilir.</li>
	<li>Aşı etkinliğini değerlendirmek için ham inoculated örnekleri E. coli ATCC 25922 varlığı için test ve onları kurutma işlemi önce sigara aşısını kontrol örnekleri ile karşılaştırın. Bu amaçla:<ol>
<li>Et örnekleri (2 kontrol örnekleri ve 2 aşısını örnekleri) yıkayın. Tamponlu pepton su (8,5 gram NaCl, pepton 1 gr., 5 tablet fosfat tamponlu tuz ve su 1 litre Polysorbate 80 1 g) ile sterilize edilmiş bir şişesi her et Örnek 1:10 (w/v) pH aralığı üzerinden 7-7,3 oranında askıya alma. Bir shaker oda sıcaklığında 10 dakika için 140 rpm'de kullanarak sallamak. Not: Yıkama hemen sonra aşı prosedür.</li>
		<li>Chen, Nace ve Irwin33 Plate Count Agar (PCA) ve MacConkey Agar (MCA) tarafından özetlenen ayarlanmış bir 6 × 6 damla plaka yordam tarafından bakteri sayısını değerlendirin. Not: 6 × 6 bırakma yöntem daha az emek yoğun ve daha ekonomik geleneksel yöntem33' e, göre bir çok kanallı pipet ile incelenen örnek 10 kat seri dilutions hazırlamak için suyu mikro seyreltme yöntemini kullanır 34.</li>
		<li>6 × 6 damla plaka yordam E. colideğerlendirilmesi için tarafından 10 kat seri örnek dilutions yetiştirmek. Not: Ekimi kullanım altı 5 µL-damla için 6 × 6 bırakma yöntem için özellikle altı dilutions bir çok kanallı pipet ile incelenen örneğinin seçili. Uygun şekilde kurutulmuş Petri yemekler, damla hızlı bir şekilde agar emmek ve bu yöntemle dikim çok uygun ve yönetilebilir34olduğunu.</li>
		<li>Petri yemekler için 24 h 37 ° C'de kuluçkaya. Ekimi süresinden sonra e.coli kolonileri Petri yemekleri (CFU g-1 kurutulmuş et) sayısı 5 bölümde açıklandığı gibi değerlendirin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Kurutma sonra aşı iki kurutulmuş örnekleri almak ve bunları uygun E. coliiçin sırasıyla iki kurutulmuş sigara aşısını kontrol örnekleri ile karşılaştırın. Bu dört samples E. coli olup olmadığını belirlemek için aşağıdaki gibi her et örnek ön zenginleştirme işlemi taşımak:<ol>
<li>Her et örnek tamponlu pepton suyla sterilize edilmiş bir şişesi içinde askıya alma (bkz: adım 4.2.1) ve oda sıcaklığında 10 dakika için 140 devir / dakikada bir shaker kullanarak sallamak. O zaman her şişeyi 37 ° c 6 h ön zenginleştirme için sırasında kuluçkaya.</li>
		<li>Değerlendirme ve bakteri tarımı için adımlarda 4.2.2 - 4.2.4 açıklandığı gibi aynı yordamı izleyin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. sonuçlar gözden geçirin
<ol><li>Kuluçka tamamlandıktan sonra Petri yemekler kuluçka makinesi kaldır ve sonuçları aşağıdaki gibi gözden geçirin:<ol>
<li>Koloniler toplam sayısı değerlendirmek için plakalar PCA (beyaz lekeler) ve tipik E. coli mesophilic aerobik bakteri varlığı için inceleyin MCA koloniler (koyu pembe kırmızı). Patojen yok ise, her iki agars yok büyüme mevcut.</li>
		<li>Kolonilerin sayımı ve E. coli (CFU/g-1 kurutulmuş et) mevcut miktarını belirlemek. Not: 30 veya daha az kolonileri başına damla (şekil 1) içeren iki ardışık dilutions, koloniler (N) saymak. Kurutulmuş et CFU/g-1 sayısı N aşağıdaki35 belirlenir <img alt="Equation" src="/files/ftp_upload/57054/57054eq1.jpg"> nerede, C koloniler üzerinde tüm damla sayılan toplamıdır, v (burada, 0.05 mL) damla kullanılan Numune dilüsyonu hacmi n1 ilk seyreltme kullanılan damla sayısını, n2 damla sayısıdır İkinci seyreltme kullanılan ve d hangi ilk kez ele geçirildi seyreltme temsil eder.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Mikrobiyolojik verileri çözümlemek üzere, CFU g-1 oturum ve onları tedavi36ana etkileri için Varyans analizi için (ANOVA) tabi koloni sayısı dönüştürün.<ol>
<li>Tukey dürüst önemli fark testi (Tukey HSD) için birden çok kötü karşılaştırmalar36 gerçekleştirmek ve tedaviler arasındaki önemli farkları belirlemek.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Eklund, M. W., Peterson, M. E., Poysky, F. T., Paranjpye, R. N., Pelroy, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+bacterial+pathogens+during+processing+of+cold-smoked+and+dried+salmon+strips%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Food+Prot%22%5BJournal%5D)">Control of bacterial pathogens during processing of cold-smoked and dried salmon strips.</a> J. Food Prot. 67 (2), 347-351 (2004).</li>
<li>Mahmoud, B. S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preservative+effect+of+combined+treatment+with+electrolyzed+NaCl+solutions+and+essential+oil+compounds+on+carp+fillets+during+convectional+air-drying%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Food+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Preservative effect of combined treatment with electrolyzed NaCl solutions and essential oil compounds on carp fillets during convectional air-drying.</a> Int. J. Food Microbiol. 106 (3), 331-337 (2006).</li>
