Name: Mikro-diseksiyon emaye Organ dan çene kemiğinde kesici sıçan için çevre Toxicants maruz (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-29T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 12 s
Description: Öğrenin sıçan mine organlarının mikro-diseksiyonu yöntemini ameloblast aktivitesini incelemek için. Bu teknik diş epitelini ayrıştırarak mine patolojileri ve fluorozis gibi hastalıkların mekanizmalarını anlamaya yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu eser Odontolojik araştırma (IFRO) Üniversitesi Paris-Diderot, Fransız Ulusal Sağlık Enstitüsü ve tıbbi araştırma (INSERM) ve Fransız Enstitüsü tarafından finanse edildi.

Mevcut çalışmada kullanılan tüm hayvanların bakım ve Tarım (A-75-06-12) Fransızca Bakanlığı laboratuvar hayvanları kullanımı için kuralları uyarınca muhafaza.
1. hayvan Toxicants maruz
<ol><li>Bu iletişim kuralı gerçekleştirmeden önce gerekli kurumsal onay aldıktan ve bunlar tüm hayvan bakımı yönergelerle uyumlu olmak emin olun.</li>
	<li>Farklı deneysel grupları Anayasası ameloblast salgılanması sahne ve ameloblast olgunlaşma sahne üzerinde araştırıldı molecule(s) etkisini test etmek için izin vererek araştırma protokolü tasarım uygula. Burada, dört erkek Wistar rats grupları florür (kaf) birlikte veya BPA (şekil 1A)2ile değil maruz kaldıkları bağlı olarak teşkil. Bütün hayvanlar gözlenen ve gün 65 (şekil 1B) disseke.</li>
</ol>2. diseksiyon Hemi-Mandible yetişkin fareler üzerinden
<ol><li>CO2 boğulma, isteğe bağlı olarak işten çıkarma tarafından vücudun geri kalanından ayrı başından takip tarafından fareler ötenazi. Fareler CO2 özel kutu165 min için maruz.</li>
	<li>#11 neşter kolay erişim sağlamak alt kesici kullanarak alt dudak tüm cilt kaldırın.</li>
	<li>Aynı neşter, çene kemiği iki yarısı bölünür ve bir kesi ile hafif bir basınç iki alt kesici dişler arasında olun.</li>
	<li>Zamansal çene kemiğinde ortak çene ayırmak için bir neşter ile kesme ve hemi-çene iyi cımbız ile tutun.</li>
	<li>Çevre yumuşak dokular bir neşter ile kesmek ve tüm kas, tendon ve bağ kemik tamamen temiz olana bir kazıyıcı kullanarak kaldırın.</li>
</ol>3. yalıtım kesici17,18
<ol><li>Dikkatli bir şekilde kemikten bıçak kesici büyük boyuna eksenine paralel yerleştirerek tıraş. Kemikli Ridge (proksimal uç) kesici uçları yakınındaki servikal döngü yakınındaki kesici sonuna kadar başlayın. Kesi hareket proksimal distal yönde üzerinden devam eder.</li>
	<li>İlk kesiği klemple hemi-çene gonion kaldırıp kesici kolayca servikal döngü veya ameloblasts ( Şekil 2' deki kırmızı çizgi) salgı sahne zarar vermeden gerçekleştirmeden izin vermek için neşter ile servikal döngü olun.</li>
	<li>İkinci altında ikinci bir kesim molar yapın ve neşter kemik ve kesici medial yüzeyi arasında ekleyin. Bazal kemik kaldırdı kesici dışa doğru döndürün ve dikkatle emaye önlemek için çıkar organ doku zarar iyi cımbız kullanarak.</li>
</ol>4. mikro-diseksiyon emaye Organ dürbün mercek altında
<ol><li>Serum fosfat tampon (PBS 1 X) 200 µL bir pipet kullanarak kesici diş üzerinde bırakın. Yukarı dönük olacak şekilde dudak yüzeyi ile iyi cımbız ile kesici alın. Renksiz ve doku portakal bölümleri arasında işaretlemek bir neşter olun. Bu işareti observable daha sonra (Şekil 2) olan temel beyaz noktaya karşılık gelir.</li>
	<li>, Bir tarak ya da eşdeğer aracıyla, apikal son salgı sahne (renksiz) ameloblasts ve olgunlaşma aşamasında (turuncu) ameloblasts için kesici ucu neşter işaretine buradan karşılık gelen hücre yüzeyine neşter Mark kazı.</li>
	<li>Daha önce açıklanan19geçiş aşamasına karşılık gelen 2 mm dokuyu. Kesici diş tarafından Mezenşim kirlenmesini önlemek için emaye organ diseksiyon sırasında açık değil.</li>
	<li>Hemen kesici apikal kısmında yer alan servikal döngü kesmek (Şekil 2) daha önce20açıklandığı gibi.</li>
	<li>(Bkz. Tablo reçetesi) daha ileri araştırmalar için % 10 formalin veya lizis çözümde toplamak.</li>
</ol>5. ayrılmış emaye Organ dokuları için daha fazla araştırma topluluğu
<ol><li>200 µL PBS 1 X arabellek kesici diş üzerinde bırak.</li>
	<li>#11 neşter bıçakla dikkatle diş epitel hücreleri arabellekte yavaş yavaş ayrı olarak daha önce yapılmış neşter işareti yardımıyla her aşaması için bağlantısını kesin.</li>
	<li>Hücre RNA ve protein çekimi için doku protein ve RNA'ların (bkz. Tablo reçetesi) çıkarma sağlar lizis çözeltilerine koymak. Not: yüksek kaliteli RNA'ların doku-tarak tüp dönüm ve sonra hücreleri homojen bir karışım elde etmek kadar taşlama hazırlayın. Karışım yukarıda açıklanan2,8,17oldu üreticinin yordamına uygun olarak RNA ve protein çekimi için hazırdır. Genellikle, hakkında 5-10 µg toplam RNA'ların ve 150 µg toplam protein her hazırlık için elde.</li>
	<li>Histolojik analizler için immünhistokimya (IHC) ve in situ hibridizasyon (ISH), 2 h, o zaman mağaza PBS 1 X 4 ° C'de % 10 formalin hücre katmanı soktun. Doku sonra balmumu/parafin veya doku OCT donmuş bölümleri için gömülü olabilir.</li>
	<li>EMP çekimi için kesici iyi cımbızla almak. Hava (hafif dehidratasyon) için kısa maruz kaldıktan sonra beyaz bir nokta emaye Qafqaz inisiyasyon temsil eden kesici diş dudak yüzeyine orta kısmı görünür hale gelir. Bu beyaz noktaya karşılık gelen geçiş- / erken ameloblasts, olgunlaşma aşamasında öylesine kullanma o bir göstergesi olarak EMP'leri21çıkarılması için.</li>
</ol>

