Name: Laboratuvar konut, turkuaz Killifish (Nothobranchius furzeri) için bir iletişim kuralı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-04-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 58 s
Description: Öğrenin yaşlanma ve yaşla ilişkili hastalıkları yüksek verimli şekilde çalışmak için Nothobranchius furzeri laboratuvar kolonisi yetiştirme yöntemini. Bu protokol genetik ve çevresel araştırmalar için standartlaştırılmış bir çerçeve sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Alessandro Cellerino, Tyrone Genade, Anne Brunet, Sabrina Sharp, Mickie Powell, Simone Keil, Yumi Kim, Patrick Smith, Kai Mathar ve Valenzano laboratuvar tüm üyeleri Max Planck Enstitüsü, biyoloji yaşlanma için farklı yönleri için katkıda bulunduğunuz için teşekkür ediyoruz Geçerli killifish yetiştiriciliği protokolü ile yıl içinde.

<ol><li>Valenzano, D. R., Aboobaker, A., Seluanov, A., Gorbunova, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-canonical+aging+model+systems+and+why+we+need+them%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">Non-canonical aging model systems and why we need them.</a> EMBO J. 36 (8), 959-963 (2017).</li>
<li>Harel, I., Brunet, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+African+Turquoise+Killifish%3A+A+Model+for+Exploring+Vertebrate+Aging+and+Diseases+in+the+Fast+Lane%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Symp+Quant+Biol%22%5BJournal%5D)">The African Turquoise Killifish: A Model for Exploring Vertebrate Aging and Diseases in the Fast Lane.</a> Cold Spring Harb Symp Quant Biol. 80, 275-279 (2015).</li>
<li>Smith, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+life+span+by+the+gut+microbiota+in+the+short-lived+African+turquoise+killifish%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Regulation of life span by the gut microbiota in the short-lived African turquoise killifish.</a> Elife. 6, (2017).</li>
<li>Cellerino, A., Valenzano, D. R., Reichard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+the+bush+to+the+bench%3A+the+annual+Nothobranchius+fishes+as+a+new+model+system+in+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Rev+Camb+Philos+Soc%22%5BJournal%5D)">From the bush to the bench: the annual Nothobranchius fishes as a new model system in biology.</a> Biol Rev Camb Philos Soc. 91 (2), 511-533 (2016).</li>
<li>Kim, Y., Nam, H. G., Valenzano, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+short-lived+African+turquoise+killifish%3A+an+emerging+experimental+model+for+ageing%5BTitle%5D)+AND+%22Dis+Model+Mech%22%5BJournal%5D)">The short-lived African turquoise killifish: an emerging experimental model for ageing.</a> Dis Model Mech. 9 (2), 115-129 (2016).</li>
<li>Blazek, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repeated+intraspecific+divergence+in+life+span+and+aging+of+African+annual+fishes+along+an+aridity+gradient%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">Repeated intraspecific divergence in life span and aging of African annual fishes along an aridity gradient.</a> Evolution. 71 (2), 386-402 (2017).</li>
<li>Terzibasi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large+differences+in+aging+phenotype+between+strains+of+the+short-lived+annual+fish+Nothobranchius+furzeri%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Large differences in aging phenotype between strains of the short-lived annual fish Nothobranchius furzeri.</a> PLoS One. 3 (12), e3866(2008).</li>
<li>Kirschner, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+of+quantitative+trait+loci+controlling+lifespan+in+the+short-lived+fish+Nothobranchius+furzeri--a+new+vertebrate+model+for+age+research%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Mapping of quantitative trait loci controlling lifespan in the short-lived fish Nothobranchius furzeri--a new vertebrate model for age research.</a> Aging Cell. 11 (2), 252-261 (2012).</li>
<li>Valenzano, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+loci+associated+with+tail+color+and+sex+determination+in+the+short-lived+fish+Nothobranchius+furzeri%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Mapping loci associated with tail color and sex determination in the short-lived fish Nothobranchius furzeri.</a> Genetics. 183 (4), 1385-1395 (2009).</li>
<li>Reichwald, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insights+into+Sex+Chromosome+Evolution+and+Aging+from+the+Genome+of+a+Short-Lived+Fish%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Insights into Sex Chromosome Evolution and Aging from the Genome of a Short-Lived Fish.</a> Cell. 163 (6), 1527-1538 (2015).</li>
<li>Valenzano, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+African+Turquoise+Killifish+Genome+Provides+Insights+into+Evolution+and+Genetic+Architecture+of+Lifespan%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The African Turquoise Killifish Genome Provides Insights into Evolution and Genetic Architecture of Lifespan.</a> Cell. 163 (6), 1539-1554 (2015).</li>
<li>Harel, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+platform+for+rapid+exploration+of+aging+and+diseases+in+a+naturally+short-lived+vertebrate%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A platform for rapid exploration of aging and diseases in a naturally short-lived vertebrate.</a> Cell. 160 (5), 1013-1026 (2015).</li>
<li>Valenzano, D. R., Sharp, S., Brunet, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transposon-Mediated+Transgenesis+in+the+Short-Lived+African+Killifish+Nothobranchius+furzeri%2C+a+Vertebrate+Model+for+Aging%5BTitle%5D)+AND+%22G3%22%5BJournal%5D)">Transposon-Mediated Transgenesis in the Short-Lived African Killifish Nothobranchius furzeri, a Vertebrate Model for Aging.</a> G3. 1 (7), Bethesda. 531-538 (2011).</li>
<li>Harel, I., Valenzano, D. R., Brunet, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+genome+engineering+approaches+for+the+short-lived+African+turquoise+killifish%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Efficient genome engineering approaches for the short-lived African turquoise killifish.</a> Nat Protoc. 11 (10), 2010-2028 (2016).</li>
<li>Polacik, M., Blazek, R., Reichard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+breeding+of+the+short-lived+annual+killifish+Nothobranchius+furzeri%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Laboratory breeding of the short-lived annual killifish Nothobranchius furzeri.</a> Nat Protoc. 11 (8), 1396-1413 (2016).</li>
<li>Avdesh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regular+care+and+maintenance+of+a+zebrafish+%28Danio+rerio%29+laboratory%3A+an+introduction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: an introduction.</a> J Vis Exp. (69), e4196(2012).</li>
</ol>