<li>Rahman, M. S., Guizani, N., Al-Ruzeiki, M. H., Al Khalasi, A. S. <a target="_blank" href="http://www.tandfonline.com/doi/abs/10.1080/07373930008917847">Microflora Changes in Tuna Mince During Convection Air Drying.</a> Dry. Technol. 18 (10), 2369-2379 (2000).</li>
<li>Faith, N. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viability+of+Escherichia+coli+O157%3A+H7+in+ground+and+formed+beef+jerky+prepared+at+levels+of+5+and+20%25+fat+and+dried+at+52%2C+57%2C+63%2C+or+68+C+in+a+home-style+dehydrator%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Food+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Viability of Escherichia coli O157: H7 in ground and formed beef jerky prepared at levels of 5 and 20% fat and dried at 52, 57, 63, or 68 C in a home-style dehydrator.</a> Int. J. Food Microbiol. 41 (3), 213-221 (1998).</li>
<li>Hierro, E., De La Hoz, L., Ordóñez, J. A. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0308814603003947">Headspace volatile compounds from salted and occasionally smoked dried meats (cecinas) as affected by animal species.</a> Food Chem. 85 (4), 649-657 (2004).</li>
<li>Nummer, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Preparation+Methods+on+the+Microbiological+Safety+of+Home-Dried+Meat+Jerky%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Food+Prot%22%5BJournal%5D)">Effects of Preparation Methods on the Microbiological Safety of Home-Dried Meat Jerky.</a> J. Food Prot. 67 (10), 2337-2341 (2004).</li>
<li>Greig, J. D., Ravel, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+foodborne+outbreak+data+reported+internationally+for+source+attribution%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Food+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Analysis of foodborne outbreak data reported internationally for source attribution.</a> Int. J. Food Microbiol. 130 (2), 77-87 (2009).</li>
<li>Eidson, M., Sewell, C. M., Graves, G., Olson, R. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/282181056_Beef_jerky_gastroenteritis_outbreaks">Beef jerky gastroenteritis outbreaks.</a> J. Environ. Health. 62 (6), 9-13 (2000).</li>
<li>Allen, K., Cornforth, D., Whittier, D., Vasavada, M., Nummer, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+high+humidity+and+wet+marinade+methods+for+pasteurization+of+jerky%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Food+Sci%22%5BJournal%5D)">Evaluation of high humidity and wet marinade methods for pasteurization of jerky.</a> J. Food Sci. 72 (7), (2007).</li>
<li>Levine, P., Rose, B., Green, S., Ransom, G., Hill, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11510658">Pathogen testing of ready-to-eat meat and poultry products collected at federally inspected establishments in the United States, 1990 to 1999.</a> J. Food Prot. 64 (8), 1188-1193 (1990).</li>
<li>Keene, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+outbreak+of+Escherichia+coli+O157%3AH7+infections+traced+to+jerky+made+from+deer+meat%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA%22%5BJournal%5D)">An outbreak of Escherichia coli O157:H7 infections traced to jerky made from deer meat.</a> JAMA. 277 (15), 1229-1231 (1997).</li>
<li>Oliver, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+viable+but+nonculturable+state+in+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The viable but nonculturable state in bacteria.</a> J. Microbiol. 43, 93-100 (2005).</li>
<li>Oliver, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+findings+on+the+viable+but+nonculturable+state+in+pathogenic+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS+Microbiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Recent findings on the viable but nonculturable state in pathogenic bacteria.</a> FEMS Microbiol. Rev. 34 (4), 415-425 (2010).</li>
<li>Khamisse, E., Firmesse, O., Christieans, S., Chassaing, D., Carpentier, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+cleaning+and+disinfection+on+the+non-culturable+and+culturable+bacterial+loads+of+food-contact+surfaces+at+a+beef+processing+plant%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Food+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Impact of cleaning and disinfection on the non-culturable and culturable bacterial loads of food-contact surfaces at a beef processing plant.</a> Int. J. Food Microbiol. 158 (2), 163-168 (2012).</li>
<li>Li, L., Mendis, N., Trigui, H., Oliver, J. D., Faucher, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+importance+of+the+viable+but+non-culturable+state+in+human+bacterial+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The importance of the viable but non-culturable state in human bacterial pathogens.</a> Front. Microbiol. 5, 258(2014).</li>