<ol><li>Jedeon, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enamel+defects+reflect+perinatal+exposure+to+bisphenol+A%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Enamel defects reflect perinatal exposure to bisphenol A.</a> Am J Pathol. 183, 108-118 (2013).</li>
<li>Jedeon, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+Exposure+to+Bisphenol+a+Exacerbates+Dental+Fluorosis+in+Growing+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Miner+Res%22%5BJournal%5D)">Chronic Exposure to Bisphenol a Exacerbates Dental Fluorosis in Growing Rats.</a> J Bone Miner Res. 31, 1955-1966 (2016).</li>
<li>Alaluusua, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+dental+aberrations+after+the+dioxin+accident+in+Seveso%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Health+Perspect%22%5BJournal%5D)">Developmental dental aberrations after the dioxin accident in Seveso.</a> Environ Health Perspect. 112, 1313-1318 (2004).</li>
<li>Chapple, I. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+lifestyle%2C+behaviour+or+systemic+diseases+with+dental+caries+and+periodontal+diseases%3A+consensus+report+of+group+2+of+the+joint+EFP%2FORCA+workshop+on+the+boundaries+between+caries+and+periodontal+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Periodontol%22%5BJournal%5D)">Interaction of lifestyle, behaviour or systemic diseases with dental caries and periodontal diseases: consensus report of group 2 of the joint EFP/ORCA workshop on the boundaries between caries and periodontal diseases.</a> J Clin Periodontol. 44, S39-S51 (2017).</li>
<li>Nanci, A. Enamel: Composition, Formation, and Structure. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNanci%2C+A+%22Ten+Cate%27s+Oral+Histology+Development%2C+Structure%2C+and+Function%22">Ten Cate's Oral Histology Development, Structure, and Function</a>. , 8th ed, Elsevier mosby. 122-164 (2012).</li>
<li>Leite, G. A., Sawan, R. M., Teofilo, J. M., Porto, I. M., Sousa, F. B., Gerlach, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+to+lead+exacerbates+dental+fluorosis%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Oral+Biol%22%5BJournal%5D)">Exposure to lead exacerbates dental fluorosis.</a> Arch Oral Biol. 56, 695-702 (2011).</li>
<li>Jedeon, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enamel+hypomineralization+due+to+endocrine+disruptors%5BTitle%5D)+AND+%22Connect+Tiss+Res%22%5BJournal%5D)">Enamel hypomineralization due to endocrine disruptors.</a> Connect Tiss Res. 55, 1-5 (2014).</li>
<li>Jedeon, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Androgen+receptor+involvement+in+rat+amelogenesis%3A+an+additional+way+for+endocrine+disrupting+chemicals+to+affect+enamel+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Androgen receptor involvement in rat amelogenesis: an additional way for endocrine disrupting chemicals to affect enamel synthesis.</a> Endocrinology. 157, 4287-4296 (2016).</li>
<li>Weerheijm, K. L., Jalevik, B., Alaluusua, S. <a target="_blank" href="https://www.karger.com/Article/Abstract/47479">Molar-incisor hypomineralisation.</a> Caries Res. 35, 390-391 (2001).</li>
<li>Jälevik, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+and+Diagnosis+of+Molar-Incisor-+Hypomineralisation+%28MIH%29%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Arch+Paediatr+Dent%22%5BJournal%5D)">Prevalence and Diagnosis of Molar-Incisor- Hypomineralisation (MIH): A systematic review.</a> Eur Arch Paediatr Dent. 11, 59-64 (2010).</li>
<li>Alaluusua, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aetiology+of+Molar-Incisor+Hypomineralisation%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Arch+Paediatr+Dent%22%5BJournal%5D)">Aetiology of Molar-Incisor Hypomineralisation: A systematic review.</a> Eur Arch Paediatr Dent. 11, 53-58 (2010).</li>
<li>Jedeon, K., Berdal, A., Babajko, S. The tooth, target organ of Bisphenol A, could be used as a biomarker of exposure to this agent. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aJedeon%2C+K+%22Bisphenol+A%3A+Sources%2C+Risks+of+Environmental+Exposure+and+Human+Health+Effects%22">Bisphenol A: Sources, Risks of Environmental Exposure and Human Health Effects</a>. Gibert, Y. , Nova Science Publishers. 205-225 (2015).</li>
<li>Fejerskov, O., Larsen, M. J., Richards, A., Baelum, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dental+tissue+effects+of+fluoride%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Dent+Res%22%5BJournal%5D)">Dental tissue effects of fluoride.</a> Adv Dent Res. 8, 15-31 (1994).</li>
<li>Robinson, C., Connell, S., Kirkham, J., Brookes, S. J., Shore, R. C., Smith, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+fluoride+on+the+developing+tooth%5BTitle%5D)+AND+%22Caries+Res%22%5BJournal%5D)">The effect of fluoride on the developing tooth.</a> Caries Res. 38, 268-276 (2004).</li>
<li>Sahlberg, C., Pavlic, A., Ess, A., Lukinmaa, P. L., Salmela, E., Alaluusua, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+effect+of+amoxicillin+and+sodium+fluoride+on+the+structure+of+developing+mouse+enamel+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Oral+Biol%22%5BJournal%5D)">Combined effect of amoxicillin and sodium fluoride on the structure of developing mouse enamel in vitro.</a> Arch Oral Biol. 58, 1155-1164 (2013).</li>
<li>Pritchett-Corning, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Euthanasia+of+neonatal+rats+with+carbon+dioxide%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Assoc+Lab+Anim+Sci%22%5BJournal%5D)">Euthanasia of neonatal rats with carbon dioxide.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 48, 23-27 (2009).</li>
<li>Hiller, C. R., Robinson, C., Weatherell, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variations+in+the+composition+of+developing+rat+incisor+enamel%5BTitle%5D)+AND+%22Calcif+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Variations in the composition of developing rat incisor enamel.</a> Calcif Tissue Res. 18, 1-12 (1975).</li>
<li>Robinson, C., Kirkham, J., Nutman, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+between+enamel+formation+and+eruption+rate+in+rat+mandibular+incisors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Relationship between enamel formation and eruption rate in rat mandibular incisors.</a> Cell Tissue Res. 254, 655-658 (1988).</li>
<li>Smith, C. E., Nanci, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+sampling+the+stages+of+amelogenesis+on+mandibular+rat+incisors+using+the+molars+as+a+reference+for+dissection%5BTitle%5D)+AND+%22Anat+Rec%22%5BJournal%5D)">A method for sampling the stages of amelogenesis on mandibular rat incisors using the molars as a reference for dissection.</a> Anat Rec. 225, 257-266 (1989).</li>
<li>Chavez, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+dental+epithelial+stem+cells+from+the+adult+mouse+incisor%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of dental epithelial stem cells from the adult mouse incisor.</a> J Vis Exp. (87), (2014).</li>