Tüm yazarlar hiçbir rakip mali ve mali olmayan ilgi bildirin.

Biz laboratuvar embriyo koleksiyonu, kuluçka gibi yetişkin balık konut, dahil olmak üzere turkuaz killifish kültür için bir protokol tarif doğurmak ve besleme. Bizim iletişim kuralı özellikle yetişkin balık, özellikle deneysel araştırmalar yaşlanma ve yaşam süresi üzerinde duruldu araştırma laboratuvarları hedeflenmektedir. Turkuaz killifish bir çift Zebra balığı tesisi yükseltilebilir; Ancak, standart Zebra balığı bakımı16' dan killifish yetiştiriciliği önemli yönleri farklı. Bu ayarlamalar erken bir tuzlu su-karides sadece diyet bir diyet protein açısından zengin kan solucan gibi kuru ve sıvı kuluçka aşaması oluşan embriyo kuluçka belirli adımları ile takıma geçiş içerir.
İletişim kuralına kritik adımlar 8-30 ° C sıcaklık aralığında sevkiyat embriyo içerir. Yetiştirme durumunda, sıklık ve gıda kalitesi besleme verimlilik bağlıdır; Bu nedenle, embriyo verim (bakınız Bölüm 5.6) artırmak için tank doğurmak başına günde en az iki besleme önerilir. Embriyo beyazlatma sırasında embriyo kuluçka beyazlatma çözüm genişletmeniz değil. Bu yumurta koryon ve artan embriyo ölümleri hasara neden olabilir. Metilen mavisi ile embriyo kuluçka zaman kuluçka hazır kapak embriyo canlılığı önemli ölçüde azaltılmış olacak gibi 2 hafta daha uzun süre uzatmak değil. Turkuaz killifish kuluçkalık için Hümik asit solüsyonu düşük sıcaklık tarama artırır ve embriyoların çözüm Komple daldırma eşitlenmiş tarama sağlar. Fry gaz mesane doldurmak mümkün değil yüksek oranda kuluçka sonuçlarında sırasında yetersiz havalandırma ("göbek-kaymak" fenotip, bkz: Notlar bölümünde 5.1).
Sınırlama-in doğurmak için protokol hangi pozlar sorunlar için filtrasyon sistemleri Merkezi ve alternatif yöntemlerle gelecekte değiştirilmesi gerektiğini kum substrate kullanımını içerir. Olası alternatifler tankları damızlık Zebra balığı kullanımı olabilir. Embriyo ağartma büyük fiziksel-kimyasal değişiklikler değiştirilmiş koryon fizyolojisi ve başarı kuluçkalık neden olabilir yumurta koryon neden olabilir. Embriyo sürekli maruz kalma Metilen mavisi yetişkin balık fizyolojisi uzun vadeli değişiklikler neden olabilir. Hayatta kalma kohort çalışmaları için bireysel tankları yetişkin balık yetiştirme balık davranış ve sağlık olumsuz yönde etkileyebilir. Ancak, grup konut hayatta kalma kohort çalışmaları için sıkı sosyal hiyerarşileri için önde gelen sosyal hakimiyet ve erkek bölgede kurulması nedeniyle önemli karıştırıcı faktörlerin ekler. Bu nedenle, yalıtım sağkalım Etütleri erkek balık makul bir uzlaşma olduğuna karar. Beslenme laboratuvar killifish kolonileri un kontrollü kaynaklardan gelen canlı gıda ile dış contaminations için bir risk parazitler ve potansiyel patojenik mikrobiyal topluluklar ekleyin. Gelecekte, bir geçici steril balık besleme geliştirilmelidir.
Bu iletişim kuralı için gelecekteki iyileştirmeler hala 3-4 hafta içinde cinsel olgunlaşma tamamlamak için yol bir kontrollü, Sigara-live diyet ele alınacak. Özet olarak, bizim iletişim kuralı turkuaz killifish laboratuvar için geniş bilimsel bir topluluk kültür erişilebilirlik sunmaktadır.