<li>Hernández, H., Claramount, D., Kučerová, I., Banout, J. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/jfpp.13161/abstract">The effects of modified blanching and oregano essential oil on drying kinetics and sensory attributes of dried meat.</a> J. Food Process. Preserv. , (2016).</li>
<li>García-Díez, J., et al. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/306070887_The_Impact_of_Essential_Oils_on_Consumer_Acceptance_of_Chourico_de_vinho_-_A_Dry-Cured_Sausage_Made_from_Wine-Marinated_Meat_-_Assessed_by_the_Hedonic_Scale_JAR_Intensity_Scale_and_Consumers'_Will_to_">The Impact of Essential Oils on Consumer Acceptance of Chouriço de vinho - A Dry-Cured Sausage Made from Wine-Marinated Meat - Assessed by the Hedonic Scale, JAR Intensity Scale and Consumers' &#34;Will to Consume and Purchase.&#34.</a> J. Food Process. Preserv. 41 (4), (2017).</li>
<li>Govaris, A., Solomakos, N., Pexara, A., Chatzopoulou, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+antimicrobial+effect+of+oregano+essential+oil%2C+nisin+and+their+combination+against+Salmonella+Enteritidis+in+minced+sheep+meat+during+refrigerated+storage%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Food+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The antimicrobial effect of oregano essential oil, nisin and their combination against Salmonella Enteritidis in minced sheep meat during refrigerated storage.</a> Int. J. Food Microbiol. 137 (2-3), 175-180 (2010).</li>
<li>Holley, R. A., Patel, D. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0740002004001042">Improvement in shelf-life and safety of perishable foods by plant essential oils and smoke antimicrobials.</a> Food Microbiol. 22 (4), 273-292 (2005).</li>
<li>Petrou, S., Tsiraki, M., Giatrakou, V., Savvaidis, I. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chitosan+dipping+or+oregano+oil+treatments%2C+singly+or+combined+on+modified+atmosphere+packaged+chicken+breast+meat%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Food+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Chitosan dipping or oregano oil treatments, singly or combined on modified atmosphere packaged chicken breast meat.</a> Int. J. Food Microbiol. 156 (3), 264-271 (2012).</li>
<li>Ballester-costa, C., Sendra, E., Viuda-martos, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+Antioxidant+and+Antibacterial+Properties+on+Meat+Homogenates+of+Essential+Oils+Obtained+from+Four+Thymus+Species+Achieved+from+Organic+Growth%5BTitle%5D)+AND+%22Foods%22%5BJournal%5D)">Assessment of Antioxidant and Antibacterial Properties on Meat Homogenates of Essential Oils Obtained from Four Thymus Species Achieved from Organic Growth.</a> Foods. 6 (8), 59(2017).</li>
<li>Hernández, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+oregano+essential+oil+on+microbial+load+and+sensory+attributes+of+dried+meat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Sci.+Food+Agric%22%5BJournal%5D)">The effect of oregano essential oil on microbial load and sensory attributes of dried meat.</a> J. Sci. Food Agric. 97 (1), 82-87 (2017).</li>
<li>García-Díez, J., Alheiro, J., Falco, V., Fraqueza, M. J., Patarata, L. <a target="_blank" href="http://www.tandfonline.com/doi/abs/10.1080/10412905.2016.1212738">Chemical characterization and antimicrobial properties of herbs and spices essential oils against pathogens and spoilage bacteria associated to dry-cured meat products.</a> J. Essent. Oil Res. 29 (2), 117-125 (2017).</li>
<li>Cavanagh, H. M. A. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/285700524_Antifungal_activity_of_the_volatile_phase_of_essential_oils_A_brief_review">Antifungal Activity of the Volatile Phase of Essential Oils: A Brief Review.</a> Nat. Prod. Commun. 2 (12), 1297-1302 (2007).</li>
<li>Tajkarimi, M. M., Ibrahim, S. A., Cliver, D. O. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0956713510000459">Antimicrobial herb and spice compounds in food.</a> Food Control. 21 (9), 1199-1218 (2010).</li>
<li>Nedorostova, L., Kloucek, P., Kokoska, L., Stolcova, M., Pulkrabek, J. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0956713508000960">Antimicrobial properties of selected essential oils in vapour phase against foodborne bacteria.</a> Food Control. 20 (2), 157-160 (2009).</li>