<li>Brookes, S. J., Kingswell, N. J., Barron, M. J., Dixon, M. J., Kirkham, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+the+32-kDa+fragment+the+functional+enamelin+unit+in+all+species%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Oral+Sci%22%5BJournal%5D)">Is the 32-kDa fragment the functional enamelin unit in all species?</a> Eur J Oral Sci. 119, 345-350 (2011).</li>
<li>Babajko, S., Jedeon, K., Houari, S., Loiodice, S., Berdal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+Steroid+Axis%2C+a+New+Paradigm+for+Molar+Incisor+Hypomineralization+%28MIH%29%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">Disruption of Steroid Axis, a New Paradigm for Molar Incisor Hypomineralization (MIH).</a> Front Physiol. 8, 343(2017).</li>
<li>Houari, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Asporin+and+the+mineralization+process+in+fluoride-treated+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bone+Min+Res%22%5BJournal%5D)">Asporin and the mineralization process in fluoride-treated rats.</a> J Bone Min Res. 29, 1446-1455 (2014).</li>
<li>Denbesten, P., Li, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+fluoride+toxicity%3A+dental+fluorosis%5BTitle%5D)+AND+%22Monographs+in+oral+science%22%5BJournal%5D)">Chronic fluoride toxicity: dental fluorosis.</a> Monographs in oral science. 22, 81-96 (2011).</li>
<li>Kirkham, J., Robinson, C., Phull, J. K., Shore, R. C., Moxham, B. J., Berkovitz, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+rate+of+eruption+on+periodontal+ligament+glycosylaminoglycan+content+and+enamel+formation+in+the+rat+incisor%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">The effect of rate of eruption on periodontal ligament glycosylaminoglycan content and enamel formation in the rat incisor.</a> Cell Tissue Res. 274, 413-419 (1993).</li>
<li>Lacruz, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+novel+candidate+genes+involved+in+mineralization+of+dental+enamel+by+genome-wide+transcript+profiling%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Identification of novel candidate genes involved in mineralization of dental enamel by genome-wide transcript profiling.</a> J Cell Physiol. 227, 2264-2275 (2012).</li>
<li>Wen, X., Paine, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iron+deposition+and+ferritin+heavy+chain+%28Fth%29+localization+in+rodent+teeth%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+research+notes%22%5BJournal%5D)">Iron deposition and ferritin heavy chain (Fth) localization in rodent teeth.</a> BMC research notes. 6, 1(2013).</li>
<li>Houari, S., Loiodice, S., Jedeon, K., Berdal, A., Babajko, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+Steroid+Receptors+in+Ameloblasts+during+Amelogenesis+in+Rat+Incisors%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Physiol%22%5BJournal%5D)">Expression of Steroid Receptors in Ameloblasts during Amelogenesis in Rat Incisors.</a> Front Physiol. 7, 503(2016).</li>
<li>Kawano, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+dental+epithelial+cell+line+%28HAT-7%29+and+the+cell+differentiation+dependent+on+Notch+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Connect+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">Establishment of dental epithelial cell line (HAT-7) and the cell differentiation dependent on Notch signaling pathway.</a> Connect Tissue Res. 43, 409-412 (2002).</li>
<li>Zhou, Y. L., Snead, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+CCAAT%2Fenhancer-binding+protein+alpha+as+a+transactivator+of+the+mouse+amelogenin+gene%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Identification of CCAAT/enhancer-binding protein alpha as a transactivator of the mouse amelogenin gene.</a> J Biol Chem. 275, 12273-12280 (2000).</li>
<li>Nakata, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+characterization+of+a+spontaneously+immortalized+mouse+ameloblast-lineage+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Establishment and characterization of a spontaneously immortalized mouse ameloblast-lineage cell line.</a> Biochem Biophys Res Commun. 308, 834-839 (2003).</li>
<li>Harada, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+ameloblastoma+cell+line%2C+AM-1%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+oral+pathology+%26+medicine%3A+official+publication+of+the+International+Association+of+Oral+Pathologists+and+the+American+Academy+of+Oral+Pathology%22%5BJournal%5D)">Establishment of ameloblastoma cell line, AM-1.</a> Journal of oral pathology & medicine: official publication of the International Association of Oral Pathologists and the American Academy of Oral Pathology. 27, 207-212 (1998).</li>
<li>Jussila, M., Thesleff, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Signaling+networks+regulating+tooth+organogenesis+and+regeneration%2C+and+the+specification+of+dental+mesenchymal+and+epithelial+cell+lineages%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Biol%22%5BJournal%5D)">Signaling networks regulating tooth organogenesis and regeneration, and the specification of dental mesenchymal and epithelial cell lineages.</a> Cold Spring Harb Perspect Biol. 4, a008425(2012).</li>
<li>Tucker, A., Sharpe, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cutting-edge+of+mammalian+development%3B+how+the+embryo+makes+teeth%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">The cutting-edge of mammalian development; how the embryo makes teeth.</a> Nat Rev Genet. 5, 499-508 (2004).</li>
<li>Vos, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Years+lived+with+disability+%28YLDs%29+for+1160+sequelae+of+289+diseases+and+injuries+1990-2010%3A+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study+2010%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Years lived with disability (YLDs) for 1160 sequelae of 289 diseases and injuries 1990-2010: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2010.</a> Lancet. 380, 2163-2196 (2012).</li>
<li>Marcenes, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+burden+of+oral+conditions+in+1990-2010%3A+a+systematic+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent+Res%22%5BJournal%5D)">Global burden of oral conditions in 1990-2010: a systematic analysis.</a> J Dent Res. 92, 592-597 (2013).</li>
<li>National Institute of Dental and Craniofacial Research. Dental Caries (Tooth Decay) in Adults (Age 20 to 64). , Available from:
 <a target="_blank" href="https://www.nidcr.nih.gov/DataStatistics/FindDataByTopic/DentalCaries/DentalCariesAdults20to64.htm">https://www.nidcr.nih.gov/DataStatistics/FindDataByTopic/DentalCaries/DentalCariesAdults20to64.htm</a> (2017).</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir ifşa etmek çıkar çatışması var.