Hızlı yaşam döngüsü ve kısa yaşam süresi göz önüne alındığında, turkuaz killifish Biyoloji1,2,3' te bir umut verici yeni model organizma olarak hızla büyüyor. Bu tür benzersiz bir yaşam döngüsü embriyonik diapause, hızlı cinsel olgunlaşma ve bir genişletilmiş post-reproductive hayat sahne4,5oluşan bir teleost için karakterizedir. Son iş bu tür Biyoloji hem tutsak hem de vahşi6,7elucidating için katkıda bulunmuştur. Turkuaz killifish live mevsimlik taze su organları oluşturan Zimbabve ve Mozambik Afrika savana yağışlı sezon sırasında. Kuru sezonunda embriyo su diapause denilen bir stres dayanıklı hayat sahne sayesinde yokluğunda kuru çamur içinde hayatta kalmak.
Genetik haritalar bu tür için oluşturulan8,9edilmiş ve son zamanlarda onların genom sıralı ve monte10,11oldu. Birkaç doğuştan laboratuvar balık suşları geliştirdik ve transgenesis ve CRISPR/Cas9 yolu ile düzenleme genom elde edilebilir içinde bu tür, turkuaz killifish rekabetçi laboratuvar omurgalı model organizma teşvik fiili haline gelmiştir 12,13,14.
Her ne kadar bu tür15için yayımlanmış bir laboratuvar protokol, mevcut protokolünde biz özellikle yaşlanma ve hayatta kalma araştırmak Etüdleri amaçlayan deneysel laboratuvar kuralları kapsamlı bir listesi geliştirmek. Mevcut Protokolü araştırmacılar Zebra balığı ve medaka yetiştiriciliği ile zaten tanıdık turkuaz killifish çiftçiliği anahtar ayarlamalar en az sayıda benimseyerek usta olmak için sağlar. Aynı zamanda, araştırmacılar balık yetiştiriciliği gerekli araçları ile deneyiminiz olmadan gelişen bir turkuaz killifish koloni yükseltmek için bu iletişim kuralı sağlar.

