Kornea Greftlerinde Stromal Özelliklerin Histoloji Benzeri Analizi için Tam Alan Optik Koherens Mikroskopisi

Bu yöntem, göz bankalarındaki kornea donör dokularının taranmasını ve seçimini iyileştirebilir, kornea nakli sonuçlarını iyileştirebilir. Bu tekniğin temel avantajı, yüksek çözünürlüklü değerlendirme kabiliyeti ve korneanın görüntü yakalama boyunca depolama ortamıyla dolu kapalı bir odaya daldırılmış halde kalması ve olası kontaminasyon riskini azaltmasıdır. Prosedürü gösteren, laboratuvarımızdan doktora mezunu olan Maelle Vilbert olacaktır.

Başlamak için, depolama ortamına batırılmış korneayı, epitel yukarı bakacak şekilde numune tutucuya yerleştirin. Numune tutucu ile birlikte verilen temiz bir silika kapak fişini korneanın üzerine yerleştirin. Ardından, numune hafifçe düzleşene ve kapak kaymasının altında hareketsiz hale gelene kadar tabanını hafifçe çevirerek tutucuyu kapatın ve nispeten eşit bir görüntüleme yüzeyi sağlayın.

Hava kabarcıklarını önlemek için önlemler alın. Daldırma ortamı olarak kapak fişine kalın bir oftalmik veya optik jel tabakası uygulayın. Cihazın arkasındaki güç düğmesini açarak cihazı başlatın.

Cihazın önündeki yeşil LED'in yanması, gücün açık olduğunu gösterir. Hareketli tepsi dışında görüntüleme aşamasının net olduğundan emin olun. Ardından, istemde motorları başlatmak için edinme yazılımında Tamam'a tıklayın.

Cihazı ayarlamak için, belirlenen ve zorunlu alana örnek bir tanımlayıcı girin. İsteğe bağlı olarak örnek bir açıklama ve çalışma açıklaması girin. Ardından, örneğin daha sonra yanal konumlandırma ve gezinme amacıyla kullanılabilecek bir anlık görüntüsünü oluşturmak için Makro görüntüsü al'ı tıklatın.

Memnun kaldıktan sonra, Evet'i tıklatarak istemde görüntüyü doğrulayın. Bundan sonra cihaz, numune tepsisini hedefin altına taşıyacak ve otomatik bir ayarlama gerçekleştirecektir. Daha fazla ilerlemeden önce mikroskop hedefinin optik jele iyice daldırıldığından emin olun.

Keşfet sekmesine giderek alımı hazırlayın. Bir görüntü yığını elde etmeden önce, joystick veya ekrandaki manuel seçim yoluyla korneanın ortasına gidin. Oyun çubuğunun döndürülmesi, kaydırıcının ayarlanması veya grafik kullanıcı arayüzünde manuel klavye girişi yoluyla görüntüleme derinliğini değiştirin.

Ardından, optimum kornea görüntülemesi için ortalama değeri 40 olarak ayarlayın. Derinlik alanına kornea yüzey değerini veya ilk görüntü konumunu girin. Ardından, görüntüleri almak için Al sekmesini seçin.

Aygıtın eksenel çözünürlüğüyle eşleşen dilim aralığını seçin ve ayarlayın. Dilim Sayısı altına kornea kalınlığı değerini girin. Parametreleri ve edinme süresini gözden geçirin.

Ve memnun kaldığınızda, satın alma işlemini başlatmak için Tamam'a basın. Satın alma sırasında, mikroskobun yerleştirildiği masayla temastan kaçının. Stromal ve Bowman'ın tabaka kalınlığını değerlendirmek için, kornea kesitlerinin mesafelerini ölçün.

Örneğin, metin makalesinde açıklandığı gibi kesit boyunca eşit aralıklı beş nokta ekleyin. Varsayılan görüş alanına göre bilinen mesafenin iki noktası arasına bir çizgi çizin. Ardından Analiz sekmesine gidin ve Ölçeği Ayarla'yı seçin.

Bilinen mesafeyi ve uzunluk birimini uygun alanlara girin. 1024 piksel veya 780 mikrometre olarak ayarlayın ve Tamam'ı tıklatın. Bilinmeyen mesafeye sahip iki nokta arasında bir çizgi çizin ve doğrudan durum çubuğundan ölçülen uzunluğu veya mesafeyi okuyun. Ortalama ve varyasyon katsayısını kaydedin.

Görüntü sekmesine tıklayın ve keratinosit yoğunluğunu belirlemek için Yığınlar altında Z Dilimi'ni seçin. Bu, karşılaştırılabilir kalınlıkta dilimler üretmek için stromal en face görüntülerini yedi kişilik gruplar halinde toplayacaktır. Daha fazla analiz için, en ön stroma için mevcut tüm yüz dilimlerini, anterior stroma için 15 görüntüyü, orta stroma için beş görüntüyü ve posterior stroma için beş görüntüyü ekleyin.

Her bir yüzlü görüntüde, 300 x 300 mikrometrelik bir ilgi alanı seçin. Çekirdek görselleştirmesini geliştirmek için, Düzenle sekmesinin altındaki Ters Çevir'i kullanarak görüntüyü tersine çevirin. Görüntü sekmesini tıklatıp Parlaklık-Karşıtlık'a giderek karşıtlığı ve parlaklığı ayarlayın.

Hücre çekirdeklerini manuel olarak saymak için Eklentiler'e gidin ve Analiz sekmesi altındaki Hücre Sayacı'na gidin. Başlat'a basın ve ardından bir sayaç türü seçin. Ardından, ters çevrilmiş görüntüdeki koyu oval özelliklere tıklayarak hücre çekirdeklerini sayın, görüntünün yalnızca dört tarafından ikisi için bir görüntü sınırına inenleri göz önünde bulundurun.

Seçilen insan donör kornea, organ kültürü ortamında depolandıktan sonra şişmiş, ödemli korneanın patofizyolojik bir modelini vermiş ve sınırlı penetrasyon derinliği nedeniyle tüm kornea kalınlığında görüntü elde edilmesini engellemiştir. Dekstrin takviyeli organ kültürü ortamına transfer, şişliği azalttı ve normal kalınlıkta donör kornealarla sonuçlandı. Hastalıklı kornealar, morfolojik değişiklikler ve değişken stromal kalınlıkta veya Bowman tabakasında bir azalma da dahil olmak üzere tipik stromal özellikler ile tanındı.

Keratinosit yoğunluğunun ve stromal reflektivitenin değerlendirilmesi, klinik optik koherens tomografi sistemlerinin yeteneklerinin ötesinde, tam alan optik koherens mikroskobu ile histoloji benzeri analiz ve normalin patolojik kornea dokularından ayırt edilmesine yardımcı olmuştur. Bu videoyu izledikten sonra, hastalığın normal insan kornea dokularından farklılaşmasına izin veren kornea stromasının kalitatif ve kantitatif histoloji benzeri analizinin nasıl yapılacağına dair iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.