<li>Burt, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Essential+oils%3A+Their+antibacterial+properties+and+potential+applications+in+foods+-+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Food+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Essential oils: Their antibacterial properties and potential applications in foods - A review.</a> Int. J. Food Microbiol. 94 (3), 223-253 (2004).</li>
<li>Ramanathan, L., Das, N. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/jf00013a004">Studies on the control of lipid oxidation in ground fish by some polyphenolic natural products.</a> J. Agric. Food Chem. 40 (1), 17-21 (1992).</li>
<li>Yamazaki, K., Yamamoto, T., Kawai, Y., Inoue, N. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0740002003000856">Enhancement of antilisterial activity of essential oil constituents by nisin and diglycerol fatty acid ester.</a> Food Microbiol. 21 (3), 283-289 (2004).</li>
<li>García-Díez, J., Alheiro, J., Falco, V., Fraqueza, M. J., Patarata, L. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/309763965_Synergistic_Activity_of_Essential_Oils_from_Herbs_and_Spices_Used_on_Meat_Products_against_Food_Borne_Pathogens">Synergistic activity of essential oils from herbs and spices used on meat products against food borne pathogens.</a> Nat. Prod. Commun. 12 (2), 281-286 (2017).</li>
<li>Hussein Hamdy Roby, M., Atef Sarhan, M., Abdel-Hamed Selim, K., Ibrahim Khalel, K. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0926669012004992">Evaluation of antioxidant activity, total phenols and phenolic compounds in thyme (Thymus vulgaris L.), sage (Salvia officinalis L.), and marjoram (Origanum majorana L.) extracts.</a> Ind. Crops Prod. 43, 827-831 (2013).</li>
<li>Gouveia, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/jfpp.13066/full">The Antimicrobial Effect of Essential Oils Against Listeria monocytogenes in Sous vide Cook-Chill Beef during Storage.</a> J. Food Process. Preserv. 41 (4), (2017).</li>
<li>Chen, C., Nace, G., Irwin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+6+x+6+drop+plate+method+for+simultaneous+colony+counting+and+MPN+enumeration+of+Campylobacter+jejuni%2C+Listeria+monocytogenes%2C+and+Escherichia+coli%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Microbiol.+Methods%22%5BJournal%5D)">A 6 x 6 drop plate method for simultaneous colony counting and MPN enumeration of Campylobacter jejuni, Listeria monocytogenes, and Escherichia coli.</a> J. Microbiol. Methods. 55 (2), 475-479 (2003).</li>
<li>Herigstad, B., Hamilton, M., Heersink, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+to+optimize+the+drop+plate+method+for+enumerating+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Microbiol.+Methods%22%5BJournal%5D)">How to optimize the drop plate method for enumerating bacteria.</a> J. Microbiol. Methods. 44 (2), 121-129 (2001).</li>
<li>Greenwood, M., Roberts, D. Practical food microbiology. , Blackwell Pub. Available from:
 <a target="_blank" href="https://drive.google.com/file/d/0BzyVOLllJ0B1YmlEemZ5M1RZekU/view?ts=590d8019">https://drive.google.com/file/d/0BzyVOLllJ0B1YmlEemZ5M1RZekU/view?ts=590d8019</a> (2003).</li>
<li>Vaughan, G. M., Corballis, M. C. Beyond tests of significance: Estimating strength of effects in selected ANOVA designs. Am. Psychol. Assoc. 72 (3), Available from:
 <a target="_blank" href="http://dx.doi.org/10.1037/h0027878">http://dx.doi.org/10.1037/h0027878</a> 204-213 (1969).</li>
<li>Smith-Palmer, A., Stewart, J., Fyfe, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+properties+of+plant+essential+oils+and+essences+against+five+important+food-borne+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Lett.+Appl.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial properties of plant essential oils and essences against five important food-borne pathogens.</a> Lett. Appl. Microbiol. 26 (2), 118-122 (1998).</li>
<li>Burt, S. a, Reinders, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antibacterial+activity+of+selected+plant+essential+oils+against+Escherichia+coli+O157%3AH7%5BTitle%5D)+AND+%22Lett.+Appl.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Antibacterial activity of selected plant essential oils against Escherichia coli O157:H7.</a> Lett. Appl. Microbiol. 36 (3), 162-167 (2003).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Önceki araştırmalar mikroorganizmaların gıda kaynaklı hastalıklar neden kurutma10hayatta göstermiştir. Bu nedenle gıda güvenliğini sağlamak üzere kurutma önce koruyucu uygulamak gereklidir. Bu çalışmada TEO kullanarak üzerinde odaklanın. Neden iki kat geçerli: ilk olarak, tüketicilerin gıda kalite16; geliştirmek için alternatif katkı doğal ürünler kullanmak için yüksek bir talep olduğunu İkinci olarak, bir önceki çalışma süreci22kurutma et sırasında ...