Değiştirilmiş ameloblast etkinliği ve/veya kesintiye ameloblast yayılması, farklılaşma ve olgunlaşma süreçleri kurşun geri dönüşü olmayan emaye kusurları ve sırayla, emaye kusurları karakterizasyonu değişmiş anlayış geliştirmek yardımcı olabilir ameloblast aktivite sırasında amelogenesis. Böylece, kökenlerine, çevresel veya genetik kusurları ne olursa olsun emay önde gelen patolojik olayları aydınlatmak için belirleyici izole emaye organ üzerinde çalışmalar vardır.
Bu teknik aslında Hiller <em...

Birçok gelişimsel emaye kusurları maruz çevre toxicants ve/veya uygunsuz yaşam tarzı1,2,3,4neden olabilir. Olaylar ve şu anda açıklanan yordamı kullanarak amelogenesis molekülleri karakterizasyonu elde edilen emaye kusurları kullanımı birkaç toxicants etkilenme erken işaretleyici olarak teşvik edecek ve sağlık geçmişini reconstitute için yardımcı olabilir her hastanın perinatal dönemde emaye synthetized1,2ne zaman. Ameloblast etkinlik5bağlı olarak dört ana aşamadan emaye sentez ayrılabilir. İlk adım habercisi hücre ve pre-ameloblast yayılması regroups. İkinci adımı sırasında farklılaşmış ameloblasts emaye matris proteinler (EMP'leri), esas olarak amolgenin, enamelin ve ameloblastin, son emaye kalınlığını belirleyen salgılar. Böylece, herhangi bir kesinti EMP sentezi emaye nicel hatalarına karşı yol açar. Tam emaye kalınlığı birikimi sonra olgunlaşma aşamasında başlar. Bu aşamada, apatit crystallite büyüme genişlik ve kalınlığı emaye ağırlıkça % 96'ile biyolojik bir doku buldum en yüksek Qafqaz oranına ulaşmak sağlar. Olgunlaşma aşamasında müşteri adayına sırasında ortaya çıkan nitel dağıtmak olayları kusurları emay. Son olarak, ameloblasts sonrası olgunlaşma, kemirgen, pigmentasyon olarak da adlandırılan bir aşaması girin ve emaye hataları (varsa) yapma onarılamaz ve geri dönüşü olmayan diş patlama sırasında apoptosis tabi, böylece potansiyel geriye dönük kayıt hataları sağlar ameloblast vurguluyor. Kemirgen, amelogenesis benzer bir olay onları amelogenesis genel işlem çalışmaya uygun bir model kılan onların ön dişler sürekli büyüyor, özelliği ile sırasını izler. Böylece, değişiklikler emaye kalite ve/veya miktarı bağlı olarak dağıtmak olay saat penceresinin herhangi bir bozulma amelogenesis sonuçlanır. Bu anlamda, dioksin, kurşun ve endokrin engellemeden kimyasallar (EDCs) Bisfenol A (BPA), genistein ve vinclozolin, gibi maruz gösterilmiştir emaye hypomineralizations1,2,3 oluşturmak için ,6,7,8. Asimetrik beyaz opak noktalar fetal dönem ve ilk ay sonra doğum1sırasında Düşük doz BPA doz maruz sıçan ön dişler üzerinde tespit edilmiştir. Fareler ve o insan molar kesici hypomineralization (MIH), bu emaye hatalarını benzer klinik, yapısal ve biyokimyasal özellikleri paylaşıyor. MIH olduğunu son zamanlarda açıklanan diş Mine patoloji hangi etiyolojisi belirsiz9,10 birçok nedensel faktör rağmen hala için edilerek9,10,11 onaylanmadığına karar ,12.
Başka bir önemli emaye hypomineralization patoloji çevresel faktörler nedeniyle aşırı florür emme sonucu diş florozis (DF), olduğunu (> 0,1 mg/kg/gün)13,14. Ana florür içme suyu takıma veya doğal olarak florür ile zenginleştirilmiş kaynağıdır. Florür diş çürüğü önlemek için de sık sık reçete sadece % 50 tek toxic düşük (≤0.05 mg/kg/gün) profilaktik doz değildir MIH ve DF, çevresel faktörler, maruz kaynaklanan iki sık patolojiler kullanılmasının muhtemelen Flor EDCs2 gibi diğer toxicants ile birlikte hypomineralizing etkileri nedeniyle karakterize edilebilir gerek ortak özellikleri takdim ediyorum veya amoksisilin15.
Mikro-diseksiyon sıçan emaye organ ameloblasts farklı farklılaşma aşamalarında içeren moleküllerin ameloblast etkinliği bozabilir ve diş Erüpsiyonu sonra tanısı emaye kusurları neden etki mekanizması anlamak için yardımcı olacaktır. Başka bir deyişle, değişiklikler nedeniyle çevre toxicants emaye gen ifade ve emaye matris kompozisyon karakterizasyonu toxicants maruz tarihinin sulandırma sağlar ve halk için çevre güvenliği izleme kolaylaştırır Sağlık.