<table><tbody><tr><td>Prob kalibrasyon tampon çözeltisi pH=7.0</td><td>Roth</td><td>A518.1</td><td>1L tampon çözeltisi pH=7.0 su sistemini kalibre etmek için pH-elektrot</td></tr><tr><td>Prob kalibrasyon tampon çözeltisi pH=4.0</td><td>Roth</td><td>P712.1</td><td>1L tampon çözeltisi pH=4.0 su sistemini kalibre etmek için pH-elektrot</td></tr><tr><td>İletkenlik standardı</td><td>VWR</td><td>83607.260</td><td>500 mL İletkenlik standardı 1,413 uS/cm su sistemini kalibre etmek için iletkenlik elektrodu</td></tr><tr><td>Kolay Şeritler Testi 6'sı 1</td><td>arada JBL</td><td>2533900</td><td>Sistem suyunun klor değerlerinin belirlenmesi için test şeritleri</td></tr><tr><td>Amonyak Testi</td><td>JBL</td><td>2536500</td><td>Sistem suyunun amonyak içeriğini belirlemek için test</td></tr><tr><td>Kızıldeniz Tuzu</td><td>Kızıldeniz</td><td></td><td>22 kg kova</td></tr><tr><td>Sodyum hidrojen karbonat</td><td>VWR</td><td>27780.360</td><td></td></tr><tr><td>Hümik asit</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>53680-50G</td><td></td></tr><tr><td>Yeni HUFA Artemia zenginleştirme</td><td>ZM Sistemleri İngiltere</td><td></td><td>75g şişe</td></tr><tr><td>Metilen mavisi</td><td>Roth</td><td>AE64.1</td><td></td></tr><tr><td>Hidrojen peroksit çözeltisi</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>31642-1L</td><td>%30 (a/a)</td></tr><tr><td>Hindistan cevizi lifi</td><td>Dragon</td><td>ZCS010</td><td></td></tr><tr><td>Whatman kağıdı</td><td>GE sağlık</td><td>3030-690</td><td></td></tr><tr><td>Etanol saf</td><td>VWR</td><td>20821.467</td><td>%100</td></tr> <tr><td>Silis kumu</td><td>yerel evcil hayvan dükkanı</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Artemia Eggs Premium Grade</td><td>Sanders</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bloodworm</td><td>yerel distribütörü</td><td></td><td>Poseidon Aquakultur Almanya</td></tr><tr><td>dNTP'lerin çözelti karışımı</td><td>Biolabs</td><td>N04472</td><td>10mM</td></tr><tr><td>Taq DNA polimeraz</td><td>Invitrogen</td><td>18038-042</td><td>5U/uL</td></tr><tr><td>PCR 10x Tampon</td><td>İnvitrogen</td><td>18038-042</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2</td><td>Invitrogen</td><td>18038-042</td><td>50mM</td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>S8045-500g</td><td>50mM</td></tr><tr><td>Tris-HCl, pH = 8.0 çözelti</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>T2694-1L</td><td>1M</td></tr><tr><td>HCl 37%</td> <td>Sigma- Aldrich</td><td>H1758-500mL</td><td></td></tr><tr><td>Balık tankları</td><td>Aquaneering</td><td></td><td>hacmi: 0.8L, 2.8L, 9.5L; bölmeler, kızartma ağları ve kapaklarla donatılmış</td></tr><tr><td>Orbital çalkalayıcı</td><td>VWR</td><td>89032-100</td><td>model 5000</td></tr><tr><td>Mikrobiyolojik inkübatör</td><td>Thermo Scientific, Heratherm</td><td>50125882</td><td>model IMC18; sıvı fazdaki depolama embriyoları için, t = 27-28 & derece olarak ayarlayın; C</td></tr><tr><td>Soğutma İnkübatörü</td><td>Bağlayıcı</td><td>9020-0209</td><td>model KT115; katı fazdaki embriyoların depolanması için, t = 27-28 & derece olarak ayarlayın; C</td></tr><tr><td>Kuluçka kuluçka makinesi</td><td>Thermo Scientific, Heratherm</td><td>51028114</td><td>model OGS180; kuluçkalık embriyolar için, t = 27-28 & derece olarak ayarlayın; C</td></tr><tr><td>Stereomikroskop</td><td>Leica</td><td></td><td>model M80</td></tr><tr><td>Üreme kumu/kuluçka kutuları</td><td>Roth</td><td>1598.1</td><td>1000mL</td></tr><tr><td>Petri kabı</td><td>Sarstedt</td><td>82.1473</td><td>92x16mm</td></tr><tr><td>50 mL Konik tüp</td><td>Sarstedt</td><td>62.547.254</td><td></td></tr><tr><td>15 mL Konik tüp</td><td>Sarstedt</td><td>62.554.002</td><td></td></tr><tr><td>Tek Kullanımlık Plastik Pasteur pipeti</td><td>Roth</td><td>EA71.1</td><td>2 mL; Kan kurtları ile beslenen balıklar veya embriyo seçimi için 3-4mm çapında açmak için ucunu kesin</td></tr><tr><td>Serolojik pipet</td><td>Sarstedt</td><td>86.1689.001</td><td>50mL</td></tr><tr><td>Şırınga</td><td>Henke Sass Wolf</td><td>4100-000V0</td><td>10mL</td></tr><tr><td>Metal süzgeç</td><td></td><td></td><td>inceliği < 1 mm; embriyo toplama için</td></tr><tr><td>Cımbız</td><td>Dumont</td><td>0508-5/45-PO</td><td>tip5/45; embriyo transferi için</td></tr><tr><td>25 L Salamura karides kuluçka makinesi</td><td>Aquaneering</td><td>ZHBS25</td><td>ana kuluçka makinesi</td></tr><tr><td>500 mL Salamura karides kuluçka makinesi</td><td>JBL</td><td>6106100</td><td>model Artemio 1; yedek kuluçka</td></tr><tr><td>Dar gözenekli balık ağları</td><td>JBL</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kum kabı</td><td>VWR</td><td>BURK7102-5000</td><td>5000mL</td></tr><tr><td>Salamura karides ayırma kabı</td><td>VWR</td><td>BURK7102-2000</td><td>2000mL</td></tr><tr><td>Plastik fermuarlı çanta</td><td>Roth</td><td>P279.2</td><td>ölü balık saklama için</td></tr><tr><td>Pipetboy</td><td>Integra</td><td>155000</td><td>model Pipetboy acu2</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>P-Lab</td><td>P701605</td> Hava tüpü www.zajac.de <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>AQ380</td><td>4-6 mm çap</td></tr><tr><td>1 L Cam şişe</td><td>VWR</td><td>215-1595</td><td></td></tr><tr><td>2 L Cam şişe</td><td>VWR</td><td>215-1596</td><td></td></tr><tr><td>500 mL Salamura</td><td></td> karides 120-&#956 <td>ile balık beslemek için</td>sıkma şişesi Roth <td>K665.1</td></tr><tr><td>; m salamura karides süzgeci</td><td>Florida Aqua Farms</td><td>BB-PC2</td><td>salamura karides/kan kurdu toplama için</td></tr><tr><td>Finish filtre çorapları</td><td>Aquaneering</td><td>MFVB025C</td><td>25-&#956; m</td></tr><tr><td>Merkezi filtrasyon balık barınma sistemi</td><td></td><td></td><td>Aquaneering, Techniplast, Aquatic Habitats, Aqua Schwarz</td></tr></tbody></table>

laboratuvar konut, turkuaz killifish (nothobranchius furzeri) için bir iletişim kuralı