Gıdalar korumak için geleneksel bir yöntem olarak kurutma antik çağlardan beri kullanılmaktadır. Günümüzde, gıda koruma1,2,3için etkili bir yöntem olarak kurutma giderek artan bir ilgi vardır. Özel olarak işlenmiş etler çeşitli yapmak için kullanılır. Biri en iyi bilinen düzensiz olur.
Eti, et koruma, en eski yöntemlerden birini tedavi ve daha düşük su aktivitesi için kurutma üzerinde dayanır ve bu nedenle4raf ömrünü uzatmak için. Günümüzde, sarsıntılı korunmuş bir tedavi et hala çok popüler olduğu gibi nerede gıda güvenliği, tat ve doku gereklidir. Sarsıntılı hazırlık et, sığır eti, domuz eti, tavuk veya oyun5, dahil olmak üzere hemen hemen her tür için kullanılabilir ve eti yağsız şeritler doğrama ve kurutma gerektirir. Genellikle, bir kür çözüm ya da sigara içinde et marine kurutma ile birlikte sarsıntılı6onun karakteristik lezzet vermek için kullanılır.
Gerçekten gıda korumak için kurutma geniş ilgi rağmen kötü kurutulmuş et gıda kaynaklı salgınlar E. coli tarafından riskini ve kritik kontrol gerekmektedir. Gıda kaynaklı gastroenterit salgınlar ile işleme ev-kurutma sırasında yetersiz ısı atfedilen özellikle E. coli O157: H7, raporlama bazı çalışmalar vardır. Benzer durumlarda bile ticari olarak hazırlanan sarsıntılı7,8,9oluşmuş. Levine ve ark. 10 gıda kaynaklı mikroorganizmaların ticari sarsıntılı üreticileri tarafından kullanılan orta kurutma koşulları (yaklaşık 60 ° C) yaşayabilir evlenme teklif etti. E. coli O157: H7 1990'ların ortasında gıda kaynaklı hastalık salgınları zemin kurutulmuş et ürünleri6,11' e atfedilmiştir. İlginçtir, tüm önceki durumda da, ama culturable (VBNC) olarak tanınan bakteriyel patojenler başlıca risk nedeniyle oluşur. Sıcaklık değişiklikleri veya açlık gibi çeşitli gerilmeler altında E. coli hücreleri belirli bir devlet VBNC devlet12,13bilinen girebilirsiniz. VBNC hücreleri daha sonra geri culturable hücrelere uygun koşullarla maruz resüsite ve gıda kaynaklı kirlenme14,15nedeniyle insan sağlığı için bir tehdit mevcut. Bu ürün hemen kuruduktan sonra et tüketilen Eğer güvenli olduğu anlamına gelir. Ancak, artan nem gibi yetersiz depolama durumunda yoktur patojenler ve mikrobiyal büyüme reaktivasyonu riski yüksek.
Kurutma ve Marine yöntemlerinin yanı sıra, tüketicilerin gıda kalite16,17geliştirmeye katkı maddeleri alternatif olarak doğal ürünler kullanmak için yüksek bir talep vardır. Doğal Gıda katkı maddeleri, et yerine klasik Sentetik koruyucu18,19,20,21için uygulama özel bir ilgi oluştu. Orada olsa bile esansiyel yağların kullanımı yeterli deneysel kanıt eksikliği ne zaman et kurutma, bu alanda erken araştırma zaten olumlu sonuçlar22,23gösterir.
Orta çağlardan beri insanların kendi antimikrobiyal, böcek ve antiparaziter chracteristics24,25,26için esans bileşikler (EOCs) tanımış. Bugün, EOCs biyoaktif doğal bileşiklerin en önemli grup yer almaktadır. Arasında farklı EOCs, thymol en iyi bilinen biridir. TEO%2385'den fazla oluşur. Bu fenol gıda için eklendiğinde mikrobiyal ve kimyasal bozulma engeller. Ayrıca, antibakteriyel özellikleri diğer doğal koruyucu2,27,28,29,30ile birlikte geliştirilmiş. Günümüzde, kekik (Thymus vulgaris), bir lezzet ajan olarak hem de bir çok etkili et koruyucu31 Ballıbabagiller ailesine ait bir ot kabul. García Díez ve arktarafından yapılan bir çalışma. et ürünleri 30 TEO diğer uçucu yağlar için karşılaştırıldığında gıda kaynaklı patojenlere karşı daha geniş bir inhibisyon desen görüntülenen buldum. Bu nedenle, kurutulmuş et değerini artırmak ve kurutma işlemi sırasında temel yağlar uygulayarak gıda kaynaklı hastalıkların riskini azaltmak için bir fırsat vardır.
Bu iletişim kuralı, biz TEO et kurutma sırasında uygulama roman yöntemi mevcut, özellikle buharı formunda doğrudan kullanarak bir kurutma odası. Değerlendirme için tedavi örneklerinde ham olanlarla karşılaştırıldığında patojen bakteri yokluğu belirlemek için mikrofon kullanın. İlk sonuçları göster: Bu yöntem Sentetik koruyucu için son derece etkili bir alternatiftir ve kurutulmuş et mikrobiyal yükü önemli ölçüde azaltır.