<table><tbody><tr><td>Bisfenol A</td><td>, Sigma Aldrich, Saint Louis MO</td><td>239658</td><td></td></tr><tr><td>formalin% 10</td> <td>Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO</td><td>HT5012</td><td></td></tr><tr><td>Tri-Reaktif</td><td>Euromedex, Fransa</td><td>TR118</td><td></td></tr><tr><td>RLT tamponu</td><td>Qiagen, Les Ulis, Fransa</td><td>74126</td><td>RNeasy Protect Mini Kit</td></tr><tr><td>Androjen reseptör antikoru</td><td>Santa Cruz Biyoteknoloji, Santa Cruz, CA)</td><td>SC-816</td><td>tavşan poliklonal antikoru</td></tr><tr><td>PBS 10x</td><td>EUOMEDEX</td><td>ET330. Bir</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum florür (NaF)</td> <td>Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO</td><td>S-1504</td><td></td></tr><tr><td>paraplast düzenli</td><td>Leica mikrosistemleri, Nanterre cedex,&nbsp; Metin</td><td>dokusunda was/parafin</td><td>olarak</td> adlandırılan Fransa</tr><tr><td>39601006 OCT</td><td>VWR, Fontenay-sous-Bois, Fransa</td><td>411243</td><td></td></tr><tr><td>Ekstra İnce Bonn Makası - Düz/8.5 cm</td><td>PHYMEP , Paris, Fransa</td><td>14084-08</td><td></td></tr><tr><td>Neşter Bıçakları için Sap - 12,5 cm</td><td>PHYMEP, Paris, Fransa</td><td>10035-12</td><td></td></tr><tr><td>Kavisli Neşter Bıçağı</td><td>PHYMEP , Paris, Fransa</td><td>10035-20</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon Bıçağı - İnce/Düz Uçlu</td><td>PHYMEP , Paris, Fransa</td><td>10055-12</td><td></td></tr><tr><td>Daire Bıçağı</td><td>PHYMEP, Paris, Fransa</td><td>10059-15</td><td></td></tr><tr><td>N&deg; 11 Swann-Morton</td><td>VWR, Fontenay-sous-Bois, Fransa</td><td>233-0024</td><td></td></tr><tr><td>dürbün lens</td><td>Leica biosystems, Nanterre cedex,&nbsp; Fransa</td><td>MZFLIII</td><td></td></tr></tbody></table>