A Protocol for Laboratory Housing of Turquoise Killifish (Nothobranchius furzeri)

Deneysel amaçlar için kullanılan modeli laboratuvar balık yetiştiriciliği uygulamaları geliştirme modeli sistemleri, Zebra balığı ve medaka gibi başvuru balık kurulması büyük ölçüde yararlanmıştır. Son yıllarda ortaya çıkan bir balık-turkuaz killifish (Nothobranchius furzeri) – alanları araştırma grupları Biyoloji yaşlanma ve ekoloji, giderek artan sayıda tarafından kabul edilmiştir. Esir bir yaşam süresi 4-8 ay ile bu tür shortest-lived omurgalılar esaret kaldırdı ve yaşlanma oranı ve yaşam beklentisi değişikliklere yol açabilir testinde – kısa bir süre – deneysel müdahaleler bilimsel topluluk sağlar. Embriyonik diapause tarafından karakterize bu tür benzersiz Biyoloji verilen patlayıcı cinsel olgunlaşma, işaretlenmiş morfolojik ve davranış cinsel dimorfizm - ve onların nispeten kısa yetişkin yaşam süresi - özel yetiştirme uygulamaları içinde acil vardır isteğe bağlı. Bu iletişim kuralı en iyi turkuaz killifish laboratuvar Bakımı, etkinleştirme bu tür güçlü laboratuvar hayvan modeli olarak benimsemeye bilimsel topluluk izin anahtar yetiştirme önlemleri kümesini raporlar.

Medyan sağkalım GRZ zorlanma (örneğin şekil 4A) haftada 12-18 arasında değişen turkuaz killifish uygun hayvancılık sonuç. Medyan sağkalım varyasyonları frekans beslenme ve sıcaklık koşullarında konut rejime bağlıdır. Zavallı yetiştiriciliği hayatta kalma eğriler sunmak sonuçlarında erken mortalite ve birkaç dönüm noktaları (şekil 4B) tarafından karakterize yaşam boyunca zaman, tekrarlayan, ani damla arttı.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57073/57073fig1.jpg"> Şekil 1: temsilcisi embriyonik gelişim dönemleri ile ilgili kuluçka substrat. (A) taze embriyolar, metilen mavisi çözüm kuluçka 28 ° C'de inkübe toplanan (B) embriyo katı ortamına aktarılması hazır ya kağıt veya Hindistan cevizi lif filtre. (C) embriyo yumurtadan için tipik altın süsen görüntüleme hazır. Ölçek çubuğu 1 mm. için eşit olan <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57073/57073fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57073/57073fig2.jpg"> Şekil 2: turkuaz killifish sonrası gelişim çıkım dönemlerinde. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57073/57073fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57073/57073fig3.jpg"> Şekil 3: temsilcisi balık ID etiket 3üncü itibaren balık için. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57073/57073fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57073/57073fig4.jpg"> Şekil 4: 70 erkek turkuaz killifish için temsilcisi sağkalım eğrisi. (A) turkuaz killifish laboratuvar kaldırdı için tipik bir hayatta kalma eğrisi. Hayatta kalma eğrileri karşılaştırılması (B) elde edilen balık en uygun yetiştirme koşullarında (siyah) kaldırdı ve zavallı yetiştiriciliği (kırmızı ve mavi). Kesikli kırmızı yatay çizgi % 50 hayatta kalma, ortalama yaşam süresi (x ekseni üzerinde belirtilir), kesişen yaşam eğrisi gösterir. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/57073/57073fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>KİMLİĞİ</td>
			<td colspan="2">İleri astar</td>
			<td colspan="2">Ters astar</td>
			<td>Boyut aralığı (bp)</td>
		</tr>
<tr>
<td>* NfuSU0007</td>
			<td colspan="2">GGCTAAGCCTTGCTGACAGA</td>
			<td colspan="2">CAGGGAGCTGAAAACCTCAG</td>
			<td>166 - 214</td>
		</tr>
<tr>
<td>* NfuSU0010</td>
			<td colspan="2">CGCAGTCTGATCAAATCGTGT</td>
			<td colspan="2">TGTTTGAAGGTTCACATTCATTATC</td>
			<td>220 - 272</td>
		</tr>
<tr>
<td>NfuSU0016</td>
			<td colspan="2">CATGGCTAAACCGTGATGAA</td>
			<td colspan="2">GAAGGACGCCAGCTATGAAG</td>
			<td>209 - 240</td>
		</tr>
<tr>
<td>NfuSU0022</td>
			<td colspan="2">AACACAGCTCTCGTAAGGAGGTA</td>
			<td colspan="2">TTCAGACTTGTCTTACTACCATGTTT</td>
			<td>198 - 238</td>
		</tr>
<tr>
<td>NfuSU0027</td>
			<td colspan="2">TCCAGCTGAATCGGTAATGA</td>
			<td colspan="2">AAACTCGAGGGTGCAATCTG</td>
			<td>164 - 226</td>
		</tr>
<tr>
<td>NfuSU0049</td>
			<td colspan="2">CTGGACAAAGTGCCAATCAC</td>
			<td colspan="2">CTCCCACAGTCCCAAAACAT</td>
			<td>196 - 197</td>
		</tr>
<tr>
<td>NfuSU0050</td>
			<td colspan="2">CCAGAATGAACAATACTCAGATCAA</td>
			<td colspan="2">GCAGCTTAGTTTAATGATATCACAATG</td>
			<td>252 - 295</td>
		</tr>
<tr>
<td>NfuSU0060</td>
			<td colspan="2">CTAGCCACTCCCCTGGTTTA</td>
			<td colspan="2">CCGTCACGATGTGCTGATAC</td>
			<td>216 - 248</td>
		</tr>
<tr>
<td>NfuFLI0030</td>
			<td colspan="2">CAGAAGCTAAAGGCCAGACG</td>
			<td colspan="2">GGGAAACAATAGGGAACCAC</td>
			<td>174 - 205</td>
		</tr>
<tr>
<td>* NfuFLI0091</td>
			<td colspan="2">ACGCTGACTCTACCCAGTC</td>
			<td colspan="2">CTGCCTGCTACTGACAATG</td>
			<td>355 - 373</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="6">* - belirlenmesi işaretleri seks</td>
		</tr>
</tbody></table>Tablo 1: Genotipleme astar zorlanma tanımlama için.