<table><tbody><tr><td>Miami Gardens, FL, ABD'den</td> <td>et kesici</td><td>Kalorik</td><td>KP 3530</td></tr><tr><td>Laminer güvenlik kabini</td><td>İtalya'dan</td><td>Faster s.r.l</td><td></td></tr><tr><td>CZ'den</td><td>500 mL'lik şişeyi sıkın</td><td>Merci</td><td>632 524 325 025</td></tr><tr><td>Standart laboratuvar kurutucusu UFE 400</td><td>Memmert</td><td>DE</td><td>Almanya'dan 66812464 CZ'den</td></tr><tr><td>İnkübatör</td><td>BT 120</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Buzdolabı ve Dondurucu</td><td>Bosch</td><td>KGN34VW20G</td><td>DE</td></tr><tr><td>Densitometre</td><td>Biosan</td><td>220 000 050 122</td><td>Letonya; tedarikçi Merci, CZ</td></tr><tr><td>Escherichia coli CZ'den ATCC 25922</td><td>Oxoid</td><td>CL7050</td><td>CZ'den</td></tr><tr><td>Vortex</td><td>Chromservis</td><td>22008013</td><td>CZ'den</td></tr><tr><td>Sterilize plastik tüpler 15 mL</td><td>Gama</td><td>331 000 020 115</td><td>itibaren CZ, tedarikçi Merci</td></tr><tr><td>20 mL enjeksiyon şişesi</td><td>Çin'den</td><td>sağlıklı şişe</td><td>hvft169</td></tr><tr><td>CZ'den</td><td>20 mm steril bütil kauçuk tıpa</td><td>Merci</td><td>22008013</td></tr><tr><td>20 mm alüminyum kapak</td><td>Çin'den</td><td>sağlıklı şişe</td><td>N/A</td></tr><tr><td>Kekik esansiyel yağı</td><td>Sigma Aldrich</td><td>W306509</td><td>St Louis, MO, ABD'den</td></tr><tr><td>Mueller Hinton Et Suyu</td><td>Oksoit</td><td>CM0337</td><td>CZ'den</td></tr><tr><td>CZ'den NaCl</td><td>Penta</td><td>16610-31000</td>, <td>CZ'den</td></tr><tr><td>Pepton</td><td>Oxoid</td><td>LP0034</td><td></td></tr>, <tr><td>Fosfat tamponlu salin</td><td>Sigma Aldrich</td><td>, CZ'den</td><td>P4417</td></tr><tr>,<td>Polisorbat 80 (Tween 80),</td> DE'den <td>Roth</td><td>T 13502</td><td>, tedarikçi P-lab</td></tr><tr><td>Shaker SHO-1D</td><td>, Verkon</td><td>DH. WSR04020</td><td>CZ'den 10 - 300 rpm. 350 x 350 mm, şişeler için bir platform ile</td></tr><tr><td>Etanol CZ'den% 70</td> <td>Bioferm</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>MacConkey Agar</td><td>Oxoid CM007</td><td></td><td>CZ'den</td></tr><tr><td>Plaka Sayısı Agar</td><td>Oxoid</td><td>CM0325</td><td>CZ'den</td></tr><tr><td>Filtre kağıdı</td><td>Merci</td><td>480 622 080 040</td><td>CZ'den</td></tr><tr><td>Erlenmeyer şişeleri 250 mL</td><td>Simax</td><td>610 002 122 636</td><td>CZ'den; tedarikçi Merci CZ</td></tr><tr><td>İsviçre'den çok kanallı pipet</td><td>Socorex</td><td>S852820</td><td>; tedarikçi P laboratuvarı, CZ</td></tr><tr><td>Mikrotitre plakası</td><td>Gama</td><td>V400916</td><td>CZ</td></tr><tr><td>Mikrolitre pipet 100-1000 & mu; Almanya'dan L</td><td>Eppendorf</td><td>333 120 000 062</td><td>; tedarikçi Merci, CZ</td></tr></tbody></table>