mikro-diseksiyon emaye organ dan çene kemiğinde kesici sıçan için çevre toxicants maruz

Micro-dissection of Enamel Organ from Mandibular Incisor of Rats Exposed to Environmental Toxicants

Çevre koşulları ve yaşam kaynaklanan emaye kusurları nedeniyle onların yüksek yaygınlık kamu sağlık endişeleri vardır. Bu kusurları hücre emaye organ mevcut ameloblasts adlı emaye sentezi için sorumlu değişmiş aktivitesindeki neden. Amelogenesis sırasında ameloblasts yayılması, farklılaşma ve ölüm olayları belirli ve kesin bir dizi izleyin. Sürekli büyüyen kesici dişler bir rat ameloblast etkinliği ve farklılaşma aşamaları fizyolojik ve patolojik koşullarda çalışmaya uygun bir deneysel modelidir. Burada, mikro-fareler için çevre toxicants maruz emaye organı incelemek için güvenilir ve tutarlı bir yöntem açıklanmaktadır. Mikro disseke diş epiteli kantitatif analizleri gibi yanı sıra immünhistokimya deneyleri ve in situ hibridizasyon, gibi nitel deneyler için kullanılabilir salgı ve olgunlaşma sahne ameloblasts içeren RT-qPCR, RNA-seq ve Western Blot.

Birçok diş florozis12,13, çevre koşulları nedeniyle aşırı florür emme sonucu veya hypomineralization benzer MIH için bazı EDCs1, maruz emaye gibi kusurlar, Mine 7,22. Bu gelişim emaye kusurları deneysel olarak fareler (şekil 1)1,2,<sup clas...

Emaye oluşumu ve olası değişiklikler anlamak ameloblast etkinlik çalışması gerekir. Burada, emaye organları daha fazla nicel ve nitel deneysel yordamlar için kullanılabilir salgı ve olgunlaşma sahne ameloblasts içeren mikro incelemek için güvenilir ve tutarlı bir yöntem açıklanmaktadır.

Mikro-diseksiyon emaye Organ dan çene kemiğinde kesici sıçan için çevre Toxicants maruz

Enamel defects resulting from environmental conditions and ways of life are public health concerns because of their high prevalence. These defects result ...