Laboratuvar muhafazasını turkuaz ev ve verimli bir şekilde standart Zebra balığı özellikleri için kullanılan aynı altyapı istihdam Merkezi su filtrasyon sistemi, bireysel balık binlerce yükseltmek killifish ölçeklendirilecektir. Burada verimli killifish bakım izin standart yordamların listesini ayrıntılı.

Laboratuvar konut, turkuaz Killifish (Nothobranchius furzeri) için bir iletişim kuralı

The development of husbandry practices in non-model laboratory fish used for experimental purposes has greatly benefited from the establishment of ...

Bu protokolün genel amacı, yaşlanma ve yaşa bağlı hastalıkları hızlı ve yüksek verimli bir şekilde incelemek için turkuaz killifish'ten oluşan bir laboratuvar kolonisini başarılı bir şekilde yetiştirmektir. Bu yöntem, tek gen mutasyonlarının veya çevresel müdahalelerin omurgalı türlerinde yaşlanma sürecini modüle edip edemeyeceği gibi yaşlanma alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, temel protokollerimizi takip ederek, birkaç laboratuvarın artık turkuaz killifish kullanarak deneyler yapabilmesidir.Genel olarak, bu yönteme yeni olan bireyler, killifish yetiştiriciliğinin bazı benzersiz özelliklere sahip olması nedeniyle mücadele edeceklerdir. Örneğin, embriyolar, zebra balığı gibi kanonik balık modellerinden çok farklı olan yumurtadan çıkmadan önce kuru bir alt tabaka üzerinde büyütülür. Başlamak için, her biri beş haftalık bir erkek ve iki altı ila yedi haftalık dişi ile 9,5 litrelik üreme tankları kurun.Daha sonra plastik bir kabı yaklaşık iki ila üç santimetre derinliğinde otoklavlanmış kumla doldurun ve kum havuzunu üreme tankının ortasına yerleştirin. Turkuaz killifish'in sürekli üremesine izin verin ve embriyo kuluçkalığı için haftada bir kez embriyoları toplayın. Transgenik hatların enjeksiyonu ve üretilmesi için kullanılacak bir hücre aşaması embriyolarını hasat etmek için, az önce gösterildiği gibi bir erkek ve iki dişi balıkla bir üreme tankı kurun.Embriyo toplamadan iki gün önce, erkeği ayrı bir tanka aktarın ve yetişkin dişilerle görsel temas halinde tutun. Toplama gününde, erkeği ve bir kum havuzunu üreme tankına ekleyin ve balığın iki saat boyunca yumurtlamasına izin verin. Yumurtladıktan ve kum havuzunu tanktan çıkardıktan sonra, kum havuzunu bir süzgecin içine boşaltın ve durulamak için sistem suyunu kullanın.Daha sonra süzgeci kısmen sistem suyuna batırın ve embriyoların merkezde bir araya gelmesi için hafifçe döndürün. İki mililitrelik bir Pasteur pipeti kullanarak embriyoları toplayın ve yaklaşık 40 mililitre sistem suyu ile 90 milimetrelik bir Petri kabına aktarın. Işık mikroskobu altında, Petri kabındaki embriyoları inceleyin ve yırtılmış bir koryon ve hasar belirtileri gösterenleri çıkarın.Embriyoları metin protokolüne göre ağarttıktan sonra, maviye boyanacak ölü embriyoları inceleyin ve çıkarın. Embriyoların taze metilen mavisi solüsyonunda inkübe edilmesine izin verildikten sonra, geliştirilen embriyoların görünür siyah gözlere sahip olup olmadığını kontrol edin. Daha sonra tek kullanımlık bir Pasteur pipeti veya ince kavisli cımbız kullanarak embriyoları bir filtre kağıdı plakasına aktarın.Gelişmemiş embriyoları metilen mavisinde tutun ve günlük olarak izleyin. Siyah gözler geliştikten sonra, onları katı substrat ortamına aktarın. Forseps ile embriyoları yaklaşık beş milimetre aralıklarla 90 milimetrelik plaka başına 100 embriyoya kadar yayın.Daha sonra çanağı kapatmak için parafin kullanın ve embriyoları tamamen altın süsen geliştirene ve yumurtadan çıkmaya hazır olana kadar iki ila üç hafta boyunca 28 santigrat derecede inkübe edin. Bir yıla kadar uzun süreli depolama için, metilen mavisi çözeltisinde üç gün boyunca inkübasyonun ardından, embriyoları az önce gösterildiği gibi katı