kekik esans uygulama etkisi et kurutma sırasında mikrobiyal yükü

The Effect of the Application of Thyme Essential Oil on Microbial Load During Meat Drying

Et korunması ve güvenliği önemli nerede sarsıntılı, popüler gıda atıştırmak hazırlanmasında kullanılan bir yüksek protein yemek 's. Gıda güvenliğini sağlamak üzere ve et ve et ürünleri raf ömrünü uzatmak için sentetik veya doğal koruyucu kullanımını denetime uygulanan ve gıda kaynaklı bakterilerin ortadan kaldırmak. Doğal Gıda katkı maddeleri, et için uygulama büyüyen bir ilgi arttı. Mikroorganizmalar, Escherichia coligibi et ve et ürünleri, gıda kaynaklı hastalıklara neden kontamine. Bu nedenle, et koruma sürecini geliştirmek gereklidir. Ancak, ne zaman et kurutulmuş esansiyel yağların kullanımı derinden araştırılmamıştır. Bu bağlamda, kurutulmuş et değerini artırmak ve kurutma işlemi sırasında temel yağlar uygulayarak gıda kaynaklı hastalıkların riskini azaltmak için bir fırsat vardır. Bu protokol için et, özellikle de buharı formu doğrudan bir kurutma odası kurutma sırasında kekik esans (TEO) uygulama roman yöntemi mevcut. Değerlendirme için zararlı bakteri sayısı için ham örnekleri karşılaştırıldığında tedavi örneklerinde algılamak için minimum inhibitör konsantrasyonu (MIC) kullanır. İlk sonuçları göster: Bu yöntem bir kalıcı ve alternatif seçenek için Sentetik koruyucu ve kurutulmuş et mikrobiyal yükü önemli ölçüde azaltır.

Biz ilk daha önce bu yöntem gıda güvenliği artırmak ve kurutulmuş et değerini artırmak için kekik esans (OEO) kullanarak geliştirmişti. Genel olarak, önceki deneyler E. coli bir hayatta kalma stratejisi olarak kurutma sırasında VBNC durumuna geçer gösterdi. Bu kurutma22bitirdikten sonra culturable bakteri olduğu gerçeğini tarafından gösterilmiştir. Bu nedenle, 6 h ön zenginleştirme işlemi suşu sayma izin vermek gerekli. Daha kısa dönemlerde sayıları gidere...

Mikroorganizmaların Escherichia coli gibi et ürünleri kontamine gıda kaynaklı hastalıklara neden. Et kurutma işlemi esansiyel yağların kullanımı derinden araştırılmamıştır. Burada, kurutulmuş et mikrobiyal yükü azaltmak için kurutma sırasında et için kekik esans uygulama roman yöntemi mevcut.

Kekik esans uygulama etkisi et kurutma sırasında mikrobiyal yükü

Meat is a high protein meal that is used in the preparation of jerky, a popular food snack, where preservation and safety are important. To assure food ...

Bu deneyin genel amacı, buhar fazında uygulanan kekik esansiyel yağının et kurutma işlemi sırasında etkili bir koruyucu olarak hizmet edip edemeyeceğini değerlendirmektir. Bu yöntem, sentetik koruyucular yerine doğal koruyucuların nasıl etkili bir şekilde uygulanacağı gibi gıda işleme ve güvenliği alanındaki soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin en önemli avantajları, et kururken kekik esansiyel yağının hızlı ve eşit dağılımını sağlaması ve tüm buharın sıvı yağ uygulamasına göre daha düşük hacimlerde kullanılabilmesidir.Bu yöntemin kullanılması, kurutulmuş etin güvenliğinin ve kalitesinin iyileştirilmesi konusunda fikir verebilir ve ayrıca diğer gıda ürünlerinin diğer olumsuz mikroorganizmalara karşı tedavisi için de uygulanabilir. Genel olarak, bu yönteme yeni olan bireyler mücadele edecektir çünkü bakteri sayısını saymak için kullanılan damla plaka yöntemleri, uygun şekilde hazırlanmış plakalar ve pratik gerektirir. Yerel bir kasaptan kısa bir fileto sığır eti alın ve satın alma tarihinden itibaren 20 dakika içinde ortam sıcaklıklarında kapalı bir torba içinde laboratuvara aktarın.Laminer bir güvenlik kabininde, bir sıkma şişesinden püskürtülen 10 saniyelik %70

the-effect-application-thyme-essential-oil-on-microbial-load-during

Research

JoVE Journal

Environment

Çevre

Köpeklerde ağız kokusu teşhisi için basit bir yaklaşımın yanı sıra yönetimi için bir diyet yaklaşımı da açıklıyoruz. Bu protokol yakın gelecekte insanlarda ağız kokusu yönetimine genişletilebilir.

Köpeklerde Ağız kokusunun Yönetimi için Diyet Supplement Terapötik Etkinliği

Örnek Kurutma işlemleri esnasında alt-tabaka sıcaklığının ayarlanması sayesinde yöntemde MALDI kütle spektrometresi iyon sinyallerin uzaysal farklılıklarını azaltmak için bir kuralı gösterilmektedir.