Bu prosedürün genel amacı, sıçan mine organını mikro diseksiyon yapmak ve diş epitelini mine sentezi sırasında hücre farklılaşmasının ana aşamalarına göre ayırmaktır. Bu yöntem, dental florozis, molar kesici diş, hiperemaye ve kalıtım minesi genesis imperfektum gibi mine patolojileri alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, önceden herhangi bir tedavi olmaksızın immünohistokimya gibi kantitatif deneyler kullanarak diş hücrelerini daha fazla analiz etme yeteneğinin yanı sıra, bu yöntemin hemogenezi bozabilen endojen ve eksojen moleküllerin moleküler mekanizaksiyonu hakkında fikir verebilmesidir.Deneysel bir fareye ötenazi uyguladıktan sonra, alt kesici dişlere kolay erişim sağlamak için 11 numaralı bir neşter kullanarak alt dudaklardaki tüm cildi çıkarın. Daha sonra aynı neşter ile iki alt kesici diş arasında bir kesi yapın. Hafif basınç uygulayarak, mandibula daha sonra iki yarıya bölünecektir.Daha sonra, hemi-mandibulayı ince cımbızla tutarken çeneyi ayırmak için temporal-mandibular eklemi neşter ile kesin. Daha sonra çevredeki yumuşak dokuları bir neşter ile kesin ve kemik tamamen temizlenene kadar bir kazıyıcı kullanarak tüm kasları, tendonları ve bağları çıkarın. Kesici dişi izole etmek için, bıçağı kesici dişin ana uzunlamasına eksenine paralel olarak yerleştirerek kemiği dikkatlice tıraş edin.Kesici dişin uçlarına yakın kemikli sırtta tıraşa başlayın ve kesici dişin diğer ucuna, servikal halkanın yakınına doğru çalışın. Daha sonra, hemi-mandibula gonyonunu çıkarmak için neşter ile servikal halkaya distal olarak bir kesi yapın, böylece kesici dişin servikal halkaya veya ameloblastların salgı aşamasına zarar vermeden çıkarılmasını kolaylaştırır. Daha sonra, ikinci azı dişinin altında ikinci bir kesim yapın ve neşteri kemik ile kesici dişin medial yüzeyi arasına yerleştirin.Bazal kemiğin tamamı kaldırıldığında, kesici dişi dışa doğru döndürün ve mine organ dokusuna zarar vermemek için ince cımbız kullanarak dikkatlice çıkarın. Şimdi tüm kesici diş izole edilmiştir. Diseksiyon için, kesici dişi 60 milimetrelik bir tabak veya tabakta 200 mikrolitre PBS ile örtün.Başlamak için, daha önce tarif edildiği gibi, kesici dişin apikal kısmında hemen bulunan servikal halkayı kesin. Daha sonra kesici dişi ince cımbızla, labial yüzey yukarı bakacak şekilde tutun ve dokunun renksiz kısmının sonunda bir neşter işareti yapın. Bu işaret, daha sonra gözlemlenebilecek olan altta yatan bir beyaz noktaya karşılık gelir.Şimdi, hücre yüzeyini işaretten apikal uca kadar kazımak için bir ekskavatör veya eşdeğer bir alet kullanın, bu da renksiz, salgılama aşaması ameloblastlarına karşılık gelir. Daha sonra, turuncu kısmın başında, olgunlaşma aşaması ameloblastlarına karşılık gelen bir neşter işareti yapın ve neşter işaretinden kesici dişin ucuna kadar kazıyın. Şimdi geçiş aşaması ameloblastlarına karşılık gelen iki milimetre dokuyu çıkarın.Mine organ diseksiyonu sırasında kesici dişi açmayın çünkü bu, diseke edilen dokuları mezenşim ile kontamine edecektir. Son olarak, daha ileri araştırmalar için dokuları% 10 formalin veya lizis solüsyonunda saklayın. Bir mine matris proteini ekstraksiyonu için, labial yüzeyin orta kısmında beyaz bir nokta görünene kadar kesici dişi solüsyondan kısa bir süre çıkarın.Bu nokta, mine mineralizasyonunun başlangıcını temsil eder ve erken evre ameloblastlara geçişe karşılık gelir. Bu doku bölgesini kesin ve gerektiği gibi tedavi edin. Çıkarılan doku hücresel RNA ve protein ekstraksiyonları içinse, ekstraksiyonu gerçekleştirmek için ticari bir kit kullanın.Çıkarılan dokuyu lizis çözeltisine aktarın ve homojen bir karışım haline getirin. Histolojik analizler, immünohistokimya ve NC2 hibridizasyonu, toplanan dokuyu oda sıcaklığında iki saat boyunca% 10 formalin içine koyar. Daha sonra dokuyu PBS'ye aktarın ve dört santigrat derecede saklayın.Daha sonra doku, balmumu, parafin veya doku OCT'ye gömülebilir. BPA ile kombinasyon halinde florür maruziyetine bağlı olarak dört grup erkek beyaz kuyruklu sıçan oluşturuldu. Tüm hayvanlar tarif edildiği gibi 65. günde gözlemlendi ve diseke edildi.Mikro diseke edilen mine dokularının kalitesi trikrom Masson boyaması kullanılarak kontrol edildi. Mikroskobik gözlem tipik mine epitel hücrelerini ve ameloblast palositi gösterir. Mezenkimal kontaminasyonun olmaması, kollajen yeşili lekelenmesinin olmaması ile doğrulanmıştır.Salgı aşaması ameloblastlar emaye eksprese eder. Olgunlaşma aşaması: ameloblastlar kalikin dördünü eksprese eder ve ayrıca yüksek seviyelerde feratin içerir, bu da onlara minenin turuncu renginden sorumlu olan yüksek miktarda demir depolama yeteneği verir. Bu RNA'lar tercihen mezenkimel hücrelerinden ziyade ameloblastlar tarafından eksprese edilir.Öte yandan kollajen bir, ameloblastlar tarafından değil, mezenşimel hücreleri tarafından eksprese edilir. İmmünohistokimya daha sonra sekresyon veya olgunlaşma aşamasındaki ameloblastlarda dört spesifik proteini puanlamak için kullanıldı. Örneğin, yeşil renkte görülen bir androjen reseptörü, özellikle olgunlaşma aşaması ameloblastlarına lokalizedir.Bu videoyu izledikten sonra, salgılama ve olgunlaşma aşamaları arasında başarılı bir ayrım için kemirgenlerin emaye organı olan ameloblastların nasıl mikro diseksiyon yapılacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız. Bu yaklaşım, patolojik ve fizyolojik mine hastalığından sorumlu in vivo anahtar faktör mekanizmalarının anlaşılması için çok yararlıdır.

micro-dissection-enamel-organ-from-mandibular-incisor-rats-exposed-to

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Sürekli büyüyen fare kesici diş epitel kök hücreler (DESCs) diş dokularının yenilenmesini eğitim için bir model sağlar. Sürekli ve güvenilir bir şekilde kesici bu hücrelerin elde edilmesi ve in vitro ile genişletilmesi için sağlam bir sistem burada bildirilmektedir.