substrat orta plakalarına aktarın ve 17 santigrat derecede inkübe edin. Balıkları yumurtadan çıkarmak için, 50 ila 100 gelişmiş embriyoyu kuluçka kutusuna dikkatlice aktarmak için ince kavisli cımbız kullanın ve bunları dört santigrat derecede iki santimetreden daha derin olmayan hümik asit çözeltisine tamamen daldırın.Bu protokoldeki kritik bir adım, kuru bir substrat üzerinde inkübe edilen embriyoların yeterli havalandırma ile sağlanan hümik asit içeren bir kuluçka çözeltisine aktarılmasıyla elde edilen killifish embriyolarının kuluçkalanmasıdır. Kuluçka kutusunu bir kapakla örtün ve bir kuluçka makinesinde 28 santigrat derecede inkübe edin. Yeterli havalandırma sağlamak için kutuyu borulu bir hava kaynağına bağlayın.Kuluçka kutusunda yeterli su kalitesini korumak için, yumurtadan çıktıktan sonraki günden itibaren günde bir kez, kutuyu iki santimetrelik bir nihai derinliği koruyarak bire bir oranında otoklavlanmış sistem suyu ile doldurun. Yumurtadan çıkmamış embriyoları katı alt tabakaya geri aktarın ve bir hafta sonra yumurtadan çıkmayı deneyin. Yavru ve yetişkin balıkları yumurtadan çıktıktan beş gün sonra yetiştirmek için, 400 mikrometre yavru süzgeci ile donatılmış 0,8 litrelik tank başına beş yavruyu dikkatlice aktarmak için tek kullanımlık plastik pipetler veya plastik bir kaşık kullanarak yavruları su devridaim sistemine taşıyın.14 günlükken, yavru balıkları 850 mikrometre yavru süzgeci ile donatılmış 2,8 litrelik bir tanka aktarın. Bu noktadan itibaren, her tankı bir balık kimliği ile etiketleyin.Hayatta kalma tahlilleri için, her balığı ayrı ayrı tek bir tankta barındırın. Hayatta kalma testleri için yetiştirilen balıklar da ayrı ayrı 2,8 litrelik bir tankta barındırılır.Takip eden yedi gün boyunca, yavruları günde iki kez, bir ila üç canlı kan kurdu ile desteklenmiş beş mililitre salamura karides ile besleyin. Dört haftalıkken, her balığı günde iki kez salamura karides ve bir mililitre kan kurdu ile besleyin. Bu aşamada, erkeklerde renklenme belirtileri olan büyük sırt, anal ve kuyruk yüzgeçlerinin ve dişilerde yumurta dolu yuvarlak karınların varlığını kontrol ederek balığın tam cinsel olgunlaşmaya ulaştığından emin olun.Burada gösterilen, 70 erkek turkuaz killifish için temsili bir hayatta kalma eğrisidir. Uygun hayvancılık, GRZ suşunda 12 ila 28 hafta arasında değişen medyan sağkalım ile sonuçlanır. Ortalama sağkalımdaki değişiklikler diyete, beslenme sıklığına ve konut sıcaklığı koşullarına bağlıdır.Yetersiz hayvancılık altında yetiştirilen balıklar için hayatta kalma eğrisi, optimal hayvancılık koşulları altında yetiştirilen balıklarla karşılaştırıldığında, erken ölüm oranlarında bir artış ve zaman içinde hayatta kalmada tekrarlayan ani düşüşler ortaya koymaktadır. Bu protokolü takip ederken, yumurtadan yeni çıkmış yavruların su durumunu ve fazla yiyeceği yakından izlemek önemlidir, çünkü bunların temiz bir ortamda muhafaza edilmesi çok önemlidir. Geliştirilmesinden sonra, bu teknik, araştırmacıların turkuaz killifish'te transgenez, genom düzenleme ve diyet manipülasyonları dahil olmak üzere deneysel manipülasyonları keşfetmelerinin yolunu açtı.Bu videoyu izledikten sonra, turkuaz killifish'in laboratuvarda nasıl başarılı bir şekilde yetiştirileceğini iyi anlamalı ve bu modeli, esaret altında yetiştirilebilecek en kısa ömürlü omurgalılarda yaşlanma biyolojisini keşfetmek için kullanmalısınız.

a-protocol-for-laboratory-housing-turquoise-killifish-nothobranchius

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu protokol zebrafish yetiştiriciliği için en uygun koşulları sağlamak için düzenli bakım ve bakım özetliyor. Video sistemi bakımı, düzenli barınma, beslenme, üreme ve zebrafish larvaların yetiştirme için protokol göstermektedir.