Kantitatif Uygulamalar için Homojen MALDI Örneklerin Hazırlanması

Bu çalışma, bir hücre süspansiyon kültürü çay (Camellia sinensis L.) bu böcek ilaçları gibi tüm bitki tarafından alınabilir dış bileşiklerin metabolizmasını incelemek için kullanılabilir yaprakları türetilen kurulması için bir protokol sunuyor.

Çay (Camellia sinensis L.) türetilmiştir yeni kurulan hücre süspansiyon kültürü altı sistemik Böcek Ilacı metabolizması üzerinde çalışma Yaprak -ları

Balgamın ısı inaktivasyonundan sonra yapılan tüberküloz moleküler bakteriyel yük testini tanımladık. Isı inaktivasyonu balgam örneklerini enfeksiyöz olmayan hale getirir ve tüberküloz moleküler testleri için 3 laboratuvarları kapsama ihtiyacını ortadan kılmaktadır.

Tüberküloz Moleküler Bakteriyel Yük Analizi (TB-MBLA)

Yeni bir antibiyotik modu-of-action açıklaması ilaç bulma sürecinde zor bir görevdir. Burada açıklanan yöntemin amacı ilaç-mikrop etkileşimleri içine ek fikir sağlamak için antibakteriyel profilleme calScreener kullanarak isothermal mikrocalorimetri uygulamasıdır.

Isothermal Mikrocalorimetri Kullanarak Yeni Doğal Ürünlerin Bakterisidal veya Bakteriyostatik Etkilerini Belirlemek Için Metabolik Profilleme

Bitki türevi ürünlerin antifungal etkilerini ölçmek için tasarlanmış modifiye edilmiş bir agar bazlı yöntemi açıklıyoruz. Antifungal aktiviteye hem uçucu hem de uçucu olmayan katkılar bu protokol ile değerlendirilebilir. Ek olarak, mantarlara karşı etkinlik tek bir deneysel kurulumda önemli gelişim aşamalarında ölçülebilir.

Biyokontrol Ürünlerin Uçucu ve Uçucu Olmayan Antifungal Aktivitesinin Ölçülmesi

Antimikrobiyal laboratuvar önlükleri, patojen birikiminin çapraz kontaminasyonunu ve kazara biyo-dökülmelerini önler. Burada, laboratuvar önlüğünün tipik kullanımı için etkinliği ve uygunluğu tam olarak değerlendirmek için nano-bitkisel kapsülleme ve modifiye standart testler kullanarak cilt dostu bir antimikrobiyal kumaş geliştirme protokolünü açıklıyoruz.

Uçucu yağların nano-bitkisel kapsüllemesini kullanan bir antimikrobiyal kumaş

Bu protokol, spreyle kurutulmuş bir probiyotik ürünün üretimi ve fizikokimyasal karakterizasyonunda yer alan adımları detaylandırır.

Probiyotik bakterilerin sprey kurutulması için proses geliştirme ve ürün kalitesinin değerlendirilmesi

Mikroplaka dayalı işlemler hücre dışı enzim aktivitesi, kolorimetrik veya florometrik analizi için tarif edilmiştir. Bu işlemler yönetilebilir bir süre içinde çevre örneklerin çok sayıda bu tür aktivitenin hızlı analizi için izin verir.

Yüksek Verimli Mikroplate Tahliller kullanarak Waters, Topraklar ve tortulları Mikrobiyal Ekstrasellüler Enzim Aktivitesi Belirlenmesi

Endüstriyel atıklar, mikrobiyal büyümeyi analiz etmek için toplanabilir ve değiştirilebilir. Lignoselüloz ekstraksiyon teknikleri, spesifik biyolojik bozunma kabiliyetini analiz etmek için bileşenler sağlar. Gaz kromatografisi-kütle spektrometresi, hamur atıkları üzerinde yetiştirilen mikroorganizmaların fermantasyon ürünlerini tanımlar. Bu yöntemler, mikroorganizmaların hamur atıklarını parçalamak için metabolik kapasitesini belirler.

Selüloz Fabrikası Atık Akışlarında Mikrobiyal Büyümeyi Kolaylaştırma Yöntemleri ve Kültürlenmiş Mikropların Biyolojik Bozunma Potansiyelinin Karakterizasyonu

Keşfedin, et kurutma sırasında kekik esansiyel yağının buhar fazında uygulanmasıyla mikrobiyal yükü nasıl azaltabileceğinizi. Bu doğal koruyucu yöntem, gıda güvenliğini artırır ve sentetik koruyuculara alternatif sunar.

Kekik esans uygulama etkisi et kurutma sırasında mikrobiyal yükü

Daha fazla video keşfet