Yetişkin Fare insizör Diş Epitel Kök Hücreleri İzolasyon ve Kültür

Burada, yerel olarak farelerde apikal periodontitis teşvik etmek için bir protokol sunuyoruz. Biz nasıl fare diş bir delik matkap ve onun hamuru maruz göstermek, amacıyla lokal inflamasyon neden. Mikro-CT ve histoloji gibi bu inflamasyonun doğasını araştırmak için analiz yöntemleri de gösterilmiştir.

Fareler içinde Apical periodontitis İndükleme

Trowell tipi organ kültürü yöntemi, diş gelişimini yöneten karmaşık sinyal ağlarını çözmek ve daha yakın zamanlarda, sürekli büyüyen fare kesici dişinin kök hücrelerinde yer alan düzenlemeleri incelemek için kullanılmıştır. Floresan muhabir hayvan modelleri ve canlı görüntüleme yöntemleri, dental kök hücrelerin ve bunların spesifik niş mikro çevrelerinin derinlemesine analizini kolaylaştırır.

Trowell Tipi Organ Kültürünün Diş Kök Hücrelerinin Düzenlenmesini Incelemek İçin Kullanılması

Mevcut protokol, sürekli büyüyen bir fare kesici dişinden, fare azı dişinden ve insan dişlerinden tek hücreli RNA-seq analizine uygun tek hücreleri izole etmek için hızlı, verimli ve nazik bir yöntem sunar.

Fare ve İnsan Dişlerinden Tek Hücrelerin Hızlı İzolasyonu

Fare kesicisi, kök hücre nişinde değerli etiket tutucu hücreler içerir. Etiket tutucu hücreleri tarafsız bir şekilde tespit etmek ve ölçmek için yeni bir yolumuz var; Çalışmamızda EdU etiketleme ve PEGASOS dokusunun mandibuladan temizlenmesinden sonra 3D rekonstrüksiyon yaklaşımı kullanılmıştır.

Doku Temizliğinden Sonra 3D Rekonstrüksiyon Yaklaşımı Kullanılarak Fare Kesici Dişlerinde Etiket Tutan Hücrelerin Tespiti ve Kantitasyonu

Ex vivo canlı görüntüleme, canlı dokulardaki hücresel hareketlerin ve etkileşimlerin dinamik süreçlerini incelemek için güçlü bir tekniktir. Burada, kültürlenmiş tüm yetişkin fare kesici dişlerinde diş epitel hücrelerini canlı izlemek için iki foton mikroskobu uygulayan bir protokol sunuyoruz.

Fare Diş Yenileme Sırasında Hücre Bölünmelerini ve Hareketlerini Araştırmak için Ex Vivo Canlı Görüntülemeyi Kullanma

Mikrosertlik, mekanik bir özelliktir ve sert doku patofizyolojisini değerlendirmek için bilgilendirici bir parametredir. Burada, kemirgen ağız hastalığı modellerinde diş ve alveol kemiğinde mikrosertlik analizi, yani dental florozis ve ligatür kaynaklı periodontal kemik rezorpsiyonu için standart bir protokol (numune hazırlama, parlatma, düz yüzey ve girinti bölgeleri) gösteriyoruz.

Kemirgen Ağız Hastalığı Modellerinde Diş ve Alveol Kemiği Üzerinde Mikrosertlik Ölçümleri

Bu protokolün amacı, fırın diş eti epitel bariyerinin bütünlüğünü nicel olarak değerlendirmek için standart bir yaklaşım sağlamaktır; diş eti yüzeyine farklı moleküler boyutlarda floresans etiketli dekstransları in vivo uygulanarak ve ardından tek foton mikroskopi sistemiyle ex vivo görüntüleme uygulanır.

Fusesans İzleyicilerle Fare Diş Etili Epitelyal Bariyerinin Fonksiyonel Değerlendirmesi

Deneysel hayvan araştırmaları, klinik transplantasyon uygulamalarının gelişiminde çok önemli bir rol oynamaktadır. Domuz ortotopik karaciğer nakli modeli (OLTx), insan koşullarına çok benzer ve klinik odaklı araştırmalarda sıklıkla kullanılır. Aşağıdaki protokol, aktif bir porto-kaval-juguler şant kullanan güvenilir bir domuz OLTx modeli için tüm bilgileri içerir.

Active Porto-Caval Shunt kullanarak Domuz Karaciğer Tedarik ve Ortotopik Nakli Tekniği

Bu makale, farklı kalp atış hızlarında basınç/hacim analizi yoluyla murin sol ventrikül fonksiyonunun ölçümünü açıklamaktadır.

Bowditch Efekt incelenmesi: Basınç Hacim İlişkisi Tedbir Fare Kardiyak Kateterizasyon

Öğrenin sıçan mine organlarının mikro-diseksiyonu yöntemini ameloblast aktivitesini incelemek için. Bu teknik diş epitelini ayrıştırarak mine patolojileri ve fluorozis gibi hastalıkların mekanizmalarını anlamaya yardımcı olur.

Mikro-diseksiyon emaye Organ dan çene kemiğinde kesici sıçan için çevre Toxicants maruz

Daha fazla video keşfet