Bir Zebra balığı Düzenli Bakım ve Onarım (<em&gt; Br.rerio</em&gt;) Laboratuvar: An Introduction

Üreme ve in vivo araştırmalara uygun bir Zebra balığı tesisi kolay ve ekonomik bir şekilde inşa edilmiştir. Bakım minimumdur. Bu tesis, öğrenci katılımı ve bağımsız araştırma için idealdir.

Bir Ekonomik ve Kolay oluşturun Zebra balığı Tesisi İnşaatı

Bu çalışma, bir antibiyotik ile cilt ve bağırsak mikrobiyomları toplulukları kompozisyon değiştirilmesinden model balık konak üzerindeki etkilerini ortaya çıkarmak için yöntemler içerir.

Ana fenotipleri incelenmesi halinde<em&gt; Gambusia affinis</em&gt; Takiben Antibiyotik Tedavisi

Bu iletişim kuralı karter temizleme bezi kullanımı ve Zebra balığı sistemleri, hangi nöbetçiler tek kullanım göre artan algılama patojen Aeromonas hydrophila, Mycobacterium spp. ve gibi algılamaya yol çamur analizini açıklar Pseudocapillaria tomentosa. P. tomentosa yumurta karantinada izlemek için bir sistem de önerilmiştir.

Aeromonas hydrophila, Mycobacterium spp. ve Pseudocapillaria tomentosa Zebra balığı sistemlerinde çevre tarama

Bu iletişim kuralı, fluorescently etiketli T. cruzi şeffaf Zebra balığı larva enjekte ve parazit hareketliliği hafif levha Floresans mikroskobu kullanılarak vivo gözlendi.

Kuruluş, larva Zebra balığı bir hayvan modeli araştırmak Trypanosoma cruzi hareketliliği In Vivo olarak

Bu çalışmada, akut, kronik ve multigenerational bir bioassay turkuaz killifish Nothobranchius furzeritek ve kombine stresler etkilerini çalışmaya açıklar. Bu iletişim kuralı hayat-Tarih özellikleri (ölüm, büyüme, verimlilik, ağırlık) ve kritik termal maksimum çalışma için tasarlanmıştır.

Akut ve kronik Ecotoxicity test turkuaz Killifish Nothobranchius furzeri için iletişim kuralı

Bu iletişim kuralı, biz Astyanax mexicanus yetişkin doğurmak, larvalar yükseltmek nasıl gösterir ve bütün Dağı immünhistokimya yüzey fenotipleri karşılaştırmak ve morphotypes mağara sonrası larva balık gerçekleştirin.

Meksika Tetra Astyanax mexicanus analiz Post-larval fenotipleri ve bütün Dağı immünhistokimya için yetiştirme

Esaret altındaki hayvanların refahını değerlendirmenin temel bir yönü, hayvanların istediklerini alıp almadıklarını sormaktır. Burada, zebra balığında(Danio rerio)çevresel zenginleşmenin varlığı/yokluğu ve akan suya erişim açısından konut tercihini belirlemek için bir protokol sıyoruz.

Balık Refahını Değerlendirmek Için Tercih Testi için StandartLaştırılmış Protokol

Burada, kısa ömürlü omurgalı model Nothobranchius furzeri'nin beyinlerinden çekirdekleri izole etmek için tek çekirdekli RNA dizilimi veya dizileme ile transpozaz erişimli kromatin için tek çekirdekli tahlil (ATAC-seq) gibi aşağı akış uygulamaları için bir protokol sunuyoruz.

Yetişkin Afrika Turkuaz Killifish'in Beyin Dokusundan Çekirdeklerin Nazik İzolasyonu, Yaşlanma Araştırmaları için Doğal Kısa Ömürlü Bir Model

Burada, zebrafish kovanlarının yeniden dolaşımı için yeni, kolay inşa edilebilir ve düşük maliyetli bir protokol sunuyoruz.

Özel Yapım Bir Döner Zebrafish Konut Sistemi

Öğrenin yaşlanma ve yaşla ilişkili hastalıkları yüksek verimli şekilde çalışmak için Nothobranchius furzeri laboratuvar kolonisi yetiştirme yöntemini. Bu protokol genetik ve çevresel araştırmalar için standartlaştırılmış bir çerçeve sunar.

Laboratuvar konut, turkuaz Killifish (Nothobranchius furzeri) için bir iletişim kuralı

Daha fazla video keşfet